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      一種快速檢測甘薯蔓割病抗性的方法

      文檔序號:9356238閱讀:392來源:國知局
      一種快速檢測甘薯蔓割病抗性的方法
      【技術領域】
      [0001]本發(fā)明涉及作物育種與農(nóng)業(yè)植物保護技術領域,尤其涉及一種快速檢測甘薯蔓割病抗性的方法。
      【背景技術】
      [0002]甘薯是我國重要的糧食、飼料、工業(yè)原料和能源作物。甘薯用途廣泛,產(chǎn)量高,適應性廣,我國近年來栽培面積穩(wěn)定在550萬公頃左右,栽培面積和總產(chǎn)分別占世界的65%和86%。然而,甘薯的生產(chǎn)面臨著各種病害的威脅,其中蔓割病是南方薯區(qū)嚴重的病害。甘薯蔓割病在南方薯區(qū)發(fā)病面積大,嚴重影響甘薯產(chǎn)量和品質(zhì),發(fā)病田塊一般減產(chǎn)10%?20%,重者達50%以上,成為甘薯生產(chǎn)發(fā)展重要的制約因素,近年來危害有逐年擴大的趨勢。在病害的防治工作中,培育抗性新品種是效果最直接、成本最低的方法。
      [0003]在甘薯育種過程中,需要鑒定后代品系的蔓割病抗性。當前所應用的抗病鑒定方法,是在夏天高溫季節(jié),薯苗接種病菌后,栽于土壤中,30天后調(diào)查病情,鑒定抗病性。這種方法存在一些問題:(1)抗病鑒定受到季節(jié)的限制,需要在每年的高溫高濕的夏季進行;(2)抗病鑒定需要用到較多的土地,鑒定之后,該土地存在蔓割病菌,不適合于再用于甘薯生產(chǎn);(3)鑒定的時間較長,要求30天以上;(4)鑒定結(jié)果容易受到土壤環(huán)境及微生物的影響,不同年分鑒定結(jié)果可能存在差異。

      【發(fā)明內(nèi)容】

      [0004]本發(fā)明所要解決的技術問題是針對現(xiàn)有技術中存在的上述不足,提供一種快速檢測甘薯蔓割病抗性的方法,提高甘薯抗蔓割病育種的效率,同時為研究甘薯抗病分子機理、抗病種質(zhì)資源篩選等提供簡易快速的檢測方法。
      [0005]一種快速檢測甘薯蔓割病抗性的方法,包括如下步驟:
      (1)建立甘薯苗水培裝置;
      (2)準備待鑒定甘薯苗;
      (3)制備接種蔓割病菌孢子液;
      (4)接種、培養(yǎng)與管理;
      (5)抗病性檢測。
      [0006]具體包括如下步驟:
      (1)建立甘薯苗水培裝置:選用高12-13cm,容積250-260mL,廣口的塑料或玻璃瓶,配置一個增氧機,每瓶有一個增氧口,由定時器控制每天增氧的時間;
      (2)準備待鑒定甘薯苗;每個待鑒定的甘薯品種需要7株苗,薯苗生長正常、健康、均勻一致,薯苗長度約20 cm,帶5-6個葉片,剪口第一節(jié)的節(jié)間長度需5-6cm ;
      (3)制備接種蔓割病菌孢子液:將致病力強的蔓割病菌,接種于PDA培養(yǎng)基中,置于30°C下培養(yǎng)10天,長滿菌絲,在無菌條件下將菌絲刮入到無菌水中,再配制成孢子濃度為I X 15個/ml的懸液; (4)接種、培養(yǎng)與管理;將蔓割病孢子懸液分裝到各培養(yǎng)瓶中,每瓶高度為4.5cm,將準備好的甘薯苗,剪去節(jié)間,插入到培養(yǎng)瓶中,僅節(jié)間浸入溶液,節(jié)保持在水面上;打開增氧機開關,每天6次,每次10分鐘;期間每天加一次滅過菌的純水,培養(yǎng)瓶中水的高度保持在4.5-5cm,不要沒過節(jié)間;環(huán)境溫度控制在28?30°C ;
      (5)抗病性檢測;培養(yǎng)12天后,進行病情調(diào)查與抗性分級,根據(jù)發(fā)病率和病情指數(shù)檢測植株抗病能力。
      [0007]所述的甘薯蔓割病病原菌為尖孢鐮刀菌甘薯?;蛷娭虏【‵bOl (方樹民,楊國成,鄭光武.甘薯新品種金山57抗蔓割病鑒定研究.福建農(nóng)學院學報(自然科學版),1993.22(2):179-182)。
