專利名稱：培養(yǎng)來自人體組織的癌細胞的方法和制備組織樣品的裝置的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種培養(yǎng)來自人體組織的癌細胞用于自然科學，優(yōu)選分子生物學和細胞生物學系列研究的方法以及實施此方法的細胞培養(yǎng)基和制備組織樣品的裝置。
對于分子生物學研究，特別是帶有預言性意義的研究來說，培養(yǎng)由細針和鉆孔活檢獲得的初級細胞材料具有重要意義。但是，在已知的方法中，由人體組織分離出的細胞的增裂率(“Angehrate”)很低。目前，對于有些種類的腫瘤還未實現(xiàn)細胞培養(yǎng)。其問題在于，腫瘤組織周圍的正常細胞和/或浸潤腫瘤組織的結締組織細胞首先增長，因此，生長優(yōu)于待研究的腫瘤細胞，且阻止其生長。此外，卓有成效地培養(yǎng)癌細胞會受到各種各樣的污染物，特別是細菌或真菌的抑制。
目前增養(yǎng)癌細胞使用的細胞培養(yǎng)基，如RPMI 1640，Basal MediumEagle，ISCOVE’s，Medium 199，Leibovitz L-15等，不能充分地促進癌細胞生長同時防止正常細胞和細菌的污染。目前通常不加控制地使用抗生素雖然對污染的負面影響有反作用，但同時也妨礙了腫瘤細胞的生長。
在已知的增養(yǎng)癌細胞的方法中，由細針或鉆孔活檢獲得的組織樣品的制備是通過機械-酶組織-解聚作用進行的，這里，異質的由不同層組成的形成組織樣品的鉆孔柱在精細切碎后作為整體分散到糊狀物料中，借助于酶而轉變成單個細胞。但是，通過精細切碎，取來的組織樣品的異質結構遭到破壞，造成腫瘤細胞與正常細胞和污染物的強烈混合。一方面，精細磨碎損害了腫瘤細胞存活力。另一方面，通過破壞了組織樣品的非均勻性，樣品材料糊與正常細胞和污染物混合，以致于腫瘤細胞的生長基于上述原因而減少或甚至于完全受到抑止。在這種整體材料的機械-酶組織-解聚作用下，不可能表述腫瘤的結構。
目前已知的繁殖和提純由組織樣品獲得的腫瘤材料的方法中，細胞繁殖通過將腫瘤材料移殖到裸鼠身上進行(異種移植)。雖然這種方法實現(xiàn)了50％，偶爾還會更多的移植腫瘤組織的增裂率，但是(取決于腫瘤種類和特性)細胞在體內繁殖需要數(shù)周，甚至數(shù)月?；诖罅肯暮蜁r間，目前為了病程檢查和預言目的用病人個體的原初細胞進行的常規(guī)試驗還未開始應用于臨床。由于培養(yǎng)取自病人的組織材料的實驗費時并經常是徒勞的，檢測結果太遲，以致于不能按常規(guī)方法從試驗結果出發(fā)及時改變治療方案。除了大量耗時外，必需進行的動物實驗和高額的成本費用也是缺陷。
這里，本發(fā)明的主題是，說明一種不依賴于實驗動物的培養(yǎng)來自人體組織樣品的癌細胞的方法，保證在相對較短的少數(shù)幾天時間內安全繁殖來自組織樣品的腫瘤細胞，可重復性表述腫瘤結構和惡性以及生長和結構變化或治療效果。本發(fā)明的另一目的在于提供基于此方法的用于可重復性制備組織樣品以及體外繁殖癌細胞的合適的培養(yǎng)基的裝置。
根據(jù)本發(fā)明，此主題用按照權利要求書1的特征的培養(yǎng)癌細胞的方法來解決。
