專利名稱:腫瘤模型與方法
技術領域:
本發(fā)明涉及了一種能夠揭示人類實體惡性腫瘤與機體組織或器官微環(huán)境演進轉化-改變綜合分子腫瘤生物調(diào)控機制、綜合分子腫瘤生物應答機制、綜合分子腫瘤生物預防治療機制方法及藥物的,腫瘤模型與方法,綜合腫瘤模型科學研究實驗平臺。能夠揭示檢測、監(jiān)測人類小原位癌細胞組織的,人類相關分子腫瘤蛋白質組表達譜靶標;揭示拮抗-抑制人類腫瘤細胞組織生長增殖的,人類相關分子腫瘤蛋白質組表達譜靶標、腫瘤相關人類基因表達譜靶標。它涉及生命科學領域、及醫(yī)藥領域。
背景技術:
現(xiàn)代醫(yī)學科學針對在人類群體中臨床自然發(fā)病率最高的致死性實體惡性腫瘤,如肺癌、胃癌、乳腺癌、大腸癌、肝癌……,實施的各個科學研究層面的腫瘤科學研究,已經(jīng)超過一個世紀;迄今在有效預防癌癥發(fā)生、在針對已經(jīng)發(fā)生腫瘤轉移的中晚期致死性實體惡性腫瘤的有效根治或長期有效緩解治療方面,沒有取得解決實質問題的科學研究突破。需要擁有能夠實施現(xiàn)代醫(yī)學、分子生物學、生物化學、遺傳學、免疫學、病理生理學、實驗動物學等多個不同相關生物科學研究領域——各個相關科學學科協(xié)同的綜合科學研究,揭示人類實體惡性腫瘤與機體組織或器官微環(huán)境演進轉化-改變綜合分子腫瘤生物調(diào)控機制、綜合分子腫瘤生物應答機制、綜合分子腫瘤生物預防治療機制方法及藥物的,腫瘤模型與方法,綜合腫瘤模型科學研究實驗平臺。能夠揭示檢測、監(jiān)測人類小原位癌細胞組織的,人類相關分子腫瘤蛋白質組表達譜靶標;揭示拮抗-抑制人類腫瘤細胞組織生長增殖的,人類相關分子腫瘤蛋白質組表達譜靶標、腫瘤相關人類基因表達譜靶標。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開了一種能夠被用于模擬揭示人類實體惡性腫瘤與機體組織或器官微環(huán)境演進轉化-改變綜合分子腫瘤生物調(diào)控機制、綜合分子腫瘤生物應答機制、綜合分子腫瘤生物預防治療機制方法及藥物的,腫瘤模型與方法,綜合腫瘤模型科學研究實驗平臺。能夠揭示檢測、監(jiān)測人類小原位癌細胞組織的,人類相關分子腫瘤蛋白質組表達譜靶標;揭示拮抗-抑制人類腫瘤細胞組織生長增殖的,人類相關分子腫瘤蛋白質組表達譜靶標、腫瘤相關人類基因表達譜靶標。
現(xiàn)代腫瘤科學研究所依賴的,實驗生物學片面科學認識思維、簡單科學方法論及研究實驗方法禁錮束縛一個多世紀的現(xiàn)代腫瘤科學研究,只片面注重研究揭示腫瘤生物表達性狀、發(fā)生機制,能夠在動物及人類機體組織或器官發(fā)生的生物發(fā)生機制、藥物及生物治療機制,長期忽視了動物及人類機體組織或器官的微環(huán)境為什么能夠發(fā)生腫瘤、客觀存在微環(huán)境對腫瘤生物表達性狀、生物發(fā)生機制的正負生物調(diào)控機制,及腫瘤相應的正負生物應答機制,是動物及人類腫瘤主要發(fā)生因素的相關綜合科學研究!特別值得注意,具有開拓性科學創(chuàng)新認識、前瞻性科學研究指導意義的是現(xiàn)代腫瘤實驗科學研究的重要科學研究手段,已經(jīng)建立的可移植性動物腫瘤模型,有令人信服的、可重復科學實驗結果證實,動物及人類機體微環(huán)境演進轉化-改變正負生物調(diào)控腫瘤細胞克隆生長增殖狀態(tài)、腫瘤生物表達性狀……是動物及人類腫瘤主要生物發(fā)生機制;許多重要的腫瘤生物表達性狀、生物發(fā)生機制,是腫瘤受到機體微環(huán)境正負生物調(diào)控、腫瘤相應正負生物應答所表達的,獲得性腫瘤生物表達性狀、生物發(fā)生機制。例如,Qgawa等設計實施的致癌物質誘發(fā)大鼠肝癌并肺轉移動物腫瘤模型實驗,揭示誘發(fā)大鼠肝癌腫瘤的重要轉移生物表達性狀、肺轉移腫瘤細胞KALL基因與heparanase基因表達明顯改變,是受到機體組織或器官的微環(huán)境正負生物,由腫瘤相應正負生物應答所表達的、獲得性腫瘤生物表達性狀、生物發(fā)生機制。例如,F(xiàn)idler實驗室在20世紀80年代,比較不同分期人結腸癌在裸鼠肝內(nèi)生長情況,強調(diào)腫瘤細胞的器官特異性轉移不僅取決于腫瘤細胞的特征,而且取決于器官的微環(huán)境。例如,李雁等設計實施完成的人肝癌裸鼠轉移復發(fā)的腫瘤模型研究報告中有表述,可移植人類肝癌異質小原位癌細胞組織,與異質腫瘤細胞克隆腫瘤病理分化的高低、體外細胞培養(yǎng)傳代增殖速度的快慢,不是決定異質人類小原位癌細胞組織、異質人類腫瘤細胞克隆能夠在裸鼠機體微環(huán)境中,轉化-改變成為具有生長增殖優(yōu)勢人類腫瘤細胞克隆構成、主導腫瘤組織生長的人類腫瘤組織的,腫瘤主要發(fā)生因素;而是主要取決于裸鼠機體組織或器官微環(huán)境演進轉化-改變,對異質人類小原位癌細胞組織、異質人類腫瘤細胞克隆的選擇,最終決定其是否能夠在機體組織或器官微環(huán)境中轉化-改變成為,具有生長增殖優(yōu)勢人類腫瘤細胞克隆構成、主導腫瘤組織生長的人類腫瘤組織;正負生物調(diào)控異質人類腫瘤細胞克隆生物表達性狀、與異質人類腫瘤組織生長。
本發(fā)明的目的是,提供一種能夠被應用于模擬揭示人類實體惡性腫瘤與機體組織或器官微環(huán)境演進轉化-改變綜合分子腫瘤生物調(diào)控機制、綜合分子腫瘤生物應答機制、綜合分子腫瘤生物預防治療機制方法及藥物的,腫瘤模型與方法,綜合腫瘤模型科學研究實驗平臺。能夠揭示檢測、監(jiān)測人類小原位癌細胞組織的,人類相關分子腫瘤蛋白質組表達譜靶標;揭示拮抗-抑制人類腫瘤細胞組織生長增殖的,人類相關分子腫瘤蛋白質組表達譜靶標、腫瘤相關人類基因表達譜靶標。
1.把取自手術獲取的近交系小鼠的自發(fā)腫瘤肺癌、胃癌、乳腺癌、大腸癌、肝癌……等,約106~108腫瘤細胞或腫瘤小塊組織,原位移植、或皮下移植到同種近交系小鼠的相應器官、或皮下;建立能夠被應用于模擬在人類機體發(fā)生的小原位癌,研究揭示動物及人類腫瘤的某些生物發(fā)生機制、生物性質的,那種近交系小鼠自發(fā)腫瘤可移植瘤模型——瘤株。
2.取那種小鼠自發(fā)腫瘤可移植瘤模型的,機體接種移植瘤株傳代增殖量達到109腫瘤細胞——1g腫瘤組織的荷瘤小鼠的血;制取血清。應用荷瘤小鼠20%血清加培養(yǎng)基,體外培養(yǎng)那種小鼠自發(fā)腫瘤可移植瘤株細胞,建立應用那種荷瘤小鼠血清體外培養(yǎng)的自發(fā)腫瘤可移植細胞系。
