一種萼花臂尾輪蟲的培養(yǎng)及氨氮對其毒性的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種萼花臂尾輪蟲的培養(yǎng)及氨氮對其毒性的 檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 萼花臂尾輪蟲是淡水中常見的一種輪蟲，由于其在漁業(yè)生產(chǎn)上具有易于高密度培 養(yǎng)、適應(yīng)性強、種群增長迅速、適口性好、營養(yǎng)豐富等特點，因此被廣泛用于魚蝦等水產(chǎn)動物 的開口餌料，而且輪蟲這一活餌料的培養(yǎng)好壞常常是導致水產(chǎn)苗種生產(chǎn)成敗的關(guān)鍵因素； 另外，由于輪蟲在水體中分布廣泛、體型微小、對環(huán)境污染物的敏感性較高，因而也可較好 地將其作為水域生態(tài)和環(huán)境檢測的重要指示生物。餌料的投食在輪蟲的培養(yǎng)過程中是最不 可缺少的，好壞直接影響到輪蟲的生長。
[0003] 通常，富營養(yǎng)化水體的氨氮含量較高，尤其在水產(chǎn)養(yǎng)殖池塘和輪蟲專門培育池中， 由于生產(chǎn)上常采用施肥培養(yǎng)單胞藻或直接潑灑豆?jié){等方法培養(yǎng)輪蟲以及水生動物的排泄 物、糞便及殘餌等有機物的不斷分解，導致水體的氨氮大量積累，這可能是影響其生長、繁 殖等種群增長的重要制約因素之一。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種萼花臂尾輪蟲的培 養(yǎng)及氨氮對其毒性的檢測方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)不足導致的諸多問題。
[0005] 為了解決上述問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下： 一種萼花臂尾輪蟲的培養(yǎng)及氨氮對其毒性的檢測方法，所述培養(yǎng)方法采用單胞藻和酵 母混合餌料投食并添加微量元素。
[0006] 優(yōu)選地，所述投食的頻率為1次/天，投食密度為2X106個/ml。
[0007] 優(yōu)選地，所述微量元素添加量為：FeC6H507 5X10 7mol/L、CuS04 3X10 8mol/L、 CuS04 8X10smol/L、MnS04 3X10smol/L、CoCl2 4X108mol/L、NiS04 5X10smol/L、 NaMo07 1X10 9mol/L〇
[0008] -種萼花臂尾輪蟲的培養(yǎng)及氨氮對其毒性的檢測方法，還包括一氨氮對萼花臂尾 輪蟲毒性的檢測方法，所述檢測方法包括如下步驟： 1) 分別設(shè)定若干個不同質(zhì)量濃度梯度的氨氮微孔培養(yǎng)板，用分析純級NH4C1配制，另 設(shè)1個未添加氨氮的對照微孔培養(yǎng)板； 2) 用吸管隨機吸取預(yù)培養(yǎng)的不帶卵、個體較大、游動活躍的萼花臂尾輪蟲，置于含不同 氨氮濃度梯度的微孔培養(yǎng)板中，每孔含10個輪蟲個體和10mL試驗溶液，蓋上蓋子以防水分 蒸發(fā)； 3) 將培養(yǎng)板在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，pH為7. 5±0. 2,投食密度為4X106cell/mL; 4) 在實驗開始后的第6h、24h、48h、96h用解剖鏡觀察輪蟲的存活情況，及時挑出并 記錄個體死亡數(shù)。
[0009] 優(yōu)選地，所述一種氨氮對萼花臂尾輪蟲毒性的檢測方法，步驟1)中氨氮微孔培養(yǎng) 板共有 6 個，且濃度梯度分別為 1.5mg/L、2. 5mg/L、10. 0mg/L、15. 0mg/L、20. 0mg/L、 25.0mg/L、30.0mg/L〇
