一種在高寒草甸原生態(tài)條件下制備冬蟲夏草菌種的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，是一種在高寒草甸原生態(tài)條件下制備冬蟲夏草菌種的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]冬蟲夏草是一種蟲生子囊真菌，寄生于鱗翅目Lepidoptera蝠蛾科Hepialidae鉤蝠蛾屬Thitarodes昆蟲的幼蟲，其無性型為中國(guó)被毛孢Hirsutella sinensis Liu, Guo,Yu&Zengo冬蟲夏草寄主鉤蝠蛾屬Thitarodes昆蟲的一個(gè)世代包括卵、幼蟲、蛹和成蟲四個(gè)發(fā)育階段，幼蟲營(yíng)地下隧道式穴居生活，雜食性，喜食圓穗寥、頭花寥、小大黃和珠芽寥等高寒植物的幼嫩根莖。
[0003]冬蟲夏草分布于青藏高原高海拔區(qū)域，該區(qū)域高寒缺氧，其氣溫常年具有高山低溫的特點(diǎn)。利用青藏高原高寒草甸原有生態(tài)環(huán)境條件進(jìn)行原生態(tài)冬蟲夏草道地藥材產(chǎn)業(yè)化研究，可有效保持冬蟲夏草道地產(chǎn)區(qū)的原生態(tài)屬性，同時(shí)也可以最大程度節(jié)省能源消耗，達(dá)到清潔生產(chǎn)的目的。
[0004]目前采用常規(guī)冬蟲夏草菌種侵染寄主鉤蝠蛾昆蟲幼蟲仍存在侵染率低、耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)等問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種在高寒草甸原生態(tài)條件下制備冬蟲夏草菌種的方法，該方法利用那曲地區(qū)羌塘草原高寒草甸原有植被及生態(tài)條件，通過構(gòu)建冬蟲夏草菌中國(guó)被毛孢與活體高寒植物組織的共生體，增大高寒植物組織中國(guó)被毛孢的共生量，激活中國(guó)被毛孢的侵染活性，得到對(duì)寄主鉤蝠蛾幼蟲具有高侵染活性的冬蟲夏草菌種，達(dá)到高效侵染寄主鉤蝠蛾幼蟲的目的。
[0006]本發(fā)明通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):一種在高寒草甸原生態(tài)條件下制備冬蟲夏草菌種的方法，在那曲地區(qū)羌塘草原冬蟲夏草適生地區(qū)域的高寒草甸及生態(tài)環(huán)境下，利用其原有高寒植被植株，以10?20mX 10?20m大小為建設(shè)單位，建立高寒植物苗培育園，利用原生態(tài)溫濕度及光照條件，通過適合高原的農(nóng)業(yè)園藝栽培技術(shù)進(jìn)行水肥管理，栽培并獲得冬蟲夏草寄主鉤蝠蛾幼蟲取食的高寒植物苗；將冬蟲夏草菌源接種到培育園栽培的高寒植物苗組織上，利用每年5?11月原生態(tài)溫濕度條件，遮陰使冬蟲夏草菌中國(guó)被毛孢與活體高寒植物共生培育，形成菌物-植物共生體，將菌絲檢測(cè)結(jié)果為中國(guó)被毛孢的菌物-植物共生體作為對(duì)寄主鉤蝠蛾幼蟲具有高侵染活性的冬蟲夏草菌種。
[0007]為更好的實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，進(jìn)一步的，所述高寒植物苗培育園內(nèi)采用通常農(nóng)業(yè)園藝規(guī)劃方法進(jìn)行分區(qū)建壟，壟面大小為50?90cmX 500?1900cm，在壟面中間上方高40?90cm處鋪設(shè)水肥管理管路，壟間設(shè)立寬25?30cm深7?1cm的區(qū)域便于排水和管理人員行走，培育園四周留下約50?60cm的空區(qū)。
[0008]為更好的實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，進(jìn)一步的，所述通過適合高原的農(nóng)業(yè)園藝栽培技術(shù)進(jìn)行水肥管理是:每年5?11月，每個(gè)月噴淋水一至四次，使15cm深度的土壤含水量保持在28?43%，每個(gè)月在一次噴水中按水:尿體積比為100: 6?100: 18濃度加入牛羊尿或人尿；每年5月施放一次有機(jī)牛糞肥或羊糞肥，施放為干重每平方米160?240g。
