專利名稱：核糖核酸作為產(chǎn)品防偽標(biāo)記及驗(yàn)證的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是為一種標(biāo)記物品以達(dá)到防偽目的的方法，特別指一種利用核糖核酸作為產(chǎn)品防偽標(biāo)記及驗(yàn)證的方法，制作時(shí)將混有核糖核酸的介質(zhì)標(biāo)記于目標(biāo)物上，檢驗(yàn)時(shí)將介質(zhì)取下，使用溶劑將核糖核酸萃取回收，再以聚合酶連鎖反應(yīng)將核糖核酸信號(hào)放大檢驗(yàn)，根據(jù)結(jié)果以判別被標(biāo)記的目標(biāo)物的真?zhèn)涡浴?br> 在產(chǎn)品制造與行銷上經(jīng)常發(fā)生的問題之一就是產(chǎn)品仿冒及偽造的問題。仿冒及偽造品假借真品的外觀、品牌，利用真品的形象以達(dá)牟利的目的；因?yàn)榉旅捌芳皞卧炱吠ǔＶ皇峭庥^及品牌相似，但卻是以低省的材質(zhì)所制成；也有銷售近似真品品質(zhì)的偽造品，但因不須花費(fèi)廣告及行銷的成本，因而可以較低的價(jià)格奪取真品的市場(chǎng)。除此之外，凡具有高單價(jià)的物品，如名畫珠寶首飾及紀(jì)念品等，及具有金融功能及價(jià)值的物品，如信用卡、存折及有價(jià)證券等亦經(jīng)常面臨偽造仿冒的問題。諸如此類問題不但有價(jià)證券等經(jīng)常面臨偽造仿冒的物品，如信用卡、存折及有價(jià)證券等亦經(jīng)常面臨偽造仿冒的問題。諸如此類問題不但會(huì)破壞真品的商譽(yù)及影響真品的銷售，更有甚者會(huì)阻礙一個(gè)國(guó)家的金融秩序及發(fā)明創(chuàng)新的能力，所以如何打擊仿冒及偽造品，防止真品被仿造，實(shí)有其需求及必要性。現(xiàn)有防止偽造的方法除了以本身明顯特殊的造型及品質(zhì)搏取消費(fèi)者信任外，也有以外加的方式來達(dá)到防偽的目的，譬如存折上的磁性條碼，又如金融卡上的鐳射標(biāo)簽圖案，和在特殊波長(zhǎng)下才顯示的暗記等，也有以蛋白質(zhì)抗體熒光物質(zhì)等加諸于受保護(hù)的物體上，以特殊方式檢驗(yàn)以達(dá)驗(yàn)明正身的目的；諸如此類手段用意皆在建立一技術(shù)或方法的障礙使得制造仿冒品及偽造品者不易輕易模仿，已知的方法所提供的是技術(shù)屏障的保護(hù)，但此類保護(hù)仍可被具有相同技術(shù)能力者所輕易模仿。
故本發(fā)明的目的提供一種更具專一性，且無法被具有相同技術(shù)能力者所仿冒的防偽方法。
為此，本發(fā)明乃利用核糖核酸(ribonucleic acid RNA)具有序列專一性的特性，將核糖核酸與介持混和后，帶有核糖核酸的介質(zhì)可被涂布于易被防偽的目標(biāo)物上或滲于目標(biāo)物內(nèi)，再檢驗(yàn)?zāi)繕?biāo)物上帶有的核糖核酸，即可驗(yàn)明目標(biāo)物是否為當(dāng)初所標(biāo)記。
介質(zhì)具有的特性為能與核糖核酸充分混合，且不屬于目標(biāo)物的一部份，核糖核酸的組成經(jīng)過設(shè)計(jì)，可具有特定的長(zhǎng)度及序列，而且此序列只有在偵測(cè)時(shí)使用特定的聚合酶連鎖反應(yīng)引子才可偵測(cè)驗(yàn)證介質(zhì)帶有的核糖核酸真?zhèn)巍?br> 本發(fā)明的具體技術(shù)方案是一種核糖核酸作為產(chǎn)品防偽標(biāo)記及驗(yàn)證的方法，其特征是將核糖核酸保存于介質(zhì)中，將含有核糖核酸的介質(zhì)直接標(biāo)記于目標(biāo)物上或目標(biāo)物內(nèi)，或是將含有核糖核酸的介質(zhì)加于液體或固體中后再用于標(biāo)記；檢驗(yàn)時(shí)利用溶劑回收及聚合酶連鎖反應(yīng)放大核糖核酸的方式來達(dá)到認(rèn)證被標(biāo)記的目標(biāo)物的真?zhèn)巍?br> 本發(fā)明的特征還在于所述核糖核酸為去氧核糖核酸或核糖核酸。