3.分別取那種小鼠自發(fā)腫瘤可移植瘤模型的,接種移植瘤株0d、7d、14d、21d、28d、35d荷瘤小鼠的血;分別制取血清。分別應用接種移植瘤株0d、7d、14d、21d、28d、35d荷瘤小鼠的20%血清加培養(yǎng)基,模擬接種移植那種自發(fā)腫瘤可移植瘤株小鼠不同生命時間發(fā)生進程0d、7d、14d、21d、28d、35d機體微環(huán)境土壤演進轉化-改變,在體外培養(yǎng)那種自發(fā)腫瘤可移植細胞系,模擬那種自發(fā)腫瘤可移植瘤株小原位癌細胞組織種子,與接種移植那種可移植瘤株荷瘤小鼠機體微環(huán)境土壤,在不同生命時間發(fā)生進程0d、7d、14d、21d、28d、35d發(fā)生多重復雜相互誘導、相互調(diào)控轉化-改變由最初接種移植自發(fā)腫瘤可移植瘤株種子生長增殖受到機體微環(huán)境土壤抑制成瘤潛伏期、到機體微環(huán)境土壤促進移植自發(fā)腫瘤可移植瘤株種子增殖成瘤生長期、繼而會發(fā)生出致死性占位實體惡性腫瘤組織——腫瘤-微環(huán)境演進轉化-改變生物調(diào)控、生物應答。建立能夠綜合模擬表達在動物及人類機體發(fā)生存在的,具有生長增殖優(yōu)勢腫瘤細胞克隆的小原位癌細胞組織種子——那種自發(fā)腫瘤可移植瘤株種子,被移植到一個新動物宿主機體土壤;自發(fā)腫瘤可移植瘤株種子傳代生長增殖會受到新宿主機體微環(huán)境土壤的明顯抑制;必須經(jīng)歷種子-土壤多重復雜相互誘導、相互調(diào)控轉化-改變——腫瘤-微環(huán)境演進轉化-改變生物調(diào)控、生物應答,被移植自發(fā)腫瘤可移植瘤株種子在新宿主機體的移植占位腫脹目測觀察消退的成瘤潛伏期;而后受到新宿主機體微環(huán)境土壤明顯抑制的、那種自發(fā)腫瘤可移植瘤株種子,才能夠被移植新宿主機體微環(huán)境土壤演進轉化-改變,再次被轉化成為具有生長增殖優(yōu)勢、傳代生長增殖速度快、能夠對機體組織或器官造成致死性生物損傷的、自發(fā)腫瘤可移植瘤株種子,繼而會傳代生長增殖成為對機體組織或器官造成致死性生物損傷的占位實體惡性腫瘤的腫瘤模型與方法,綜合腫瘤模型科學研究實驗平臺。為現(xiàn)代腫瘤實驗科學研究,能夠綜合模擬分析揭示在人機體發(fā)生的小原位癌細胞組織種子轉化為致死性占位實體惡性腫瘤,與機體組織或器官微環(huán)境演進轉化-改變的,綜合分子腫瘤生物調(diào)控機制、綜合分子腫瘤生物應答機制、綜合分子腫瘤生物預防治療機制方法及藥物,提供切實可以實施的綜合生物醫(yī)學科學研究實驗方法。能夠揭示檢測、監(jiān)測人類小原位癌細胞組織的,人類相關分子腫瘤蛋白質組表達譜靶標;揭示拮抗-抑制人類腫瘤細胞組織生長增殖的,人類相關分子腫瘤蛋白質組表達譜靶標、腫瘤相關人類基因表達譜靶標。
具體實施例方式
為達到上述目的,實施本發(fā)明采用的方案1.制備生物實驗材料1.1.1 中國醫(yī)學科學院腫瘤研究所建立的小鼠乳腺癌MAC891瘤株,是應用具有乳腺癌高自然發(fā)病率的TA2近交系小鼠,自發(fā)乳腺癌組織連續(xù)傳代移植于同種TA2近交系小鼠皮下,建立的可移植小鼠B2型乳腺癌瘤株。移植瘤株發(fā)病率100%;動物存活時間47d。
1.1.2 TA2近交系小鼠乳腺癌MAC891移植瘤模型小鼠乳腺癌MAC891瘤株按照5×106細胞/0.2ml/每只劑量,分別注射接種于6只TA2小鼠腋下。接種移植瘤株30d~35d,觸摸移植瘤株成瘤的長、短徑達到1.0~1.5cm時,實施頸椎脫臼法處死荷瘤小鼠,手術剝離取出腫瘤組織,稱重;選取其中1個腫瘤細胞組織生長性狀最好、沒有發(fā)生組織壞死、腫瘤重量大于0.6g的腫瘤。采用常規(guī)機械法把腫瘤組織制成2.5×107細胞/ml細胞懸液,按照5×106細胞/0.2ml/每只劑量,分別注射接種于70只TA2小鼠腋下;按照1.1.3法,分別于接種移植瘤株不同時間0d乙醚麻醉采血處死20只小鼠,7d、14d、21d、28d、35d各自乙醚麻醉采血處死10只小鼠,制取血清備用。分別手術剝離取出在各自動物機體發(fā)生的不同成瘤生長時間腫瘤組織,用卡尺測量腫瘤組織的長、短徑,稱重,記錄;置于2%多聚甲醛、0.5%戊二醛、0.2%苦味酸、0.1mol/L磷酸緩沖液的固定液中固定;制作組織切片Giemsa染色、400×腫瘤細胞組織光鏡形態(tài)學觀察數(shù)碼照相圖片資料儲存?zhèn)溆?。選取另1個腫瘤細胞組織生長性狀最好、沒有發(fā)生組織壞死、腫瘤重量大于0.5g的腫瘤。用常規(guī)機械法把腫瘤組織制成2.5×107細胞/ml單細胞懸液,按照5×106細胞/0.2ml/每只劑量,分別注射接種于30只TA2小鼠腋下、30只TA2小鼠皮下;移植瘤株注射接種于腋下的30只TA2小鼠、30d乙醚麻醉采血處死按照1.4.3法制取血清備用,移植瘤株注射接種于皮下的30只TA2小鼠實施下述2.模擬動物小原位癌—腫瘤與機體微環(huán)境演進轉化-改變生物調(diào)控/生物應答動物實驗。
1.1.3 分別制取接種小鼠乳腺癌MAC891瘤株,0d、7d、14d、21d、28d、30d、35d不同荷瘤時間采血的TA2小鼠的血清分別乙醚麻醉接種移植瘤株/不同荷瘤時間采血的TA2小鼠,把動物仰臥固定。正中切口入腹。把腸子用紗布保護好放置在腹腔外左側。通過尾靜脈用5號針注射0.4ml林格氏液,注射速度0.05ml/s~0.1ml/s,注射完畢后先用絲線結扎注射前端止血,再抽出注射針。輕輕分開脊柱前的脂肪,暴露腹主動脈;在腹主動脈遠心端用絲線打一個節(jié),再用拉線阻斷腹主動脈近心端,然后在其間平行刺入,并松開近心端阻斷拉線,立即采血。當動物呼吸減弱時,擠壓動物胸腔輔助呼吸同時不斷擠出心臟殘余血液?;驅嵤﹦游镄呐K穿刺采血。分別把接種移植瘤株/不同荷瘤時間采血的裸小鼠的血,注入各自集中收集的4℃低溫保存離心管內(nèi)收集完成后,以2000g離心10min,離心后4℃低溫靜置60min;然后用血管鉗擠壓血凝塊,擠出內(nèi)含的血清;棄去血凝塊,再以5~10000g離心60min。把取自于接種移植瘤株/不同荷瘤時間采血的TA2小鼠的血清編號——Ln,n=0d、7d、14d、21d、28d、30d、35d;各自分別用一系列一次性注射器式過濾器進行過濾,最后用0.1μm孔徑無菌過濾器進行過濾后;分別把編號血清Ln,n=0d、7d、14d、21d、28d、30d、35d,各自分置于多個小無菌高密度聚丙烯容器,放置-70℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br>
1.1.4 配制MCDB170培養(yǎng)基,-D。分別應用接種小鼠乳腺癌MAC891瘤株0d、7d、14、21、28d、35d不同時間采血的小鼠的編號血清Ln,n=0d、7d、14d、21d、28d、35d,按照小鼠血清∶MCDB170培養(yǎng)基=1∶4,分別配制綜合模擬接種小鼠乳腺癌MAC891移植瘤株的小鼠不同生命時間進程0d、7d、14d、21d、28d、35d機體微環(huán)境土壤演進轉化-改變的編號培養(yǎng)基,Ln-D,n=0d、7d、14d、21d、28d、35d。分別應用模擬機體微環(huán)境土壤演進轉化-改變的編號Ln-D,n=0d、7d、14d、21d、28d、35d的6種培養(yǎng)基,各自配制小鼠乳腺癌MAC891細胞系2×105/ml的6種培養(yǎng)腫瘤細胞懸液、各自3ml。實施下述3.模擬動物小原位癌—腫瘤與機體微環(huán)境演進轉化-改變生物調(diào)控/生物應答體外培養(yǎng)動物腫瘤細胞實驗。