[0009]為更好的實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，進(jìn)一步的，從冬蟲夏草適生地采集新鮮冬蟲夏草或其子囊孢子，采用合適嗜低溫菌物的工業(yè)微生物方法進(jìn)行分離純化，經(jīng)分子生物學(xué)方法或形態(tài)學(xué)方法鑒定為中國(guó)被毛孢，通過常規(guī)低溫發(fā)酵法在13±5°C條件下發(fā)酵為冬蟲夏草菌中國(guó)被毛孢菌絲體及分生孢子或芽生孢子，并進(jìn)一步將菌絲體及分生孢子或芽生孢子按發(fā)酵物與水體積比1: 150?1: 900稀釋成懸浮液，作為冬蟲夏草菌源；或直接采用冬蟲夏草的新鮮子囊孢子稀釋制成每毫升含有150?900個(gè)子囊孢子的懸浮液，作為冬蟲夏草菌源。
[0010]為更好的實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，進(jìn)一步的，所述栽培并獲得冬蟲夏草寄主鉤蝠蛾幼蟲取食的高寒植物苗的方法為:利用原生態(tài)溫濕度及光照條件，促進(jìn)培育園內(nèi)原有的高寒植物苗旺盛生長(zhǎng)；或者再將高寒植物苗培育園以外的鉤蝠蛾幼蟲食料植物和/或其種子移栽補(bǔ)充到培育園中栽培，或者再將快速擴(kuò)繁的高寒植物組培苗移栽到高寒植物苗培育園中，使之與高寒植物苗培育園內(nèi)原有植被一同旺盛生長(zhǎng)獲得高寒植物苗。
[0011]為更好的實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，進(jìn)一步的，所述“將冬蟲夏草菌源接種到培育園栽培的高寒植物苗組織上，利用每年5?11月原生態(tài)溫濕度條件，遮陰使冬蟲夏草菌中國(guó)被毛孢與活體高寒植物共生培育”的接種及共生培育的方法是:將制備的冬蟲夏草菌源噴淋接種到高寒植物苗培育園栽培的高寒植物苗上，每平方米噴施300?500ml菌懸液，連續(xù)噴施I?7天，每天噴施I?3次，共生培育的時(shí)間為7?30天，溫濕度條件為當(dāng)?shù)厍嗖馗咴??11月自然溫濕度值，共生培育時(shí)遮陰培育。
[0012]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果:
本發(fā)明利用那曲地區(qū)羌塘草原高寒草甸原有植被及生態(tài)條件，通過構(gòu)建冬蟲夏草菌中國(guó)被毛孢與活體高寒植物組織的共生體，增大高寒植物組織中國(guó)被毛孢的共生量，激活中國(guó)被毛孢的侵染活性，得到對(duì)寄主鉤蝠蛾幼蟲具有高侵染活性的冬蟲夏草菌種，達(dá)到高效侵染寄主鉤蝠蛾幼蟲的目的。
【具體實(shí)施方式】
[0013]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，本發(fā)明的實(shí)施方式包括但不限于下列實(shí)施例。
[0014]實(shí)施例1:
一種在高寒草甸原生態(tài)條件下制備冬蟲夏草菌種的方法，在那曲地區(qū)羌塘草原冬蟲夏草適生地區(qū)域的高寒草甸及生態(tài)環(huán)境下，利用其原有高寒植被植株，以10?20mX 10?20m大小為建設(shè)單位，建立高寒植物苗培育園，利用原生態(tài)溫濕度及光照條件，通過適合高原的農(nóng)業(yè)園藝栽培技術(shù)進(jìn)行水肥管理，栽培并獲得冬蟲夏草寄主鉤蝠蛾幼蟲取食的高寒植物苗；將冬蟲夏草菌源接種到培育園栽培的高寒植物苗組織上，利用每年5?11月原生態(tài)溫濕度條件，遮陰使冬蟲夏草菌中國(guó)被毛孢與活體高寒植物共生培育，形成菌物-植物共生體，將菌絲檢測(cè)結(jié)果為中國(guó)被毛孢的菌物-植物共生體作為對(duì)寄主鉤蝠蛾幼蟲具有高侵染活性的冬蟲夏草菌種。
[0015]實(shí)施例2: 本實(shí)施例是在上述實(shí)施例的基礎(chǔ)上進(jìn)一步優(yōu)化，為更好的實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，進(jìn)一步的，所述高寒植物苗培育園內(nèi)采用通常農(nóng)業(yè)園藝規(guī)劃方法進(jìn)行分區(qū)建壟，壟面大小為50?90cm X 500?1900cm，在壟面中間上方高40?90cm處鋪設(shè)水肥管理管路，壟間設(shè)立寬25?30cm深7?1cm的區(qū)域便于排水和管理人員行走，培育園四周留下約50?60cm的空區(qū)。