本發(fā)明的基本思想在于，在順序-平行的切割過程中，將組織樣品分割成許多獨立的組織裂片，以此局部分離基于污染物，正常細胞和腫瘤細胞異質的組織樣品或其異質性。然后，組織裂片各自獨立地進一步切碎，這樣形成的小的、分開的組織片斷和組織液以及在組織樣品的順序-平行分裂過程中形成的、同樣各自獨立獲得的組織液在特定的細胞培養(yǎng)基中，在選定的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)。通過局部分離組織樣品，已有的在通常(機械或酶)制備組織樣品過程中優(yōu)于腫瘤細胞生長的正常細胞的影響得到消除或抑制。同樣，污染物，如真菌或細菌的數(shù)量大大減少，且眾所周知妨礙腫瘤細胞繁殖的抗生素可以節(jié)省或針對性使用，不會對癌細胞培養(yǎng)起負作用。
提出的方法在本發(fā)明的其它內容中通過適合很小量組織以 8給出的組成的細胞培養(yǎng)基以及通過關于氧和二氧化碳氣氛，空氣濕度和溫度以及使用生物基質的權利要求5所述的培養(yǎng)條件有利加以補充。由此總體上實現(xiàn)促進癌細胞生長的條件，這些條件基本上限制了正常細胞和污染物或甚至完全消除。
其它有利的工藝特征來自從屬權利要求。這方面例如發(fā)現(xiàn)，在直接來源于病人組織樣品的取樣點的紅細胞存在下，腫瘤細胞特別快地生長，具有比只是放入純細胞培養(yǎng)基進行生長的細胞更高的。此外，當組織樣品在細胞培養(yǎng)基中在約4℃至12℃下保存至少2小時，但不長于24小時，以適應接下來應完成癌細胞繁殖的細胞培養(yǎng)基，已經證明這是有利的。在上述工藝條件下，如果設定與組織取樣方式一致的培養(yǎng)溫度，在1至12小時后就顯示出來自制備的組織片斷的腫瘤細胞在細胞培養(yǎng)瓶中的生物基質上的粘附。
借助此和其它下面在實施方案中詳細描述的發(fā)明，給出了體外腫瘤細胞繁殖的方法，由此實現(xiàn)在相對較短時間內對于各種腫瘤細胞以100％增裂率培養(yǎng)由人體組織獲得的細胞。與在裸鼠(異種移植)上實現(xiàn)約50％增裂率的細胞繁殖相比，不僅避免了動物試驗，節(jié)省了成本，還明顯縮短了繁殖細胞材料需要的時間，與體內腫瘤生長期為幾周或甚至幾個月相比，這里本發(fā)明提出的方法一般只為1-10天。
由此首次可能以簡單和重復性的方式快速和低成本地進行常規(guī)研究以實行癌癥病程的檢查和用于預后目的(對輻射，化學療法，體溫療法的敏感性試驗)或鑒別對新抗癌活性物質的抗性之早期檢測，作為對細胞學或組織病理學的組織鑒定的補充，及用于基礎研究。
根據(jù)本發(fā)明的另一個特征，提供了用于制備本發(fā)明局部分離的組織樣品的權利要求9特征的裝置作為有效細胞繁殖的前提條件。這個裝置一方面包括用于順序-平行分離組織樣品的切割設備，另一方面包括用于進一步加工由切割設備制備的組織裂片的切碎儀器。在這些設備中進行的切割過程中，取自異質組織樣品的不同位置的各個組織片斷和組織液在裝置中彼此保持分開，由此它們可選擇性用于細胞繁殖。
切割設備一般包括一個上面活動安裝切割板的劃分為小室的接收盤以及一個切割刀具架。在切割板里以預先確定間隔構成的切割槽，其在切割范圍內向接收盤開放，各自位于小室的上方。切割刀具架中，切割刀具或切割金屬絲以與切割槽間隔相一致的間隔安裝。通過各自在切割槽范圍內切割位于切割板上的組織樣品，實現(xiàn)了整齊割下組織裂片，同時剩余片斷和組織液到達切割槽下方的小室。
