專利名稱：防霉型大腸菌群培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種防霉型大腸菌群培養(yǎng)基。
大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。大腸菌群在自然界分布較廣，多存在于溫血動物糞便、人類經(jīng)?；顒拥膱鏊约坝屑S便污染的地方，人、畜糞便對外環(huán)境的污染是大腸菌群在自然界存在的主要原因。
大腸菌群是作為糞便污染指標(biāo)提出來的，主要是以該菌群的檢出情況來表示食品中有否糞便污染。大腸菌群數(shù)的高低，表明了糞便污染的程度。在衛(wèi)生檢驗中，它是評價產(chǎn)品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)和必檢項目。
目前，對大腸菌群的檢測普遍使用多管發(fā)酵法。其檢測原理是利用大腸菌群在生長繁殖過程中分解乳糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，通過溴甲酚紫的顏色改變和發(fā)酵管中是否產(chǎn)氣來推斷樣品中是否含有大腸菌群。使用發(fā)酵法檢測大腸菌群需要配制大量培養(yǎng)基，檢測過程需要經(jīng)過初發(fā)酵、分離培養(yǎng)、復(fù)發(fā)酵等步驟，一般需要3天以上才能報告結(jié)果。而且，檢驗步驟、抑菌劑、產(chǎn)氣量、pH值等因素均直接影響檢測結(jié)果。特別是當(dāng)樣品數(shù)量較大時，發(fā)酵管的制作和洗刷給實際工作帶來很大困難。
隨著社會的發(fā)展，食品、飲料、衛(wèi)生用品的種類越來越多，衛(wèi)生監(jiān)督監(jiān)測的任務(wù)越來越大，對快速檢驗方法的需求更加迫切。因此，為了克服發(fā)酵法的這些缺點，找到一種操作簡單、檢驗快速、靈敏度高和特異性強的檢測大腸菌群的方法，滿足實際工作中的需要，出現(xiàn)了系列大腸菌群快檢紙片。它可用于食(飲)具、食品、生活飲用水、飲用天然礦泉水、瓶裝飲用純凈水(總)大腸菌群和生活飲用水中糞大腸菌群的檢驗。以上兩種方法中共同存在的問題是在進(jìn)行大腸菌群的檢驗過程中，無論是發(fā)酵法，還是紙片法，都存在霉菌的污染問題。由于霉菌廣泛存在于自然界，對營養(yǎng)條件要求不高，因此，霉菌污染是細(xì)菌檢驗過程中的主要問題，大量的霉菌污染常常造成細(xì)菌檢驗工作的失敗。遍查有關(guān)大腸菌群培養(yǎng)基文獻(xiàn)，尚未發(fā)現(xiàn)有防霉型大腸菌群培養(yǎng)基。
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足提供一種能夠有效地抑制所有霉菌的生長，同時對細(xì)菌的生長沒有任何影響的防霉型大腸菌群培養(yǎng)基。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的防霉型大腸菌群培養(yǎng)基其組分及重量含量為蛋白胨0.50％～10.00％；乳糖 1.00％～15.00％；氯化鈉0.08％～3.00％；磷酸氫二鉀0.25％～5.00％；3號膽鹽 0.10％～2.00％；Delvocid抑制酶0.01％～2.00％；1.6％溴甲酚紫 0.50％～9.00％；TTC 0.10％～5.00％；瓊脂 0,05％～1.00％；蒸餾水50.00％～96.00％。
本發(fā)明的一種改進(jìn)，防霉型大腸菌群培養(yǎng)基其組分及重量含量為蛋白胨1％～9％；
乳糖 2.5％～15.00％；氯化鈉0.08％～2.5％；磷酸氫二鉀0.25％～4.00％；3號膽鹽 0.50％～1.5％；Delvocid抑制酶0.01％～1.5％；1.6％溴甲酚紫 1.0％～9.00％；TTC 0.25％～4.00％；瓊脂 0.1％～0.85％；蒸餾水60.00％～90.00％。
本發(fā)明的最佳方案為蛋白胨1.70％；乳糖 2.55％；氯化鈉0.08％；磷酸氫二鉀0.25％；3號膽鹽 0.76％；Delvocid抑制酶0.01％；1.6％溴甲酚紫 8.49％；TTC 0.42％；瓊脂 0.85％；蒸餾水84.89％。
下面是普通大腸桿菌培養(yǎng)基與本發(fā)明培養(yǎng)基進(jìn)行的對比試驗防霉型大腸菌群培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基細(xì)菌生長試驗的比較
防霉型大腸菌群培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基霉菌生長試驗的比較
通過比較可以發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明防霉型大腸菌群培養(yǎng)基能夠有效地抑制所有霉菌的生長，同時對細(xì)菌的生長沒有任何影響。大大彌補了現(xiàn)有大腸菌群培養(yǎng)基由于大量的霉菌污染常常造成細(xì)菌檢驗工作失敗的不足。由于Delvocid抑制酶通常使用在食品添加劑領(lǐng)域，將其應(yīng)用在細(xì)菌培養(yǎng)基中尚屬首次。通過Delvocid抑制酶與細(xì)菌培養(yǎng)基其他祖墳組合后，出現(xiàn)了既能有效地抑制所有霉菌的生長又不影響細(xì)菌生長的良好效果。故是對現(xiàn)有大腸菌群培養(yǎng)基組分上的一次大的改進(jìn)。
