一種黑曲霉微丸的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別設(shè)及黑曲霉（Aspergillusnigerxj)微丸及其制 備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 黑曲霉，半知菌亞口，絲抱綱，絲抱目，叢梗抱科，曲霉屬真菌中的一個(gè)常見種。廣 泛分布于世界各地的糧食、植物性產(chǎn)品和±壤中。是重要的發(fā)酵工業(yè)菌種，可生產(chǎn)淀粉酶、 酸性蛋白酶、纖維素酶、果膠酶、葡萄糖氧化酶、巧樣酸、葡糖酸和沒食子酸等。本申請(qǐng)是利 用黑曲霉在生長(zhǎng)過程中所產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物來對(duì)白絹病菌、軟腐病菌進(jìn)行抑制。白絹病 又稱菌核性根腐病和菌核性苗枯病，危害苗木和幼樹的根莖部。該病可危害多種植物，主要 為害油茶、油桐、揪樹、相枯、蘋果、梧桐、泡桐、核桃、馬尾松等多種樹種，還可引起花生，大 蔥等許多農(nóng)作物發(fā)病。軟腐病可使植物的組織或器官發(fā)生腐爛。病菌均為弱寄生菌，主要為 害植物的多汁肥厚的器官，如塊根、塊莖、果實(shí)、莖基等。發(fā)病不限于田間，運(yùn)輸途中和膽藏 期間也有發(fā)生，且為害更重。為害的作物種類甚多。本發(fā)明主要針對(duì)魔芋白絹病、軟腐病。
[0003] 黑曲霉發(fā)酵液雖然有良好的抗菌活性，但因其液體的性質(zhì)不宜大量?jī)?chǔ)存與運(yùn)輸， 長(zhǎng)期儲(chǔ)存時(shí)如保藏不當(dāng)更會(huì)被雜菌污染，對(duì)生防效果及植物生長(zhǎng)產(chǎn)生未知的危害，因此我 們對(duì)黑曲霉發(fā)酵液產(chǎn)品進(jìn)行了進(jìn)一步的加工和優(yōu)化。
[0004] 根據(jù)魔芋生長(zhǎng)及大田生防的具體情況，將黑曲霉發(fā)酵液加工成生防微丸緩釋劑。 微丸緩釋劑，W緩控釋理論為基礎(chǔ)，應(yīng)用現(xiàn)代藥用新輔料、制備技術(shù)和設(shè)備制備直徑在 0. 5-1. 5mm范圍內(nèi)的球形或類球形制劑，發(fā)揮平穩(wěn)、持久、安全有效的作用。微丸直接施用后 既能滿足首劑量要求的抑菌濃度，亦能產(chǎn)生維持劑量的抑菌濃度，且抑菌濃度曲線平穩(wěn)，有 重演性，緩釋時(shí)間長(zhǎng)達(dá)72h。根據(jù)白絹菌、軟腐病生長(zhǎng)繁殖的特點(diǎn)，在雨后高熱高濕的環(huán)境中 能穩(wěn)定釋放，有效抑制病原菌的增殖，在人力物力有限的情況下能最大限度的防止魔芋白 絹病、軟腐病的發(fā)生。采用30%黑曲霉發(fā)酵產(chǎn)物微丸緩釋劑在有效劑量1. 3g/m3下對(duì)白絹 病菌、軟腐病菌的平均防效分別在77. 52%、95. 92%，具有較強(qiáng)的抑制作用。本發(fā)明人目的 在于提供一種易于生產(chǎn)、劑型加工，又利于存活的括抗菌制劑，將其用于魔芋白絹病，軟腐 病防治。
[0005] 所述括抗菌為黑曲霉（Aspergillusnigerxj)由貴州大學(xué)真菌資源研究所分離， 已經(jīng)于2006年3月7日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中屯、，（地址：中國(guó)武漢武漢大學(xué)），保 藏號(hào)：CCTCCNO:M206021

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是解決穩(wěn)定性和藥效最優(yōu)化，并且實(shí)現(xiàn)黑曲霉的可控 制釋放。
[0007] 本發(fā)明提供了一種穩(wěn)定的黑曲霉微丸。
[0008] 本發(fā)明還提供了所述黑曲霉微丸的生產(chǎn)方法。
[0009] 本發(fā)明還提供了所述黑曲霉微丸的使用方法。
[0010] 本發(fā)明還提供了所述黑曲霉微丸可用于防治白絹病，軟腐病。
[0011] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種括抗菌，所述括抗菌為黑曲霉 (AspergillusnigerXj)由貴州大學(xué)真菌資源研究所分離，已經(jīng)于2006年3月7日保藏于 中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中屯、，（地址：中國(guó)武漢武漢大學(xué)），保藏號(hào)：CCTCCN0 :M206021。
[0012] 為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案：
[0013] 一種黑曲霉微丸，其包括下述組分：黑曲霉、微晶纖維素、乳糖、徑丙基甲基纖維 素。
[0014] 優(yōu)選地，黑曲霉為黑曲霉發(fā)酵濃縮液粗提物粉劑。
[0015] 優(yōu)選地，黑曲霉發(fā)酵濃縮液粗提物粉劑10~40重量份、微晶纖維素10~45重量 份、乳糖15~50重量份和徑丙基甲基纖維素1~10重量份。
[0016] 優(yōu)選地，黑曲霉發(fā)酵濃縮液粗提物粉劑30重量份、微晶纖維素32重量份、乳糖35 重量份和徑丙基甲基纖維素3重量份。