另一種制備組織裂片的工藝中提供切碎儀器，其包括一個劃分為小室的液體接收盤，一個在其上可拆卸地固定的帶有用以容納組織裂片的凹槽的加工板，單獨或在一個支撐板上可旋轉并可縱向活動性安裝的正面固定有刀的旋轉立柱。用此儀器產生了最后用于細胞繁殖的小組織片斷。同樣可使用的在切割過程中形成的組織液經在凹槽中形成的孔洞到達液體接收盤中各自下方的小室中，同樣用于細胞繁殖。
本發(fā)明裝置的其它特征和有利的其它構成由從屬權利要求給出。
本發(fā)明的實施方案在下面加以描述，這里關于體外細胞繁殖請參考附表，其中給出了所用細胞培養(yǎng)基的組成，而關于組織樣品的加工請參考附圖。圖中表示


圖1用以按本發(fā)明順序-平行制備組織樣品的切割裝置的分拆透視圖；圖2用以進一步制備在按
圖1的裝置中制備的用于體外細胞繁殖的組織裂片的裝置的分拆透視圖；圖3沿
圖1中B-B線方向的接收盤的剖面圖；圖4沿
圖1中A-A線方向在切割槽范圍內通過切割板的垂直切割面；和圖5裝配狀態(tài)下，按圖2的裝置的橫截面圖。
從病人以細針或鉆孔活檢形式取得的組織樣品以組織鉆孔柱形式存在，但是也可以是按其它方法獲得的小組織片斷或不同形狀和大小的組織片斷。帶有粘附的來自病人的取樣點的紅細胞的組織樣品為運輸?shù)窖芯康攸c而保存在細胞培養(yǎng)基中，溫度為2℃-12℃，時間雖然至少2小時，但最長為24小時。在這段時間內，避免組織片斷遭受機械負荷。這里，組織片斷已經能適應接下來用于細胞繁殖的同樣組成的細胞培養(yǎng)基，其中上述溫度特別有利。
用于細胞培養(yǎng)的組織樣品的加工用圖中所表示的裝置完成。
用于順序-平行地將組織樣品分解為一定的，預先給定長度的段，并用于分離這些段或其組分的裝置包括接收盤1，保持在接收盤1上的切割板2和切割刀具架3。切割板2劃分為同樣寬度的5段。在每一段內有分別以不同間隔設置的切割槽4，它們在其中間范圍內向接收盤1開放。切割槽4在5段內分別設置間距為1mm，2mm，3mm，5mm和1mm。在切割板的長度方向，其中間區(qū)域內形成銼紋的支撐面5，以固定切割過程中放在其上的組織樣品6。在此范圍內，切割槽4向下開放。切割板2可移動地保持在2個在接收盤1長度側面上安裝的導軌7中。切割板2的切割槽4在導軌中的凹口8中連續(xù)。
接收盤1相應于切割板2中安裝的槽段通過隔板12劃分為5個小室1a-1e，其中切割槽通過在相關小室1a，1b，1c和1e中的其它中間隔板分別布置有次級小室1a1至1a9，1b1至1b4，1c1至1c3和1e1至1e9。次級小室為了確切地局部布置各個組織樣品裂片6a或組織樣品殘余或組織液而相應不同地加以標記。
切割刀具架3包括蓋板上固定有切割刀具10的蓋或支撐架。不用切割刀具10還可以在框架側面張緊切割金屬絲。切割刀具10按與切割板中切割槽4同樣的間距安裝。切割刀具架3這樣計算尺寸安裝，或切割刀具10這樣安裝，以便切割元件可在切割槽4和凹口8上方或內部移來移去。切割刀具架3可以在接收盤1的長度側面曲柄狀固定，而且這樣使得它能在切割板2上存在的但與組織樣品交叉的位置移動，以便在切割位置整齊切開樣品。
