草莓移栽苗組培方法
【專利摘要】草莓移栽苗組培方法，步驟包括：A、草莓外植體的選取，B、消毒滅菌，C、抗褐化培養(yǎng)，D、愈傷組織誘導，叢芽發(fā)生和增殖培養(yǎng)，E、擴繁培養(yǎng)，F(xiàn)、生根培養(yǎng)，G、煉苗和移栽。其有益效果是，草莓苗組培程序簡單，可在同一培養(yǎng)基中同時進行愈傷組織誘導、叢芽發(fā)生和增殖培養(yǎng)；組培周期短、繁殖系數(shù)高，整個快速繁殖過程只需三種培養(yǎng)基就解決了褐化現(xiàn)象、愈傷組織、叢芽發(fā)生和增殖、以及生根問題；試管苗不定根誘導未添加植物激素，煉苗移栽成活率高，生長迅速；種苗可保持同一基因型，繁殖后代不易褐化、病毒積累很少；抑制褐化的組培方法，成本低、時間短、育出的苗品質好且成活率高，性狀穩(wěn)定，能滿足草莓高品質種苗的工廠化生產(chǎn)需求。
【專利說明】
草莓移栽苗組培方法
技術領域
[0001 ]本發(fā)明屬于草莓苗組織培養(yǎng)技術領域，涉及一種草莓移栽苗組培方法。
【背景技術】
[0002]草莓傳統(tǒng)上主要以匍匐莖和分株方式進行繁殖，這兩種繁殖方式均存在周期長、系數(shù)低等問題。長期無性繁殖容易造成病毒在草莓植株體內積累，致使草莓種性退化，產(chǎn)量逐年降低。利用組織培養(yǎng)技術進行脫毒、快速繁殖是解決這些問題的有效途徑。但現(xiàn)有的組織培養(yǎng)技術中，組培苗的整體應用處于較低水平，草莓組培苗外植體褐化現(xiàn)象嚴重、繁殖系數(shù)低、組培周期長、移栽成活率低，影響了草莓的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展。

【發(fā)明內容】

[0003]本發(fā)明針對現(xiàn)有技術中，草莓苗組織培養(yǎng)技術存在褐化現(xiàn)象嚴重、繁殖系數(shù)低、組培周期長、移栽成活率低的問題，提供一種草莓移栽苗組培方法，其技術方案是:
一種草莓移栽苗組培方法，包括以下步驟:
A、草莓外植體的選取:選擇長勢良好、無病蟲害、無畸形的健壯草莓植株，取其匍匐莖帶節(jié)莖段，用手術刀切割為約2?3 cm長，獲得草莓外植體；
B、消毒滅菌:將外植體先用自來水清洗表面的泥土和灰塵，再將外植體用質量比為10%的洗衣粉溶液浸泡10 min，輕微震蕩攪動后，流水沖洗30 min，置于超凈工作臺上的器皿中；再用質量比為50%的維生素C溶液浸泡3 min，用體積比為75%乙醇溶液處理10?15 s，再經(jīng)質量比為0.1%的萊水溶液消毒8?10 min，最后用無菌水沖洗5?6次，每次不低于3 min，在整個消毒過程中充分搖動器皿；
C、抗褐化培養(yǎng):在每升蒸餾水中加入20000~30000mg的硫代硫酸鈉，100?150 mg的維生素C，1.0?5.0mg的活性炭，I.0~10 mg的氯化鈉，30000 mg的鹿糖和5300 mg的瓊脂粉配制成培養(yǎng)基I，培養(yǎng)基I的PH值在5.4-5.8之間；
將經(jīng)消毒滅菌的外植體接入培養(yǎng)基I中進行培養(yǎng)，間隔7 d后，將外植體轉接到另一個相同的新鮮培養(yǎng)基I中進行培養(yǎng)，外植體共轉接3次完成抗褐化處理；
