本發(fā)明涉及一種基于海帶孢子體白爛病的預(yù)防方法，尤其是指一種利用海帶孢子體抗氧化能力對(duì)白爛病的預(yù)防方法。

背景技術(shù)：

海帶是一種具有明顯世代交替的兩年生褐藻，葉狀體是海帶的孢子體世代。海帶原產(chǎn)于日本、朝鮮北部的冷水海洋中，我國(guó)自主的海帶養(yǎng)殖研究工作開始于1951年，經(jīng)過科研人員不斷努力和探索，解決了海帶苗種和養(yǎng)殖生產(chǎn)中的關(guān)鍵技術(shù)，成果及時(shí)推廣應(yīng)用，使我國(guó)的海帶養(yǎng)殖業(yè)從無到有蓬勃發(fā)展，迅速成為世界上產(chǎn)量和養(yǎng)殖規(guī)模最大的國(guó)家。然而近幾年海帶白爛病的發(fā)生，不僅造成減產(chǎn)，海帶的品相也大打折扣，腐爛的海帶也會(huì)使養(yǎng)殖海域周邊的環(huán)境發(fā)生污染。海帶白爛病通常是孢子體在脆嫩期以后營(yíng)養(yǎng)缺乏和光照過強(qiáng)引起，因此如果能通過對(duì)海帶孢子體生理狀況的監(jiān)測(cè)，提前對(duì)海帶白爛病進(jìn)行預(yù)防，及時(shí)采取措施，完全可以杜絕海帶白爛病的發(fā)生。植物體內(nèi)存在著抗氧化調(diào)控系統(tǒng)，它們參與抵抗逆境脅迫對(duì)植物的損害，當(dāng)脅迫出現(xiàn)時(shí)，抗氧化系統(tǒng)的成分會(huì)發(fā)生變化，一些清除活性氧的關(guān)鍵性酶（SOD、POD、CAD）活性升高，機(jī)體抵抗外界脅迫的能力也相應(yīng)增強(qiáng)。但是在脅迫后期或者脅迫超過了抗氧化系統(tǒng)的承載能力時(shí)，抗氧化系統(tǒng)受到損傷，進(jìn)而導(dǎo)致活性氧含量劇增，細(xì)胞受到損害。因此可以利用脅迫初期海帶的清除活性氧的關(guān)鍵性酶（SOD、POD、CAD）的變化作為海帶受環(huán)境脅迫的預(yù)防指標(biāo)。

海帶孢子體的生長(zhǎng)分為幼齡期、凸凹期、脆嫩期、厚成期、成熟期、衰老期四個(gè)階段，海帶養(yǎng)殖中在凸凹期夾苗，厚成期后期收獲，脆嫩期和厚成期的海帶為間生長(zhǎng)方式，不同長(zhǎng)度的葉片生長(zhǎng)部范圍不同，同一長(zhǎng)度的葉片不同部位的生長(zhǎng)速度差異較大，總體而言，越接近于柄部的基部生長(zhǎng)速度越快，梢部生長(zhǎng)最慢，長(zhǎng)度超過1米的海帶生長(zhǎng)部的位置約在葉片基部到距基部10厘米的位置，梢部逐漸衰退并脫落。海帶孢子體這種生長(zhǎng)方式?jīng)Q定了葉片各部位對(duì)環(huán)境的要求不同，因此對(duì)環(huán)境脅迫所表現(xiàn)出的抗氧化能力不同。

為了防止?fàn)I養(yǎng)缺乏或光照過強(qiáng)引起海帶白爛病，保證海帶養(yǎng)殖的產(chǎn)量和質(zhì)量，針對(duì)海帶不同生長(zhǎng)時(shí)期的生長(zhǎng)特性的差異，本發(fā)明提供一種海帶孢子體取樣方法，并通過對(duì)樣品抗氧化酶（SOD、POD、CAD）進(jìn)一步的測(cè)定，根據(jù)測(cè)定結(jié)果對(duì)海帶孢子體白爛病的發(fā)生進(jìn)行預(yù)防。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：一種海帶孢子體白爛病的預(yù)防方法，其特征在于：

1)凸凹期海帶孢子體：

凸凹期抗氧化酶活性測(cè)定：取距基部4-20cm葉片邊緣厚度≤1.3mm部分研磨后按抗氧化酶測(cè)定要求稱取用量，然后進(jìn)行酶活性測(cè)定；

2)脆嫩期海帶孢子體：

a、生長(zhǎng)部抗氧化酶活性測(cè)定：取距海帶葉片基部0-10cm處邊緣片取表層厚度≤0.8mm的部分研磨后按抗氧化酶測(cè)定要求稱取用量，然后進(jìn)行酶活性測(cè)定；

b、脫落部抗氧化酶活性測(cè)定：取海帶葉片尾部即將脫落部分片取表層厚度≤0.8mm的部分研磨后按抗氧化酶測(cè)定要求稱取用量，然后進(jìn)行酶活性測(cè)定；

3)厚成期海帶孢子體：

a、生長(zhǎng)部抗氧化酶活性測(cè)定：取距海帶葉片基部5-10cm處選長(zhǎng)1cm寬8-10cm片取表層厚度≤0.8mm部分研磨后按抗氧化酶測(cè)定要求稱取用量，然后進(jìn)行酶活性測(cè)定；

b、脫落部抗氧化酶活性測(cè)定：取海帶葉片尾部脫落部分向前10-20cm選長(zhǎng)1cm寬8-10cm片取表層厚度≤0.8mm部分研磨后按抗氧化酶測(cè)定要求稱取用量，然后進(jìn)行酶活性測(cè)定；