根據(jù)組織樣品的長度和希望的切割間距，組織樣品6放在切割板2的銼紋支撐面5上。通過在組織樣品上放置(翻轉)的切割刀具架3的來回移動，制品在切割槽4范圍內切開。切割過程形成的液體經過在切割板2的支撐面5范圍內在切割槽4中設置的孔洞4a，流入各自下方的次級小室。收集的液體如同分開的樣品裂片一樣可用于細胞繁殖，或者留在切割板2上，或通過切割槽4中的孔洞4a落入下方的次級小室。
用
圖1，3和4表示的裝置，可以重復性按預先給定的尺寸精確，均勻以及光滑地切割而不損壞樣品材料。借此，從相應于由病人取來的組織片斷的異質性通過分裂而局部分離的組織樣品來完成細胞繁殖。由此，正常細胞和污染物對腫瘤細胞生長(篩選)的妨礙作用得以抑制或消除。此外，在組織樣品切割過程中局部分離形成的組織液，其含有重要的干細胞，也可以用于細胞繁殖。作為在下面描述的進一步制備組織樣品的過程之后體外細胞繁殖的結果，可表述異質形成的組織樣品的結構，腫瘤核的排列或惡性。最后，以各個局部分離的樣品裂片的制備也是可重復的，以便可以可靠表述病變的進程或治療措施的效果。
在上述切割裝置的各種實施方案中，組織樣品的切割也可以用獨立的刀具立柱(未示出)來完成，其上以與切割槽4之間一致的間距安裝切割刀具或切割金屬絲。
圖2和圖5中示出了一種用于進一步制備局部分離提供的樣品裂片6a或殘余片斷的裝置。在此裝置中，液體接收盤13通過垂直隔板11劃分為多個小室13a至13e。在兩個于液體接收盤13的上邊緣上安裝的導軌14中支撐著一個在其中以一定間隔成型的凹槽16的加工板15。凹槽16在底部有小孔17。在加工板15完全插入導軌14中的位置，凹槽16分別位于小室13a-13e的上方。事先分開的組織樣品6的樣品裂片6a放入凹槽16，用在旋轉立柱18上固定的旋轉立柱刀具19進一步切碎。優(yōu)選在旋轉立柱的正面安裝2個或多個旋轉立柱刀具19。樣品裂片6a的切碎在輕壓下，還可能同時伴隨著旋轉立柱18的來回旋轉來完成。
如圖2所示，支撐板20中也可以有多個旋轉立柱18保持可旋轉移動和可升降。旋轉立柱18之間的間距相應于加工板15中凹槽16的間距。
樣品裂片6a經過進一步切分過程后，其切分片斷(組織片斷)和在分開過程中形成的組織液，它經過凹槽16中的孔洞17到達小室13a至13e，用于細胞繁殖。
圖1至5所表示的用于局部分離的順序-平行的切割和進一步制備組織樣品的裝置由耐熱達121℃、適于高壓釜中處理的材料，優(yōu)選聚四氟乙烯，金屬或塑料構成。對于切割刀具優(yōu)選使用玻璃。
局部分離制備的樣品裂片6a的各個切分片斷和各自的組織液獨立地引入充滿細胞培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)瓶中，所述細胞培養(yǎng)基與貯存取自患者的樣品組織6之培養(yǎng)基相同。在取樣后保存組織樣品的剩余細胞培養(yǎng)基同樣裝入細胞培養(yǎng)瓶。細胞培養(yǎng)瓶各自用生物基質(這里為膠原或多聚賴氨酸)涂覆。這里用于體外細胞繁殖的細胞培養(yǎng)基的組成在下表中給出無機鹽Ca(NO3)250mg/LCaCl2·2H2O 132mg/LKcl400mg/LMgSO4·7H2O 150mg/LNaCl 6400mg/LNaHCO32100mg/LNa2HPO4400mg/L氨基酸L-精氨酸·4HCl 110mg/LL-天冬酰胺(自由堿) 38mg/LL-天冬氨酸 23mg/LL-胱氨酸 31mg/LL-谷氨酸 25mg/LL-谷氨酰胺 296mg/L甘氨酸 13mg/LL-組氨酸(自由堿) 12mg/LL-羥脯氨酸 10mg/LL-異亮氨酸 38mg/LL-亮氨酸 38mg/LL-賴氨酸·HCl 35mg/LL-甲硫氨酸 12mg/LL-苯丙氨酸 16mg/LL-脯氨酸 22mg/LL-絲氨酸 26mg/LL-蘇氨酸 22mg/LL-色氨酸 5mg/L
