專利名稱:一種脫落細(xì)胞保存液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種脫落細(xì)胞保存液。
背景技術(shù)：
活細(xì)胞具有生理功能、生物學(xué)活性和固有的細(xì)胞形態(tài)及結(jié)構(gòu)，在很多方面具有應(yīng)用 價值。但若將其脫離原來的生存環(huán)境放置，細(xì)胞的生理功能、生物學(xué)活性及固有的細(xì)胞 形態(tài)及結(jié)構(gòu)就會發(fā)生改變，常規(guī)的方法就是對脫落的細(xì)胞進(jìn)行冷凍保存，而冷凍保存需 要專門的冷凍設(shè)備，比較昂貴，而且，由于冷凍、解凍過程中存在對細(xì)胞損傷的危害， 從而導(dǎo)致細(xì)胞變異或變形，影響后續(xù)工作。
由此，市場上出現(xiàn)了專門用于脫落細(xì)胞保存的溶液，如美國新柏氏(TinpreperTCT) 生產(chǎn)的保存液(PresetverCytTM)，該保存液是與機(jī)器Tinpreper—2000配套使用的試劑，價 格昂貴。為降低應(yīng)用成本，研究人員開發(fā)了一種新的保存液配方，參考申請?zhí)枮?200610017591.9的中國發(fā)明申請公開《脫落細(xì)胞保存液》(公開號CN1834233A)，該申 請的保存液由以下成分組成，按體積份計甲醇或乙醇40份 60份、磷酸鹽緩沖液或三 羥甲基氨基甲垸鹽酸緩沖液20份 40份、甲醛或丙酮5份 10份、乙二胺四乙酸二鉀或 乙二胺四乙酸二鈉5份 10份。
該技術(shù)領(lǐng)域：
的專利文獻(xiàn)又可以參考申請?zhí)枮?00680042980.5的中國發(fā)明申請公開 《細(xì)胞保存用水溶液》(公開號CN101310009A)，該水溶液包括增稠劑、防冷凍劑、糖， 但不含天然動物源組分，如血清和基礎(chǔ)培養(yǎng)基等。還可以參考申請?zhí)枮?00710050463.9 的中國發(fā)明申請公開《脫落細(xì)胞保存固定液及細(xì)胞薄層涂片的制作方法》(公開號 CN101182506A),脫落細(xì)胞保存液包括下述配比以體積份計的組分甲醇10-15份；乙
醇10-15份；丙三醇l-2份；聚乙二醇l-2份；甲醛10-12份；冰醋酸0.5-1份；質(zhì)量濃
度為0.85-0.9%的氯化鈉10-20份；磷酸緩沖液33-68.5份。該保存液具有細(xì)胞固有效果 好、細(xì)胞粘片率高的特點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對上述的技術(shù)現(xiàn)狀而提供一種細(xì)胞保存率高、保存 時間長的脫落細(xì)胞保存液。
本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為 一種脫落細(xì)胞保存液，其特征在于
4包括pH緩沖劑、滲透壓維持劑、防腐保鮮劑、用于維持細(xì)胞形態(tài)的固定劑、抗凝劑、 黏液軟化劑、保濕劑及破壞紅細(xì)胞的成分。
作為優(yōu)選，所述的pH緩沖劑pH值為6.5~7.4。
作為優(yōu)選，所述的pH緩沖劑為的PBS、 Tris HC1或PIPES中的至少一種； 所述的滲透壓維持劑為氯化鈉溶液；
所述的防腐保鮮劑為苯甲酸鈉鹽、苯甲酸鉀鹽中的至少一種； 所述的固定劑為無水乙醇、甲醇、多聚甲醛、丙酮、香豆素中的至少一種； 所述的抗凝劑為乙二胺四乙酸二納、乙二胺四乙酸二鉀、肝素中的至少一種； 所述的黏液軟化劑為蛋白酶K; 所述的保濕劑為石炭酸；
所述的破壞紅細(xì)胞的成分為碳酸氫鈉、磷酸三鈉中的至少一種。
作為優(yōu)選，包括如下組分和重量百分比
氯化鈉 0.5%~0.9%
碳酸氫鈉 0.1%~0.5%
磷酸三鈉 0.1%~0.5%
抗凝劑 5%~10%
防腐保鮮劑1%
蛋白酶K: 0.1~0.5%
多聚甲醛 1%~4%
香豆素 1%~4%
石碳酸
1%~5%， '
還添加有如下組分和體積百分比比
pH緩沖劑 50%~70%
無水乙醇 12%~20%
甲醇 10%~15%
丙酮 1%~4%，
其中，所述的抗凝劑為乙二胺四乙酸二納、乙二胺四乙酸二鉀、肝素中的一種，所 述的防腐保鮮劑為苯甲酸鈉鹽、苯甲酸鉀鹽中的一種，所述的pH緩沖劑為PBS、TrisHCl 或PIPES中的一種。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于保存液中各個組分合理配比，相互協(xié)同，使
得細(xì)胞保存率高，常溫下可保存長，最長能達(dá)到2年；能充分溶解粘液和部分破壞紅細(xì)