[0017] 其中，黑曲霉發(fā)酵濃縮液粗提物粉劑是通過下述方法制備得到：
[001引A.取滅菌發(fā)酵液過濾，在25°C濃縮至相對(duì)密度為1. 12,噴霧干燥，干燥條件為進(jìn) 風(fēng)溫度150°C;排氣溫度95°C;流速20血/s;
[0019] 或
[0020] B.取滅菌發(fā)酵液過濾，在25°C濃縮至相對(duì)密度為1. 12,置70°C烘箱中，鼓風(fēng)干燥 36h，取出后使用高速粉碎機(jī)粉碎，過100目篩既得。
[0021] 所述的微丸可用于防治魔芋白絹病和軟腐病。
[0022] 當(dāng)防治防治魔芋白絹病時(shí)：將黑曲霉微丸菌劑與基質(zhì)按1 : 80~120混勻，種植 時(shí)將菌劑灌根，之后每隔30天灌根一次，待魔芋收獲后，應(yīng)在大田大面積噴灑3-5次。
[0023] 當(dāng)防治防治魔芋軟腐病時(shí)：將黑曲霉微丸菌劑與基質(zhì)按1 : 400~600混勻，種植 時(shí)將菌劑灌根，之后每隔30天灌根一次。 實(shí)施例
[0024] 本發(fā)明根據(jù)下述實(shí)施例做進(jìn)一步的描述，本領(lǐng)域技術(shù)人員可W明了的是，下述實(shí) 施例對(duì)本發(fā)明僅僅起到說明的作用。在不背離本發(fā)明精神的前提下，對(duì)本發(fā)明所做的任意 改進(jìn)和替代均在本發(fā)明保護(hù)的范圍之內(nèi)。
[00巧]使用的儀器和試藥：球型微丸造粒機(jī)，華東理工大學(xué)機(jī)械工業(yè)研究院；標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn) 篩，浙江省上虞縣紗篩廠；CJY-300脆碎度測(cè)定儀，上海黃海藥檢儀器廠）。微晶纖維素 (MCC)，常熟藥用輔料廠；乳糖，北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司；徑丙基甲基纖維素 化PMCK4M)，山東泰安瑞泰纖維素有限公司；95%乙醇，沈陽試劑一廠；所述括抗菌為黑曲 霉（Aspergillusnigerxj)由貴州大學(xué)真菌資源研究所提供，其發(fā)酵液按照現(xiàn)有技術(shù)中方 法進(jìn)行制備。
[002引實(shí)施例1 :緩釋微丸的制備
[0027] 黑曲霉發(fā)酵濃縮液粗提物粉劑制備：
[0028] A.取滅菌發(fā)酵液過濾，濃縮至相對(duì)密度為1. 12 (25°C)，噴霧干燥，干燥條件為：進(jìn) 風(fēng)溫度150°C;排氣溫度95°C;流速20血/s。
[0029] 利用噴霧干燥及在進(jìn)風(fēng)溫度150°C;排氣溫度95°C;流速20血/s下對(duì)黑曲霉發(fā)酵 液進(jìn)行濃縮干燥加工，采用空氣經(jīng)過濾和加熱，進(jìn)入干燥器頂部空氣分配器，熱空氣呈螺旋 狀均勻地進(jìn)入干燥室。料液經(jīng)塔體頂部的高速離屯、霧化器，（旋轉(zhuǎn)）噴霧成極細(xì)微的霧狀 液珠，與熱空氣并流接觸在極短的時(shí)間內(nèi)可干燥為成品。產(chǎn)品具有良好的均勻度、流動(dòng)性和 溶解性，產(chǎn)品純度高，質(zhì)量好。生產(chǎn)過程簡(jiǎn)化，操作控制方便。對(duì)于含濕量40-60% (特殊物 料可達(dá)90% )的液體能一次干燥成粉粒產(chǎn)品，干燥后不需粉碎和篩選，減少生產(chǎn)工序，提高 產(chǎn)品純度。對(duì)產(chǎn)品粒徑，松密度，水份，在一定范圍內(nèi)可通過改變操作條件進(jìn)行調(diào)整，控制和 管理都很方便。
[0030] 或
[0031] B.取滅菌發(fā)酵液過濾，濃縮至相對(duì)密度為1. 12(25°C)，置70°C烘箱中，鼓風(fēng)干燥 36h，取出后使用高速粉碎機(jī)粉碎，過100目篩既得。
[0032] 發(fā)酵液高溫鼓風(fēng)干燥技術(shù)：利用鼓風(fēng)烘箱在烘箱溫度70°C，鼓風(fēng)干燥時(shí)間36h，對(duì) 黑曲霉發(fā)酵液進(jìn)行濃縮干燥加工。高溫鼓風(fēng)干燥箱的采用進(jìn)口多個(gè)大功率風(fēng)機(jī)，雙風(fēng)道式 熱循環(huán)系統(tǒng)，將不誘鋼高溫電加熱器通過風(fēng)循環(huán)，快速加熱工作室內(nèi)，使產(chǎn)品迅速干燥，取 出后使用高速粉碎機(jī)粉碎，過100目篩既得。
[003引微丸制備：
[0034] 黑曲霉微丸由下列組分按重量百分比組成：
[0035] 黑曲霉發(fā)酵濃縮液粗提物粉劑質(zhì)量 30重量份；
[0036] 乳糖 30重量份； MCC 30重量份； 怒丙基甲基纖維素(HPMCK4M) 10重量份；
[0037] 過篩混勻用適量的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%的50mL乙醇水溶液作為黏合劑制粒得到濕度 適中的濕物料，干燥即得。
[003引實(shí)施例2 :緩釋微丸的制備
[0039] 按照實(shí)施例1相同的方法進(jìn)行制備，不同之處在于采用下述重量份的組分：
[0040] 黑曲霉發(fā)酵濃縮液粗提物粉劑質(zhì)量 30重量份； 乳糖 35重量份； MCC 32重量份；