L-酪氨酸19mg/LL-纈氨酸22mg/LL-丙氨酸10mg/L維生素生物素 0,6mg/LD-泛酸鈣0,7mg/L鹽酸膽堿3,5mg/L葉酸1,0mg/Li-肌醇 35,9mg/L煙酰胺 1,0mg/L吡哆醛·HCl 1,0mg/L核黃素 20μg/L硫胺素·HCl 1,0mg/L對氨基苯甲酸500μg/L維生素B125μg/L煙酸25μg/L抗壞血酸50μg/L甲酰四氫葉酸6μg/L脂酮酸 21μg/L維生素A(醋酸鹽) 100μg/L吡哆素·HCl 25μg/L煙酰胺 25μg/Lα-維生素E磷酸酯10μg/L其它組分D-葡萄糖1750mg/L酚紅7mg/L谷胱甘肽(還原型)0,5mg/L
丙酮酸鈉1mM表皮生長因子(表皮生長因子，EGF重組體) 250ng/L胎牛血清(FBS) 12,5％牛胰島素(凍干) 8mg/L(26U/mg)根據(jù)技術狀況使用抗生素。
然后，用生物基質涂覆的含有本發(fā)明的細胞培養(yǎng)基和其中已有的按前面所述制備方法制備的小組織片斷或組織液的細胞培養(yǎng)瓶放入恒溫箱，那里在溫度為30℃-36.5℃，含氧氣0.01-3％，含二氧化碳0.1-5％，空氣濕度為100％條件下保存。準確的溫度取決于取組織樣品時測得的溫度。
至早在1-12小時后，腫瘤細胞粘附到細胞培養(yǎng)瓶中的生物基質基體上。在培養(yǎng)物初次建立后約24小時，進行細胞粘附之后，將細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基用同第一次具有相同組成的新鮮培養(yǎng)基替換。其它培養(yǎng)基的變化應當-根據(jù)污染物存在情況—在第一周內進行。當腫瘤細胞在休眠期之后建立并開始繁殖后，將它們維持在一種無抗生素的培養(yǎng)基中，接著開始大量繁殖。
通過上述早期將組織樣品在2-24小時后切分為獨立的組織裂片或更小的組織片斷，培養(yǎng)瓶中污染的概率和污染物大量繁殖的概率很小。但是，偶爾發(fā)現(xiàn)的含高污染負荷的培養(yǎng)瓶被丟棄。如果由于操作失誤正常細胞強烈繁殖且生長超過腫瘤細胞，可以進行磁力分離，然后在上面說明的培養(yǎng)條件下可保證惡性細胞的選擇性生長。
相關圖例1 接收盤1a1至1a10 次級小室1b1至1b5次級小室1c1至1c3次級小室1d1e1至1e10 次級小室2 切割板3 切割刀具架4 切割槽4a4中孔洞5 支撐面6 組織樣品6a樣品裂片7 導軌8 凹槽10切割刀具/切割金屬絲11隔板12隔板13液體接收盤13a-13e 小室14導軌15加工板16凹槽17孔洞18旋轉立柱19旋轉立柱刀具20旋轉立柱-支撐板
權利要求
1.一種培養(yǎng)來自人體組織的癌細胞的用于分子生物學的系列研究的方法，其特征為，基于涉及腫瘤細胞，正常細胞和污染物的異質結構將組織樣品(6)通過順序-平行切開而局部分離為盤狀裂片，單個組織樣品裂片分離，進一步分為組織片斷，得到的局部分離的組織樣品裂片(6a)的小的、分開的組織片斷和組織液在一定的細胞培養(yǎng)基中，在給定培養(yǎng)條件下選擇性生長。
