專利名稱：一種t－淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種生物試劑類，特別是一種淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液。
現(xiàn)有的T—淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液，在進(jìn)行細(xì)胞檢測分析時，用血量較大，而且試劑穩(wěn)定性、細(xì)胞培養(yǎng)效果等方面都存在不足，而且檢測操作繁瑣。
本發(fā)明的培養(yǎng)液克服了現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供了一種穩(wěn)定性高、培養(yǎng)效果好，特別是用血量少、使用方便的培養(yǎng)液。
本發(fā)明培養(yǎng)液的組成成分及配制1000克培養(yǎng)液的用量為N—(2—羥乙基)哌嗪—N’—2—乙烷磺酸(Hepes) 3—6g碳酸氫鈉1—3gRPMI 1640培養(yǎng)基(以干粉量計) 5—10gL—谷氨酰胺(LG) 0．1—0．3g肝素鈉(150u／mg)0．1—0．3g植物血凝素(PHA) 5—20 mg胎牛血清100—300 ml青霉素(80萬u／2ml 0．1—0．5ml鏈霉素(100萬u／2ml) 0．1—0．5ml余量用蒸餾水補(bǔ)齊。
本發(fā)明的培養(yǎng)液是通過如下方法及步驟制備而成的(1)將Hepes、碳酸氫鈉和RPMI 1640培養(yǎng)基三種試劑按計量置于容器中，向容器中加入約300毫升蒸餾水，于37℃下混合溶解，再加入剩余量的蒸餾水，混合均勻后待用；(2)取密封在容器中的胎牛血清或?qū)⑻ヅＱ逯糜谌萜髦?，?6℃水浴箱內(nèi)30分鐘滅活，冷卻至室溫后加入到(1)步驟制得的水溶液中；(3)將L—谷氨酰胺、肝素鈉、植物血凝素、青霉素和鏈霉素，加入到(2)步驟的溶液中，充分混勻，直至全部溶解，其PH值為6．5—7．5；(4)將上述溶液用濾菌器過濾，即得本發(fā)明的培養(yǎng)液。
將培養(yǎng)液分裝、密封后，于—18℃以下冰凍保存。培養(yǎng)液于37℃孵箱內(nèi)孵育一周無細(xì)菌生長，則為合格。
本發(fā)明培養(yǎng)液制備過程中的濾菌器過濾采用濾膜過濾。
本發(fā)明培養(yǎng)液的制備過程中，所使用的器皿及其它用具全部需要消毒滅菌處理，而且所有操作均應(yīng)符合無菌操作，消毒滅菌方法和無菌操作方法均屬于本領(lǐng)域的公知技術(shù)。
本發(fā)明培養(yǎng)液的制備過程中，玻璃瓶、膠塞的消毒滅菌處理，可采用如下方法，但不僅限于如下方法玻璃瓶(1)用洗滌靈液徹底刷洗玻璃瓶內(nèi)外，然后用流水沖凈；(2)將洗好的玻璃瓶浸泡在1—1．5％HCl中24小時，再用流水徹底沖洗至中性，使玻璃瓶內(nèi)外均無酸液殘留；(3)將上述玻璃瓶置于潔凈容器內(nèi)用蒸餾水沖洗，取出后烘干，瓶口向上放置待用；(4)使用前經(jīng)過9．08kg壓力30分鐘濕熱滅菌，再烘干備用。膠塞將膠塞用蒸餾水煮沸十分鐘后加洗滌靈清洗，然后用水沖凈，再用蒸餾水洗后晾干，使用前經(jīng)過9．08kg壓力30分鐘濕熱滅菌。與現(xiàn)有技術(shù)的培養(yǎng)液相比，本發(fā)明的培養(yǎng)液具有以下優(yōu)點(diǎn)1、培養(yǎng)液的穩(wěn)定性強(qiáng)，保質(zhì)期長達(dá)6個月，而現(xiàn)有技術(shù)的培養(yǎng)液一般只能存儲1個月左右；2、本發(fā)明培養(yǎng)液活性較高，可以特異性地刺激T—淋巴細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)化，使T—淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率達(dá)到80％以上，同時能抑制其它細(xì)胞的增殖；3、使用胎牛血清，提高了培養(yǎng)液的營養(yǎng)成分；4、用血量少，僅需要0．5毫升左右的血量，而現(xiàn)有技術(shù)需要約10毫升左右的血；5、本發(fā)明培養(yǎng)液可以直接用于檢測分析，減少了使用之前按比例現(xiàn)配或現(xiàn)混的繁瑣操作。
下面結(jié)合實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明按上述制備方法和步驟制備一種T—淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液，該培養(yǎng)液的組成成分及配制1000克培養(yǎng)液的用量為Hepes 4．76g碳酸氫鈉 1．6gRPMI 1640培養(yǎng)基8．32gL—谷氨酰胺(LG)0．3g
肝素鈉(150u／mg) 0．1g美國sigma生產(chǎn)的PHA—P 10mg青霉素(80萬u／2ml)0．35ml鏈霉素(100萬u／2ml) 0．3ml胎牛血清 200ml量用蒸餾水補(bǔ)齊。
該培養(yǎng)液的PH值為7．0—7．2。
權(quán)利要求
1．一種T—淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液，其特征在于其組成成分及配制1000克培養(yǎng)液的用量為N—(2—羥乙基)哌嗪—N’—2—乙烷磺酸3—6g碳酸氫鈉1—3gRPMI 1640培養(yǎng)基 5—10gL—谷氨酰胺(LG) 0．1—0．3g肝素鈉(150u／mg)0．1—0．3g植物血凝素(PHA) 5—20 mg胎牛血清100—300 ml青霉素(80萬u／2ml) 0．1—0．5ml鏈霉素(100萬u／2m) 0．1—0．5ml余量用蒸餾水補(bǔ)齊；培養(yǎng)液的PH值為6．5—7．5。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種T－淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液,其是由Hepes、NaHCO
文檔編號C12N5/00GK1280194SQ0010966
公開日2001年1月17日 申請日期2000年6月21日 優(yōu)先權(quán)日2000年6月21日
發(fā)明者張國慶 申請人:張國慶