      [0008]培養(yǎng)12天后,進行病情調(diào)查,根據(jù)發(fā)病率和病情指數(shù)判斷植株抗病能力。發(fā)病率和病情指數(shù)按O?6級進行鑒定(參考文獻:方樹民,何明陽,康玉珠.1998.甘薯品種對蔓割病抗性的研究.植物保護學報,15(3): 185-189.),以株為單位,其中:
      O級:植株生長正常,未見發(fā)病癥狀;
      I級:植株生長正常,莖基部維管束變褐在5cm以內(nèi)。
      [0009]2級:植株生長基本正常,莖基部維管束變褐在1/3以內(nèi)。
      [0010]3級:植株基部葉片變黃,維管束變褐在2/3以內(nèi)。
      [0011]4級:植株葉片多數(shù)變黃枯死,維管束變褐擴展至全株;
      5級:全株枯死。根據(jù)病情指數(shù)進行抗病性評價。
      [0012]病情指數(shù)的計算按如下公式計算:
      病情指數(shù)=[(0.lXrii+0.2Xn2+0.5Xn3+0.8Xn4+l.0Xn5) /N] X 100(其中:n為各級病株數(shù),N為試驗總株數(shù))
      本發(fā)明的顯著優(yōu)點:
      1、抗病檢測不受到季節(jié)的限制,只要在能控制溫度的室內(nèi),常年均可進行檢測。
      [0013]2、抗病檢測不需要用到土地,只需要較簡易的容器和純水即可進行。
      [0014]3、檢測的時間較短,一般15天即可檢測出抗病結(jié)果。
      [0015]4、檢測在室內(nèi)環(huán)境即可進行,檢測結(jié)果不會受到環(huán)境及土壤微生物的影響,檢測結(jié)果較穩(wěn)定。
      [0016]綜上所述,本發(fā)明一種利用水培快速檢測甘薯蔓割病抗性的方法,利用薯苗水培進行鑒定,不需要土地,在室內(nèi)即可進行,不受季節(jié)限制,一年之內(nèi)可以根據(jù)需要隨時開展鑒定,檢測結(jié)果可靠,檢測周期短,費用低,步驟簡單,是較理想的一種甘薯蔓割病抗性的方法。
      【具體實施方式】
      [0017]實施例1
      (O建立甘薯苗水培裝置:選用高12cm,容積250 mL,廣口的塑料或玻璃瓶,配置一個增氧機,每瓶有一個增氧口,由定時器控制每天增氧的時間;
      (2)準備待鑒定甘薯苗;每個待鑒定的甘薯品種需要7株苗,薯苗生長正常、健康、均勻一致,薯苗長度約20 cm,帶6個葉片,剪口第一節(jié)的節(jié)間長度需5cm ;
      (3)制備接種蔓割病菌孢子液:將致病力強的蔓割病菌,接種于PDA培養(yǎng)基中,置于30°C下培養(yǎng)10天,長滿菌絲,在無菌條件下將菌絲刮入到無菌水中,再配制成孢子濃度為I X 15個/ml的懸液;
      (4)接種、培養(yǎng)與管理;將蔓割病孢子懸液分裝到各培養(yǎng)瓶中,每瓶高度為4.5cm,將準備好的甘薯苗,剪去節(jié)間,插入到培養(yǎng)瓶中,僅節(jié)間浸入溶液,節(jié)保持在水面上;打開增氧機開關,每天6次,每次10分鐘;期間每天加一次滅過菌的純水,培養(yǎng)瓶中水的高度保持在4.5cm,不要沒過節(jié)間;環(huán)境溫度控制在28°C ;
      (5)病情調(diào)查。培養(yǎng)12天后,進行病情調(diào)查,根據(jù)發(fā)病率和病情指數(shù)檢測植株抗病能力。發(fā)病率和病情指數(shù)按O?6級進行鑒定,以株為單位,其中:
      O級:植株生長正常,未見發(fā)病癥狀;1級:植株生長正常,莖基部維管束變褐在5cm以內(nèi)。
      [0018]2級:植株生長基本正常,莖基部維管束變褐在1/3以內(nèi)。
      [0019]3級:植株基部葉片變黃,維管束變褐在2/3以內(nèi)。
      [0020]4級:植株葉片多數(shù)變黃枯死,維管束變褐擴展至全株;
      5級:全株枯死。根據(jù)病情指數(shù)進行抗病性評價。
      [0021]病情指數(shù)的計算按如下公式計算:
      病情指數(shù)=[(0.lXrii+0.2Xn2+0.5Xn3+0.8Xn4+l.0Xn5) /N] X 100(其中:n為各級病株數(shù),N為試驗總株數(shù))
      (6)抗性分級。根據(jù)病情指數(shù)檢測甘薯蔓割病抗性,具體分級如下:
