一種杏鮑菇液體菌種制備及優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)栽培技術(shù)研究方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于食用菌栽培學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，涉及使用液體菌種生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)杏鮑菇的方 法。
[0002]
【背景技術(shù)】
[0003] 杏鮑燕（Pleurotus eryngii (DC. ex Fr. ) Qu6l)在分類上屬擔(dān)子菌亞門，層菌 綱，傘菌目，側(cè)耳科，側(cè)耳屬，又稱刺芹側(cè)耳，在日本叫"雪茸"。杏鮑菇的肉質(zhì)肥厚，質(zhì)地脆 嫩，特別是菌柄色澤雪白，粗長，組織極其致密，結(jié)實(shí)，脆感強(qiáng)，其口感獨(dú)具一格，是味道最好 的燕類之一，被稱為"平燕王"、"干貝燕"。前蘇聯(lián)的瓦西爾柯夫（1955)稱它為"草原的美味 牛肝菌"，可見味道鮮美之及，目前在國際市場上是人工栽培的食用菌中數(shù)量稀少，價格最 高的菇類。杏鮑菇的營養(yǎng)十分豐富，植物蛋白含量高達(dá)25%，含18種氨基酸和具有提高人體 免疫力、防癌抗癌的多糖。同時，它含有大量的寡糖，是灰樹花的15倍、金針菇的3. 5倍、真 姬菇的2倍，它與胃腸中的雙歧菌一起作用，具有很好的促進(jìn)消化、吸收功能。杏鮑菇是一 種口感非常好又具有藥用功能的珍稀食用菌新品種，深受國內(nèi)外市場的歡迎。杏鮑菇原產(chǎn) 歐洲南部、非洲北部和中亞地區(qū)高山、草原及沙漠地區(qū)，我國野生杏鮑菇主要分布在新疆和 四川西部。法國、意大利、印度都先后進(jìn)行過杏鮑菇的栽培研究。Kalmar (1958)第一次進(jìn) 行栽培試驗(yàn)；Henda (1970 )在印巴交界的克什米爾高山上發(fā)現(xiàn)杏鮑菇，并首次在段木上進(jìn)行 栽培；Vessey (1971)分離到杏鮑菇的菌株；Caileux (1974)用菌褶分離到杏鮑菇的菌株， 并試驗(yàn)栽培成功；Ferri (1977)首先成功地進(jìn)行商業(yè)化栽培，但只得到有限的成功。現(xiàn)在泰 國、日本、美國、中國臺灣省都有小批量栽培試驗(yàn)。20世紀(jì)90年代，我國開始引種栽培。目 前，我國南方和北方一些省市已開始小規(guī)模栽培。
[0004] 食用菌液體菌種指的是通過深層發(fā)酵技術(shù)獲得的用于繁殖下一代菌種或食用菌 子實(shí)體的菌絲體。液體菌種應(yīng)用在食用菌領(lǐng)域始于1948年美國科學(xué)家H. Humfeld等，他 們成功地對蘑菇進(jìn)行了深層發(fā)酵。十年后，即1958年J. Szuecs首次用發(fā)酵罐又培養(yǎng)出羊 肚菌的菌絲體，1975-1977年日本杉森恒武等，用1%有機(jī)酸或0. 5%酵母膏等材料配成液體 培養(yǎng)基，培養(yǎng)出了大量香菇菌絲體。我國最早是I960年上海植物生理研究所陳美豐等進(jìn) 行了香菇深層發(fā)酵研究。1979年上海師范學(xué)院楊慶堯開始香菇、金針菇等深層發(fā)酵培養(yǎng)液 體菌種，并進(jìn)行栽培試驗(yàn)。20世紀(jì)80年代以后食用菌發(fā)酵技術(shù)有了迅速發(fā)展，食用菌深層 發(fā)酵、液體菌種和中小型發(fā)酵設(shè)備研制的報(bào)道日益增多。