專利名稱：羊膜3d基質(zhì)組織工程支架羊膜平鋪固定完全脫細(xì)胞方法及裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及制造人體器官和組織的組織工程領(lǐng)域，特別是一種羊膜3D基質(zhì)組織工程支架羊膜平鋪固定完全脫細(xì)胞方法及裝置。
背景技術(shù)：
組織工程是用生物工程學(xué)方法制作人體組織和器官的科學(xué)，其中支架(供細(xì)胞生長(zhǎng)的細(xì)胞外基質(zhì))是組織工程方法的一個(gè)重要方面。目前已經(jīng)出現(xiàn)的組織工程支架除化學(xué)合成支架、生物提取物外，還有自然衍發(fā)基質(zhì)(如用尸體的皮膚、闊筋膜、頭發(fā)、羊膜制作支架)。對(duì)于自然衍發(fā)基質(zhì)(3D基質(zhì))，它含有細(xì)胞所需要的各種整合素生物信息，因此用自然衍發(fā)基質(zhì)制作組織工程支架是最佳方案。研究證明在這些自然衍發(fā)基質(zhì)中，羊膜是公認(rèn)的抗原性很低的材料，且來(lái)源廣泛，成本幾乎是零。現(xiàn)有技術(shù)中，中國(guó)專利申請(qǐng)021163057公開(kāi)了一種羊膜完全脫細(xì)胞的方法。該方法用胰蛋白酶溶液浸泡羊膜；然后固定羊膜進(jìn)行攪拌沖洗，將羊膜上皮細(xì)胞層的上皮細(xì)胞和纖維母細(xì)胞層的纖維母細(xì)胞沖掉。它是在不使用氨水等破壞生物信息物質(zhì)的條件下，將羊膜上的所有細(xì)胞都脫掉，因此可以保留富含各種整合素生物信息的羊膜基質(zhì)，用作3D組織工程支架，有利于細(xì)胞外不同的生物信息傳導(dǎo)到細(xì)胞核，從而支配細(xì)胞的生存、分裂、增殖、功能、衰老和細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)。但是，該方法對(duì)于如何固定羊膜沒(méi)有找到更好的方法，導(dǎo)致脫細(xì)胞的效率受到影響。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)的問(wèn)題，而提供一種羊膜3D基質(zhì)組織工程支架羊膜平鋪固定完全脫細(xì)胞方法及裝置。該方法通過(guò)胰蛋白酶溶液浸泡與平鋪固定羊膜，并通過(guò)浸泡溶液產(chǎn)生漩渦水流更有效地作用于羊膜，而使羊膜表面和內(nèi)部的所有細(xì)胞都被脫掉。
本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是羊膜3D基質(zhì)組織工程支架羊膜平鋪固定完全脫細(xì)胞方法，其特征是包括以下步驟完成(1)取羊膜，用胰蛋白酶溶液浸泡；(2)將羊膜平鋪懸空夾放在支架上；(3)開(kāi)動(dòng)位于支架下方的旋轉(zhuǎn)體，使胰蛋白酶液體產(chǎn)生旋渦進(jìn)行沖洗，直至將羊膜上皮細(xì)胞層的上皮細(xì)胞和纖維母細(xì)胞層的纖維母細(xì)胞全部沖掉。
本發(fā)明專用于羊膜3D基質(zhì)組織工程支架羊膜平鋪固定完全脫細(xì)胞方法的裝置，它包括裝有液體的容器和旋轉(zhuǎn)體。其特征是容器底部固定有一個(gè)或多個(gè)用來(lái)平鋪懸空夾放羊膜的支架，而旋轉(zhuǎn)體對(duì)應(yīng)安裝在每個(gè)支架的下方。
有益效果本發(fā)明提供的羊膜3D基質(zhì)組織工程支架羊膜平鋪固定完全脫細(xì)胞方法及裝置，由于在脫細(xì)胞過(guò)程中，經(jīng)過(guò)浸泡的羊膜平鋪固定在支架上，半透膜的羊膜在攪動(dòng)的水流作用下使上皮細(xì)胞層的上皮細(xì)胞和纖維母細(xì)胞層的纖維母細(xì)胞隨著水流而脫下。其中，旋轉(zhuǎn)的水流漩渦對(duì)羊膜的下表層產(chǎn)生湍流沖洗效果，而對(duì)羊膜的上表層在負(fù)壓下產(chǎn)生層流沖洗效果，部分液體從羊膜中穿過(guò)，從而得到完全去除了上皮細(xì)胞層的上皮細(xì)胞和纖維母細(xì)胞層的纖維母細(xì)胞的羊膜。本發(fā)明的方法簡(jiǎn)單，成本低，便于批量生產(chǎn)，為實(shí)現(xiàn)組織工程大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化創(chuàng)造了


圖1專用裝置示意圖主視圖；圖2專用裝置示意圖俯視圖。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明羊膜3D基質(zhì)組織工程支架羊膜平鋪固定完全脫細(xì)胞方法通過(guò)以下步驟完成(1)取羊膜，用0.2-5％的胰蛋白酶溶液，在37℃溫度下浸泡羊膜20-30分鐘；(2)將羊膜裁剪成適合大小，然后平鋪懸空夾放在支架上；(3)開(kāi)動(dòng)位于支架下方的旋轉(zhuǎn)體，使胰蛋白酶液體產(chǎn)生旋渦進(jìn)行沖洗，直至將羊膜上皮細(xì)胞層的上皮細(xì)胞和纖維母細(xì)胞層的纖維母細(xì)胞全部沖掉。
