一種鐵皮石斛專用組織培養(yǎng)液的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種鐵皮石斛專用組織培養(yǎng)液的制備方法
【背景技術(shù)】
[0002]石斛為蘭科石斛屬多年附生草本植物，是我國(guó)傳統(tǒng)常用的名貴中藥材。早在《神農(nóng)本草經(jīng)》和《本草綱目》上列為上品藥材，歷代本草及當(dāng)今《中華人民共和國(guó)藥典》中均有收載。石斛以莖入藥，含有石斛堿、石斛胺、石斛次堿、石斛寧等多種生物堿；味甘淡、性微寒；有滋陰養(yǎng)胃、清熱生津功效，主要對(duì)消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、心血管和眼科等疾病有明的治療作用。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明，石斛可促進(jìn)血液循環(huán)，增強(qiáng)心臟功能；促進(jìn)腸胃蠕動(dòng)，增強(qiáng)消化功能；能顯著提高人體內(nèi)的SOP(超氧歧化酶)水平，降低LPO(過氧化脂質(zhì))，起到顯著的抗衰老作用。
[0003]鐵皮石斛又稱黑節(jié)草，屬蘭科石斛屬，為蘭科多年生附生草本植物，是一種珍貴的野生藥用植物。生于海拔達(dá)1600米的山地半陰濕的巖石上，喜溫暖濕潤(rùn)氣候和半陰半陽的環(huán)境，不耐寒，一般均能耐_5°C的低溫。石斛可分為黃草、金釵、馬鞭等數(shù)十種，鐵皮石斛和金釵石斛為石斛之極品，鐵皮石斛被列為“中華九大仙草之首”，自唐宋以來，一直被列為皇室貢品，鐵皮石斛因表皮呈鐵綠色而得名。鐵皮石斛具有獨(dú)特的藥用價(jià)值，以其莖入藥，中藥名:石斛，屬補(bǔ)益藥中的補(bǔ)陰藥，《中國(guó)藥典》:益胃生津，滋陰清熱。鐵皮石斛等少數(shù)品種之嫩莖，扭成螺旋狀或彈簧狀，曬干，商品稱為耳環(huán)石斛，然而，因生長(zhǎng)周期緩慢，極難存活，野生鐵皮石斛瀕臨滅絕，人工育苗，成活率較低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]基于【背景技術(shù)】存在的技術(shù)問題，本發(fā)明提出了一種鐵皮石斛專用組織培養(yǎng)液的制備方法，通過調(diào)整個(gè)組分之間的比例和添加的先后順序，使最終得到的培養(yǎng)液，能夠?yàn)殍F皮石斛提供全面的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，能夠使鐵皮石斛快速促根生莖，并能夠提高鐵皮石斛中多糖含
量、氨基酸含量°
[0005]本發(fā)明提出的一種鐵皮石斛專用組織培養(yǎng)液的制備方法，包括如下步驟:
[0006]S1、按摩爾份稱取2.2-2.5份碘化鉀、40-42份硫酸錳、23-25份硫酸鋅、70-72份硼酸、1-1.5份鉬酸鈉、0.1-0.3份硫酸銅、0.3-0.5份氯化鈷，加水溶解后攪拌均勻得到第一組分，其中碘化鉀與第一組分的摩爾體積比(mmol/L)為2.2-2.5:2.3-2.4 ；
[0007]S2、按摩爾份稱取30-33份硫酸亞鐵和59_62份乙二胺四乙酸二鈉，加水溶解后攪拌均勻得到第二組分，其中硫酸亞鐵與第二組分的摩爾體積比(mmol/L)為30-33:
1.9-2.1 ；