該項(xiàng)技術(shù)引起人們越來越多的關(guān) 注，是因?yàn)橛靡后w菌種的方法有著明顯優(yōu)越性，在液體深層培養(yǎng)過程中，菌種細(xì)胞能在反應(yīng) 器內(nèi)處于最適溫度、酸堿度、氧氣和碳?xì)浔葪l件下生長，呼吸作用所產(chǎn)生的廢氣又能及時排 出，故新陳代謝旺盛，菌種分裂迅速，在短短幾天內(nèi)就可獲得大量的菌絲體或液體菌種。液 體菌種接入固體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)時，是有流動快、分散性好、萌發(fā)點(diǎn)多、發(fā)菌迅速、菌絲覆 蓋料面早，可使袋式栽培的雜菌污染得到有效控制，這是固體菌種所望塵莫及的。
[0005] 本研究著眼于把杏鮑菇液體深層發(fā)酵技術(shù)及其優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)栽培結(jié)合起來，使食用菌 液體菌種培養(yǎng)技術(shù)在杏鮑菇的規(guī)?；a(chǎn)上得到廣泛的應(yīng)用和推廣，為產(chǎn)業(yè)化優(yōu)質(zhì)開發(fā)杏 鮑菇產(chǎn)品做出貢獻(xiàn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 1.杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)工藝技術(shù)體系的建立， ⑴適宜液體培養(yǎng)的杏鮑菇菌株篩選研究； ⑵不同碳氮源對杏鮑菇液體深層培養(yǎng)的影響； ⑶杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)基篩選的研究； ⑷杏鮑燕液體搖瓶種培養(yǎng)條件的研究； (5) 杏鮑菇液體發(fā)酵罐種培養(yǎng)條件的研究； (6) 杏鮑菇液體菌種保存及有效期試驗(yàn)研究。
[0007] 2、杏鮑菇液體菌種優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)栽培技術(shù)體系的建立， (1) 杏鮑菇液體菌種與固體菌種栽培對比試驗(yàn)； (2) 杏鮑菇不同栽培模式試驗(yàn)； (3) 不同培養(yǎng)料對杏鮑菇子實(shí)體蛋白質(zhì)營養(yǎng)的影響； (4) 北方大棚杏鮑菇液體菌種優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)技術(shù)研究。 一、杏鮑菇的液體菌種培養(yǎng)工藝技術(shù)體系的建立 (一）適宜液體培養(yǎng)的杏鮑燕菌株篩選研究 本研究采用普通農(nóng)副產(chǎn)品配制成三種液體培養(yǎng)基培養(yǎng)五種不同的杏鮑菇菌株，從而篩 選出適宜液體培養(yǎng)的最適菌株，為今后杏鮑菇液體深層培養(yǎng)提供參考。
[0008] 材料與方法 1. 1供試菌株杏鮑菇菌株母種由煙臺師范學(xué)院食用真菌研究所提供，經(jīng)斜面培養(yǎng)基 (PDA培養(yǎng)基，配方見下）試管擴(kuò)大培養(yǎng)。不同供試菌株種類及編號如下：