4)如果海帶脆嫩期或厚成期生長(zhǎng)部抗氧化酶活性高出凸凹期抗氧化酶活性達(dá)50%，8天內(nèi)需及時(shí)施肥或降低海帶養(yǎng)殖水層避免強(qiáng)光照；

如果脆嫩期和厚成期海帶生長(zhǎng)部抗氧化酶活性接近或高于脫落部表層抗氧化酶活性，8天內(nèi)需及時(shí)施肥或降低海帶養(yǎng)殖水層避免強(qiáng)光照。

本發(fā)明的有益效果是：海帶孢子體在同一養(yǎng)殖海域?qū)Νh(huán)境的適應(yīng)使抗氧化系統(tǒng)的酶活性保持相對(duì)穩(wěn)定，然而海帶孢子體不同時(shí)期的不同位置抗氧化酶活性差異較大，海帶孢子體在幼齡期整個(gè)葉片抗氧化酶差別不大，正常情況下凹凸期葉片邊緣靠前部抗氧化酶基本與幼齡期差不多，但在脆嫩期和厚成期，生長(zhǎng)部和脫落部差異很大，正常情況下生長(zhǎng)部表層的抗氧化酶活性和凸凹期的差不多，但脫落部表層抗氧化酶活性比生長(zhǎng)部高出40-60%，但當(dāng)生長(zhǎng)部表層的抗氧化酶活性接近或高于脫落部表層抗氧化酶活性，一般持續(xù)8天就會(huì)發(fā)生白爛病。如果及時(shí)施肥或降低海帶養(yǎng)殖水層避免強(qiáng)光照，則會(huì)避免白爛病的發(fā)生。

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明

實(shí)施例一：

1、凸凹期，海帶孢子體長(zhǎng)度10-100cm，取距基部4-20cm葉片邊緣厚度≤1.3mm部分研磨后按抗氧化酶（SOD、POD、CAD）測(cè)定要求稱取用量，然后進(jìn)行酶活性測(cè)定。

2、脆嫩期，海帶孢子體長(zhǎng)度≥100cm，a、距海帶葉片基部0-10cm處邊緣片取表層厚度≤0.8mm的部分研磨后按抗氧化酶（SOD、POD、CAD）測(cè)定要求稱取用量，然后進(jìn)行酶活性測(cè)定；b、海帶葉片尾部即將脫落部分片取表層厚度≤0.8mm的部分研磨后按抗氧化酶（SOD、POD、CAD）測(cè)定要求稱取用量，然后進(jìn)行酶活性測(cè)定。

3、厚成期，a、距海帶葉片基部5-10cm處選長(zhǎng)1cm寬8-10cm片取表層厚度≤0.8mm部分研磨后按抗氧化酶（SOD、POD、CAD）測(cè)定要求稱取用量，然后進(jìn)行酶活性測(cè)定；b、海帶葉片尾部脫落部分向前10-20cm選長(zhǎng)1cm寬8-10cm片取表層厚度≤0.8mm部分研磨后按抗氧化酶（SOD、POD、CAD）測(cè)定要求稱取用量，然后進(jìn)行酶活性測(cè)定。

4、脆嫩期和厚成期海帶生長(zhǎng)部的抗氧化酶（SOD、POD、CAD）活性與凸凹期相近，脫落部偏高，表明海帶生長(zhǎng)正常。

5、脆嫩期或厚成期海帶生長(zhǎng)部的抗氧化酶（SOD、POD、CAD）活性比凸凹期的高出50%以上，一般持續(xù)8天就會(huì)發(fā)生白爛病，8天內(nèi)需及時(shí)施肥或降低海帶養(yǎng)殖水層避免強(qiáng)光照。

6、脆嫩期或厚成期生長(zhǎng)部表層的抗氧化酶（SOD、POD、CAD）活性接近或高于脫落部表層抗氧化酶（SOD、POD、CAD）活性，一般持續(xù)8天就會(huì)發(fā)生白爛病，8天內(nèi)需及時(shí)施肥或降低海帶養(yǎng)殖水層避免強(qiáng)光照。

在5個(gè)不同海域分別取海帶孢子體凸凹期取距基部4-15cm葉片邊緣厚度≤1.3mm部分研磨稱取5.00g利用超氧化物歧化酶檢測(cè)試劑盒進(jìn)行測(cè)定；

在5個(gè)不同海域分別取海帶孢子體脆嫩期(a)距葉片基部3-5cm處邊緣片表層厚度≤0.8mm的部分研磨后稱取5.00g利用超氧化物歧化酶檢測(cè)試劑盒進(jìn)行測(cè)定；(b)分別取海帶葉片尾部即將脫落部分片表層厚度≤0.8mm的部分研磨后稱取5.00g利用超氧化物歧化酶檢測(cè)試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

在5個(gè)不同海域分別取厚成期(a)距海帶葉片基部6-7cm處選寬8-10cm片取表層厚度≤0.8mm部分研磨稱取5.00g，利用超氧化物歧化酶檢測(cè)試劑盒進(jìn)行測(cè)定；(b)分別取海帶葉片尾部脫落部分向前10-11cm選寬8-10cm片取表層厚度≤0.8mm部分研磨后稱取5.00g，利用超氧化物歧化酶檢測(cè)試劑盒進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果如表一：

表一、不同海區(qū)海帶不同部位SOD活性

由表一可以看出海區(qū)2、4、5厚成期海帶生長(zhǎng)部的SOD活性與脫落部的持平，為此在海區(qū)2養(yǎng)殖的海帶采取下降水層的方式，而海區(qū)4、5未做處理，結(jié)果8天以后海區(qū)4、5海帶開始出現(xiàn)嚴(yán)重的白爛現(xiàn)象。