一種用于眼表治療的生物羊膜及其制備方法
【專利說明】
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)用材料領(lǐng)域，具體涉及一種用于眼表治療的生物羊膜及其制備方法。
【【背景技術(shù)】】
[0002]羊膜從細胞滋養(yǎng)層衍化而來，是人兩層胎膜的內(nèi)層，由上皮細胞層，基底膜和無血管基質(zhì)組成。新鮮羊膜中包含多種膠原蛋白以及層粘連蛋白、纖連蛋白、糖胺聚糖、透明質(zhì)酸等，這些活性物質(zhì)可以促進上皮細胞的黏附移行，誘導上皮分化，防止上皮凋亡；羊膜細胞及基質(zhì)中還包含多種生長因子，如神經(jīng)生長因子(NGF)，肝細胞生長因子(HGF)，角質(zhì)細胞生長因子(KGF)，轉(zhuǎn)化生長因子-α (TGF-α)，轉(zhuǎn)化生長因子-β l(TGF-f3 I)，表皮生長因子(EGF)，堿性成纖維細胞生長因子(bFGF);此外，羊膜細胞及基質(zhì)中還包含抑制血管生成、抗炎的蛋白以及一些天然蛋白酶抑制因子，這些因子成分能夠促進上皮生長、抑制炎性反應(yīng)、抑制纖維組織過度增生和新生血管形成。
[0003]羊膜移植在多種疾病、損傷治療過程中所起到的良好作用在大量研宄中都得到了證實。大量研宄報道證明:羊膜中所含的這些豐富的活性物質(zhì)、營養(yǎng)成分、各種生長因子，以及基底膜結(jié)構(gòu)等特性是羊膜在組織工程領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用的基礎(chǔ)。羊膜具有良好的生物相容性，異體移植后幾乎不產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)，因此羊膜可以作為一種理想的組織工程修復(fù)材料，針對不同的組織損傷，通過不同的方式處理，用于多種組織損傷的治療和修復(fù)。
[0004]由于新鮮羊膜和冷藏羊膜能夠最大程度保留各種天然膠原及活性因子成分，因此臨床使用效果較好。但這類羊膜未經(jīng)病毒滅活處理，存在病毒傳播隱患。目前國內(nèi)羊膜產(chǎn)品，多為經(jīng)過凍干、風(晾)干、脫細胞等多種復(fù)雜處理過程的產(chǎn)品。這些產(chǎn)品在反復(fù)凍融、干燥和脫細胞等工藝處理過程中，損失了大量有效成分，并且制備工藝存在多種誘導蛋白質(zhì)變性因素(如冷凍保護劑及凍干保護劑的選擇，冷凍速率的選擇等)，容易造成蛋白質(zhì)變性、羊膜各種理化性能降低，從而直接導致羊膜在手術(shù)中易撕裂，需要反復(fù)更換，延長手術(shù)時間；術(shù)后炎癥反應(yīng)強烈，羊膜快速降解。尤其是某些生產(chǎn)工藝經(jīng)脫細胞、反復(fù)清洗等高強度處理，羊膜損失大量天然膠原及活性因子，對羊膜臨床使用效果造成了極為不利的影響。
[0005]公開號為US006152142A和US006326019B1的美國專利公開的羊膜產(chǎn)品是將剖腹產(chǎn)胎盤清洗干凈后鈍性分離去除絨毛膜，上皮向上平鋪在硝酸纖維濾紙上，之后保存于DMEM:甘油按1:1比例配制的保存液中，并于-80 °C冰箱中凍存。所制備的羊膜未經(jīng)脫細胞、干燥和滅菌處理，因此較好地保留了羊膜成分與結(jié)構(gòu)的完整性；但長期深低溫保存成本較高，并且其未對羊膜進行滅菌和病毒滅活處理，臨床使用安全性得不到保障。
[0006]專利申請?zhí)枮?01010113960.0的中國發(fā)明專利申請公開了一種在低溫下(-20?40C )使用基質(zhì)膠對羊膜基質(zhì)進行重建及修復(fù)，采用有色染料染色，鋪膜、干燥后用鈷60消毒，從而較好地保存了羊膜上皮及基底，但在低于零度條件下進行羊膜基質(zhì)重建，最終干燥保存，不僅工藝復(fù)雜，而且羊膜結(jié)構(gòu)會受到一定程度的破壞，機械性能降低，影響臨床使用；羊膜制備過程中，經(jīng)過多次漂洗，羊膜中有效成分隨洗液大量流失，降低了臨床使用效果。
