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      家蠶基因工程植酸酶工業(yè)化感染控制方法

      文檔序號(hào):591899閱讀:273來(lái)源:國(guó)知局
      專(zhuān)利名稱(chēng):家蠶基因工程植酸酶工業(yè)化感染控制方法
      技術(shù)領(lǐng)域
      本發(fā)明屬于轉(zhuǎn)基因物質(zhì),尤其是畜禽用轉(zhuǎn)基因酶制劑制造領(lǐng)域。
      中國(guó)專(zhuān)利CN99103564公開(kāi)了一種應(yīng)用重組BmNPV載體-家蠶宿主表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)植酸酶的基因工程方法,用植酸酶基因替換家蠶核型多角體病毒基因組中的多角體蛋白基因,并使其處于多角體蛋白基因啟動(dòng)子的控制下,再將此重組質(zhì)粒與野生型BmNPV-DNA共轉(zhuǎn)染于家蠶細(xì)胞,通過(guò)體內(nèi)同源重組得到帶有外源植酸酶基因的重組病毒,再利用多角體蛋白基因的啟動(dòng)子啟動(dòng)植酸酶基因,并將此重組家蠶核型多角體感染家蠶,在蠶體內(nèi)繁殖產(chǎn)生目標(biāo)物植酸酶蛋白。但如何將家蠶基因工程植酸酶生產(chǎn)在較大的工業(yè)化程度上實(shí)現(xiàn),或者更具體地說(shuō)在畜禽用轉(zhuǎn)基因酶制劑工業(yè)中高產(chǎn)量、低成本的生產(chǎn)出具有商業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的產(chǎn)品仍是需要解決的問(wèn)題。
      本發(fā)明的目的是,研究一種家蠶基因工程植酸酶工業(yè)化感染控制方法,使之能改善現(xiàn)有技術(shù)的不足,使蠶體取得較高且穩(wěn)定的目標(biāo)植酸酶表達(dá)量。為低成本、批量化生產(chǎn)畜禽飼料用基因工程植酸酶商品化制劑創(chuàng)立有利條件。
      本發(fā)明的目的使通過(guò)如下的方法實(shí)現(xiàn)的。
      家蠶基因工程植酸酶工業(yè)化感染控制方法,應(yīng)用重組BmNPV載體-家蠶宿主表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)植酸酶,用植酸酶基因替換家蠶核型多角體病毒基因組中的多角體蛋白基因,并使其處于多角體蛋白基因啟動(dòng)子的控制下,再將此重組質(zhì)粒與野生型BmNPV-DNA共轉(zhuǎn)染于家蠶細(xì)胞,通過(guò)體內(nèi)同源重組得到帶有外源植酸酶基因的重組病毒,再利用多角體蛋白基因的啟動(dòng)子啟動(dòng)植酸酶基因,并將此重組家蠶核型多角體感染家蠶,在蠶體內(nèi)繁殖產(chǎn)生目標(biāo)物植酸酶蛋白,以以下的手段實(shí)現(xiàn)病毒的工業(yè)化感染及生長(zhǎng)控制,A)擴(kuò)增的重組BmNPV滴度標(biāo)定達(dá)106PFU;注射接種深度為皮下2mm;B)蛹體用乙醇浸泡,蠶幼蟲(chóng)用70%乙醇棉球體表消毒;接種后蠶體噴灑氯霉素;C)接種后嚴(yán)格控制溫度在25±1℃;一般收蠶時(shí)間病蠶接種后4-5天;病蛹接種后5-6天。
      采用本發(fā)明的方法,與常規(guī)方法相比,在較小的生產(chǎn)成本下可保證較大批量的蛹(蠶)獲得平均較高的酶活量,從而使基因工程植酸酶制劑能在較大的工業(yè)化程度上實(shí)現(xiàn)商品化。
      權(quán)利要求
      1.家蠶基因工程植酸酶工業(yè)化感染控制方法,應(yīng)用重組BmNPV載體-家蠶宿主表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)植酸酶,用植酸酶基因替換家蠶核型多角體病毒基因組中的多角體蛋白基因,并使其處于多角體蛋白基因啟動(dòng)子的控制下,再將此重組質(zhì)粒與野生型BmNPV-DNA共轉(zhuǎn)染于家蠶細(xì)胞,通過(guò)體內(nèi)同源重組得到帶有外源植酸酶基因的重組病毒,再利用多角體蛋白基因的啟動(dòng)子啟動(dòng)植酸酶基因,并將此重組家蠶核型多角體感染家蠶,在蠶體內(nèi)繁殖產(chǎn)生目標(biāo)物植酸酶蛋白,其特征在于,以以下的手段實(shí)現(xiàn)病毒的工業(yè)化感染及生長(zhǎng)控制,A)擴(kuò)增的重組BmNPV滴度標(biāo)定達(dá)106PFU;注射接種深度為皮下2mm;B)蛹體用乙醇浸泡,蠶幼蟲(chóng)用70%乙醇棉球體表消毒;接種后蠶體噴灑氯霉素;C)接種后嚴(yán)格控制溫度在25±1℃;一般收蠶時(shí)間病蠶接種后4-5天;病蛹接種后5-6天為宜。
      2.根據(jù)權(quán)利要求1所述之家蠶基因工程植酸酶工業(yè)化感染控制方法,其特征在于,所述擴(kuò)增的重組BmNPV滴度預(yù)實(shí)驗(yàn)表達(dá)量蛹≥300U/克,蠶幼蟲(chóng)≥200U/克。
      3.根據(jù)權(quán)利要求1所述之家蠶基因工程植酸酶工業(yè)化感染控制方法,其特征在于,所述接種注射量蛹2-3μl,蠶幼蟲(chóng)3-5μl。
      4.根據(jù)權(quán)利要求1所述之家蠶基因工程植酸酶工業(yè)化感染控制方法,其特征在于,蛹體用70%的乙醇浸泡30秒;蠶幼蟲(chóng)用70%乙醇棉球體表消毒,氯霉素溶液濃度為600-800U/ml,每48小時(shí)噴灑一次。
      全文摘要
      本發(fā)明涉及一種家蠶基因工程植酸酶工業(yè)化感染控制方法,應(yīng)用重組BMNPV載體-家蠶宿主表達(dá)系統(tǒng),在蠶體內(nèi)繁殖產(chǎn)生目標(biāo)物植酸酶蛋白,以以下的手段實(shí)現(xiàn)病毒的工業(yè)化感染及生長(zhǎng)控制:A)擴(kuò)增的重組BmNPV滴度標(biāo)定達(dá)10
      文檔編號(hào)C12N15/866GK1384191SQ0110739
      公開(kāi)日2002年12月11日 申請(qǐng)日期2001年4月30日 優(yōu)先權(quán)日2001年4月30日
      發(fā)明者秦儉, 陳英, 楊忠生 申請(qǐng)人:四川華神集團(tuán)股份有限公司
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