[0010] 優(yōu)選地，在輪蟲培養(yǎng)24h后分別取樣，輪蟲樣品用生理鹽水潤洗、過濾，濾紙吸干 水分，準確稱量后，在冰冷的研缽中用質(zhì)量體積1 :9的勻漿介質(zhì)制成組織勻漿，4°C下離心 10min，離心條件為5000r/min，取上清液待用，采用蘇州科銘生物技術(shù)有限公司的試劑 盒，按說明書測定輪蟲H202和MDA含量以及SOD、CAT酶活性。
[0011] 本發(fā)明的優(yōu)點在于，本方案采用單胞藻和酵母混合餌料投食并添加微量元素，相 比其它的投食方式，具有輪蟲的增長速度快，生長狀態(tài)好，出現(xiàn)死亡輪蟲數(shù)量少的優(yōu)點，且 通過所述測定氨氮濃度對輪蟲毒性的檢測方法，能較好的控制水體環(huán)境，保證投食效果。
【附圖說明】
[0012] 如圖1為本發(fā)明實施例中氨氮脅迫濃度（A)和氨氮脅迫時間（B)分別對輪蟲體內(nèi) H202含量影響的對比圖； 如圖2為本發(fā)明實施例中氨氮脅迫濃度（A)和氨氮脅迫時間（B)分別對輪蟲體內(nèi)S0D含量影響的對比圖； 如圖3為本發(fā)明實施例中氨氮脅迫濃度（A)和氨氮脅迫時間（B)分別對輪蟲體內(nèi)CAT含量影響的對比圖； 如圖4為本發(fā)明實施例中氨氮脅迫濃度（A)和氨氮脅迫時間（B)分別對輪蟲體內(nèi)MDA含量影響的對比圖。
【具體實施方式】
[0013] 下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進一步進行描述，以下實施例可以使本專業(yè)技術(shù)人 員更全面的理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
[0014] -種萼花臂尾輪蟲的培養(yǎng)及氨氮對其毒性的檢測方法，所述培養(yǎng)方法采用單胞藻 和酵母混合餌料投食并添加微量元素。
[0015] 在本實例中，所述投食的頻率為1次/天，投食密度為2X106個/ml。
[0016] 在本實例中，所述微量元素添加量為：FeC6H507 5X10 7mol/L、CuS04 3X10 8mol/ L、CuS04 8X10 8mol/L、MnS04 3X10 8mol/L、CoCl2 4X10 8mol/L、NiS04 5X10 8mol/L、 NaMo07 1X10 9mol/L〇
[0017] -種萼花臂尾輪蟲的培養(yǎng)及氨氮對其毒性的檢測方法，還包括一氨氮對萼花臂尾 輪蟲毒性的檢測方法，所述檢測方法包括如下步驟： 1) 分別設(shè)定質(zhì)量濃度梯度為 1.5mg/L、2. 5mg/L、10. 0mg/L、15. 0mg/L、20. 0mg/L、 25. 0mg/L、30. 0mg/L的氨氮微孔培養(yǎng)板，用分析純級NH4C1配制，另設(shè)1個未添加氨氮的 對照微孔培養(yǎng)板； 2) 用吸管隨機吸取預(yù)培養(yǎng)的不帶卵、個體較大、游動活躍的萼花臂尾輪蟲，置于含不同 氨氮濃度梯度的微孔培養(yǎng)板中，每孔含10個輪蟲個體和10mL試驗溶液，蓋上蓋子以防水分 蒸發(fā)； 3) 將培養(yǎng)板在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，pH為7. 5±0. 2,投食密度為4X106cell/mL; 4)在實驗開始后的第6h、24h、48h、96h用解剖鏡觀察輪蟲的存活情況，及時挑出 并記錄個體死亡數(shù)，在輪蟲培養(yǎng)24h后分別取樣，輪蟲樣品用生理鹽水潤洗、過濾，濾紙吸 干水分，準確稱量后，在冰冷的研缽中用質(zhì)量體積1 :9的勻漿介質(zhì)制成組織勻漿，4°C下離 心10min，離心條件為5000r/min，取上清液待用，采用蘇州科銘生物技術(shù)有限公司的試劑