[0008]S3、按重量份稱取1.4-1.6 X 15份肌醇、400-410份煙酸、780-800份鹽酸吡哆醇、170-190份鹽酸硫胺素和1550-1600份甘氨酸，加水溶解后攪拌均勻得到第三組分，其中鹽酸吡哆醇與第三組分的質(zhì)量體積比(g/L)為156-160:1000 ；
[0009]S4、按重量份稱取3800-4000份去皮土豆，加入料理機(jī)中，加水后進(jìn)行攪拌得到土豆泥，再加入1000-1200份椰子汁，混合均勻后得到物料A ;將57-60份硝酸銨、67-70份硝酸鉀、16-20份氯化鈣、14-17份硫酸鎂、7-10份磷酸二氫鉀加入水中溶解后混合均勻得到物料B ;接著將物料A加熱，在加熱過程中加入物料B，攪拌均勻后依次加入第一組分、第二組分和第三組分并攪拌均勻，繼續(xù)加入3000-3200份紅糖和300-320份瓊脂并攪拌均勻，加水溶解后攪拌均勻后，調(diào)節(jié)PH值為5.5-6得到混合物料，其中瓊脂與混合物料的質(zhì)量體積比(g/L)為75-80:17-18，第一組分、第二組分、第三組分和混合物料的體積比為0.2-0.4:0.2-0.4:0.2-0.4:65-75 ；
[0010]S5、將混合物料分裝后，進(jìn)行高溫高壓滅菌，冷卻至室溫得到鐵皮石斛專用組織培養(yǎng)液。
[0011]優(yōu)選地，SI中，按摩爾份稱取2.3-2.4份碘化鉀、40.6-41.2份硫酸錳、23.7-24.5份硫酸鋅、70.8-71.2份硼酸、1.2-1.4份鉬酸鈉、0.13-0.22份硫酸銅、0.36-0.45份氯化鈷，加水溶解后攪拌均勻得到第一組分，其中碘化鉀與第一組分的摩爾體積比(mmol/L)為
2.3_2.4:2_ 35_2.370
[0012]優(yōu)選地，S2中，硫酸亞鐵和乙二胺四乙酸二鈉的摩爾比為31-32:60_61。
[0013]優(yōu)選地，S3中，按重量份稱取1.45-1.56X 15份肌醇、403-407份煙酸、785-795份鹽酸吡哆醇、175-185份鹽酸硫胺素和1580-1590份甘氨酸，加水溶解后攪拌均勻得到第三組分，其中鹽酸吡哆醇與第三組分的質(zhì)量體積比(g/L)為157-159:1000 ；
[0014]優(yōu)選地，S4中，按重量份稱取3850-3900份去皮土豆，加入料理機(jī)中，加水后進(jìn)行攪拌得到土豆泥，再加入1050-1150份椰子汁，混合均勻后得到物料A ;將58-59份硝酸銨、68-69份硝酸鉀、17-19份氯化鈣、15-16份硫酸鎂、8_9份磷酸二氫鉀加入水中溶解后混合均勻得到物料B ;接著將物料A加熱，在加熱過程中加入物料B，攪拌均勻后依次加入第一組分、第二組分和第三組分并攪拌均勻，繼續(xù)加入3100-3150份紅糖和305-315份瓊脂并攪拌均勻，加水溶解后攪拌均勻后，調(diào)節(jié)pH值為5.5-6得到混合物料，其中瓊脂與混合物料的質(zhì)量體積比(g/L)為77-78:17-18，第一組分、第二組分、第三組分和混合物料的體積比為0.3:0.3:0.3:68-72 ο
[0015]本發(fā)明配伍合理，通過調(diào)整個(gè)組分之間的比例和添加的先后順序，使氮磷鉀等常量元素和微量元素的處于合理的比例之中，使最終得到的培養(yǎng)液，能夠?yàn)殍F皮石斛提供全面的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，而有機(jī)物質(zhì)和無機(jī)鹽相互配合，能夠使鐵皮石斛快速促根生莖，土豆泥、椰子汁、紅糖和瓊脂相互配合，能夠提高鐵皮石斛中多糖含量、氨基酸含量，提高鐵皮石斛的生根率和生長(zhǎng)速度，顯著提高鐵皮石斛的存活率。
【具體實(shí)施方式】
[0016]下面，通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行詳細(xì)說明。
[0017]實(shí)施例1
[0018]本發(fā)明提出的一種鐵皮石斛專用組織培養(yǎng)液的制備方法，包括如下步驟:
[0019]S1、按摩爾份稱取2.2份碘化鉀、42份硫酸錳、23份硫酸鋅、72份硼酸、I份鉬酸鈉、0.3份硫酸銅、0.3份氯化鈷，加水溶解后攪拌均勻得到第一組分，其中碘化鉀與第一組分的摩爾體積比(mmol/L)為25:23 ；
[0020]S2、按摩爾份稱取33份硫酸亞鐵和59份乙二胺四乙酸二鈉，加水溶解后攪拌均勻得到第二組分，其中硫酸亞鐵與第二組分的摩爾體積比(mmol/L)為33:1.9 ;
[0021]S3、按重量份稱取1.6 X 15份肌醇、400份煙酸、800份鹽酸吡哆醇、170份鹽酸硫胺素和1600份甘氨酸，加水溶解后攪拌均勻得到第三組分，其中鹽酸吡哆醇與第三組分的質(zhì)量體積比(g/L)為156:1000 ;
[0022]S4、按重量份稱取4000份去皮土豆，加入料理機(jī)中，加水后進(jìn)行攪拌得到土豆泥，再加入1000份椰子汁，混合均勻后得到物料A ;將60份硝酸銨、67份硝酸鉀、20份氯化鈣、14份硫酸鎂、10份磷酸二氫鉀加入水中溶解后混合均勻得到物料B ;接著將物料A加熱，在加熱過程中加入物料B，攪拌均勻后依次加入第一組分、第二組分和第三組分并攪拌均勻，繼續(xù)加入3000份紅糖和320份瓊脂并攪拌均勻，加水溶解后攪拌均勻后，調(diào)節(jié)pH值為5.5得到混合物料，其中瓊脂與混合物料的質(zhì)量體積比(g/L)為80:17，第一組分、第二組分、第三組分和混合物料的體積比為0.4:0.2:0.4:65 ；
[0023]S5、將混合物料分裝后，進(jìn)行高溫高壓滅菌，冷卻至室溫得到鐵皮石斛專用組織培養(yǎng)液。
[0024]實(shí)施例2
[0025]本發(fā)明提出的一種鐵皮石斛專用組織培養(yǎng)液的制備方法，包括如下步驟:
[0026]S1、按摩爾份稱取2.5份碘化鉀、40份硫酸錳、25份硫酸鋅、70份硼酸、1.5份鉬酸鈉、0.1份硫酸銅、0.5份氯化鈷，加水溶解后攪拌均勻得到第一組分，其中碘化鉀與第一組分的摩爾體積比(mmol/L)為11:12 ;
[0027]S2、按摩爾份稱取30份硫酸亞鐵和62份乙二胺四乙酸二鈉，加水溶解后攪拌均勻得到第二組分，其中硫酸亞鐵與第二組分的摩爾體積比(mmol/L)為10:0.7 ;
[0028]S3、按重量份稱取1.4X 15份肌醇、410份煙酸、780份鹽酸吡哆醇、190份鹽酸硫胺素和1550份甘氨酸，加水溶解后攪拌均勻得到第三組分，其中鹽酸吡哆醇與第三組分的質(zhì)量體積比(g/L)為16:100 ;
[0029]S4、按重量份稱取3800份去皮土豆，加入料理機(jī)中，加水后進(jìn)行攪拌得到土豆泥，再加入1200份椰子汁，混合均勻后得到物料A ;將57份硝酸銨、70份硝酸鉀、16份氯化鈣、17份硫酸鎂、7份磷酸二氫鉀加入水中溶解后混合均勻得到物料B ;接著將物料A加熱，在加熱過程中加入物料B，攪拌均勻后依次加入第一組分、第二組分和第三組分并攪拌均勻，繼續(xù)加入3200份紅糖和300份瓊脂并攪拌均勻，加水溶解后攪拌均勻后