2.權利要求1的方法，其特征為，組織樣品由細針，抽吸和外科手術內的活檢或切除樣品獲得，與組織樣品上粘附的來自相關病人的樣品取樣點范圍內的紅細胞一起暫時置于細胞培養(yǎng)基。
3.權利要求2的方法，其特征為，用于暫時性保存新鮮組織樣品的細胞培養(yǎng)基與培養(yǎng)腫瘤細胞的細胞培養(yǎng)基是一致的。
4.權利要求2或3的方法，其特征為，為適應細胞培養(yǎng)基，組織樣品(6)在其中保留至少2小時，但不長于24小時，溫度為4℃-12℃。
5.權利要求1至4之一的方法，其特征為，由局部分離的組織樣品裂片(6a)產生的組織片斷和組織液獨立地在用生物基質涂覆并裝滿細胞培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)瓶中，在含氧氣0.01-3％，含二氧化碳0.1-5％以及空氣濕度為100％，溫度為30℃-36.5℃條件下培養(yǎng)。
6.權利要求5的方法，其特征為，在細胞培養(yǎng)物初次建立和進行細胞粘附之后一定時間內，將培養(yǎng)瓶中細胞培養(yǎng)基用新鮮的但同樣組成的培養(yǎng)基替換。
7.權利要求6的方法，其特征為，根據(jù)污染物，如細菌或真菌存在的情況，在同樣或減少了抗生素組分情況下將細胞培養(yǎng)基替換。
8.權利要求1-7之一的方法，其特征為，細胞培養(yǎng)基的組成為無機鹽，即Ca(NO3)210-100mg/LCaCl2·2H2O80-150mg/LKcl 200-1000mg/LMgSO4·7H2O200-700mg/LNaCl 3000-10000mg/LNaHCO31500-4000mg/LNa2HPO4100-1000mg/L；氨基酸，即L-精氨酸·4HCl 10-500mg/LL-天冬酰胺(自由堿) 10-500mg/LL-天冬氨酸 10-500mg/LL-胱氨酸 10-500mg/LL-谷氨酸 10-500mg/LL-谷氨酰胺 10-500mg/L甘氨酸 10-500mg/LL-組氨酸(自由堿) 10-500mg/LL-羥脯氨酸 10-500mg/LL-異亮氨酸 10-500mg/LL-亮氨酸 10-500mg/LL-賴氨酸·HCl 10-500mg/LL-甲硫氨酸 10-500mg/LL-苯丙氨酸 10-500mg/LL-脯氨酸 10-500mg/LL-絲氨酸 10-500mg/LL-蘇氨酸 10-500mg/LL-色氨酸 10-400mg/LL-酪氨酸 10-500mg/LL-纈氨酸 10-500mg/LL-丙氨酸 10-300mg/L維生素，即生物素 0,01-10mg/LD-泛酸鈣 0,01-10mg/L鹽酸膽堿 0,1-50mg/L葉酸 0,01-10mg/Li-肌醇 0,1-100mg/L煙酰胺 0,01-10mg/L吡哆醛·HCl 0,01-10mg/L核黃素 0,1-100μg/L硫氨素·HCl 0,1-50mg/L對氨基苯甲酸 1-1000μg/L維生素B121-1000μg/L煙酸 1-100μg/L抗壞血酸 1-5000μg/L甲酰四氫葉酸 1-100μg/L脂酮酸 1-100μg/L維生素A(醋酸鹽) 10-1000μg/L吡哆素·HCl 1-100μg/L煙酰胺 1-100μg/Lα-維生素E磷酸酯 0-1000μg/L以及D-葡萄糖 100-5000mg/L酚紅 0,1-1000mg/L谷胱甘肽(還原型) 0,01-10mg/L丙酮酸鈉 0,1-50nM表皮生長因子(表皮生長因子，EGF重組體) 1-3000ng/L胎牛血清(FBS)牛胰島素(凍干) 0,1-50mg/L和抗生素
