一種專用鐵皮石斛葉鞘組培成苗方法
【技術領域】
[0001 ]本發(fā)明涉及一種專用鐵皮石斛葉鞘組培成苗方法。
【背景技術】
[0002]鐵皮石斛，是一種瀕危植物，也是一種很好的中藥，其有益胃生津、滋陰清熱、滋補養(yǎng)生的功效，鐵皮石斛的發(fā)展能夠很好的弘揚中藥文化，但是鐵皮石斛對生長環(huán)境的要求苛刻，喜在溫暖、潮濕、半陰半陽的環(huán)境中生長，但不能栽培在普通土壤中，多依附于大樹干上和石壁石縫中，而且生長周期長，大約需要五六年的時間。石斛開花多，結果少，種子細如粉塵，每粒重約0.3-0.4yg，不易收集進行規(guī)?；陌l(fā)展，而種胚的發(fā)育不能超過球形階段，缺乏胚乳組織，需要與真菌共生才能萌芽，有性繁育困難。

【發(fā)明內容】

[0003]本發(fā)明的目的是為了克服以上的不足，提供步驟合理科學，功能實用，育苗效果好的一種專用鐵皮石斛葉鞘組培成苗方法。
[0004]本發(fā)明的目的通過以下技術方案來實現(xiàn):一種專用鐵皮石斛葉鞘組培成苗方法，包括以下步驟:
第I步，外植體選擇，選取當年生幼嫩的鐵皮石斛頂端帶葉鞘的葉基部為外植體，將外植體用流水洗滌，去除灰塵，再用洗潔精浸泡15min后，再流水沖洗干凈；
第2步，外植體處理，將干凈的外植體置于超凈工作臺上，放置于燒杯中，用75%酒精消毒30s，無菌水反復沖洗5 — 6次;再用0.1%升汞消毒3min，無菌水反復沖洗5 — 6次;外植體置于無菌濾紙上吸干水分，切去與葉鞘的邊緣部分，保留葉鞘帶肉質部位，切成0.5cm X 0.5cm的大小接種上，為避免交叉感染，每瓶接種2個；
第3步，成苗培養(yǎng)基，葉片滅菌處理后接種于誘導培養(yǎng)基，溫度25± 2°C，暗培養(yǎng)1d，在放入光照時間12h.d—S光照強度1200±100Lx環(huán)境下經(jīng)45天誘導形成愈傷組織，再將愈傷組織轉至分化培養(yǎng)基，在同樣條件下，培養(yǎng)55天獲得不定芽;再將不定芽切成每一個小苗，接種在生根培養(yǎng)基中，在同樣條件下，培養(yǎng)38天即可獲得根系長至2-3cm成苗;所述誘導培養(yǎng)基為:改良 MS 基本培養(yǎng)基，添加 2，4 —D 0.8-1.3 mg.!/1+ 6-BA 0.6-2.0mg.L—1+椰汁 5-9%+土豆汁3%-7%，附加蔗糖30g..L—1，pH為5.8;所述分化培養(yǎng)基為:改良MS
基本培養(yǎng)基，添加6-BA 0.5-3.0mg.L"1+ NAA 0.2-0.4mg.L—工+氨基酸13-20%，附加蔗糖30g..L一S水解酪蛋白300mg.L—1，pH為5.8;所述生根培養(yǎng)基為:改良1/2MS
基本培養(yǎng)基，添加，GA3 0.1-0.3 mg.L-1 + NAA 0.4-0.8 mg.L一S附加蔗糖30g.L-S瓊脂6.2g.L—S活性炭1.5 g.L—S pH為5.8;其中所述改良MS基本培養(yǎng)基配方是將MS培養(yǎng)基中的大量元素含量改良為KNO3 175 mg.NH4NO3 280 mg.L—\MgSO4.7H20 115 mg.L-\CaCl2.2H20 300 mg.L-'KH2PO4 275 mg.L—1，鐵鹽中Na2.EDTA 50.7 mg.L—S有機成分中甘氨酸8 mg.L—S其它微量元素、鐵鹽與有機成分含量不變；
第4步，煉苗和栽培，選擇根系發(fā)達生長健壯的無菌苗，室內開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室專用基質中盆栽，溫室溫度控制在20-25°C，濕度控制在60-70%，光度的控制在1400-1700LX;專用基質采用松樹皮、稻糠和泥炭土，經(jīng)高溫消毒后，采用6:2:2的比例配置。