2.模擬動物小原位癌—腫瘤與機體微環(huán)境演進轉化-改變生物調(diào)控/生物應答動物實驗2.1模型生物機制特點2.1.1 把具有生長增殖優(yōu)勢、傳代生長增殖速度快、能夠對機體組織或器官造成致死性生物損傷的、近交系小鼠自發(fā)腫瘤可移植瘤株106~108腫瘤細胞或腫瘤小塊組織種子,接種到同種近交系小鼠機體微環(huán)境土壤,建立近交系小鼠可移植瘤模型;可以被應用于模擬在動物及人類機體發(fā)生的小原位癌,研究揭示那種動物腫瘤的某些生物發(fā)生機制、生物性質。普遍存在具有生長增殖優(yōu)勢、傳代生長增殖速度快、能夠對機體組織或器官造成致死性生物損傷的、可移植近交系小鼠自發(fā)腫瘤株種子,被移植到一個新的同種近交系小鼠機體微環(huán)境土壤,首先受到小鼠機體微環(huán)境土壤生長增殖抑制生物調(diào)控,必須經(jīng)歷“‘種子-土壤’多重復雜相互誘導、相互調(diào)控轉化-改變——腫瘤-微環(huán)境演進轉化-改變生物調(diào)控/生物應答”,可移植近交系小鼠瘤株種子在新宿主機體的移植占位腫脹目測觀察消退,近似于腫瘤細胞進入增殖休眠抑制狀態(tài)的成瘤潛伏期;可以被認為是能夠模擬表達在動物及人類機體發(fā)生存在的,具有生長增殖優(yōu)勢小原位癌細胞組織種子,需要與機體組織或器官微環(huán)境土壤,經(jīng)歷多重復雜相互誘導、相互調(diào)控轉化-改變——腫瘤-微環(huán)境演進轉化-改變生物調(diào)控/生物應答發(fā)生進程;才能夠被相互轉化-改變成為具有對機體組織或器官造成致死性生物損傷惡性生物表性的腫瘤組織種子、與具有適合惡性腫瘤組織種子傳代增殖生物表性的機體組織或器官微環(huán)境土壤;繼而會在動物及人類機體發(fā)生出,對機體組織或器官造成致死性生物損傷的占位實體惡性腫瘤組織——獲得性腫瘤生物表達性狀、生物發(fā)生機制,動物及人類腫瘤生物發(fā)生機制的實驗動物模型。
2.2實驗動物模型及分組及實驗實施方法2.2.1 接種小鼠乳腺癌MAC891移植瘤模型對照組按照1.1.2法,把小鼠乳腺癌MAC891腫瘤組織制成的細胞懸液,按照5×106細胞/0.2ml/每只劑量,注射接種10只TA2近交系小鼠便于實驗觀察的、胸肋弧中央處皮下。
2.2.2 接種小鼠乳腺癌MAC891移植瘤模型,注射接種瘤株30d成瘤生長期動物血清,調(diào)控移植小鼠乳腺癌MAC891瘤株成瘤潛伏期、腫瘤生長速度組按照1.1.2法,把小鼠乳腺癌MAC891腫瘤組織制成的細胞懸液,按照5×106細胞/0.2ml/每只劑量,注射接種10只裸小鼠便于實驗觀察的、胸肋弧中央處皮下。在接種瘤株后,每24h一次,距離接種瘤株邊緣外5mm處,皮下注射50μl取自接種小鼠乳腺癌MAC891瘤株30d成瘤生長期小鼠的血清;分別輪換在不同位置處,共皮下注射8次。
2.2.3 接種小鼠乳腺癌MAC891移植瘤模型,注射接種瘤株0d成瘤潛伏期動物血清對照組按照1.1.2法,把小鼠乳腺癌MAC891腫瘤組織制成的細胞懸液,按照5×106細胞/0.2ml/每只劑量,注射接種10只小鼠便于實驗觀察的、胸肋弧中央處皮下。在接種瘤株后,每24h一次,距離接種瘤株邊緣外5mm處,皮下注射50μl取自接種小鼠乳腺癌MAC891瘤株0d成瘤潛伏期小鼠的血清;分別輪換在不同位置處,共皮下注射8次。
2.2.4 簡化實驗接種小鼠乳腺癌MAC891移植瘤模型,調(diào)控移植小鼠乳腺癌MAC891瘤株成瘤潛伏期、腫瘤生長速度組按照1.1.2法,把小鼠乳腺癌MAC891腫瘤組織制成的細胞懸液,按照5×106細胞/0.1ml/每只劑量,注射接種10只小鼠右后肢爪墊皮下[6]。待10只小鼠移植瘤的生長直徑,有6只能夠達到5mm時,截除10只小鼠荷瘤右下肢。取其中一個腫瘤組織生長最好的腫瘤制成2.5×107細胞/ml細胞懸液;按照2.5×106細胞/0.1ml/每只劑量,注射接種10只小鼠左后肢爪墊皮下。
2.2.5 簡化實驗接種小鼠乳腺癌MAC891移植瘤模型對照組把2.2.4取其中一個腫瘤組織生長最好的腫瘤制成2.5×107細胞/ml細胞懸液;按照2.5×106細胞/0.1ml/每只劑量,注射接種10只小鼠左后肢爪墊皮下;同時對10只小鼠實施與附2.2.4相同的截除右下肢。
2.3實驗觀察/檢測/目的評定2.3.1 目測觀察2.2.1/2.2.2/2.2.3組,移植瘤株在每一只實驗動物機體上出現(xiàn)的移植占位腫脹,移植占位腫脹消退、到腫瘤占位再次出現(xiàn)的成瘤潛伏期;目測觀察實驗動物機體上再次出現(xiàn)腫瘤占位,每2d一次用卡尺測量腫瘤占位的長、短徑;接種瘤株30d乙醚麻醉采血處死荷瘤小鼠,按照1.1.3法制取血清備用;手術剝離取出腫瘤組織,用卡尺測量腫瘤組織的長、短徑,稱重。作記錄。
2.3.2 給TA2近交系小鼠乳腺癌MAC891移植瘤模型,在移植瘤株處附近皮下、多次注射取自接種小鼠乳腺癌MAC891瘤株30d成瘤生長期小鼠的血清,使成瘤潛伏期移植瘤株接種處局部微環(huán)境、發(fā)生成瘤生長期的轉化-改變,縮短小鼠乳腺癌MAC891移植瘤株在小鼠機體受到抑制的成瘤潛伏期。應用上述2.2.1/2.2.2/2.2.3,TA2近交系小鼠乳腺癌MAC891移植瘤模型,實施機體微環(huán)境演進轉化-改變,生物調(diào)控腫瘤細胞生長增殖狀態(tài)、腫瘤生物表達性狀實驗,可信服的科學實驗結果,證實動物及人類機體組織或器官微環(huán)境演進轉化-改變生物調(diào)控最初發(fā)生、受到機體組織或器官微環(huán)境生長增殖抑制生物調(diào)控的小原位癌細胞組織,轉化-改變成為適合在演進轉化-改變微環(huán)境中傳代增殖、具有生長增殖優(yōu)勢的腫瘤細胞克隆小原位癌細胞組織,最終決定其是否能夠在機體組織或器官微環(huán)境中,轉化-改變成為具有生長增殖優(yōu)勢腫瘤細胞克隆、構成主導腫瘤組織生長的腫瘤組織;正負生物調(diào)控腫瘤細胞克隆的生物表達性狀、與腫瘤組織生長;繼而會在動物及人類機體發(fā)生出,對機體組織或器官造成致死性生物損傷的占位實體惡性腫瘤組織——獲得性腫瘤生物表達性狀、生物發(fā)生機制,是動物及人類腫瘤主要生物發(fā)生機制。
