一種提高煙草k326組培苗移栽成活率的煉苗過渡方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種提高煙草K326組培苗移栽成活率的煉苗過渡方法，屬于植物繁 育培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 煙草（AYcoiiaaa iaAac應)為前科（SoIanaceae)煙草屬（Nicotiana) -年生或多 年生的重要經(jīng)濟作物，煙草由于具有易于組織培養(yǎng)和轉(zhuǎn)化效率高等原因，成為當前植物基 因工程領(lǐng)域中重要的模式植物。煙草K326品種自1985年從美國引進我國云南，其優(yōu)點是 香氣品質(zhì)和香氣量上均優(yōu)于其它煙草品種，是我國目前推廣種植面積最大的品種，也被廣 泛用做植物基因功能驗證中的重要模式植物之一。
[0003] 煙草作為一種模式植物被廣泛地應用于外源基因功能驗證的試驗中，由于煙草在 進行外源基因功能驗證過程中，常常是利用葉盤法通過農(nóng)桿菌介導導入外源基因后誘導抗 性愈傷組織產(chǎn)生直至生出抗性小苗，這個過程一般都是在嚴格控溫抑菌的室內(nèi)組織瓶內(nèi)進 行，所以抗性煙草組培小苗從室內(nèi)無菌環(huán)境中移栽到室外并生長的過程中由于外界溫度、 濕度、病菌的種種因素的影響，組培小苗移栽后室外成活率很低，甚至一批移栽苗會全部死 亡，進而影響后續(xù)工作的順利進行。所以煙草轉(zhuǎn)基因組培苗室外煉苗過渡過程是植物基因 工程領(lǐng)域中基因功能驗證工作中的一個重要環(huán)節(jié)。
[0004] 目前，在進行煙草K326組培苗一般的室外煉苗過渡過程中，常常僅進行室內(nèi)的簡 單粗放的煉苗過程，以及僅僅用一定濃度的多菌靈等殺菌劑進行一定時間的殺菌處理，由 于在室內(nèi)煉苗階段組培小苗沒有經(jīng)過一個持續(xù)的、逐漸過渡的煉苗過程，或多菌靈等殺菌 劑對栽培土等外界環(huán)境中的病菌殺滅效果不徹底，或由于移栽過程操作不規(guī)劃以及后期煙 草組培苗剛剛移栽上盆后初期階段管理問題，所以以往的煙草轉(zhuǎn)基因組培苗在從組培室轉(zhuǎn) 移出后，進行煉苗過渡過程及移栽后，往往造成煙草小苗死亡率過高，成活率不超過70%，嚴 重的甚至整批苗移栽全部死亡。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為提高轉(zhuǎn)基因煙草組培苗移栽后在室外環(huán)境下的成活率，簡化煉苗過渡程序，降 低成本，本發(fā)明提供一種提高煙草K326組培苗移栽成活率的煉苗過渡方法。
[0006] 本發(fā)明通過下列技術(shù)方案完成：一種提高煙草K326組培苗移栽成活率的煉苗過 渡方法，其特征在于經(jīng)過下列各步驟： 步驟A，煉苗處理：將已生根2cm的煙草K326組培苗置于白天最高溫度不超過30°C、夜 晚最低溫度不低于l〇°C的室內(nèi)2天，然后將揭瓶口膜一半后，再在相同環(huán)境下放置2天，之 后完全揭開瓶口膜后在相同環(huán)境下再放置2天，對煙草K326組培苗進行選壯去弱； 步驟B，盆土消毒：用沸水澆灌盆土進行燙土消毒殺菌，自然降至室溫備用； 步驟C，組培苗消毒清洗：將步驟A煉苗處理后的煙草K326組培苗去除根部培養(yǎng)基，以 水沖洗2~3次后，再將煙草K326組培苗的植株全株浸泡在0. 3~0. 5%濃度的多菌靈液 中5~10分鐘進行消毒，然后用水將煙草K326組培苗沖洗2~3次以去除多菌靈； 步驟D，移栽上盆：將步驟C所得煙草K326組培苗移栽至步驟B中的盆土中； 步驟E，分株移栽：將步驟D移栽上盆后的煙草K326組培苗放置在室內(nèi)通風散光處，避 免極端溫度，保持土壤濕潤，生長5~6周，待煙草K326組培苗成活壯苗后，即進行分株移 栽至未經(jīng)消毒的盆土中，再在同樣的環(huán)境下成長4~5周，然后將盆土移置于室外樹蔭下或 遮陽處繼續(xù)生長3~4周，再將盆土移置于正常露天環(huán)境下，按常規(guī)進行澆水、施肥管理，即 完成煙草K326組培苗的煉苗過渡。
[0007] 所述步驟A的選壯去弱是剔除根系短甚至無根、葉片發(fā)黃、植株矮小的弱苗或畸 形苗。
[0008] 所述步驟B的燙土消毒殺菌是每次用足量沸水澆灌盆土，使沸水從盆土底部排水 孔流出，每個盆土燙土消毒殺菌2~3次，每次間隔不超過10分鐘。