[0005]本發(fā)明的進一步改進在于:所述第4步中松樹皮直徑為1-1.2cm。
[0006]本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比具有以下優(yōu)點:
本方法采用鐵皮石斛的葉鞘進行組織培養(yǎng)得到的愈傷組織，出愈率比其他方法提高26%，玻璃化降低10%;愈傷組織上分化出來的芽，不定芽分化率為62.67%，每個愈傷組織塊可形成3-11個不定芽;生根率達100%。此方法可大大提高繁殖速度及繁殖量，培養(yǎng)的鐵皮石斛比市場上的營養(yǎng)成份比較高，不僅提高產(chǎn)量，更提高了品質。
[0007]【具體實施方式】:
為了加深對本發(fā)明的理解，下面將結合實施例對本發(fā)明作進一步詳述，該實施例僅用于解釋本發(fā)明，并不構成對本發(fā)明保護范圍的限定。
實施例
[0008]一種專用鐵皮石斛葉鞘組培成苗方法，包括以下步驟:
第I步，外植體選擇，選取當年生幼嫩的鐵皮石斛頂端帶葉鞘的葉基部為外植體，將外植體用流水洗滌，去除灰塵，再用洗潔精浸泡15min后，再流水沖洗干凈；
第2步，外植體處理，將干凈的外植體置于超凈工作臺上，放置于燒杯中，用75%酒精消毒30s，無菌水反復沖洗6次;再用0.1%升汞消毒3min，無菌水反復沖洗5次;外植體置于無菌濾紙上吸干水分，切去與葉鞘的邊緣部分，保留葉鞘帶肉質部位，切成0.5 cm X 0.5cm的大小接種上，為避免交叉感染，每瓶接種2個；
第3步，成苗培養(yǎng)基，葉片滅菌處理后接種于誘導培養(yǎng)基，溫度260C，暗培養(yǎng)1d，在放入光照時間12h.d—S光照強度1250Lx環(huán)境下經(jīng)45天誘導形成愈傷組織，再將愈傷組織轉至分化培養(yǎng)基，在同樣條件下，培養(yǎng)55天獲得不定芽;再將不定芽切成每一個小苗，接種在生根培養(yǎng)基中，在同樣條件下，培養(yǎng)38天即可獲得根系長至2.5cm成苗;所述誘導培養(yǎng)基為:改良MS基本培養(yǎng)基，添加2，4一D 0.8-1.3 mg.L-1+ 6-BA 0.6-2.0mg.L—1+椰汁5-9%+土豆汁3%-7%，附加蔗糖30g..L—SpH為5.8;所述分化培養(yǎng)基為:改良MS基本培養(yǎng)基，添加 6-BA 0.5-3.0mg.L"1+ NAA 0.2-0.4mg.1/1+氨基酸13_20%，附加蔗糖308.L-S瓊脂6.2g.L—S水解酪蛋白300mg.L—SpH為5.8;所述生根培養(yǎng)基為:改良1/2MS基本培養(yǎng)基，添加，GA3 0.1-0.3 mg.L-1 + NAA 0.4-0.8 mg.L一1，附加鹿糖30g.L—S瓊脂6.2g.L一S活性炭1.5 g.L—SpH為5.8;其中所述改良MS基本培養(yǎng)基配方是將MS培養(yǎng)基中的大量元素含量改良為KNO3 175 mg.L-1^NH4NO3 280 mg.L-1^MgSO4.7H20 115 mg.[1XaCl2.2H20 300 mg.L-^KH2PO4 275 mg.L一、鐵鹽中Na2.EDTA 50.7 mg.L—S有機成分中甘氨酸8 mg.L—S其它微量元素、鐵鹽與有機成分含量不變；
第4步，煉苗和栽培，選擇根系發(fā)達生長健壯的無菌苗，室內開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室專用基質中盆栽，溫室溫度控制在230C，濕度控制在65%，光度的控制在1550Lx;專用基質采用松樹皮(直徑為1-1.2cm)、稻糠和泥炭土，經(jīng)高溫消毒后，采用6:2: 2的比例配置。
【主權項】