所稱的核糖核酸來自動(dòng)物、植物、細(xì)菌，病毒或由人工合成載體或片段。所述介質(zhì)是指惰性且不對(duì)目標(biāo)物發(fā)生交互作用的物質(zhì)。所述介質(zhì)是指可與核糖核酸混合的聚合物。所稱的聚合物為壓克力(acrylic丙烯酸塑料)或塑膠。所述液體或固體是指墨水、膠水或聚合物。所稱的墨水為油性或水性。所稱的粘著劑為油性或水性。所稱的聚合物為壓克力或塑膠。所述回收的方法是以有機(jī)溶劑或無機(jī)溶劑將核糖核酸萃取回收。所述有機(jī)溶劑為緩沖劑、甲苯、煤油、酒精、丙酮或氯仿。所述無機(jī)溶劑為水。所述緩沖劑為TE(Tris-EDTA)緩沖劑。所述聚合酶連鎖反應(yīng)放大核糖核酸的方法是為單次或多次(nested)聚合酶連鎖反應(yīng)。
操作時(shí)先將介質(zhì)溶于溶劑中，使介質(zhì)液化，再將定量且已知序列的核糖核酸加入介質(zhì)溶液中均勻混合，此時(shí)帶有核糖核酸的介質(zhì)溶液可用于涂布或填充目標(biāo)物；待溶劑蒸發(fā)后目標(biāo)物即帶有混著核糖核酸的介質(zhì)，一旦要驗(yàn)證物體是否為帶有特定核糖核酸序列的目標(biāo)物時(shí)，可將目標(biāo)物上的介質(zhì)取一小部份溶于溶劑中，再加入另一具高核糖核酸溶解度但不影響目標(biāo)物的溶劑使之充分混合，此時(shí)大部份核糖核酸會(huì)溶于高核糖核酸溶解度的溶劑內(nèi)，再使用離心的方法將不同溶劑分層分離取出，此時(shí)經(jīng)萃取出的核糖核酸濃度已足夠以聚合酶連鎖反應(yīng)的特定引子來驗(yàn)證核糖核酸的真?zhèn)?；藉此，若受檢的目標(biāo)物帶有原始放入的核糖核酸，則聚合酶連鎖反應(yīng)會(huì)將原始放入的核糖核酸放大成為數(shù)百萬倍大小相同的核糖核酸，反之受檢物若不帶有原始的核糖核酸，則聚合酶連鎖反應(yīng)無法進(jìn)行核糖核酸的放大反應(yīng)，故由產(chǎn)物大小及數(shù)量的比對(duì)就可辨別要辨識(shí)的目標(biāo)物是否為當(dāng)初所標(biāo)示。
因?yàn)楹颂呛怂嵝蛄芯哂袑Ｒ恍?，在進(jìn)行聚合酶連鎖反應(yīng)驗(yàn)證時(shí)，只有以專一的引子進(jìn)行反應(yīng)才能得到正確的核酸大小，又因?yàn)榛烊虢橘|(zhì)的核糖核酸濃度極低，無法以基因轉(zhuǎn)殖的方式得知放入核酸的序列及尺寸大小，故而保密性及專一性都極高。
下面進(jìn)一步詳細(xì)闡述本發(fā)明。
本發(fā)明乃利用核糖核酸所具有的序列特性，除非知道序列兩端內(nèi)容否則無法復(fù)制的原理，其是將核糖核酸保存于介質(zhì)中，再將介質(zhì)標(biāo)記于目標(biāo)物上當(dāng)作身份記號(hào)。在某一時(shí)間想要驗(yàn)證目標(biāo)物的真?zhèn)螘r(shí)，只需將介質(zhì)取下檢驗(yàn)內(nèi)含的核糖核酸即可判別目標(biāo)物的真?zhèn)巍?br> 所謂核糖核酸乃是去氧核糖核酸與核糖核酸的通稱，核糖核酸的來源可以來自動(dòng)物、植物、細(xì)菌、病毒等有機(jī)生物，但也可以人工合成載體或是片段的核糖核酸，核糖核酸的特性在于它所具有的特殊序列可以使用對(duì)應(yīng)的引子，以聚合酶連鎖反應(yīng)來加以復(fù)制，但先決條件是必須知道所要復(fù)制核酸片段兩端的序列才能設(shè)計(jì)適當(dāng)?shù)囊觼磉M(jìn)行復(fù)制反應(yīng)。
所謂的介質(zhì)就是用來包含核糖核酸并用來附著或混合于其他物體的中介物質(zhì)，好的介質(zhì)必須要能與核糖核酸均勻的混合，且要能遮護(hù)核糖核酸不受破壞，介質(zhì)也要能具可塑性及適當(dāng)?shù)膹?qiáng)度并能容易的附著于被標(biāo)記的物體上。
