本實(shí)用新型涉及動(dòng)物繁殖及人類生殖領(lǐng)域精子凍存技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，是一種旋蓋套管式稀少精子超薄片冷凍載體。

背景技術(shù)：

輔助生殖技術(shù)(Assisted Reproductive Technology，簡(jiǎn)稱ART)是對(duì)少精癥或無(wú)精癥患者(通過(guò)睪丸、附睪活檢獲得數(shù)量極少的精子)進(jìn)行卵胞漿內(nèi)單精子顯微注射治療(Intracytoplasmic sperm injection，簡(jiǎn)稱ICSI)而獲得子代。每個(gè)ICSI治療周期的妊娠率在35％-45％，為了獲得妊娠，部分患者需要重復(fù)多次ICSI治療。如果在術(shù)前沒(méi)有對(duì)其稀少精子進(jìn)行凍存，那么每次治療都要進(jìn)行睪丸、附睪活檢，少精癥患者的精子不穩(wěn)定，也有可能得不到精子以致取消治療。

對(duì)稀少精子的冷凍(2-3條/LPF)，目前多見(jiàn)使用各種冷凍載體的報(bào)道，Cohen和Desai分別采用透明帶作為冷凍載體凍存稀少精子，Nawroth采用冷凍環(huán)為載體冷凍睪丸、附睪獲得的精子；隨后又有盧光琇等“不添加冷凍保護(hù)劑的玻璃化方法冷凍稀少精子”的方法報(bào)道。盡管上述研究已經(jīng)獲得成功但是各有利弊。透明帶存在異種蛋白，可能存在生物污染的風(fēng)險(xiǎn)；冷凍環(huán)價(jià)格較貴，對(duì)睪丸、附睪獲得的精子可能需要數(shù)個(gè)冷凍環(huán)來(lái)進(jìn)行冷凍，成本增加。不添加冷凍保護(hù)劑的開(kāi)放性的冷凍麥管，存在著液氮污染的問(wèn)題。目前凍存精子的存儲(chǔ)管、冷凍麥管等對(duì)稀少精子的冷凍復(fù)蘇后的精子活動(dòng)率、精子形態(tài)、精子頂體完整率和DNA斷裂指數(shù)等功能指標(biāo)均不是那么令人滿意。

因此，亟需要一種凍存效果好、操作方便、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，精子回收率高,復(fù)蘇后精子存活率高的旋蓋套管式稀少精子超薄片冷凍載體。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本實(shí)用新型的目的是，提供一種凍存效果好、操作方便、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，精子回收率高,復(fù)蘇后精子存活率高的旋蓋套管式稀少精子超薄片冷凍載體。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本實(shí)用新型采取的技術(shù)方案是：

一種旋蓋套管式稀少精子超薄片冷凍載體，所述旋蓋套管式稀少精子超薄片冷凍載體包括外套管、冷凍載片、旋紐蓋；所述的冷凍載片一端固定在旋鈕蓋上，另一端插入外套管中；所述的外套管端部連接旋鈕蓋；所述外套管一端設(shè)有外螺紋；所述外套管另一端內(nèi)部呈圓錐形：所述的旋鈕蓋包括子旋鈕蓋和母旋鈕蓋；所述的子旋鈕蓋和母旋鈕蓋的內(nèi)側(cè)面均設(shè)有內(nèi)螺紋，且內(nèi)螺紋與外套管上的外螺紋相配合；所述的子旋鈕蓋和母旋鈕蓋通過(guò)折疊機(jī)構(gòu)連接；所述的子旋鈕蓋外側(cè)設(shè)有子鎖扣；所述的母旋鈕外側(cè)設(shè)有母鎖扣；所述的子旋鈕蓋上還設(shè)有平臺(tái)，且平臺(tái)上設(shè)有固定凹槽；所述載片的一端還設(shè)有圓形標(biāo)識(shí)；所述載片的另一端還設(shè)有固定卡條、手柄；所述的固定卡條與固定凹槽相配合。