實施例1蛋白胨 7.68％乳糖12.80％氯化鈉 2.56％磷酸氫二鉀(K2HPO4.3H2O) 2.05％3號膽鹽 1.15％Delvocid抑制酶 0.06％1.6％溴甲酚紫 8.96％TTC 0.64％瓊脂0.06％蒸餾水 64.04％實施例2蛋白胨 1.70％乳糖2.55％氯化鈉 0.08％磷酸氫二鉀(K2HPO4.3H2O) 0.25％3號膽鹽 0.76％Delvocid抑制酶 0.01％1.6％溴甲酚紫 8.49％TTC 0.42％瓊脂0.85％蒸餾水 84.89％實施例3蛋白胨 0.50％乳糖1.00％氯化鈉 0.25％磷酸氫二鉀(K2HPO4.3H2O) 5.00％3號膽鹽 2.00％Delvocid抑制酶 2.00％1.6％溴甲酚紫 10.00％TTC 5.00％瓊脂1.00％蒸餾水 73.25％實施例4蛋白胨 10.00％乳糖15.00％氯化鈉 3.00％磷酸氫二鉀(K2HPO4.3H2O) 2.50％3號膽鹽 1.50％Delvocid抑制酶 1.00％1.6％溴甲酚紫 9.00％
TTC 1.00％瓊脂 0.10％蒸餾水 56.90％實施例5蛋白胨 5.00％乳糖 10.00％氯化鈉 1.00％磷酸氫二鉀(K2HPO4.3H2O) 2.50％3號膽鹽 1.00％Delvocid抑制酶 1.00％1.6％溴甲酚紫5.00％TTC 2.50％瓊脂 0.50％蒸餾水 71.50％實施例6蛋白胨 2.50％乳糖 7.50％氯化鈉 1.50％磷酸氫二鉀(K2HPO4.3H2O) 3.00％3號膽鹽 1.00％Delvocid抑制酶 0.50％1.6％溴甲酚紫4.50％TTC 2.00％瓊脂 0.20％蒸餾水 77.30％實施例7蛋白胨 7.50％乳糖 7.50％氯化鈉 2.00％磷酸氫二鉀(K2HPO4.3H2O) 1.00％3號膽鹽 1.50％Delvocid抑制酶 1.00％1.6％溴甲酚紫3.00％TTC 3.00％瓊脂 0.50％蒸餾水 73.00％實施例8蛋白胨 3.00％乳糖 12.50％氯化鈉 1.50％磷酸氫二鉀(K2HPO4.3H2O) 2.00％3號膽鹽 2.00％Delvocid抑制酶 2.00％1.6％溴甲酚紫0.5％
TTC 0.1％瓊脂 0.1％蒸餾水76.30％制法上述成分除溴甲酚紫和TTC外，其它成分加熱溶解，冷卻后用5mol/L的NaOH調(diào)pH至7.0-7.6，再按量加入溴甲酚紫，混勻，116℃ 15min滅菌。冷至60℃時按量加入TTC溶液即可。所述的Delvocid抑制酶采用荷蘭產(chǎn)品；TTC為紅四氮唑。
紙片的使用方法液體樣品按國家標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行，吸取3個10ml分別涂布于三張大紙片，再吸取1∶10、1∶100稀釋液各3個1ml，分別涂布于三張小紙片，而后用手輕輕壓平，置36±1℃溫箱，培養(yǎng)18～24h觀察結(jié)果。
結(jié)果判定1、紙片上出現(xiàn)紫紅色菌落，其周圍有黃圈者為陽性。
2、紙片為一種顏色，無菌落生長者為陰性。
根據(jù)紙片的陽性片數(shù)，查閱大腸菌群MPN檢索表報告之。
權(quán)利要求
1.防霉型大腸菌群培養(yǎng)基其組分及重量含量為蛋白胨 0.50％～10.00％；乳糖 1.00％～15.00％；氯化鈉 0.08％～3.00％；磷酸氫二鉀 0.25％～5.00％；3號膽鹽 0.10％～2.00％；Delvocid抑制酶 0.01％～2.00％；1.6％溴甲酚紫0.50％～9.00％；TTC 0.10％～5.00％；瓊脂 0,05％～1.00％；蒸餾水 50.00％～96.00％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的防霉型大腸菌群培養(yǎng)基其組分及重量含量為蛋白胨1％～9％；乳糖 2.5％～15.00％；氯化鈉0.08％～2.5％；磷酸氫二鉀0.25％～4.00％；3號膽鹽 0.50％～1.5％；Delvocid抑制酶0.01％～1.5％；1.6％溴甲酚紫 1.0％～9.00％；TTC 0.25％～4.00％；瓊脂 0.1％～0.85％；蒸餾水60.00％～90.00％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的防霉型大腸菌群培養(yǎng)基其組分及重量含量為蛋白胨 1.70％；乳糖2.55％；氯化鈉 0.08％；磷酸氫二鉀 0.25％；3號膽鹽 0.76％；Delvocid抑制酶 0.01％；1.6％溴甲酚紫 8.49％；TTC 0.42％；瓊脂0.85％；蒸餾水 84.89％。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種防霉型大腸菌群培養(yǎng)基。它由下列組分組成蛋白胨；乳糖；氯化鈉；磷酸氫二鉀(K
文檔編號C12Q1/10GK1483835SQ0214237
公開日2004年3月24日 申請日期2002年9月22日 優(yōu)先權(quán)日2002年9月22日
發(fā)明者申志新 申請人:申志新