本發(fā)明也可以通過(guò)以下步驟完成(1)取羊膜，用0.2-5％的胰蛋白酶溶液，在37℃溫度下浸泡羊膜20-30分鐘；(2)將羊膜裁剪成適合大小，然后平鋪懸空夾放在支架上；(3)開(kāi)動(dòng)位于支架下方的旋轉(zhuǎn)體，使胰蛋白酶液體產(chǎn)生漩渦進(jìn)行沖洗；(4)關(guān)閉旋轉(zhuǎn)體，取下支架上的羊膜，將其翻轉(zhuǎn)后仍?shī)A放在支架上；(5)繼續(xù)開(kāi)動(dòng)支架下方的旋轉(zhuǎn)體，使胰蛋白酶液體產(chǎn)生旋渦進(jìn)行沖洗，直至將羊膜上皮細(xì)胞層的上皮細(xì)胞和纖維母細(xì)胞層的纖維母細(xì)胞全部沖掉。
沖洗可以在浸泡過(guò)程中開(kāi)始進(jìn)行，或在浸泡后再開(kāi)始進(jìn)行。
本發(fā)明的專用裝置，由裝有液體2的容器1和旋轉(zhuǎn)體8等組成。它是在容器的底部固定一個(gè)或多個(gè)用來(lái)平鋪懸空夾放羊膜的支架6，旋轉(zhuǎn)體可以是葉輪或磁棒，對(duì)應(yīng)安裝在每個(gè)支架的下方。接通電源即可旋轉(zhuǎn)工作。
支架則由支撐腿7、內(nèi)夾環(huán)4和外夾環(huán)3組成。其中，內(nèi)夾環(huán)固定在三個(gè)支撐腿的頂部，外夾環(huán)套于內(nèi)夾環(huán)外，二者之間留有可夾放并固定羊膜5的間隙。為此，也可將外夾環(huán)制成可調(diào)節(jié)式，以保證得到合適的間隙。
權(quán)利要求
1一種羊膜3D基質(zhì)組織工程支架羊膜平鋪固定完全脫細(xì)胞方法，其特征在于包括以下步驟(1)取羊膜，用胰蛋白酶溶液浸泡；(2)將羊膜平鋪懸空夾放在支架上；(3)開(kāi)動(dòng)位于支架下方的旋轉(zhuǎn)體，使胰蛋白酶液體產(chǎn)生旋渦進(jìn)行沖洗，直至將羊膜上皮細(xì)胞層的上皮細(xì)胞和纖維母細(xì)胞層的纖維母細(xì)胞全部沖掉。
2按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于(1)取羊膜，用胰蛋白酶溶液浸泡；(2)將羊膜平鋪懸空夾放在支架上；(3)開(kāi)動(dòng)位于支架下方的旋轉(zhuǎn)體，使胰蛋白酶液體產(chǎn)生旋渦進(jìn)行沖洗；(4)關(guān)閉旋轉(zhuǎn)體，取下支架上的羊膜，將其翻轉(zhuǎn)后仍?shī)A放在支架上；(5)繼續(xù)開(kāi)動(dòng)支架下方的旋轉(zhuǎn)體，使胰蛋白酶液體產(chǎn)生旋渦進(jìn)行沖洗，直至將羊膜上皮細(xì)胞層的上皮細(xì)胞和纖維母細(xì)胞層的纖維母細(xì)胞全部沖掉。
3按照權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于沖洗可以在浸泡過(guò)程中開(kāi)始，或浸泡后開(kāi)始。
4專用于權(quán)利要求1方法的裝置，它包括裝有液體的容器和旋轉(zhuǎn)體，其特征在于所說(shuō)的容器底部固定有一個(gè)或多個(gè)用來(lái)平鋪懸空夾放羊膜的支架；所說(shuō)的旋轉(zhuǎn)體對(duì)應(yīng)安裝在每個(gè)支架的下方。
5按照權(quán)利要求4所說(shuō)的裝置，其特征在于所說(shuō)的支架由支撐腿、內(nèi)夾環(huán)和外夾環(huán)組成；所說(shuō)的內(nèi)夾環(huán)固定在支撐腿的頂部，外夾環(huán)套于內(nèi)夾環(huán)外，二者之間留有可夾放并固定羊膜的間隙。
6按照權(quán)利要求4或5所說(shuō)的裝置，其特征在于所說(shuō)的旋轉(zhuǎn)體是葉輪或磁棒。
全文摘要
本發(fā)明羊膜3D基質(zhì)組織工程支架羊膜平鋪固定完全脫細(xì)胞方法及裝置，通過(guò)取羊膜用胰蛋白酶溶液浸泡，將羊膜平鋪懸空夾放在支架上，并通過(guò)位于支架下方的旋轉(zhuǎn)體旋轉(zhuǎn)，使胰蛋白酶液體產(chǎn)生旋渦進(jìn)行沖洗，直至將羊膜上皮細(xì)胞層的上皮細(xì)胞和纖維母細(xì)胞層的纖維母細(xì)胞全部沖掉。本發(fā)明由于半透膜的羊膜在漩渦水流的作用下使上皮細(xì)胞層的上皮細(xì)胞和纖維母細(xì)胞層的纖維母細(xì)胞隨著水流而脫下。本發(fā)明的方法簡(jiǎn)單，成本低，便于批量生產(chǎn)，為實(shí)現(xiàn)組織工程大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化創(chuàng)造了條件，具有良好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
文檔編號(hào)C12N5/08GK1594555SQ20041001973
公開(kāi)日2005年3月16日 申請(qǐng)日期2004年6月24日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月24日
發(fā)明者雪原 申請(qǐng)人:天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院