1. 2主要儀器 1.2.1 HZQ一Q型振蕩器 哈爾濱東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司 1.2.2 LS-B50L型立式壓力蒸汽滅菌器上海醫(yī)用核子儀器廠 1. 2. 3 LRH - 250-A型生化培養(yǎng)箱 廣東省醫(yī)療器械廠 1.2.4 FA1004型上皿電子天平 上海精科電子天平廠 1.2.5 502型電熱鼓風(fēng)干燥箱 中國龍口先科儀器公司 1. 3培養(yǎng)基 1.3. 1斜面培養(yǎng)基（固體培養(yǎng)基） 馬鈴薯20% 葡萄糖2% 磷酸二氫鉀0. 2% 硫酸鎂0.05% 維生素10mg/L 瓊脂2% pH值自然 1. 3. 2液體培養(yǎng)基(共三種配方） I、 馬鈴薯20% 葡萄糖2% 磷酸二氫鉀0.2% 硫酸鎂0.1% 維生素 B1 10mg/L II、 玉米粉3% 蔗糖2% 磷酸二氫鉀0. 1% 硫酸鎂0. 1% 酵母粉〇. 5% 維生素 BI 10mg/L III、 玉米粉3% 麩皮2% 葡萄糖2% 蛋白胨0.2% 磷酸二氫鉀1% 硫酸鎂〇· 5% 維生素 B1 10mg/L 1. 4試驗(yàn)方法 按照斜面培養(yǎng)基的組成配方配制好培養(yǎng)基，然后倒斜面。將母種接入試管中斜面培養(yǎng) 基上，在生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)9天左右，可長滿試管。按照三種液體培養(yǎng)基配方分別稱取后 煮沸30分鐘，用紗布過濾取濾液，每種培養(yǎng)基配制3000mL，分別均勻分裝在15個容量為 500mL的三角瓶中，每瓶裝200mL，然后在I. lkg/cm2的壓力下滅菌30分鐘，冷卻后在無菌 工作臺上接種，每瓶接種大約Icm2的斜面母種菌塊，然后在25°C條件下在培養(yǎng)箱中靜置24 小時。24小時后放入搖床進(jìn)行振蕩培養(yǎng)（25°C，175r/min)。培養(yǎng)7天后測菌球的密度、大 小和干重。測量密度用量筒靜置測出相對密度，用刻度尺測菌球直徑，用預(yù)先稱量好的脫脂 棉濾取菌球并將脫脂棉和菌球一同烘干后稱量，用差減法計(jì)算干物質(zhì)產(chǎn)量。根據(jù)菌球干重、 密度大小、直徑大小等綜合指標(biāo)，以此來確定適宜液體培養(yǎng)的杏鮑菇最適菌株。
[0009] ?結(jié)果與分析 2. 1母種菌絲體生長情況 接種后25°C下培養(yǎng)，B生長最快，7d左右滿管，A生長最慢，9d左右滿管，C、D、E居中， 8d左右滿管，各菌株長勢見圖1。
[0010] . 2杏鮑菇在三種不同培養(yǎng)基下的菌球干重 杏鮑燕在三種不同培養(yǎng)基下的菌球干重見表1。
[0011] 表1不同培養(yǎng)基下的菌球干重
由表1可以看出各種杏鮑菇在有玉米面的培養(yǎng)基中培養(yǎng)要比在有馬鈴薯的培養(yǎng)基中 的生長勢頭好，產(chǎn)量高。不管在哪種培養(yǎng)基中菌球產(chǎn)量都以濟(jì)南杏鮑菇（B)為最高，依次為 北京杏鮑菇（C)、香絨杏鮑菇（E)、黑絨杏鮑菇（D)、杏鮑菇1號（A)。
[0012] . 3五種杏鮑菇在三種不同培養(yǎng)基中的菌球相對密度 五種杏鮑菇在三種不同培養(yǎng)基中的菌球相對密度見表2。
[0013] 表2不同培養(yǎng)基下菌球的相對密度
由表2可以看出五種杏鮑菇在有玉米面的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的密度明顯要大于在有馬鈴 薯的培養(yǎng)基中培養(yǎng)后的密度，尤其是黑絨杏鮑菇和杏鮑菇1號菌球數(shù)量很少。而無論在哪 種培養(yǎng)基下五種杏鮑菇仍以濟(jì)南杏鮑菇（B)為最好，依次為北京杏鮑菇（C)、香絨杏鮑菇 (E)、黑絨杏鮑菇（D)、杏鮑菇1號（A)。