2.3.3 觸摸觀察2.2.4/2.2.5組每一只實驗動物,移植瘤株在左后肢爪墊皮下成瘤生長狀況。待2.2.5組有6只動物左后肢爪墊皮下成瘤生長出可觸摸到的腫瘤組織時,對2組動物實施頸椎脫臼法處死各自10只小鼠,手術剝離取出腫瘤組織,用卡尺測量腫瘤組織的長、短徑,稱重;作記錄。2.2.4組動物右后肢爪墊皮下首次接種移植瘤株生長出腫瘤,機體組織微環(huán)境演進轉化-改變?yōu)榇龠M生物調(diào)控腫瘤細胞生長增殖的生物調(diào)控,截除荷瘤右下肢,再次移植瘤株,在左后肢爪墊皮下成瘤生長出腫瘤的時間、腫瘤體積和重量,比2.2.5組動物初次移植瘤株,在左后肢爪墊皮下成瘤生長出腫瘤的時間短、腫瘤體積和重量大??梢杂米詈啽阋仔械膭游锬[瘤模型實驗,證實動物及人類機體組織或器官微環(huán)境演進轉化-改變正負生物調(diào)控腫瘤細胞克隆生長增殖狀態(tài)、腫瘤生物表達性狀……是動物及人類腫瘤主要生物發(fā)生機制;揭示獲得性腫瘤生物表達性狀、生物發(fā)生機制。
應用2.2.4/2.2.5簡化動物腫瘤模型實驗,可以為現(xiàn)代腫瘤實驗科學研究首先篩選具有肺癌、胃癌、乳腺癌、肝癌、胰腺癌、大腸癌、卵巢癌、前列腺癌、黑色素瘤……等,某種動物腫瘤高自然發(fā)病率的各種不同品系近交系小鼠,有哪種或哪些種品系近交系小鼠自發(fā)致死性占位實體惡性腫瘤,受機體組織或器官微環(huán)境演進轉化-改變綜合分子腫瘤生物調(diào)控機制、正負生物調(diào)控,相應表達綜合分子腫瘤生物應答機制/綜合分子腫瘤生物預防治療機制——獲得性腫瘤生物表達性狀、生物發(fā)生機制,提供最簡便易行的腫瘤模型科學實驗方法。進而能夠為應用動物腫瘤模型相似的綜合模擬分析揭示人類群體臨床自然發(fā)病率最高的肺癌、胃癌、乳腺癌、大腸癌、肝癌……等,哪種或哪些種致死性占位實體惡性腫瘤與機體組織或器官微環(huán)境演進轉化-改變,綜合分子腫瘤生物調(diào)控機制/綜合分子腫瘤生物應答機制/綜合分子腫瘤生物預防治療機制——獲得性腫瘤生物表達性狀、生物發(fā)生機制,提供相關腫瘤模型科學研究實驗依據(jù)。
3.模擬動物小原位癌—腫瘤與機體微環(huán)境演進轉化-改變生物調(diào)控/生物應答體外培養(yǎng)動物腫瘤細胞實驗3.1模型生物機制特點3.1.1 接種小鼠自發(fā)腫瘤可移植瘤模型的,機體血液循環(huán)血清分子生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜,在接種移植瘤株后不同生命時間進程發(fā)生的演進轉化-改變,表達小鼠自發(fā)腫瘤可移植瘤模型的腫瘤-微環(huán)境演進轉化-改變生物調(diào)控/生物應答,機體微環(huán)境演進轉化-改變針對可移植自發(fā)腫瘤細胞的重要綜合分子腫瘤生物調(diào)控機制。分別檢測、綜合分析接種小鼠自發(fā)腫瘤可移植瘤模型,接種移植瘤株0d、7d、14、21、28d、35d不同時間采血的小鼠的編號血清Ln,n=0d、7d、14d、21d、28d、35d,分子生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜演進轉化-改變,能夠被應用于模擬分析揭示動物及人類機體組織或器官微環(huán)境演進轉化-改變正負生物調(diào)控自發(fā)腫瘤細胞生長增殖狀態(tài)、腫瘤生物表達性狀;生物調(diào)控最初發(fā)生、受到機體組織或器官微環(huán)境生長增殖抑制生物調(diào)控的小原位癌細胞組織轉化-改變成為,適合在演進轉化-改變微環(huán)境中傳代增殖、具有生長增殖優(yōu)勢的腫瘤細胞克隆小原位癌細胞組織;最終決定其是否能夠在機體組織或器官微環(huán)境中轉化-改變成為,具有生長增殖優(yōu)勢腫瘤細胞克隆構成、主導腫瘤組織生長的腫瘤組織;正負生物調(diào)控自發(fā)腫瘤細胞克隆的生物表達性狀、與腫瘤組織生長——獲得性腫瘤生物表達性狀、生物發(fā)生機制;由動物及人類體微環(huán)境演進轉化-改變的血清相關分子腫瘤生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜,針對可移植自發(fā)腫瘤細胞表達的,重要綜合分子腫瘤生物調(diào)控機制。分別應用接種小鼠自發(fā)腫瘤可移植瘤模型,各自不同腫瘤生命時間進程的編號血清Ln,n=0d、7d、14d、21d、28d、35d,分別配制能夠模擬接種小鼠自發(fā)腫瘤可移植瘤株的小鼠不同生命時間進程0d、7d、14d、21d、28d、35d機體微環(huán)境土壤演進轉化-改變的編號培養(yǎng)基Ln-D,n=0d、7d、14d、21d、28d、35d,體外培養(yǎng)小鼠自發(fā)腫瘤可移植腫瘤細胞;分別檢測、綜合分析體外培養(yǎng)腫瘤細胞的小鼠基因表達譜,能夠被應用于模擬分析揭示最初發(fā)生、受到機體組織或器官微環(huán)境生長增殖抑制生物調(diào)控的,自發(fā)小原位癌細胞組織轉化-改變成為,適合在演進轉化-改變微環(huán)境中傳代增殖、具有生長增殖優(yōu)勢的腫瘤細胞克隆小原位癌細胞組織;在機體組織或器官微環(huán)境演進轉化-改變中,轉化-改變成為具有生長增殖優(yōu)勢腫瘤細胞克隆構成、主導腫瘤組織生長的腫瘤組織——獲得性腫瘤生物表達性狀、生物發(fā)生機制;由動物及人類機體微環(huán)境演進轉化-改變的血清相關分子腫瘤生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜,正負生物調(diào)控可移植自發(fā)腫瘤細胞表達的,演進轉化-改變的小鼠腫瘤相關基因表達譜,重要綜合分子腫瘤生物應答機制。
3.2實驗分組及實驗實施方法
3.2.1 1、應用配制的MCDB170培養(yǎng)基、在9cm皮氏培養(yǎng)器皿清洗手術取自小鼠乳腺癌MAC891移植瘤模型的,腫瘤細胞組織生長性狀好、沒有發(fā)生組織壞死的腫瘤組織。2、轉入另一個培養(yǎng)器皿,切除多余組織如脂肪組織或生長不良的腫瘤組織,用刀切成約3mm3小塊;應用MCDB170培養(yǎng)基清洗。3、把清洗后的腫瘤組織小塊,每次取幾個組織小塊放置在1mm孔徑的不銹鋼或聚丙烯篩網(wǎng)上,把篩網(wǎng)置于9cm皮氏培養(yǎng)器皿中,應用注射器芯輕輕擠壓腫瘤組織;用注射器吸取1.4.4法配制的、培養(yǎng)基L30d-D,吹過篩網(wǎng)將脫落的腫瘤細胞、小腫瘤組織沖入培養(yǎng)器皿中。4、吸取分離的腫瘤組織,置于50μm孔徑的篩網(wǎng)上中,重復步驟3。5、應用1.4.4法配制的、培養(yǎng)基L30d-D,將獲得的腫瘤細胞懸液配制2×105/ml培養(yǎng)腫瘤細胞懸液。6、應用2~3個35mm培養(yǎng)器皿體,外培養(yǎng)小鼠乳腺癌MAC891瘤株細胞2×105/ml培養(yǎng)腫瘤細胞懸液,建立小鼠乳腺癌MAC891細胞系;在有一定濕度,5%CO2的37℃溫箱中培養(yǎng);每培養(yǎng)72h換1次培養(yǎng)基L30d-D;體外培養(yǎng)建立小鼠乳腺癌MAC891細胞系。