D、愈傷組織誘導，叢芽發(fā)生和增殖培養(yǎng):在每升蒸餾水中加入1.0-1.5mg的6-芐胺基嘌呤，0.1?1.0 mg的萘乙酸，0.05?0.1 mg的2 ,4-二氯苯氧乙酸，30000 mg的鹿糖，5300?5500 mg的瓊脂制成培養(yǎng)基Π，培養(yǎng)基Π的PH值在5.4-5.8之間；
將C中得到的外植體接入到培養(yǎng)基Π中，在光照度為1500?2000 lx，光照時間為12 h/d，溫度控制在22 ± I °C的條件下進行愈傷組織誘導，叢芽發(fā)生和增殖培養(yǎng)，5 d后在其節(jié)部和基部出現(xiàn)愈傷組織；10 d后愈傷組織迅速增殖，其表面開始出現(xiàn)綠色芽點；15 d后分化出不定芽叢；
E、擴繁培養(yǎng):將D步驟中15d后分化出不定芽叢進行無菌分切，切成4-6株一叢，分別轉接到另一個相同的新鮮培養(yǎng)基Π中，進行擴繁，培養(yǎng)30 d后，擴繁培養(yǎng)出種苗；
F、生根培養(yǎng):在每升蒸饋水中加入1.0mg的活性炭，10000 mg的鹿糖，5300-5500 mg的瓊脂粉配制成培養(yǎng)基m，培養(yǎng)基m的PH值在5.4-5.8之間；
取E步驟中高3~4 Cm的健壯種苗，接種于培養(yǎng)基m中，放在光照度為1500?2000 lx，光照時間為12 h/d，溫度控制在22±1 °C的條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)45 d后獲得苗壯根粗的生根苗；
G、煉苗和移栽:取6?8 cm高的生根苗，連培養(yǎng)瓶一起置于室溫下煉苗3 d后，打開瓶蓋，從培養(yǎng)基中取出幼苗，將幼苗上殘留培養(yǎng)基清洗干凈，放入濃度為0.1-0.2%的多菌靈溶液中消毒2?3 min后，移栽至消毒后的沙土基質中保溫保濕培養(yǎng)，生長30 d后，即得移栽苗。
[0004]本發(fā)明有益效果是:
1、用組織培養(yǎng)技術在培養(yǎng)室內可實現(xiàn)周年生產(chǎn)，既節(jié)約了土地資源，又提高了經(jīng)濟效益，克服了傳統(tǒng)繁殖方式無法周年進行生產(chǎn)的難點。
[0005]2、解決了草莓屬植物快速繁殖中易出現(xiàn)的褐化現(xiàn)象，種苗成活率和質量得到了提尚O
[0006]3、消除褐化后的外植體在同一培養(yǎng)基中同步進行愈傷組誘導、不定芽叢分化，大大縮短了草莓的體外繁殖周期，解決了前人未能同步誘導愈傷組織和芽叢分化的問題。
[0007]4、所有種苗可保持同一基因型背景，易于標準化、工廠化操作，有效地提高了種苗質量，可為大面積推廣種植提供統(tǒng)一標準的優(yōu)良種苗，解決了傳統(tǒng)草莓繁殖后代易褐化、病毒積累多，性狀不穩(wěn)定而導致的種苗品質不一的難題。
[0008]5、試管苗不定根誘導未添加植物激素，煉苗移栽成活率高，且生長迅速，效果很好。
[0009]6、使用三種培養(yǎng)基分別進行抗褐化處理，愈傷組織、叢芽發(fā)生和增殖處理以及生根處理，解決草莓苗不同生長時期存在的技術問題，解決問題的針對性強、效果好。
[0010]7、所使用的抑制褐化的方法，成本低、時間短、育出的苗品質好且成活率高，能將優(yōu)良性狀固定下來，能滿足草莓高品質種苗的工廠化生產(chǎn)需求。
【具體實施方式】
[0011 ]實施例一:一種草莓移栽苗組培方法，包括以下步驟:
A、草莓外植體的選取:選擇長勢良好、無病蟲害、無畸形的健壯草莓植株，取其匍匐莖帶節(jié)莖段，用手術刀切割為約3 cm長，獲得草莓外植體；
B、消毒滅菌:將外植體先用自來水清洗表面的泥土和灰塵，再將外植體用質量比為10%的洗衣粉溶液浸泡10 min，輕微震蕩攪動后，流水沖洗30 min，置于超凈工作臺上的器皿中；再用質量比為50%的維生素C溶液浸泡3 min，用體積比為75%乙醇溶液處理13 S，再經(jīng)質量比為0.1%的萊水溶液消毒9 min，最后用無菌水沖洗5次，每次4 min，在整個消毒過程中充分搖動器皿；
C、抗褐化培養(yǎng):在每升蒸饋水中加入25mg的硫代硫酸鈉，130 mg的維生素C，3.0 mg的活性炭，5 mg的氯化鈉，30000 mg的鹿糖和5300 mg的瓊脂粉配制成培養(yǎng)基I，培養(yǎng)基I的PH值為5.6;
將經(jīng)消毒滅菌的外植體接入培養(yǎng)基I中進行培養(yǎng)，間隔7 d后，將外植體轉接到另一個相同的新鮮培養(yǎng)基I中進行培養(yǎng)，外植體共轉接3次完成抗褐化處理；
D、愈傷組織誘導，叢芽發(fā)生和增殖培養(yǎng):在每升蒸餾水中加入1.3mg的6-芐胺基嘌呤，
0.5 mg的萘乙酸，0.08 mg的2,4-二氯苯氧乙酸，30000 mg的鹿糖，5400 mg的瓊脂制成培養(yǎng)基Π，培養(yǎng)基Π的PH值為5.6;
將C中得到的外植體接入到培養(yǎng)基Π中，在光照度為1800 lx，光照時間為12 h/d，溫度控制在22 °C的條件下進行愈傷組織誘導，叢芽發(fā)生和增殖培養(yǎng)，5 d后在其節(jié)部和基部出現(xiàn)愈傷組織，得愈率為98.87%;10 d后愈傷組織迅速增殖，其表面開始出現(xiàn)綠色芽點；15 d后分化出不定芽叢，芽叢分化率100%; 20 d后叢芽發(fā)生系數(shù)可達6.32;
E、擴繁培養(yǎng):將D步驟中15d后分化出不定芽叢進行無菌分切，切成5株一叢，分別轉接到另一個相同的新鮮培養(yǎng)基Π中，進行擴繁，培養(yǎng)30 d后，平均繁殖系數(shù)達12.86，擴繁培養(yǎng)出種苗；
F、生根培養(yǎng):在每升蒸饋水中加入1.0mg的活性炭，10000 mg的鹿糖，5400 mg的瓊脂粉配制成培養(yǎng)基m，培養(yǎng)基m的PH值為5.6;
取E步驟中高4 cm的健壯種苗，接種于培養(yǎng)基ΙΠ中，放在光照度為1800 lx，光照時間為12 h/d，溫度控制在22 °C的條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)45 d后獲得苗壯根粗的生根苗，其生根率可達100%;
G、煉苗和移栽:取7cm高的生根苗，連培養(yǎng)瓶一起置于室溫下煉苗3 d后，打開瓶蓋，從培養(yǎng)基中取出幼苗，將幼苗上殘留培養(yǎng)基清洗干凈，放入濃度為0.15%的多菌靈溶液中消毒3 min后，移栽至消毒后的沙土基質中保溫保濕培養(yǎng)，生長30 d后，即得移栽苗，成活率可達98%。
【主權項】