      高抗(HR):病情指數(shù)0.0?20.5
      抗(R):病情指數(shù)20.6?40.5 中抗(MR):病情指數(shù)40.6?60.5 感(MS):病情指數(shù)60.6?80.5 中感(S):病情指數(shù)80.6?90.5 高感(HS):病情指數(shù)90.6?100
      采用本發(fā)明一種利用水培快速檢測甘薯蔓割病抗性的方法,通過對高抗蔓割病甘薯品種金山57、湘薯75-55和高感蔓割病甘薯品種新種花的抗病性進行檢測,金山57的病情指數(shù)為12.1,湘薯75-55的病情指數(shù)為9.8,新種花病情指數(shù)為100.0,與田間鑒定進行比校,
      結(jié)果一致。
      [0022]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例,凡依本發(fā)明申請專利范圍所做的均等變化與修飾,皆應屬本發(fā)明的涵蓋范圍。
      【主權項】
      1.一種快速檢測甘薯蔓割病抗性的方法,其特征在于,包括如下步驟: (1)建立甘薯苗水培裝置; (2)準備待鑒定甘薯苗; (3)制備接種蔓割病菌孢子液; (4)接種、培養(yǎng)與管理; (5)抗病性檢測。2.根據(jù)權利要求1所述的一種快速檢測甘薯蔓割病抗性的方法,其特征在于,具體包括如下步驟: (1)建立甘薯苗水培裝置:選用高12-13cm,容積250-260mL,廣口的塑料或玻璃瓶,配置一個增氧機,每瓶有一個增氧口,由定時器控制每天增氧的時間; (2)準備待鑒定甘薯苗;每個待鑒定的甘薯品種需要7株苗,薯苗生長正常、健康、均勻一致,薯苗長度約20 cm,帶5-6個葉片,剪口第一節(jié)的節(jié)間長度需5-6cm ; (3)制備接種蔓割病菌孢子液:將致病力強的蔓割病菌,接種于PDA培養(yǎng)基中,置于30°C下培養(yǎng)10天,長滿菌絲,在無菌條件下將菌絲刮入到無菌水中,再配制成孢子濃度為IX 15個/ml的懸液; (4)接種、培養(yǎng)與管理;將蔓割病孢子懸液分裝到各培養(yǎng)瓶中,每瓶高度為4.5cm,將準備好的甘薯苗,剪去節(jié)間,插入到培養(yǎng)瓶中,僅節(jié)間浸入溶液,節(jié)保持在水面上;打開增氧機開關,每天6次,每次10分鐘;期間每天加一次滅過菌的純水,培養(yǎng)瓶中水的高度保持在4.5-5cm,不要沒過節(jié)間;環(huán)境溫度控制在28?30°C ; (5)抗病性檢測;培養(yǎng)12天后,進行病情調(diào)查與抗性分級,根據(jù)發(fā)病率和病情指數(shù)鑒定植株抗病能力。3.根據(jù)權利要求1所述的一種快速鑒定甘薯蔓割病抗性的方法,其特征在于:所述的甘薯蔓割病病原菌為尖孢鐮刀菌甘薯?;蛷娭虏【?,包括FbOl。4.根據(jù)權利要求1所述的一種快速檢測甘薯蔓割病抗性的方法,其特征在于:根據(jù)病情指數(shù)進行抗病性檢測,病情指數(shù)的計算按如下公式計算: 病情指數(shù)=[(0.1 Xrii+0.2 Xn2+0.5 Xn3+0.8 Xn4+l.0 Xn5) /N] X 100,其中:n 為各級病株數(shù),N為試驗總株數(shù)。
      【專利摘要】本發(fā)明公開了一種快速檢測甘薯蔓割病抗性的簡易方法,包括甘薯水培方法、蔓割病菌種的制備與接種、接種后的培養(yǎng)與管理、抗病性的檢測等,利用本方法,可以不受季節(jié)限制,在有限的空間和較短的時間內(nèi),鑒定出甘薯品種或品系的蔓割病抗性,同時可以避免受到田間土壤、環(huán)境和微生物等條件的影響,實現(xiàn)快速、準確鑒定,具有提高鑒定結(jié)果的可靠性、不受季節(jié)和土地限制、節(jié)約成本等特點。
      【IPC分類】A01G31/00, A01G31/02
      【公開號】CN105075823
      【申請?zhí)枴緾N201510476186
      【發(fā)明人】陳選陽, 林羽立, 張招娟, 鄒為坤
      【申請人】福建農(nóng)林大學
      【公開日】2015年11月25日
      【申請日】2015年8月6日
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