1.一種專用鐵皮石斛葉鞘組培成苗方法，其特征在于:包括以下步驟: 第I步，外植體選擇，選取當年生幼嫩的鐵皮石斛頂端帶葉鞘的葉基部為外植體，將外植體用流水洗滌，去除灰塵，再用洗潔精浸泡15min后，再流水沖洗干凈； 第2步，外植體處理，將干凈的外植體置于超凈工作臺上，放置于燒杯中，用75%酒精消毒30s，無菌水反復沖洗5 — 6次;再用0.1%升汞消毒3min，無菌水反復沖洗5 — 6次;外植體置于無菌濾紙上吸干水分，切去與葉鞘的邊緣部分，保留葉鞘帶肉質部位，切成0.5cm X 0.5cm的大小接種上，每瓶接種2個； 第3步，成苗培養(yǎng)基，葉片滅菌處理后接種于誘導培養(yǎng)基，溫度25± 2°C，暗培養(yǎng)1d，在放入光照時間12h.d—S光照強度1200±100Lx環(huán)境下經(jīng)45天誘導形成愈傷組織，再將愈傷組織轉至分化培養(yǎng)基，在同樣條件下，培養(yǎng)55天獲得不定芽;再將不定芽切成每一個小苗，接種在生根培養(yǎng)基中，在同樣條件下，培養(yǎng)38天即可獲得根系長至2-3cm成苗;所述誘導培養(yǎng)基為:改良 MS 基本培養(yǎng)基，添加 2，4 —D 0.8-1.3 mg.!/1+ 6-BA 0.6-2.0mg.L—1+椰汁 5-9%+土豆汁3%-7%，附加蔗糖30g.r1,3? 1^6.2g.L—1，pH為5.8;所述分化培養(yǎng)基為:改良MS基本培養(yǎng)基，添加6-BA 0.5-3.0mg.L"1+ NAA 0.2-0.4mg.L—工+氨基酸13-20%，附加蔗糖30g.L-1Mme^g.L一S水解酪蛋白300mg.L—1，pH為5.8;所述生根培養(yǎng)基為:改良1/2MS基本培養(yǎng)基，添加，GA3 0.1-0.3 mg.L—1 + NAA 0.4-0.8 mg.L一1，附加鹿糖30g.L-S瓊脂6.2g.L—S活性炭1.5 g.L—SpH為5.8;其中改良MS基本培養(yǎng)基配方是將MS培養(yǎng)基中的大量元素含量改良為KNO3 175 mg.L-1^NH4NO3 280 mg.L-1^MgSO4.7H20 115 mg.L-\CaCl2.2H20 300 mg.L-1^KH2PO4 275 mg.L—1，鐵鹽中Na2.EDTA 50.7 mg.L—S有機成分中甘氨酸8 mg.L—S其它微量元素、鐵鹽與有機成分含量不變； 第4步，煉苗和栽培，選擇根系發(fā)達生長健壯的無菌苗，室內開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室專用基質中盆栽，溫室溫度控制在20-25°C，濕度控制在60-70%，光度的控制在1400-1700LX;專用基質采用松樹皮、稻糠和泥炭土，經(jīng)高溫消毒后，采用6:2:2的比例配置。2.根據(jù)權利要求1所述一種專用鐵皮石斛葉鞘組培成苗方法，其特征在于:所述第4步中松樹皮直徑為1-1.2cm。
【專利摘要】本發(fā)明公開一種專用鐵皮石斛葉鞘組培成苗方法，包括以下四個步驟：第1步，外植體選擇；第2步，外植體處理；第3步，成苗培養(yǎng)基；第4步，煉苗和栽培。本方法采用鐵皮石斛的葉鞘進行組織培養(yǎng)得到的愈傷組織，提高了出愈率，降低了玻璃化，不定芽分化率達到62.67%，每個愈傷組織塊可形成多個不定芽，有效保證生根率，大大提高繁殖速度及繁殖量，培養(yǎng)的鐵皮石斛比市場上的營養(yǎng)成份比較高，提高產(chǎn)量與品質。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105613292
【申請?zhí)枴緾N201610002192
【發(fā)明人】戴云新, 馬贊留, 蔡紅海, 錢海云, 崔成華, 鄔榮領, 王建新
【申請人】江蘇遠鵬基因組研究院有限公司
【公開日】2016年6月1日
【申請日】2016年1月6日