3.2.2 按照1.1.4法,分別應用模擬接種小鼠乳腺癌MAC891瘤株0d、7d、14d、21d、28d、35d小鼠機體微環(huán)境土壤演進轉化-改變的6種編號培養(yǎng)基Ln-D,n=0d、7d、14d、21d、28d、35d,各自配制小鼠乳腺癌MAC891細胞系2×105/ml的6種培養(yǎng)腫瘤細胞懸液、各自3ml。在一塊24孔板上,分別各自實施6種編號培養(yǎng)基Ln-D,n=0d、7d、14d、21d、28d、35d,不連續(xù)體外培養(yǎng)小鼠乳腺癌MAC891細胞系每種編號培養(yǎng)基各3孔,每孔灌注1ml分別應用各自編號培養(yǎng)基Ln-D,n=0d、7d、14d、21d、28d、35d配制小鼠乳腺癌MAC891細胞系2×105/ml培養(yǎng)腫瘤細胞懸液;在有一定濕度,5%CO2的37℃溫箱中培養(yǎng);培養(yǎng)72h時各自換1次各自編號培養(yǎng)基Ln-D。培養(yǎng)144h,停止培養(yǎng);分別收集6種培養(yǎng)基各自3個孔培養(yǎng)的腫瘤細胞,分別做制備涂片Giemsa染色、400×培養(yǎng)腫瘤細胞光鏡形態(tài)學觀察數(shù)碼照相圖片資料儲存?zhèn)溆?;培養(yǎng)腫瘤細胞生長周期與生長曲線測定;置于液氮冷凍保存,準備做培養(yǎng)腫瘤細胞小鼠基因表達譜檢測。
3.2.3 按照1.1.4法,應用L0d-D培養(yǎng)基,配制小鼠乳腺癌MAC891細胞系2×105/ml培養(yǎng)腫瘤細胞懸液4ml,分置于2個10號培養(yǎng)瓶;實施按照培養(yǎng)基的6種編號n=0d、7d、14d、21d、28d、35d順序應用Ln-D培養(yǎng)基連續(xù)體外培養(yǎng)小鼠乳腺癌MAC891細胞系;在有一定濕度,5%CO2的37℃溫箱中培養(yǎng)。養(yǎng)瓶培養(yǎng)3d時換1次編號n=0d培養(yǎng)基;養(yǎng)瓶培養(yǎng)6d時取出50%~80%培養(yǎng)腫瘤細胞備用,換1次編號n=7d培養(yǎng)基;培養(yǎng)瓶培養(yǎng)9d時換1次編號n=7d培養(yǎng)基;培養(yǎng)瓶培養(yǎng)12d時取出50%~80%培養(yǎng)腫瘤細胞備用,換1次編號n=14d培養(yǎng)基;培養(yǎng)瓶培養(yǎng)15d時換1次編號n=14d培養(yǎng)基;培養(yǎng)瓶培養(yǎng)18d時取出50%~80%培養(yǎng)腫瘤細胞備用,換1次編號n=21d培養(yǎng)基;培養(yǎng)瓶培養(yǎng)21d時換1次編號n=21d培養(yǎng)基;培養(yǎng)瓶培養(yǎng)24d時取出50%~80%培養(yǎng)腫瘤細胞備用,換1次編號n=28d培養(yǎng)基;培養(yǎng)瓶培養(yǎng)27d時換1次編號n=28d培養(yǎng)基;培養(yǎng)瓶培養(yǎng)30d時取出50%~80%培養(yǎng)腫瘤細胞備用,換1次編號n=35d培養(yǎng)基;培養(yǎng)瓶培養(yǎng)33d時換1次編號n=35d培養(yǎng)基;培養(yǎng)瓶培養(yǎng)36d時結束連續(xù)培養(yǎng),取出培養(yǎng)腫瘤細胞備用。對應用Ln-D培養(yǎng)基連續(xù)培養(yǎng)小鼠乳腺癌MAC891細胞系,分別培養(yǎng)6d、12d、18d、24d、27d、30、36d取出的培養(yǎng)腫瘤細胞,分別做制備涂片Giemsa染色、400×培養(yǎng)腫瘤細胞光鏡形態(tài)學觀察數(shù)碼照相圖片資料儲存?zhèn)溆?;培養(yǎng)腫瘤細胞生長周期與生長曲線測定;置于液氮冷凍保存,準備做培養(yǎng)腫瘤細胞小鼠基因表達譜檢測。
3.3實驗檢測/目的評定3.3.1 通過P3級生物質譜——蛋白質組表達譜檢測分析實驗室,分別檢測1.1.3制備生物實驗材料,TA2近交系小鼠乳腺癌MAC891移植瘤模型,分別接種移植瘤株0d、7d、14、21、28d、35d不同時間采血的小鼠的編號血清Ln,n=0d、7d、14d、21d、28d、35d,各自血清分子生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜。綜合對比分析TA2近交系小鼠乳腺癌MAC891移植瘤模型的編號血清Ln,n=0d、7d、14d、21d、28d、35d,由成瘤潛伏期抑制小原位癌腫瘤細胞生長增殖、到成瘤生長期促進小原位癌腫瘤細胞生長增殖、到發(fā)生致死性腫瘤,血清分子生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜演進轉化-改變。綜合模擬分析揭示動物及人類機體組織或器官微環(huán)境演進轉化-改變,正負生物調(diào)控自發(fā)腫瘤細胞生長增殖狀態(tài)、腫瘤生物表達性狀;生物調(diào)控最初發(fā)生、受到機體組織或器官微環(huán)境生長增殖抑制生物調(diào)控的自發(fā)小原位癌細胞組織轉化-改變成為,適合在演進轉化-改變微環(huán)境中傳代增殖、具有生長增殖優(yōu)勢的腫瘤細胞克隆小原位癌細胞組織;最終決定其是否能夠在機體組織或器官微環(huán)境中轉化-改變成為,具有生長增殖優(yōu)勢腫瘤細胞克隆構成、主導腫瘤組織生長的腫瘤組織;正負生物調(diào)控自發(fā)腫瘤細胞克隆的生物表達性狀、與腫瘤組織生長——獲得性腫瘤生物表達性狀、生物發(fā)生機制;由動物及人類機體微環(huán)境演進轉化-改變的血清相關分子腫瘤生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜,針對可移植自發(fā)腫瘤細胞表達的,重要綜合分子腫瘤生物調(diào)控機制。