進(jìn)一步地，所述的外套管兩端呈開(kāi)口結(jié)構(gòu)。

進(jìn)一步地，圓形標(biāo)識(shí)共有兩個(gè)，每個(gè)圓形標(biāo)識(shí)內(nèi)容積為2微升。

進(jìn)一步地，所述載片長(zhǎng)度為23.5毫米，寬度為8毫米。

進(jìn)一步地，所述外套管內(nèi)徑為10mm載片寬度為8mm。

進(jìn)一步地，所述的外套管為耐溫高分子材質(zhì)制備。

進(jìn)一步地，所述手柄的高度為6.2毫米，寬度為4.95毫米。

進(jìn)一步地，所述的手柄上設(shè)有三角形標(biāo)識(shí)。

進(jìn)一步地，所述固定卡條為長(zhǎng)方形。

本實(shí)用新型優(yōu)點(diǎn)在于：

1、本實(shí)用新型的一種旋蓋套管式稀少精子超薄片冷凍載體，凍存效果好、操作方便、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，精子回收率高,復(fù)蘇后精子存活率高；

2、設(shè)有冷凍載片，且冷凍載片一端設(shè)圓形標(biāo)識(shí)，壁薄、透明，便于技術(shù)人員在倒置顯微鏡下操作時(shí)可以清晰觀察，能快速將需要冷凍的極少精子放入圓形標(biāo)識(shí)內(nèi)；

3、冷凍載片上的圓形標(biāo)識(shí)，容積為2微升，器容積小，復(fù)蘇的精子容易找到，精子回收率高；

4、設(shè)有外套管，將冷凍載片裝在密封的套管內(nèi)可以有效地避免液氮的直接接觸，減少了交叉污染/感染的機(jī)會(huì)；

5、設(shè)有旋鈕蓋，其旋鈕蓋通過(guò)固定凹槽固定連接冷凍載片，旋鈕蓋通過(guò)內(nèi)螺紋與外套管上的外螺紋固定連接，旋鈕蓋采用折合扣鎖方式，使用方便，穩(wěn)定性好，使用過(guò)程中不擔(dān)心會(huì)側(cè)翻或顛倒：

6、本實(shí)用新型的一種旋蓋套管式稀少精子超薄片冷凍載體，采用的是顯微操作+微滴蓋油法來(lái)冷凍稀少(單個(gè))精子，當(dāng)顯微鏡下挑選精子操作完畢后，將載體取出培養(yǎng)皿再去除載體上覆蓋的油，即可放入帶旋蓋的套管中，置液氮冷藏；

7、精子回收率高于90％，復(fù)蘇存活率約50％。其凍存效果好、使用方便，適合臨床推廣使用。

附圖說(shuō)明

附圖1是本實(shí)用新型的一種旋蓋套管式稀少精子超薄片冷凍載體裝配結(jié)構(gòu)示意圖。

附圖2是旋鈕蓋和冷凍載片連接結(jié)構(gòu)示意圖。

附圖3為外套管主視方向示意圖。

附圖4為外套管結(jié)構(gòu)示意圖。

附圖5為子旋鈕蓋主視方向示意圖。

附圖6為旋鈕蓋結(jié)構(gòu)示意圖。

附圖7冷凍載片主視方向示意圖。

附圖8為冷凍載片結(jié)構(gòu)示意圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例并參照附圖對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步描述。

附圖中涉及的附圖標(biāo)記和組成部分如下所示：

1.外套管 11.外螺紋

2.冷凍載片 21.圓形標(biāo)識(shí)

22.固定卡條 23.手柄

24.三角形標(biāo)識(shí) 3.旋紐蓋

31.內(nèi)螺紋 32.折疊機(jī)構(gòu)

33.子旋紐蓋 331.平臺(tái)

332.固定凹槽 333.子鎖扣

34.母旋紐蓋 341.母鎖扣

實(shí)施例1

請(qǐng)參照?qǐng)D1和圖2，圖1是本實(shí)用新型的一種旋蓋套管式稀少精子超薄片冷凍載體裝配結(jié)構(gòu)示意圖。圖2是旋鈕蓋3和冷凍載片2連接結(jié)構(gòu)示意圖。一種旋蓋套管式稀少精子超薄片冷凍載體包括外套管1、冷凍載片2、旋紐蓋；所述的冷凍載片2一端固定在旋鈕蓋3上，另一端插入外套管1中；所述的外套管1端部連接旋鈕蓋3。