胞；制片效果具有細(xì)胞分布非常均勻，細(xì)胞形態(tài)完好，胞漿與細(xì)胞核分界清楚、層次分 明，胞漿與細(xì)胞核透亮性非常好，核質(zhì)非常清晰細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和數(shù)量，可同時用于 HPV-DNA、衣原體及免疫組化測試；可提供用于其他部位細(xì)胞學(xué)檢査的專用液基；同一標(biāo)本可重復(fù)制片多次，并具有同一性；細(xì)胞保存液無毒無害無污染，確保操作人員健 康安全；充分保留了有診斷意義的細(xì)胞成分；配置成本較低，易于推廣。
具體實施方式
以下結(jié)合
附圖實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。 實施例l:本實施例中的脫落細(xì)胞保存液包括如下
重量百分比的組分0.7%氯化鈉，0.25%磷酸三鈉，7.5%乙二胺四乙酸二納、乙
二胺四乙酸二鉀、肝素中之一，1%苯甲酸納鹽(或鉀鹽)，3%多聚甲醛、3%香豆素、0.1% 蛋白酶K， 0.3%碳酸氫鈉，2.5%石碳酸，。
體積百分比的組分60。/。pH緩沖劑(pH7)， 16%無水乙醇，12.5%甲醇，3%丙酮， 其中，pH緩沖劑為PBS、 TrisHCl、 PIPES中的一種。
實施例2:本實施例中的脫落細(xì)胞保存液包括如下
重量百分比的組分0.9%氯化鈉，0.1%磷酸三鈉，10%乙二胺四乙酸二納、乙二
胺四乙酸二鉀、肝素中之一，1%苯甲酸納鹽(或鉀鹽)，4%多聚甲醛，4%香豆素，0.5% 蛋白酶K， 0.5%碳酸氫鈉，1%石碳酸。
體積百分比的組分50%pH緩沖劑(pH6.5)， 20%無水乙醇，15%甲醇，4%丙酮， 其中，pH緩沖劑為PBS、 TrisHCl、 PIPES中的一種。
實施例3:本實施例中的脫落細(xì)胞保存液包括如下
重量百分比的組分0.5%氯化鈉，0.5%磷酸三鈉，5%乙二胺四乙酸二納、乙二胺 四乙酸二鉀、肝素中之一，1%苯甲酸納鹽(或鉀鹽)，1%多聚甲醛，4%香豆素，0.3%蛋 白酶K， 0.1%碳酸氫鈉，5%石碳酸。
體積百分比的組分70%pH緩沖劑(pH7.4)， 12%無水乙醇，10%甲醇，2%丙酮， 其中，pH緩沖劑為PBS、 TrisHCl、 PIPES中的一種。
試驗結(jié)果表明，實施例1、實施例2及實施例3的脫落細(xì)胞保存液細(xì)胞保存率高、 保存時間長，常溫下能保存2年。
權(quán)利要求
1、一種脫落細(xì)胞保存液，其特征在于包括pH緩沖劑、滲透壓維持劑、防腐保鮮劑、用于維持細(xì)胞形態(tài)的固定劑、抗凝劑、黏液軟化劑、保濕劑及破壞紅細(xì)胞的成分。
2、 根據(jù)權(quán)利要求
1所述的脫落細(xì)胞保存液，其特征在于所述的pH緩沖劑pH值為 6.5~7.4。
3、 根據(jù)權(quán)利要求
2所述的脫落細(xì)胞保存液，其特征在于 所述的pH緩沖劑為的PBS、 Tris HC1或PIPES中的至少一種； 所述的滲透壓維持劑為氯化鈉溶液；所述的防腐保鮮劑為苯甲酸鈉鹽、苯甲酸鉀鹽中的至少一種； 所述的固定劑為無水乙醇、甲醇、多聚甲醛、丙酮、香豆素中的至少一種； 所述的抗凝劑為乙二胺四乙酸二納、乙二胺四乙酸二鉀、肝素中的至少一種； 所述的黏液軟化劑為蛋白酶K; 所述的保濕劑為石炭酸；所述的破壞紅細(xì)胞的成分為碳酸氫鈉、磷酸三鈉中的至少一種。
4、 根據(jù)權(quán)利要求
3所述的脫落細(xì)胞保存液，其特征在于包括如下組分和重量百分比氯化鈉 0.5%~0.9% 碳酸氫鈉 0.1%~0.5% 磷酸三鈉 0.1%~0.5% 抗凝劑 5%~10% ,防腐保鮮劑1% 蛋白酶K: 0.1~0.5% 多聚甲醛 1%~4% 香豆素 1%~4% 石碳酸 1%~5%， 還添加有如下組分和體積百分比比 pH緩沖劑 50%~70% 無水乙醇 12%~20% 甲醇 10%~15% 丙酮 1%~4%，其中，所述的抗凝劑為乙二胺四乙酸二納、乙二胺四乙酸二鉀、肝素中的一種，所 述的防腐保鮮劑為苯甲酸鈉鹽、苯甲酸鉀鹽中的一種，所述的pH緩沖劑為PBS、TrisHCl或PIPES中的一種。
專利摘要
一種脫落細(xì)胞保存液，其特征在于包括pH緩沖劑、滲透壓維持劑、防腐保鮮劑、用于維持細(xì)胞形態(tài)的固定劑、抗凝劑、黏液軟化劑、蛋白酶K及破壞紅細(xì)胞的成分。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于細(xì)胞保存率高，常溫下可保存時間長；能充分溶解粘液和部分破壞紅細(xì)胞；制片效果具有細(xì)胞分布非常均勻，細(xì)胞形態(tài)完好，胞漿與細(xì)胞核分界清楚、層次分明，胞漿與細(xì)胞核透亮性非常好，核質(zhì)非常清晰細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和數(shù)量。
文檔編號A01N1/02GKCN101485303SQ200910037434
公開日2009年7月22日 申請日期2009年2月26日
發(fā)明者陳文武 申請人:廣州鴻琪光學(xué)儀器科技有限公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan