向日葵花粉超低溫保存的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種植物體局部的保存方法，特別是涉及一種用于長(zhǎng)期保存向日葵花 粉的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 向日葵起源于北美洲，是菊科、向日葵屬的植物，向日葵的種子具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià) 值，不但可作成受人喜愛(ài)的葵瓜子，更可榨出低膽固醇的高級(jí)食用葵花油。向日葵在我國(guó)已 有幾十年的栽培歷史.遍布20多個(gè)省、市、自治區(qū)，是重要的經(jīng)濟(jì)作物之一。
[0003] 向日葵具有明顯的雜種優(yōu)勢(shì)，生產(chǎn)中使用的向日葵種子絕大多數(shù)為雜種一代。在 "三系"育種工作中，有時(shí)需要利用異地的花粉，有時(shí)可能遇到親本花期不育的問(wèn)題。只有打 破雜交親本時(shí)間與空間的隔離，才能增加獲得新品種的機(jī)會(huì)，這就使得珍貴、稀有遺傳種質(zhì) 的貯備工作尤為重要。成熟花粉包含著植物的全部遺傳信息，因此向日葵花粉的貯藏對(duì)解 決雜交親本花期不遇以及人工授粉、種質(zhì)資源保存等都具有重要意義。
[0004] 目前，關(guān)于向日葵花粉長(zhǎng)期儲(chǔ)藏的報(bào)道尚不多見(jiàn)，大部分只能進(jìn)行幾天的短期儲(chǔ) 藏。本發(fā)明可以為向日葵花粉長(zhǎng)期儲(chǔ)藏提供一個(gè)經(jīng)濟(jì)、快速、簡(jiǎn)便的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明是為了解決向日葵親本花期不遇和遠(yuǎn)距離雜交的技術(shù)問(wèn)題，提供一種便于 異地運(yùn)輸及貯藏的向日葵花粉超低溫保存的方法及其所配套的花粉離體萌發(fā)培養(yǎng)基。
[0006] 本發(fā)明向日葵花粉超低溫保存的方法，包括以下步驟：
[0007] -、采集花粉：于上午9-11點(diǎn)采集花盤(pán)上的花粉，將采集的花粉過(guò)40-60目的篩 子，去除雜質(zhì)；
[0008] 二、測(cè)定花粉活性：用花粉離體萌發(fā)法測(cè)定花粉活性，花粉活性不低于50%即可 進(jìn)行下一步操作；
[0009] 三、干燥：將花粉平鋪在牛皮紙上，于常溫陰涼處干燥，至花粉含水量為80-90% ;
[0010] 四、冷凍保存：將干燥后的花粉裝入凍存管，置于液氮中5-10s后，轉(zhuǎn)移至-80°C冰 箱儲(chǔ)存；
[0011] 五、解凍：將儲(chǔ)存的花粉從-80°C冰箱取出后，直接在常溫下置于牛皮紙上解凍 0. 5h即可。
[0012] 進(jìn)一步，本發(fā)明向日葵花粉超低溫保存的方法，所述步驟二中的花粉離體萌 發(fā)使用的培養(yǎng)基為：蔗糖 120g/L、硼酸 150mg/L、CaCl2 · 2H20 1.0 g/L、PEG4000 90g/ L、MgSO4 · 7H20350mg/L、KN03950mg/L、KH2P0490mg/L、KCl 175mg/L、Na2EDTA 7. 5mg/L、 FeSO4 · 7H200. 025mg/L、Na2MoO4 · 2H20 0· 25mg/L、CuSO4 · 5H20 0· 025mg/L、CoCl2 · 6H20 0.025mg/L、VBl l.Omg/L 和 VB6 l.Omg/L。
[0013] 本發(fā)明向日葵花粉超低溫保存的方法與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下有益效果：
[0014] 1、本發(fā)明的向日葵花粉超低溫保存的方法，是針對(duì)目前向日葵制種市場(chǎng)，可直接 進(jìn)行異地父母本制種或不同季節(jié)種植，儲(chǔ)藏或運(yùn)輸，從而有效抑制向日葵花粉父母本外流。
[0015] 2、經(jīng)本發(fā)明的方法儲(chǔ)存的向日葵花粉授粉成功率不但沒(méi)有降低，反而有輕微提 高，使向日葵花粉的超低溫保藏成為可行，彌補(bǔ)了向日葵花粉長(zhǎng)期儲(chǔ)藏方法的空白。
[0016] 3、本發(fā)明的向日葵花粉超低溫保存的方法，其含水量遠(yuǎn)高于現(xiàn)有技術(shù)所使用的 量，這是由向日葵花粉其自身特性決定的，采用本發(fā)明的方法可以使向日葵花粉儲(chǔ)藏在液 氮中一年以上。而將向日葵花粉降至較低的含水量再進(jìn)行超低溫保存，將使其失去活性。
[0017] 4、本發(fā)明的向日葵花粉超低溫保存的方法，干燥和解凍時(shí)均采用在牛皮紙，置于 牛皮紙上晾干所需時(shí)間短，不需要干燥劑與特殊溫度條件；另一方面，由于花粉超低溫保存 時(shí)含水量較大，使用常規(guī)回溫方法容易造成細(xì)胞損傷，而借助牛皮紙的材質(zhì)特點(diǎn)，使花粉能 夠均勻回溫，且不會(huì)在回溫過(guò)程中粘著在介質(zhì)上。
[0018] 5、本發(fā)明的向日葵花粉超低溫保存的方法，無(wú)需添加冷凍保護(hù)劑，簡(jiǎn)單易于操作， 可以用于生產(chǎn)制種。
【具體實(shí)施方式】
[0019] 通過(guò)以下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的向日葵花粉超低溫保存的方法作進(jìn)一步的說(shuō)明。
[0020] 實(shí)施例1
[0021] 本實(shí)施例的向日葵花粉超低溫保存的方法，按以下步驟進(jìn)行：
[0022] -、采集花粉：于石家莊地區(qū)上午10點(diǎn)采集花盤(pán)上的花粉，將采集的花粉過(guò)40目 的篩子，去除雜質(zhì)；
[0023] 二、測(cè)定花粉活性：用花粉離體萌發(fā)法測(cè)定花粉活性，所得花粉活性為76% ;
[0024] 三、干燥：將花粉平鋪在牛皮紙上，于常溫陰涼處干燥，至花粉含水量為81% ;
[0025] 四、冷凍保存：將干燥后的花粉裝入凍存管，置于液氮中IOs后，轉(zhuǎn)移至_80°C冰箱 儲(chǔ)存；
[0026] 五、解凍：將儲(chǔ)存的花粉從_80°C冰箱取出后，直接在常溫下置于牛皮紙上解凍 0. 5h即可。
[0027] 實(shí)施例2
[0028] 本實(shí)施例的向日葵花粉超低溫保存的方法，按以下步驟進(jìn)行：
[0029] -、采集花粉：于石家莊地區(qū)上午11點(diǎn)采集花盤(pán)上的花粉，將采集的花粉過(guò)50目 的篩子，去除雜質(zhì)；
[0030] 二、測(cè)定花粉活性：用花粉離體萌發(fā)法測(cè)定花粉活性，所得花粉活性為71 % ;
[0031] 三、干燥：將花粉平鋪在牛皮紙上，于常溫陰涼處干燥，至花粉含水量為90% ;
[0032] 四、冷凍保存：將干燥后的花粉裝入凍存管，置于液氮中5s后，轉(zhuǎn)移至_80°C冰箱 儲(chǔ)存；
[0033] 五、解凍：將儲(chǔ)存的花粉從_80°C冰箱取出后，直接在常溫下置于牛皮紙上解凍 0. 5h即可。
[0034] 實(shí)施例3
[0035] 本實(shí)施例的向日葵花粉超低溫保存的方法，按以下步驟進(jìn)行：
[0036] -、采集花粉：于海南地區(qū)上午9點(diǎn)采集花盤(pán)上的花粉，將采集的花粉過(guò)60目的篩 子，去除雜質(zhì)；
[0037] 二、測(cè)定花粉活性：用花粉離體萌發(fā)法測(cè)定花粉活性，所得花粉活性為55% ;
[0038] 三、干燥：將花粉平鋪在牛皮紙上，于常溫陰涼處干燥，至花粉含水量為86% ;
[0039] 四、冷凍保存：將干燥后的花粉裝入凍存管，置于液氮中8s后，轉(zhuǎn)移至_80°C冰箱 儲(chǔ)存；
[0040] 五、解凍：將儲(chǔ)存的花粉從-80°c冰箱取出后，直接在常溫下置于牛皮紙上解凍 0. 5h即可。
[0041] 實(shí)施例1-3中花粉離體萌發(fā)的培養(yǎng)基為：蔗糖120g/L、硼酸150mg/L、CaCl2 · 2H20 1. Og/L、PEG4000 90g/L、MgSO4 · 7H20 350mg/L、KN039 50mg/L、KH2P0490mg/L、KCl 175mg/L、 Na2EDTA 7. 5mg/L、FeSO4 · 7H20 0· 025mg/L、Na2MoO4 · 2H20 0· 25mg/L、CuSO4 · 5H200. 025mg/ L、CoCl2 · 6H20 0· 025mg/L、VBl 1.0 mg/L 和 VB6 1.0 mg/L。對(duì)實(shí)施例 1-3 儲(chǔ)藏 I 年后解凍 的花粉活性進(jìn)行檢測(cè)，其活性分別為72 %、66 %、52 %。使用儲(chǔ)存一年后的花粉進(jìn)行授粉試 驗(yàn)，與一年前剛采集的花粉進(jìn)行授粉的成功率進(jìn)行比較。結(jié)果如表i所示。
[0042] 表1儲(chǔ)存前后向日葵花粉的授粉成功率
[0043]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種向日葵花粉超低溫保存的方法，其特征在于：包括以下步驟： 一、 采集花粉：于上午9-11點(diǎn)采集向日葵花盤(pán)上的花粉，將采集的花粉過(guò)40-60目的篩 子，去除雜質(zhì)； 二、 測(cè)定花粉活性：用花粉離體萌發(fā)法測(cè)定花粉活性，花粉活性不低于50%即可進(jìn)行 下一步操作； 三、 干燥：將花粉平鋪在牛皮紙上，于常溫陰涼處干燥，至花粉含水量為80-90% ; 四、 冷凍保存：將干燥后的花粉裝入凍存管，置于液氮中5-10s后，轉(zhuǎn)移至-80°C冰箱儲(chǔ) 存； 五、 解凍：將儲(chǔ)存的花粉從_80°C冰箱取出后，直接在常溫下置于牛皮紙上解凍0. 5h。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的向日葵花粉超低溫保存的方法，其特征在于：所述步驟二中 的花粉離體萌發(fā)使用的培養(yǎng)基為：蔗糖120g/L、硼酸150mg/L、CaCl 2 ·2Η20 I. 0g/L、PEG4000 90g/L、MgS04*7H20 350mg/L、KNO3 950mg/L、KH2PO4 90mg/L、KCl 175mg/L、Na2EDTA 7.5mg/ L、FeSO4 · 7H20 0· 025mg/L、Na2MoO4 · 2H20 0· 25mg/L、CuSO4 · 5H20 0· 025mg/L、CoCl2 · 6H20 0.025mg/L、VBl l.Omg/L 和 VB6 l.Omg/L。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明向日葵花粉超低溫保存的方法，涉及一種植物體局部的保存方法，特別是涉及一種用于長(zhǎng)期保存向日葵花粉的方法。其目的是為了提供一種便于異地運(yùn)輸及貯藏的向日葵花粉超低溫保存的方法及其所配套的花粉離體萌發(fā)培養(yǎng)基。本發(fā)明向日葵花粉超低溫保存的方法，包括：采集花粉；測(cè)定花粉活性；干燥；冷凍；解凍。本發(fā)明的向日葵花粉超低溫保存的方法簡(jiǎn)單易于操作，可以用于生產(chǎn)制種。本發(fā)明用于甜瓜花粉的保存領(lǐng)域。
【IPC分類(lèi)】A01N3-00
【公開(kāi)號(hào)】CN104705292
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510145073
【發(fā)明人】范冬冬, 黨繼革, 代云志, 李濤, 趙翠媛, 高雪平, 張慧
【申請(qǐng)人】河北雙星種業(yè)有限公司
【公開(kāi)日】2015年6月17日
【申請(qǐng)日】2015年3月31日