請(qǐng)參照?qǐng)D3和圖4，圖3為外套管1主視方向示意圖。圖4為外套管1結(jié)構(gòu)示意圖。所述的外套管1兩端呈開(kāi)口結(jié)構(gòu)；所述外套管1一端設(shè)有外螺紋11，外套管1上的外螺紋11方便在一手持裝有冷凍載片2的子旋鈕蓋33順利扭進(jìn)母旋鈕蓋34中；所述外套管1另一端內(nèi)部呈圓錐形，其圓錐形便于在精子處理所用的液氮罐中存放:所述外套管內(nèi)徑為10mm載片寬度為8mm以防載片與套管內(nèi)壁粘黏。

請(qǐng)參照?qǐng)D5和圖6，圖5為子旋鈕蓋33主視方向示意圖。圖6為旋鈕蓋3結(jié)構(gòu)示意圖。所述的旋鈕蓋3包括子旋鈕蓋33和母旋鈕蓋34；所述的子旋鈕蓋33和母旋鈕蓋34的內(nèi)側(cè)面均設(shè)有內(nèi)螺紋31，且內(nèi)螺紋31與外套管1上的外螺紋11相配合；所述的子旋鈕蓋33和母旋鈕蓋34通過(guò)折疊機(jī)構(gòu)32連接，其折疊機(jī)構(gòu)32可選擇合頁(yè)或銷軸；所述的子旋鈕蓋33外側(cè)設(shè)有子鎖扣333；所述的母旋鈕外側(cè)設(shè)有母鎖扣341；所述的子旋鈕蓋33上還設(shè)有平臺(tái)331，且平臺(tái)331上設(shè)有固定凹槽332。

請(qǐng)參照?qǐng)D7，圖7冷凍載片2主視方向示意圖。圖8為冷凍載片2結(jié)構(gòu)示意圖。所述冷凍載片2的一端還設(shè)有圓形標(biāo)識(shí)21，圓形標(biāo)識(shí)21共有兩個(gè)，每個(gè)圓形標(biāo)識(shí)內(nèi)容積為2微升；所述冷凍載片2長(zhǎng)度為23.5毫米，寬度為8毫米；所述冷凍載片2的另一端還設(shè)有固定卡條22、手柄23；所述固定卡條22為長(zhǎng)方形；所述的固定卡條22與固定凹槽332相配合；所述手柄23的高度為6.2毫米，寬度為4.95毫米；所述的手柄23上設(shè)有三角形標(biāo)識(shí)24；所述的冷凍載片2采用高透明經(jīng)特殊工藝處理具有穩(wěn)定附著性。

需要說(shuō)明的是：全文中所述的稀少精子包括單個(gè)精子情形，外套管1為耐溫高分子材質(zhì)制備，確保冷凍載片1冷凍的精子不受外界溫度影響，冷凍效果好；外套管1和旋鈕蓋3對(duì)冷凍載片2具有的安全保護(hù)作用，這樣冷凍載片2裝在密封的套管內(nèi)可以有效地避免液氮的直接接觸，減少了交叉污染/感染的機(jī)會(huì)；

外套管1上設(shè)有外螺紋11，與設(shè)有內(nèi)螺紋31的旋鈕蓋3螺紋連接，可拆卸連接，操作簡(jiǎn)單，且螺紋連接，穩(wěn)定性好。

冷凍載片2壁薄、透明，便于技術(shù)人員在倒置顯微鏡下操作時(shí)可以清晰觀察，能快速將需要冷凍的極少精子放入圓形標(biāo)識(shí)21內(nèi)。冷凍載片2上設(shè)有圓形標(biāo)識(shí)21，容積小，復(fù)蘇的精子容易找到，精子回收率高；冷凍載片2上設(shè)置有手柄23，在精子冷凍過(guò)程中，通過(guò)小鑷子夾住冷凍載片2即可將冷凍載片2從培養(yǎng)皿中取出，方便實(shí)用。手柄23使用時(shí)將冷凍載片2插入打開(kāi)子旋鈕蓋33的內(nèi)側(cè)，扣上母旋鈕蓋34，即可將冷凍載片2安全可靠的扣在旋鈕蓋3里再插入外套管1內(nèi)。

旋鈕蓋包3括子旋鈕蓋33和母旋鈕蓋34，且子旋鈕蓋33上設(shè)有平臺(tái)331，平臺(tái)331設(shè)有固定凹槽332，其固定凹槽332與手柄23上的固定卡條22相配合。當(dāng)帶手柄23的冷凍載片2盛裝好冷凍樣本后，放進(jìn)打開(kāi)折合扣的子旋鈕蓋33時(shí)可以不擔(dān)心會(huì)側(cè)翻或顛倒；然會(huì)再把母旋鈕蓋34合上，扣上子鎖扣333和母鎖扣341，將這個(gè)帶有冷凍載片2的子旋鈕蓋33旋鈕在外套管1上即可。