[0009] 所述步驟B的盆土是腐植土與紅土按體積比為1:1的混合物。
[0010] 所述步驟C的去除根部培養(yǎng)基是將組培瓶口向下傾斜45度，將煉苗處理后的煙草 K326組培苗及培養(yǎng)基一同取出，再小心去除培養(yǎng)基，避免損傷弄斷煙草組培小苗根系。
[0011] 所述步驟D的移栽是先用干凈無菌的小竹片插入到濕潤的盆土中，挖出深5cm的 小坑，再將煙草K326組培苗的根部放入小坑中，用竹片輕輕壓實煙草K326組培苗的根部土 壤，移栽時的株距控制以30cm直徑的盆土中移栽4~5株煙草K326組培苗為宜。
[0012] 所述步驟E的盆土是腐植土與紅土按體積比為1:1的混合物。
[0013] 所述步驟E的盆土的直徑為30cm。
[0014] 本發(fā)明具有下列優(yōu)點和效果：本發(fā)明采用多段煉苗處理、盆土消毒、組培苗消毒清 洗、移栽上盆及分株移栽等步驟，通過各步驟的有效操作，能大大提高煙草轉(zhuǎn)基因組培小苗 室外移栽后的成活率，達96.7~100%。以沸水澆灌盆土消毒殺菌的方法，相比藥劑拌土 (或灌土）殺菌更為徹底，殺菌效果好，不僅可以殺滅盆土中的病原菌，還可殺死盆土中的害 蟲(卵)、雜草種子等。另外，沸水澆灌消毒相對高壓鍋蒸土消毒具有用時短、操作簡單、耗能 低，不會對滅菌鍋造成污染等優(yōu)點。后期移栽過程，先在已經(jīng)沸水消毒的盆土中多栽種幾棵 小苗，等移栽后的煙草小苗經(jīng)過緩苗、成活、壯苗后，再分株直接移栽到未經(jīng)消毒的盆土中， 這樣可減少沸水澆灌盆土消毒操作過程，降低工作量，節(jié)約時間和能耗，也節(jié)約了成本。通 過本發(fā)明可以縮短煉苗時間，在一周內(nèi)即可完成從煉苗、消毒到移栽上盆等過程。
【具體實施方式】
[0015] 為了更好地說明本發(fā)明，下面給出本發(fā)明的實施例，但本發(fā)明的內(nèi)容并不僅限于 此。
[0016] 實施例1 步驟A，煉苗處理：將在組培瓶內(nèi)已生根2cm的煙草K326組培苗從組培室內(nèi)置于白天 最高溫度不超過30°C、夜晚最低溫度不低于KTC的室內(nèi)2天，然后將組培瓶封口膜打開一 半，再在相同環(huán)境下放置2天，之后完全除去組培瓶的封口膜后在相同環(huán)境下再放置2天， 對煙草K326組培苗進行選壯去弱，剔除根系短甚至無根、葉片發(fā)黃、植株矮小的弱苗或畸 形苗； 步驟B，盆土消毒：每次用足量沸水澆灌盆土，使沸水從盆土底部排水孔流出，每個盆 土燙土消毒殺菌2次，每次間隔不超過10分鐘，自然降至室溫備用，其中盆土是腐植土與紅 土按體積比為1:1的混合物； 步驟C，組培苗消毒清洗：將組培瓶口向下傾斜45度，將步驟A煉苗處理后的煙草K326 組培苗及培養(yǎng)基一同取出，再小心去除培養(yǎng)基，避免損傷弄斷煙草組培小苗根系，以水沖洗 2次后，再將煙草K326組培苗的植株全株浸泡在0. 3%濃度的多菌靈液中5分鐘進行消毒， 然后用水將煙草K326組培苗沖洗2次以去除多菌靈； 步驟D，移栽上盆：將步驟C所得煙草K326組培苗移栽至步驟B中的盆土中，先用干凈 無菌的小竹片插入到濕潤的盆土中，挖出深5cm的小坑，再將煙草K326組培苗的根部放入 小坑中，用竹片輕輕壓實煙草K326組培苗的根部土壤，移栽時的株距控制以30cm直徑的盆 土中移栽4株煙草K326組培苗為宜； 步驟E，分株移栽：將步驟D移栽上盆后的煙草K326組培苗放置在室內(nèi)通風散光處，避 免極端溫度，保持土壤濕潤，生長5周，待煙草K326組培苗成活壯苗后，即進行分株移栽至 未經(jīng)消毒的直徑為30cm的盆土中，盆土是腐植土與紅土按體積比為1:1的混合物；再在同 樣的環(huán)境下成長4周，然后將盆土移置于室外遮陽處繼續(xù)生長3周，再將盆土移置于正常露 天環(huán)境下，按常規(guī)進行澆水、施肥管理，即完成煙草K326組培苗的煉苗過渡。
[0017] 實施例2 步驟A，煉苗處理：將在組培瓶內(nèi)已生根2cm的煙草K326組培苗從組培室內(nèi)置于白天 最高溫度不超過30°C、夜晚最低溫度不低于KTC的室內(nèi)2天，然后將組培瓶封口膜打開一 半，再在相同環(huán)境下放置2天，之后完全除去組培瓶的封口膜后在相同環(huán)境下再放置2天， 對煙草K326組培苗進行選壯去弱，剔除根系短甚至無根、葉片發(fā)黃、植株矮小的弱苗或畸 形苗； 步驟B，盆土消毒：每次用足量沸水澆灌盆土，使沸水從盆土底部排水孔流出，每個盆 土燙土消毒殺菌3次，每次間隔不超過10分鐘，自然降至室溫備用，