9.實施權利要求1的方法、用于局部分離制備組織樣品的裝置，其特征為，有一個用于順序-平行地將組織樣品(6)切碎為各個彼此分開的組織裂片(6a)和屬于相應切割位置的組織液的切割裝置，包括劃分為帶有次級小室(1a1至1a10，1b1至1b5，1c1至1c3，1d和1e1至1e10)的小室的接收盤(1)，在其上可拆卸地固定的帶有向接收盤(1)部分開放的切割槽(4)的切割板(2)以及為切割刀具(10)設置的切割刀具架(3)，其中切割刀具(10)在切割刀具架(3)中的排列與切割槽(4)在切割板(2)中的排列一致，對每個切割槽(4)設置一個位于其下方的各自的次級小室；以及一個用于進一步制備局部分裂的組織樣品裂片(6a)的切碎儀器，其包括一個劃分為小室(13a-13e)的液體接收盤(13)，一個帶有凹槽(16)的在其上可拆卸地固定的加工板(15)以及帶有旋轉立柱刀具(19)的旋轉立柱(18)，其中凹槽(16)有孔洞(17)，分別位于小室(13a至13e)上方，旋轉立柱(18)與(16)相連。
10.權利要求9的裝置，其特征為，切割板(2)具有垂直于切割槽(4)方向伸展且居中安裝的銼紋支撐面(5)以穩(wěn)定放置組織樣品(6)。
11.權利要求9或10的裝置，其特征為，切割板(4)在支撐面(5)范圍內向其下方的次級小室開放，以便于切割過程中形成的組織液或組織片斷分別收集到各自的次級小室。
12.權利要求9至11之一的裝置，其特征為，切割槽(4)的寬度大于切割刀具(10)的厚度。
13.權利要求9至12之一的裝置，其特征為，切割刀具(10)固定在切割刀具架(3)的蓋板上。
14.權利要求9至12之一的裝置，其特征為，切割刀具(10)設計成切割刀具架(3)中張緊的切割金屬絲。
15.權利要求9的裝置，其特征為，切割板(2)和加工板(15)各自保持在接收盤(1)或液體接收盤(13)上的導軌中(7或14)，其中在帶有切割槽(4)的切割板(2)所用導軌(7)中形成排成直線的凹槽(8)。
16.權利要求9的裝置，其特征為，旋轉立柱-支撐板(20)的鉆孔中，旋轉立柱(18)沿垂直方向可移動或可旋轉來安裝。
全文摘要
本發(fā)明涉及培養(yǎng)用于自然科學系列研究的癌細胞的方法,其中就污染物,正常細胞和腫瘤細胞而言為異質性的組織樣品用順序－平行分裂法局部分離,進一步分裂該局部分離的樣品裂片,其中將該組織裂片的組織片段和液體分別置于給定的細胞培養(yǎng)基并在預定的培養(yǎng)條件下生長。本發(fā)明也涉及細胞培養(yǎng)基和將組織樣品分裂成盤狀裂片的裝置。該本發(fā)明的方法連同該分裂裝置和該培養(yǎng)基可以快速培養(yǎng)獲自人組織的癌細胞,對所有類型的腫瘤的增裂率為100%。
文檔編號C12N5/09GK1351655SQ0080473
公開日2002年5月29日 申請日期2000年2月18日 優(yōu)先權日1999年3月10日
發(fā)明者A·佐丹 申請人:馬格福斯應用有限公司