3.3.2 通過P3級細胞基因表達譜生物芯片檢測分析實驗室,應用小鼠基因表達檢測生物芯片分別檢測3.2.2/3.2.3,分別應用模擬小鼠乳腺癌MAC891移植瘤模型,不同生命時間進程0d、7d、14d、21d、28d、35d機體微環(huán)境土壤演進轉化-改變的編號培養(yǎng)基Ln-D,n=0d、7d、14d、21d、28d、35d,分別不連續(xù)體外培養(yǎng)小鼠乳腺癌MAC891細胞系、連續(xù)體外培養(yǎng)小鼠乳腺癌MAC891細胞系的,與血清相關分子腫瘤生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜生物調(diào)控相關的,可移植自發(fā)腫瘤細胞表達的,小鼠腫瘤相關基因表達譜。綜合對比分析模擬小鼠乳腺癌MAC891移植瘤模型發(fā)生腫瘤,由成瘤潛伏期抑制小原位癌腫瘤細胞生長增殖、到成瘤生長期促進小原位癌腫瘤細胞生長增殖、到發(fā)生致死性腫瘤不同生命時間進程6種體外培養(yǎng)小鼠乳腺癌MAC891細胞系的,與演進轉化-改變的血清相關分子腫瘤生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜生物調(diào)控相關的,可移植自發(fā)腫瘤細胞表達的,演進轉化-改變的小鼠腫瘤相關基因表達譜。綜合模擬分析揭示動物及人類機體組織或器官微環(huán)境演進轉化-改變,生物調(diào)控最初發(fā)生、受到機體組織或器官微環(huán)境生長增殖抑制生物調(diào)控的自發(fā)小原位癌細胞組織,轉化-改變成為適合在演進轉化-改變微環(huán)境中傳代增殖、具有生長增殖優(yōu)勢的腫瘤細胞克隆小原位癌細胞組織;在機體組織或器官演進微環(huán)境轉化-改變中,轉化-改變成為具有生長增殖優(yōu)勢人類腫瘤細胞克隆構成、主導腫瘤組織生長的腫瘤組織——獲得性腫瘤生物表達性狀、生物發(fā)生機制;由動物及人類機體微環(huán)境演進轉化-改變的血清相關分子腫瘤生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜,正負生物調(diào)控可移植自發(fā)腫瘤細胞表達的,演進轉化-改變的小鼠腫瘤相關基因表達譜,重要綜合分子腫瘤生物應答機制。
3.3.3 調(diào)出1.1.2制備生物實驗材料,創(chuàng)造TA2近交系小鼠乳腺癌MAC891移植瘤模型,在各自動物機體發(fā)生的不同成瘤生長時間腫瘤細胞組織的、光鏡形態(tài)學觀察數(shù)碼照相圖片資料;對比分析小鼠乳腺癌MAC891移植瘤株,在小鼠機體演進轉化-改變微環(huán)境成瘤生長的腫瘤細胞組織形態(tài),與小鼠乳腺癌MAC891細胞系體外培養(yǎng)模擬體內(nèi)成瘤生長的腫瘤細胞組織形態(tài)。
4.動物自發(fā)腫瘤生物檢測、監(jiān)控、預防、治療前瞻性綜合科學研究動物腫瘤模型實驗4.1模型生物機制特點4.1.1 依照第3項實驗綜合分析揭示的,近交系小鼠機體微環(huán)境演進轉化-改變血清相關分子腫瘤生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜,針對可移植自發(fā)腫瘤細胞表達的,重要綜合分子腫瘤生物調(diào)控機制。設計制造能夠有效檢測、監(jiān)測相關分子腫瘤生物蛋白質組表達譜靶標的生物芯片,實施可以相似的模擬生物檢測、監(jiān)測人類群體可能發(fā)生相似小原位癌細胞組織,針對具有肺癌、胃癌、乳腺癌、肝癌、胰腺癌、大腸癌、卵巢癌、前列腺癌、黑色素瘤……等,某種動物腫瘤高自然發(fā)病率的近交系小鼠的,分子腫瘤生物檢測、監(jiān)測動物腫瘤模型實驗。
4.1.2 依照第3項實驗綜合分析揭示的,近交系小鼠機體微環(huán)境生物調(diào)控拮抗-抑制肺癌、胃癌、乳腺癌、肝癌、胰腺癌、大腸癌、卵巢癌、前列腺癌、黑色素瘤……等,某種近交系小鼠自發(fā)腫瘤細胞組織生長增殖,針對自發(fā)腫瘤細胞組織表達的、正負腫瘤生物調(diào)控機制小鼠相關分子腫瘤蛋白質組表達譜,自發(fā)腫瘤細胞組織相應表達的、正負腫瘤生物應答機制小鼠腫瘤相關基因表達譜??寺∩镎{(diào)控抑制自發(fā)腫瘤細胞生長增殖的小鼠相關分子腫瘤蛋白質組表達譜靶標、在小鼠染色體上相應的cDNA基因,用原核或真核表達系統(tǒng)表達生產(chǎn)cDNA基因重組的、抑制自發(fā)腫瘤細胞生長增殖的鼠源蛋白;依照抑制自發(fā)腫瘤細胞生長增殖的小鼠腫瘤相關基因表達譜靶標,設計制造能夠有效拮抗-抑制自發(fā)腫瘤細胞組織生長增殖的生物抗腫瘤治療藥物;首先通過相應的體外培養(yǎng)自發(fā)腫瘤細胞生物調(diào)控抑制實驗,驗證抑制自發(fā)腫瘤細胞生長增殖的鼠源蛋白、生物抗腫瘤治療藥物,是否針對近交系小鼠自發(fā)腫瘤具有較好的生物抗腫瘤抑制作用;再將其實施應用于可以相似的模擬人類群體可能發(fā)生的小原位癌,針對某種動物腫瘤高自然發(fā)病率近交系小鼠,生物預防腫瘤干預治療能否延長成瘤潛伏期、生物抗腫瘤治療能否延長荷瘤動物生存壽命的動物腫瘤模型實驗。
4.2實驗動物模型分組及實驗實施方法應用TA2近交系小鼠,雌性,隨機分為4組,每組各24只動物。
4.2.1 TA2近交系小鼠,分子腫瘤生物檢測、監(jiān)測、生物預防腫瘤干預治療組小鼠飼養(yǎng)5月齡后每14d實施一次小鼠尾靜脈穿刺,抽取50~100μl抽取靜脈血,應用相應的生物芯片實施分子腫瘤生物檢測、監(jiān)測;抽血后尾靜脈注射、或腹腔注射,50~100μl含有被體外腫瘤細胞培養(yǎng)證實、有生物預防腫瘤干預治療作用的、基因重組抑制自發(fā)腫瘤細胞生長增殖的鼠源蛋白。小鼠飼養(yǎng)7月齡后每14d實施一次觸摸檢查是否發(fā)生乳腺癌,作記錄。在總共發(fā)現(xiàn)有6只小鼠發(fā)生乳腺癌時,乙醚麻醉采血處死這6只荷瘤小鼠,按照1.4.3法制取血清;實施血清相關分子腫瘤生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜檢測;手術剝離取出腫瘤組織,用卡尺測量腫瘤組織的長、短徑,稱重,作記錄;把6個腫瘤組織各自取一部分,各自應用相應的小鼠基因表達檢測生物芯片實施小鼠腫瘤相關基因表達譜檢測;把6個腫瘤組織各自置于固定液中固定;制作組織切片Giemsa染色、400×腫瘤細胞組織光鏡形態(tài)學觀察數(shù)碼照相圖片資料儲存?zhèn)溆?。再次總共發(fā)現(xiàn)有6只小鼠發(fā)生乳腺癌時,依照上法實施采血處死第二批、第三批、第四批發(fā)生腫瘤的6只小鼠。
4.2.2 TA2近交系小鼠,分子腫瘤生物檢測、監(jiān)測對照組小鼠飼養(yǎng)5月齡后每14d實施一次小鼠尾靜脈穿刺,抽取50~100μl抽取靜脈血,應用相應的生物芯片實施分子腫瘤生物檢測、監(jiān)測;抽血后尾靜脈注射、或腹腔注射50~100μl生理鹽水。小鼠飼養(yǎng)7月齡后每14d實施一次觸摸檢查是否發(fā)生乳腺癌,作記錄。在4.2.1組采血處死第一批發(fā)生腫瘤的6只小鼠時,乙醚麻醉采血處死本組記錄中首先發(fā)生腫瘤的6只荷瘤小鼠,按照1.4.3法制取血清;實施血清相關分子腫瘤生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜檢測;手術剝離取出腫瘤組織,用卡尺測量腫瘤組織的長、短徑,稱重,作記錄;把6個腫瘤組織各自取一部分,各自應用相應的小鼠基因表達檢測生物芯片實施小鼠腫瘤相關基因表達譜檢測;把6個腫瘤組織各自置于固定液中固定;制作組織切片Giemsa染色、400×腫瘤細胞組織光鏡形態(tài)學觀察數(shù)碼照相圖片資料儲存?zhèn)溆?。?.2.1組采血處死第二批、第三批、第四批發(fā)生腫瘤的6只小鼠時,依照上法實施采血處死本組第二批、第三批、第四批發(fā)生腫瘤的6只小鼠。