[0014] . 4五種杏鮑菇在三種不同培養(yǎng)基下菌球直徑大小 五種杏鮑燕在三種不同培養(yǎng)基下菌球直徑大小見表3。
[0015] 表3不同培養(yǎng)基下菌球直徑大小
注表示數(shù)量太少，無法測量 由表3可以看出，五種杏鮑菇在有玉米面的培養(yǎng)基中培養(yǎng)后的菌球直徑明顯小于有馬 鈴薯的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的菌球直徑，而無論在哪種培養(yǎng)基中培養(yǎng)菌球直徑的大小順序依次為 杏鮑菇1號（A)、黑絨杏鮑菇（D)、香絨杏鮑菇（E)、北京杏鮑菇（C)、濟(jì)南杏鮑菇（B)。
[0016] . 5培養(yǎng)終結(jié)時菌絲狀態(tài) 搖瓶培養(yǎng)終結(jié)時，各菌株菌絲體成塊狀、球狀混合(見圖2, 3,4)，濾干后呈淺灰色，而烘 干后則呈褐色至黑褐色。
[0017] ?小結(jié) 3. 1通過本試驗(yàn)得出了在液體培養(yǎng)下杏鮑菇的生長適宜菌株，其中以濟(jì)南杏鮑菇（B) 為最適菌株。無論在哪種液體培養(yǎng)基下培養(yǎng)，測量杏鮑菇生長狀況的各項(xiàng)指標(biāo)，都以濟(jì)南杏 鮑菇為最高，而有些菌株則在某些培養(yǎng)基下很不適應(yīng)，幾乎不生長。
[0018] . 2杏鮑菇菌絲體對上述三種液體培養(yǎng)基都有較好的適應(yīng)性，菌絲萌發(fā)快，生長正 常，用來制備液體菌種周期短，菌齡一致，用來制備菌絲體產(chǎn)品則生產(chǎn)量大，周期亦短且成 本低。
[0019] . 3該試驗(yàn)只作了搖瓶菌絲產(chǎn)量和菌球大小、密度等比較分析，用其液體菌種進(jìn)行 栽培，比較子實(shí)體產(chǎn)量質(zhì)量等分析還待進(jìn)一步研究。
[0020] (二）不同碳氮源對杏鮑菇深層培養(yǎng)的影響 本試驗(yàn)在杏鮑菇液體培養(yǎng)條件研究的基礎(chǔ)上，對不同的碳、氮源，合適的碳、氮比進(jìn)行 了研究，旨在為液體培養(yǎng)提供科學(xué)依據(jù)，并為杏鮑菇的營養(yǎng)生理提供參考。
[0021] 材料與方法 1.1材料本試驗(yàn)所使用的試劑均為市售的分析純或化學(xué)純。
[0022] 供試菌種 濟(jì)南杏鮑菇菌種由煙臺師范學(xué)院食用真菌研究所提供，菌種保存在 PDA斜面培養(yǎng)基上。
[0023] 主要儀器LRH-25-A型生化培養(yǎng)箱廣東省醫(yī)療器械廠 HZQ-Q型振蕩器 哈爾濱東連電子有限公司 PHS-3C型精密pH計(jì) 上海醫(yī)用核子儀器廠 LS-B50L型立式壓力蒸汽滅菌鍋上海醫(yī)用核子儀器廠 FA1004型上皿電子天平上海精科電子天平廠 502型電熱鼓風(fēng)干燥箱 中國龍口先科儀器公司 1. 4培養(yǎng)基 1.4.1 斜面菌種培養(yǎng)基（PDA):馬鈴薯(去皮）20%、葡萄糖2%、瓊脂2%、麩皮3%、蛋 白胨 3%、MgS04. 7H20 0· 1%、KH2P04 0· 2%'VB! 10mg/L、pH 自然。
[0024] 液體培養(yǎng)基 (1)基礎(chǔ)培養(yǎng)基 馬鈴薯 20%，KH2PO4 0· 15%，MgSO4. 7H20 0· 1%，VB1IOmgA。
[0025] (2)不同碳源試驗(yàn)的培養(yǎng)基在碳源和氮源的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入0. 4%的蛋白胨， 然后分別加入待測碳源：葡萄糖、果糖、乳糖、麥