本實(shí)用新型稀少精子冷凍超細(xì)管載體的使用方法包括以下步驟

(一)精子冷凍

在60mm培養(yǎng)皿內(nèi)做3個(gè)條狀含平衡液的(mHTF，含10％SSS)液滴，覆蓋礦物油，將處理后的精子標(biāo)本加入上述平衡液的(mHTF)液滴內(nèi)；另準(zhǔn)備好一個(gè)超薄冷凍載片2，在超薄冷凍載片2上的圓形標(biāo)識(shí)21內(nèi)加入2μL的冷凍保護(hù)液的微滴，然后將它放入已含精子樣本的培養(yǎng)皿中。將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入倒置顯微鏡下，利用顯微操作系統(tǒng)抓取精子，將撲獲得精子(不超過(guò)3條/每滴)放至超薄冷凍載片2上冷凍液的微滴內(nèi)，用小鑷子夾住超薄冷凍載片2上的手柄23取出超薄冷凍載片2，用吸水紙將礦物油盡量吸干。將超薄冷凍載片2插入打開(kāi)旋鈕蓋3的內(nèi)側(cè)，扣上旋鈕蓋3，套上外套管1，旋緊外套管1，固定在鋁架上，先放置4℃冰箱內(nèi)20分鐘，再置于液氮面上方5cm的液氮蒸汽中5-10分鐘至冷凍液微滴完全凍結(jié)后，放入液氮內(nèi)長(zhǎng)期保存。

二、精子復(fù)蘇

將外套管1自液氮罐取出后，搽去外套管1的霜痕，打開(kāi)旋鈕蓋3上的子鎖扣333和母鎖扣341，扭開(kāi)旋鈕蓋3，用小鑷子夾住超薄冷凍載片2從外套管1內(nèi)取出，迅速插入預(yù)先準(zhǔn)備好的顯微操作培養(yǎng)皿內(nèi)(覆蓋有37℃礦物油)，在倒置顯微鏡下，利用顯微操作針抓取復(fù)蘇后的精子直接用于卵胞漿內(nèi)單精子的注射。

本實(shí)用新型的一種旋蓋套管式稀少精子超薄片冷凍載體，凍存效果好、操作方便、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，精子回收率高,復(fù)蘇后精子存活率高；設(shè)有冷凍載片2，且冷凍載片2一端設(shè)圓形標(biāo)識(shí)21，壁薄、透明，便于技術(shù)人員在倒置顯微鏡下操作時(shí)可以清晰觀察，能快速將需要冷凍的極少精子放入圓形標(biāo)識(shí)21內(nèi)；冷凍載片2上的圓形標(biāo)識(shí)21，容積為2微升，器容積小，復(fù)蘇的精子容易找到，精子回收率高；設(shè)有外套管1，將冷凍載片2裝在密封的套管內(nèi)可以有效地避免液氮的直接接觸，減少了交叉污染/感染的機(jī)會(huì)；設(shè)有旋鈕蓋3，其旋鈕蓋3通過(guò)固定凹槽332固定連接冷凍載片2，旋鈕蓋3通過(guò)內(nèi)螺紋31與外套管1上的外螺紋11固定連接，旋鈕蓋3采用折合扣鎖方式，使用方便，穩(wěn)定性好，使用過(guò)程中不擔(dān)心會(huì)側(cè)翻或顛倒：本實(shí)用新型的一種旋蓋套管式稀少精子超薄片冷凍載體，采用的是顯微操作+微滴蓋油法來(lái)冷凍稀少(單個(gè))精子，當(dāng)顯微鏡下挑選精子操作完畢后，將載體取出培養(yǎng)皿再去除載體上覆蓋的油，即可放入帶旋蓋的套管中，置液氮冷藏；精子回收率高于90％，復(fù)蘇存活率約50％。其凍存效果好、使用方便，適合臨床推廣使用。

以上所述僅是本實(shí)用新型的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，在不脫離本實(shí)用新型原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和補(bǔ)充，這些改進(jìn)和補(bǔ)充也應(yīng)視為本實(shí)用新型的保護(hù)范圍。