所謂目標(biāo)物就是被標(biāo)記防偽的物品，可以是液體或是固體；液體者如潤(rùn)滑油、汽油等油品；固體者如古董、名畫、珠寶首飾、金融信用卡等具有紀(jì)念或有實(shí)際價(jià)值的物品，都可以是目標(biāo)物。
標(biāo)記的方法可以是將介質(zhì)涂布于目標(biāo)物的表面，例如信用卡，可以是混合于物體內(nèi)，例如水墨油畫，可以是填充于物體內(nèi)，例如印章等，可因?qū)嶋H需要加以設(shè)計(jì)。
以下就本發(fā)明的實(shí)施例加以說明。


圖1顯示以聚碳酸酯介質(zhì)，將800bp去氧核糖核酸標(biāo)記于塑膠膜上，經(jīng)回收后以聚合酶連鎖反應(yīng)將信號(hào)放大再經(jīng)電泳分離后染色得到800bp去氧核糖核酸的實(shí)施例。
圖2顯示以聚碳酸酯為介質(zhì)，將人類去氧核糖核酸基因組標(biāo)記于塑膠膜上，經(jīng)回收后以聚合酶連鎖反應(yīng)將信號(hào)放大再經(jīng)電泳分離后染色得到600bp去氧核糖核酸的實(shí)施例。
實(shí)施例1以聚碳酸酯為介質(zhì)將800bp去氧核糖核酸標(biāo)記于塑膠膜上。
材料聚碳酸酯臺(tái)灣杜邦polycarbonate95％酒精，中華藥典丙酮 臺(tái)灣默克UN1090氯仿 臺(tái)灣默克UN1888將聚合酶連鎖反應(yīng)所合成的800bp的去氧核糖核酸以酒精加丙酮溶解之，再與溶于氯仿的聚碳酸酯充分混合后涂抹于塑膠膜上。干燥后放置于40℃冰箱、陰暗處、或曝曬于陽光下一天后進(jìn)行回收?；厥諘r(shí)剪下少量的膜片，以氯仿溶解之，再以緩沖液充分混合并離心后取得澄清液。取少量澄清液做為模板進(jìn)行聚合酶連鎖反應(yīng)。聚合酶連鎖反應(yīng)的產(chǎn)物再經(jīng)電泳分離后染色之。請(qǐng)參閱
圖1，顯示以聚碳酸酯為介質(zhì)，800bp去氧核糖核酸為標(biāo)記的實(shí)施例。由左至右L1為100bp去氧核糖核酸標(biāo)準(zhǔn)，L2為陰暗處理，L3、L4及L5為曝曬于陽光下處理，L6、L7及L8為40℃冰箱處理。結(jié)果顯示所有處理皆如所預(yù)期的結(jié)果順利回收800bp去氧核糖核酸。
實(shí)施例2以聚碳酸酯為介質(zhì)將人類去氧核糖核酸基因組標(biāo)記于塑膠膜上。
材料聚碳酸酯臺(tái)灣杜邦polycarbonate95％酒精，中華藥典丙酮 臺(tái)灣默克UN1090氯仿 臺(tái)灣默克UN1888將從人類白血球抽取的去氧核糖核酸基因組以酒精加丙酮溶解之，再與溶于氯仿的聚碳酸酯充分混合后涂抹于塑膠膜上。干燥后放置于40℃冰箱、陰暗處、或曝曬于陽光下一天后進(jìn)行回收?；厥諘r(shí)剪下少量的膜片，以氯仿溶解之，再以緩沖液充分混合并離心后取得澄清液。取少量澄清液做為模板進(jìn)行聚合酶連鎖反應(yīng)。聚合酶連鎖反應(yīng)的產(chǎn)生物再經(jīng)電泳分離后染色之。請(qǐng)參閱圖2，顯示以聚碳酸酯為介質(zhì)，人類基因組去氧核糖核酸為標(biāo)記的實(shí)施例。由左至右L1為100bp去氧核糖核酸標(biāo)準(zhǔn)，L2及L3為L(zhǎng)μl澄清液做為模板的結(jié)果，L4及L5為2μl為澄清液做為模板的結(jié)果，L6為沒加模板的負(fù)控制組，L7為人類基因組去氧核糖核酸的正控制組。結(jié)果顯示除了L3較不明顯外，所有處理皆如所預(yù)期順利回收600bp人類基因。
權(quán)利要求
1.一種核糖核酸作為產(chǎn)品防偽標(biāo)記及驗(yàn)證的方法，其特征是將核糖核酸保存于介質(zhì)中，將含有核糖核酸的介質(zhì)直接標(biāo)記于目標(biāo)物上或目標(biāo)物內(nèi)，或是將含有核糖核酸的介質(zhì)加于液體或固體中后再用于標(biāo)記；檢驗(yàn)時(shí)利用溶劑回收及聚合酶連鎖反應(yīng)放大核糖核酸的方式來達(dá)到認(rèn)證被標(biāo)記的目標(biāo)物的真?zhèn)巍?br> 2.如權(quán)利要求1所述的核糖核酸作為產(chǎn)品防偽標(biāo)記及驗(yàn)證的方法，其特征是所述核糖核酸為去氧核糖核酸或核糖核酸。