[0016]實(shí)施例3:
本實(shí)施例是在上述任一實(shí)施例的基礎(chǔ)上進(jìn)一步優(yōu)化，為更好的實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，進(jìn)一步的，所述通過適合高原的農(nóng)業(yè)園藝栽培技術(shù)進(jìn)行水肥管理是:每年5?11月，每個(gè)月噴淋水一至四次，使15cm深度的土壤含水量保持在28?43%，每個(gè)月在一次噴水中按水:尿體積比為100: 6?100: 18濃度加入牛羊尿或人尿；每年5月施放一次有機(jī)牛糞肥或羊糞肥，施放為干重每平方米160?240g。
[0017]實(shí)施例4:
本實(shí)施例是在上述任一實(shí)施例的基礎(chǔ)上進(jìn)一步優(yōu)化，為更好的實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，進(jìn)一步的，從冬蟲夏草適生地采集新鮮冬蟲夏草或其子囊孢子，采用合適嗜低溫菌物的工業(yè)微生物方法進(jìn)行分離純化，經(jīng)分子生物學(xué)方法或形態(tài)學(xué)方法鑒定為中國(guó)被毛孢，通過常規(guī)低溫發(fā)酵法在13±5°C條件下發(fā)酵為冬蟲夏草菌中國(guó)被毛孢菌絲體及分生孢子或芽生孢子，并進(jìn)一步將菌絲體及分生孢子或芽生孢子按發(fā)酵物與水體積比1: 150?1: 900稀釋成懸浮液，作為冬蟲夏草菌源；或直接采用冬蟲夏草的新鮮子囊孢子稀釋制成每毫升含有150?900個(gè)子囊孢子的懸浮液，作為冬蟲夏草菌源。
[0018]實(shí)施例5:
本實(shí)施例是在上述任一實(shí)施例的基礎(chǔ)上進(jìn)一步優(yōu)化，為更好的實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，進(jìn)一步的，所述栽培并獲得冬蟲夏草寄主鉤蝠蛾幼蟲取食的高寒植物苗的方法為:利用原生態(tài)溫濕度及光照條件，促進(jìn)培育園內(nèi)原有的高寒植物苗旺盛生長(zhǎng)；或者再將高寒植物苗培育園以外的鉤蝠蛾幼蟲食料植物和/或其種子移栽補(bǔ)充到培育園中栽培，或者再將快速擴(kuò)繁的高寒植物組培苗移栽到高寒植物苗培育園中，使之與高寒植物苗培育園內(nèi)原有植被一同旺盛生長(zhǎng)獲得高寒植物苗。
[0019]實(shí)施例6:
本實(shí)施例是在上述任一實(shí)施例的基礎(chǔ)上進(jìn)一步優(yōu)化，為更好的實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，進(jìn)一步的，所述“將冬蟲夏草菌源接種到培育園栽培的高寒植物苗組織上，利用每年5?11月原生態(tài)溫濕度條件，遮陰使冬蟲夏草菌中國(guó)被毛孢與活體高寒植物共生培育”的接種及共生培育的方法是:將制備的冬蟲夏草菌源噴淋接種到高寒植物苗培育園栽培的高寒植物苗上，每平方米噴施300?500ml菌懸液，連續(xù)噴施I?7天，每天噴施I?3次，共生培育的時(shí)間為7?30天，溫濕度條件為當(dāng)?shù)厍嗖馗咴??11月自然溫濕度值，共生培育時(shí)遮陰培育。
[0020]實(shí)施例7:
本實(shí)施例是在上述任一實(shí)施例的基礎(chǔ)上進(jìn)一步優(yōu)化，一種在高寒草甸原生態(tài)條件下制備冬蟲夏草菌種的方法，具體步驟為:
1、在那曲地區(qū)羌塘草原冬蟲夏草適生地區(qū)域的高寒草甸，利用其原有高寒植被植株，以10?20mX 10?20m大小為建設(shè)單位，建立冬蟲夏草寄主鉤蝠蛾幼蟲食料植物的高寒植物苗培育園；采用通常農(nóng)業(yè)園藝規(guī)劃方法進(jìn)行分區(qū)建壟，壟面大小為50?90cmX500?1900cm，在壟面中間上方高40?9