4.2.3 接種小鼠乳腺癌MAC891移植瘤模型,分子腫瘤生物檢測、監(jiān)測、生物抗腫瘤治療組把小鼠乳腺癌MAC891腫瘤組織制成的細胞懸液,按照5×106細胞/0.2ml/每只劑量,注射接種本組小鼠便于實驗觀察的、胸肋弧中央處皮下。在接種瘤株后,每3~7d實施一次小鼠尾靜脈穿刺,抽取50~100μl抽取靜脈血,應用相應的生物芯片實施分子腫瘤生物檢測、監(jiān)測;抽血后尾靜脈注射、或腹腔注射,50~100μl含有被體外腫瘤細胞培養(yǎng)證實、生物抗腫瘤的作用藥。在接種瘤株14d后,每2d實施一次觸摸檢查是否發(fā)生乳腺癌;在總共發(fā)現(xiàn)有6只小鼠發(fā)生乳腺癌時,乙醚麻醉采血處死這6只荷瘤小鼠,按照1.4.3法制取血清;實施血清相關分子腫瘤生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜檢測;手術剝離取出腫瘤組織,用卡尺測量腫瘤組織的長、短徑,稱重,作記錄;把6個腫瘤組織各自取一部分,各自應用相應的小鼠基因表達檢測生物芯片實施小鼠腫瘤相關基因表達譜檢測;把6個腫瘤組織各自置于固定液中固定;制作組織切片Giemsa染色、400×腫瘤細胞組織光鏡形態(tài)學觀察數(shù)碼照相圖片資料儲存?zhèn)溆?。再次總共發(fā)現(xiàn)有6只小鼠發(fā)生乳腺癌時,依照上法實施采血處死第二批、第三批、第四批發(fā)生腫瘤的6只小鼠。
4.2.4 接種小鼠乳腺癌MAC891移植瘤模型,分子腫瘤生物檢測、監(jiān)測對照組把小鼠乳腺癌MAC891腫瘤組織制成的細胞懸液,按照5×106細胞/0.2ml/每只劑量,注射接種本組小鼠便于實驗觀察的、胸肋弧中央處皮下。在接種瘤株后,每3~7d實施一次小鼠尾靜脈穿刺,抽取50~100μl抽取靜脈血,應用相應的生物芯片實施分子腫瘤生物檢測、監(jiān)測;抽血后尾靜脈注射、或腹腔注射50~100μl生理鹽水。在接種瘤株14d后,每2d實施一次觸摸檢查是否發(fā)生乳腺癌;在總共發(fā)現(xiàn)有6只小鼠發(fā)生乳腺癌時,乙醚麻醉采血處死這6只荷瘤小鼠,按照1.4.3法制取血清;實施血清相關分子腫瘤生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜檢測;手術剝離取出腫瘤組織,用卡尺測量腫瘤組織的長、短徑,稱重,作記錄;把6個腫瘤組織各自取一部分,各自應用相應的小鼠基因表達檢測生物芯片實施小鼠腫瘤相關基因表達譜檢測;把6個腫瘤組織各自置于固定液中固定;制作組織切片Giemsa染色、400×腫瘤細胞組織光鏡形態(tài)學觀察數(shù)碼照相圖片資料儲存?zhèn)溆谩T?.2.3組采血處死第二批、第三批、第四批發(fā)生腫瘤的6只小鼠時,依照上法實施采血處死本組第二批、第三批、第四批發(fā)生腫瘤的6只小鼠。
4.3實驗檢測/目的評定4.3.1 參照3.3實驗檢測/目的評定。通過分別針對4組動物腫瘤模型,動物自發(fā)生長腫瘤、動物自發(fā)生長腫瘤生物預防腫瘤干預治療,動物移植自發(fā)瘤株生長腫瘤、動物移植自發(fā)瘤株生長腫瘤生物抗腫瘤治療,實施連續(xù)血清相關分子腫瘤生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜檢測、監(jiān)測,實施自發(fā)生長腫瘤細胞、或移植自發(fā)瘤株生長腫瘤細胞小鼠腫瘤相關基因表達譜檢測,實施成瘤生長腫瘤細胞組織光鏡形態(tài)學觀察,作綜合對比分析;綜合評定、總結、需要作哪些進一步完善工作,實施可以被現(xiàn)代腫瘤實驗科學研究應用于相似的、綜合模擬人類群體可能發(fā)生的小原位癌細胞組織,針對動物自發(fā)腫瘤生物檢測、監(jiān)控、預防、治療前瞻性綜合科學研究動物腫瘤模型實驗。
5.建立臨床腫瘤病人的綜合人類腫瘤模型科學研究實驗平臺應用臨床腫瘤病人手術前,實施有益于腫瘤病人的血漿置換得到的、易于腫瘤病人腫瘤細胞組織生長增殖的血清,用腫瘤病人的血清體外培養(yǎng)手術獲得的腫瘤組織細胞,培養(yǎng)得到的臨床腫瘤病人的腫瘤細胞系;通過實施上述綜合腫瘤模型科學研究實驗方法,分別應用健康青年人的正常血清、腫瘤病人的血清,體外培養(yǎng)臨床腫瘤病人的腫瘤細胞系,實施相應的分子腫瘤生物檢測……建立臨床腫瘤病人的綜合人類腫瘤模型科學研究實驗平臺。
6.綜合科學研究討論6.1.1 創(chuàng)造上述能夠被現(xiàn)代腫瘤實驗科學研究應用于相似的、綜合模擬分析揭示人類群體可能發(fā)生的小原位癌細胞組織,針對某些種近交系小鼠自發(fā)實體惡性腫瘤與機體微環(huán)境演進轉化-改變,綜合分子腫瘤生物調(diào)控機制/綜合分子腫瘤生物應答機制/綜合分子腫瘤生物預防治療機制方法及藥物的,綜合動物腫瘤模型科學研究實驗平臺,進而再依靠綜合動物腫瘤模型科學研究實驗平臺建立,腫瘤生物檢測、監(jiān)控、預防、治療綜合動物腫瘤模型分子生物定量、定性分析數(shù)據(jù)庫,在理論與科學研究方法上,不存在不可實施的現(xiàn)代生物科學技術難點。小鼠的基因組、蛋白質組,與人類的基因組、蛋白質組具有80%~85%同源性。由于現(xiàn)代腫瘤實驗科學研究絕對不可以像應用實驗動物實施上述綜合腫瘤科學研究實驗那樣,把人應用于做上述那么全面、完整的綜合人類腫瘤模型科學研究實驗,而不能建立那么全面、完整的綜合人類腫瘤模型科學研究實驗平臺,不能建立那么全面、完整的腫瘤生物檢測、監(jiān)控、預防、治療綜合人類腫瘤模型分子生物定量、定性分析數(shù)據(jù)庫。因此,創(chuàng)造能夠相似的綜合模擬分析揭示人類群體可能發(fā)生的小原位癌細胞組織的,綜合分析揭示各種不同品系近交系小鼠的自發(fā)肺癌、胃癌、乳腺癌、肝癌、胰腺癌、大腸癌、卵巢癌、前列腺癌、黑色素瘤……等,各自不同的自發(fā)腫瘤與機體微環(huán)境演進轉化-改變,綜合分子腫瘤生物調(diào)控機制/綜合分子腫瘤生物應答機制/綜合分子腫瘤生物預防治療機制方法及藥物的,各種不同綜合動物腫瘤模型科學研究實驗平臺,進而再建立腫瘤生物檢測、監(jiān)控、預防、治療綜合動物腫瘤模型分子生物定量、定性分析數(shù)據(jù)庫;可以被現(xiàn)代腫瘤實驗科學研究應用于,相似的綜合模擬分析揭示在人類群體自然臨床發(fā)生的肺癌、胃癌、乳腺癌、肝癌、胰腺癌、大腸癌、卵巢癌、前列腺癌、黑色素瘤……等,相關人類腫瘤與機體微環(huán)境演進轉化-改變,綜合分子腫瘤生物調(diào)控機制/綜合分子腫瘤生物應答機制/綜合分子腫瘤生物預防治療機制——獲得性腫瘤生物表達性狀、生物發(fā)生機制。