1.草莓移栽苗組培方法，其特征在于，包括以下步驟: A、草莓外植體的選取:選擇長勢良好、無病蟲害、無畸形的健壯草莓植株，取其匍匐莖帶節(jié)莖段，用手術刀切割為約2?3 cm長，獲得草莓外植體； B、消毒滅菌:將外植體先用自來水清洗表面的泥土和灰塵，再將外植體用質量比為10%的洗衣粉溶液浸泡10 min，輕微震蕩攪動后，流水沖洗30 min，置于超凈工作臺上的器皿中；再用質量比為50%的維生素C溶液浸泡3 min，用體積比為75%乙醇溶液處理10?15 s，再經(jīng)質量比為0.1%的萊水溶液消毒8?10 min，最后用無菌水沖洗5?6次，每次不低于3 min，在整個消毒過程中充分搖動器皿； C、抗褐化培養(yǎng):在每升蒸餾水中加入20000?30000mg的硫代硫酸鈉，100?150 mg的維生素C，1.0?5.0mg的活性炭，I.0~10 mg的氯化鈉，30000 mg的鹿糖和5300 mg的瓊脂粉配制成培養(yǎng)基I，培養(yǎng)基I的PH值在5.4-5.8之間； 將經(jīng)消毒滅菌的外植體接入培養(yǎng)基I中進行培養(yǎng)，間隔7 d后，將外植體轉接到另一個相同的新鮮培養(yǎng)基I中進行培養(yǎng)，外植體共轉接3次完成抗褐化處理； D、愈傷組織誘導，叢芽發(fā)生和增殖培養(yǎng):在每升蒸餾水中加入1.0-1.5mg的6-芐胺基嘌呤，0.1?1.0 mg的萘乙酸，0.05?0.1 mg的2 ,4-二氯苯氧乙酸，30000 mg的鹿糖，5300?.5500 mg的瓊脂制成培養(yǎng)基Π，培養(yǎng)基Π的PH值在5.4-5.8之間； 將C中得到的外植體接入到培養(yǎng)基Π中，在光照度為1500?2000 lx，光照時間為12 h/d，溫度控制在22 ± I °C的條件下進行愈傷組織誘導，叢芽發(fā)生和增殖培養(yǎng)，5 d后在其節(jié)部和基部出現(xiàn)愈傷組織；10 d后愈傷組織迅速增殖，其表面開始出現(xiàn)綠色芽點；15 d后分化出不定芽叢； E、擴繁培養(yǎng):將D步驟中15d后分化出不定芽叢進行無菌分切，切成4-6株一叢，分別轉接到另一個相同的新鮮培養(yǎng)基Π中，進行擴繁，培養(yǎng)30 d后，擴繁培養(yǎng)出種苗； F、生根培養(yǎng):在每升蒸饋水中加入1.0mg的活性炭，10000 mg的鹿糖，5300-5500 mg的瓊脂粉配制成培養(yǎng)基m，培養(yǎng)基m的PH值在5.4-5.8之間； 取E步驟中高3?4 cm的健壯種苗，接種于培養(yǎng)基ΙΠ中，放在光照度為1500?2000 lx，光照時間為12 h/d，溫度控制在22±1 °C的條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)45 d后獲得苗壯根粗的生根苗； G、煉苗和移栽:取6?8cm高的生根苗，連培養(yǎng)瓶一起置于室溫下煉苗3 d后，打開瓶蓋，從培養(yǎng)基中取出幼苗，將幼苗上殘留培養(yǎng)基清洗干凈，放入濃度為0.1-0.2%的多菌靈溶液中消毒2?3 min后，移栽至消毒后的沙土基質中保溫保濕培養(yǎng)，生長30 d后，即得移栽苗。
【文檔編號】A01H4/00GK105961201SQ201610320663
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年5月16日
【發(fā)明人】黃衡宇, 李繼祥, 王元忠, 張, 李培源
【申請人】玉溪市六合農(nóng)業(yè)科技發(fā)展有限公司