3.如權(quán)利要求1所述的核糖核酸作為產(chǎn)品防偽標(biāo)記及驗(yàn)證的方法，其特征是所稱的核糖核酸來自動(dòng)物、植物、細(xì)菌，病毒或由人工合成載體或片段。
4.如權(quán)利要求1所述的核糖核酸作為產(chǎn)品防偽標(biāo)記及驗(yàn)證的方法，其特征是所述介質(zhì)是指惰性且不對(duì)目標(biāo)物發(fā)生交互作用的物質(zhì)。
5.如權(quán)利要求1所述的核糖核酸作為產(chǎn)品防偽標(biāo)記及驗(yàn)證的方法，其特征是所述介質(zhì)是指可與核糖核酸混合的聚合物。
6.如權(quán)利要求5所述的核糖核酸作為產(chǎn)品防偽標(biāo)記及驗(yàn)證的方法，其特征是所稱的聚合物為壓克力或塑膠。
7.如權(quán)利要求1所述的核糖核酸作為產(chǎn)品防偽標(biāo)記及驗(yàn)證的方法，其特征是所述液體或固體是指墨水、膠水或聚合物。
8.如權(quán)利要求7所述的核糖核酸作為產(chǎn)品防偽標(biāo)記及驗(yàn)證的方法，其特征是所稱的墨水為油性或水性。
9.如權(quán)利要求7所述的核糖核酸作為產(chǎn)品防偽標(biāo)記及驗(yàn)證的方法，其特征是所稱的粘著劑為油性或水性。
10.如權(quán)利要求7所述的核糖核酸作為產(chǎn)品防偽標(biāo)記及驗(yàn)證的方法，其特征是所稱的聚合物為壓克力或塑膠。
11.如權(quán)利要求1所述的核糖核酸作為產(chǎn)品防偽標(biāo)記及驗(yàn)證的方法，其特征是所述回收的方法是以有機(jī)溶劑或無機(jī)溶劑將核糖核酸萃取回收。
12.如權(quán)利要求11所述的核糖核酸作為產(chǎn)品防偽標(biāo)記及驗(yàn)證的方法，其特征是所述有機(jī)溶劑為緩沖劑、甲苯、煤油、酒精、丙酮或氯仿。
13.如權(quán)利要求11所述的核糖核酸作為產(chǎn)品防偽標(biāo)記及驗(yàn)證的方法，其特征是所述無機(jī)溶劑為水。
14.如權(quán)利要求12所述的核糖核酸作為產(chǎn)品防偽標(biāo)記及驗(yàn)證的方法，其特征是所述緩沖劑為Tris-EDTA緩沖劑。
15.如權(quán)利要求1所述的核糖核酸作為產(chǎn)品防偽標(biāo)記及驗(yàn)證的方法，其特征是所述聚合酶連鎖反應(yīng)放大核糖核酸的方法是為單次或多次聚合酶連鎖反應(yīng)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種標(biāo)記物品以達(dá)到防偽目的的方法,特別指一種利用核糖核酸作為產(chǎn)品防偽標(biāo)記及驗(yàn)證的方法,制作時(shí)將混有核糖核酸的介質(zhì)標(biāo)記于目標(biāo)物上,檢驗(yàn)時(shí)將介質(zhì)取下,使用溶劑將核糖核酸萃取回收,再以聚合酶連鎖反應(yīng)將核糖核酸信號(hào)放大檢驗(yàn),根據(jù)結(jié)果以判別被標(biāo)記的目標(biāo)物的真?zhèn)涡?。本發(fā)明由此而提供了一種更具專一性,且無法被具有相同技術(shù)能力者所仿冒的防偽方法。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK1324955SQ00107580
公開日2001年12月5日 申請(qǐng)日期2000年5月18日 優(yōu)先權(quán)日2000年5月18日
發(fā)明者許俊杰, 陳苓苓, 陳素秋, 梁明華 申請(qǐng)人:博微生物科技股份有限公司