提供相關綜合腫瘤模型科學研究實驗依據(jù),提供切實可以實施的綜合腫瘤生物醫(yī)學科學研究實驗方法。針對現(xiàn)代腫瘤實驗科學研究具有重大科學研究價值!6.1.2 建立綜合動物腫瘤模型科學研究實驗平臺,和腫瘤生物檢測、監(jiān)控、預防、治療綜合動物腫瘤模型分子生物定量、定性分析數(shù)據(jù)庫。與應用上述綜合腫瘤科學研究實驗方法,通過建立人類腫瘤裸小鼠可移植瘤模型、實施人類腫瘤細胞體外培養(yǎng)……等,相應的綜合人類腫瘤模型科學研究實驗,而能夠建立的,綜合人類腫瘤模型科學研究實驗平臺,和綜合人類腫瘤模型分子生物定量、定性分析數(shù)據(jù)庫。與未來可以應用臨床腫瘤病人手術前,實施有益于腫瘤病人的血漿置換得到的、易于腫瘤病人腫瘤細胞組織生長增殖的血清,用腫瘤病人的血清體外培養(yǎng)手術獲得的腫瘤組織細胞,培養(yǎng)得到的臨床腫瘤病人的腫瘤細胞系;通過實施上述綜合腫瘤模型科學研究實驗方法,分別應用健康青年人的正常血清、腫瘤病人的血清,體外培養(yǎng)臨床腫瘤病人的腫瘤細胞系,實施相應的分子腫瘤生物檢測……而能夠建立臨床腫瘤病人的,綜合人類腫瘤模型科學研究實驗平臺,和綜合人類腫瘤模型分子生物定量、定性分析數(shù)據(jù)庫。與未來可以通過針對大樣本臨床腫瘤病例實施分子腫瘤生物檢測、監(jiān)測得到的數(shù)據(jù),而能夠建立臨床分子腫瘤生物檢測、監(jiān)測的,綜合人類腫瘤分子生物定量、定性分析數(shù)據(jù)庫。建立這三個綜合腫瘤模型科學研究實驗平臺、四個腫瘤分子生物定量、定性分析數(shù)據(jù)庫將能夠為現(xiàn)代分子腫瘤生物檢測科學技術,正確提供今后可以有效檢測出當今人類群體臨床自然發(fā)病率最高的肺癌、胃癌、大腸癌、乳腺癌、肝癌……等,最初發(fā)生、受到機體組織或器官微環(huán)境生長增殖抑制生物調(diào)控,傳代增殖106~108腫瘤細胞、尚不能對腫瘤發(fā)生位置做出精確定位的、某些種人類小原位癌細胞組織的,人類相關分子腫瘤生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜;正確提供監(jiān)控人類群體發(fā)生的小原位癌細胞組織是否能夠轉化成為致死性占位實體惡性腫瘤,可有效監(jiān)測人類群體發(fā)生小原位癌細胞組織發(fā)生惡性轉化的,人類相關分子腫瘤生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜;設計制造能夠有效檢測、監(jiān)測小原位癌細胞組織人類相關分子腫瘤生物蛋白質組表達譜靶標的生物芯片,應用于針對人類群體可能發(fā)生的小原位癌細胞組織的分子腫瘤生物檢測、監(jiān)測。將能夠為現(xiàn)代醫(yī)學今后能夠生物預防當今人類群體臨床自然發(fā)病率最高的肺癌、胃癌、大腸癌、乳腺癌、肝癌……等,某些種傳代增殖106~108腫瘤細胞、尚不能對腫瘤發(fā)生位置做出精確定位的人類小原位癌細胞組織,轉化成為致死性占位實體惡性腫瘤;將能夠為現(xiàn)代醫(yī)學今后有效長期緩解治療某些種已經(jīng)發(fā)生腫瘤轉移的中/晚期致死性實體惡性腫瘤;正確提供能夠拮抗-抑制人類腫瘤細胞組織生長增殖的,人類相關分子腫瘤蛋白質組表達譜、人類腫瘤相關基因表達譜;依照拮抗-抑制人類腫瘤細胞組織生長增殖的相關蛋白質靶標、相關基因靶標,設計制造能夠有效拮抗-抑制人類腫瘤細胞組織生長增殖的藥物,應用于臨床生物預防癌癥、臨床抗腫瘤生物治療。而能夠在人類致死性占位實體惡性腫瘤基礎醫(yī)學科學研究方面/臨床醫(yī)學科學研究方面/醫(yī)藥學科學研究方面,取得腫瘤生物檢測、監(jiān)控、預防、治療綜合科學研究突破。
權利要求
1.一種腫瘤模型與方法,其特征在于制取機體生長出動物腫瘤(1)動物(2)血液制品(3)、機體沒有生長動物腫瘤(1)同種動物(2)血液制品(4),分別配制含有血液制品(3)細胞培養(yǎng)基(5)、含有血液制品(4)細胞培養(yǎng)基(5)分別培養(yǎng)動物腫瘤(1)細胞。
2.一種腫瘤模型與方法,其特征在于制取機體生長出動物腫瘤(1)動物(2)血液制品(3)、機體沒有生長動物腫瘤(1)同種動物(2)血液制品(4),分別配制含有血液制品(3)細胞培養(yǎng)基(5)、含有血液制品(4)細胞培養(yǎng)基(5)分別培養(yǎng)動物腫瘤(1)細胞,通過分別對血液制品(3)、血液制品(4)培養(yǎng)動物腫瘤(1)細胞實施基因表達檢測(6)對比分析,揭示腫瘤發(fā)生機制、治療機制、方法及藥物。
3.一種腫瘤模型與方法,其特征在于制取機體生長出動物腫瘤(1)動物(2)的血液制品(3)、機體沒有生長動物腫瘤(1)同種動物(2)血液制品(4),通過分別對血液制品(3)、血液制品(4)實施生物質譜檢測(7)對比分析,揭示腫瘤發(fā)生機制、治療機制、方法及藥物。
4.根據(jù)權利要求1至3中所述的腫瘤模型與方法,其特征在于動物(2)是近交系動物(8)。
5.根據(jù)權利要求1至4中所述的腫瘤模型與方法,其特征在于動物(2)是近交系小鼠(9)。
6.根據(jù)權利要求1至5中所述的腫瘤模型與方法,其特征在于動物(2)是具有高腫瘤自然發(fā)病率的近交系小鼠(10)。
7.根據(jù)權利要求1至6中所述的腫瘤模型與方法,其特征在于血液制品(3)、血液制品(4)是動物血清(11)。
8.根據(jù)權利要求1至7中所述的腫瘤模型與方法,其特征在于動物腫瘤(1)是人類腫瘤(12)、培養(yǎng)動物腫瘤(1)細胞是培養(yǎng)人類腫瘤(12)細胞。
9.根據(jù)權利要求1、2、3、8中所述的腫瘤模型與方法,其特征在于血液制品(3)是腫瘤病人的血漿(13)、血液制品(4)是健康人的血漿(14)。
10.根據(jù)權利要求1、2、3、8中所述的腫瘤模型與方法,其特征在于血液制品(3)是腫瘤病人的血清(15)、血液制品(4)是健康人的血清(16)。
全文摘要
本發(fā)明名稱為腫瘤模型與方法,涉及生命科學領域、及醫(yī)藥領域。提供了一個能夠被應用于揭示人類實體惡性腫瘤與機體組織或器官微環(huán)境演進轉化-改變綜合分子腫瘤生物調(diào)控機制、綜合分子腫瘤生物應答機制、綜合分子腫瘤生物預防治療機制方法及藥物的,腫瘤模型與方法,綜合腫瘤模型科學研究實驗平臺。能夠揭示檢測、監(jiān)測人類小原位癌細胞組織的,人類相關分子腫瘤蛋白質組表達譜靶標;揭示拮抗-抑制人類腫瘤細胞組織生長增殖的,人類相關分子腫瘤蛋白質組表達譜靶標、腫瘤相關人類基因表達譜靶標。
文檔編號C12Q1/68GK1857740SQ20061007251
公開日2006年11月8日 申請日期2006年4月11日 優(yōu)先權日2006年4月11日
發(fā)明者葉新新 申請人:葉新新