[0007]申請?zhí)枮镃N03150838.3、CN200480023933.7 和 200410075361.9 的中國發(fā)明專利申請中公開了一種可常溫保存的生物羊膜的制備方法，是將胎盤的絨毛膜鈍性分離，清洗后鋪在硝酸纖維素濾紙上，經(jīng)冷凍干燥后包裝，鈷60輻照滅菌。所制備的羊膜，與上述專利方法類似，經(jīng)過了冷凍干燥，在一定程度上對羊膜造成了破壞，使其變脆，在臨床使用中容易撕裂；
[0008]綜上所述，如何保護羊膜結(jié)構(gòu)的不被破壞，最大程度保留新鮮羊膜中的各類有效成分，并且保證其安全性，使其能夠有效應(yīng)用于臨床，是制備生物羊膜應(yīng)用于眼表治療需要解決的關(guān)鍵問題。
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【發(fā)明內(nèi)容】
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[0009]本發(fā)明的目的在于針對以上所述現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種用于眼表治療的生物羊膜，能完整保留新鮮羊膜的天然結(jié)構(gòu)和活性成分，保留相同治療效果，并確保生物羊膜無任何病毒傳播隱患。
[0010]本發(fā)明的另一目的是提供一種用于眼表治療的生物羊膜的制備方法。
[0011]為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的:用于眼表治療的生物羊膜，以羊膜為原料，經(jīng)快速取材、快速裁切以及輻照滅菌步驟制成，其厚度為0.02-0.1_。
[0012]一種用于眼表治療的生物羊膜的制備方法，是以羊膜為原料，經(jīng)快速取材、快速裁切以及輻照滅菌步驟，最終得到生物羊膜；其包括的具體步驟如下:
[0013](I)快速取材
[0014]在I?3分鐘內(nèi)將胎盤之外的羊膜取得，將新鮮羊膜放入預(yù)裝無菌生理鹽水的運輸瓶中，在羊膜脫離母體I?10分鐘內(nèi)完成降溫至2?10°C冷藏，并于I小時內(nèi)運輸至潔凈車間進行后續(xù)處理；
[0015](2)快速裁切
[0016]將(I)步驟取得的羊膜，上皮面向上，鋪展于硝酸纖維素濾膜上，在I?3分鐘內(nèi)裁剪為羊膜膜片，裝入含有質(zhì)量百分比濃度為50%?90%的甘油水溶液包裝袋中，密封；
[0017](3)輻照滅菌
[0018]將⑵步驟處理后的羊膜膜片，在-25?_4°C的低溫保護條件下，采用電離輻射滅菌處理，即得到生物羊膜產(chǎn)品；采用低溫保護進行輻照滅菌，既能達到無菌醫(yī)療器械產(chǎn)品的無菌水平要求，又能同時滅活各種病毒，并且能最大程度保護生物羊膜的活性，盡可能維持其天然的抗炎癥、抗瘢痕和引導上皮化的能力，使其最終得以有效應(yīng)用于眼表損傷治療。
[0019]所述電離輻射可以是伽馬射線輻照或是高能電子束輻照，劑量為20?30kGy，輻照后立即將生物羊膜產(chǎn)品置于-90?-10°C下冷藏保存。
[0020]所述(I)步驟中采用羊膜取材裝置進行取材，所述羊膜取材裝置包括中空的漏斗狀殼體和粗端大切刀，所述漏斗狀殼體的粗端的安裝粗端大切刀，所述粗端大切刀上設(shè)置可拆卸的保護罩，可將粗端大切刀完全嵌套覆蓋?？稍跇O短時間內(nèi)完成羊膜的取材，避免羊膜長時間暴露于常溫條件造成羊膜活性的降低，保證羊膜抑制瘢痕降低炎癥的功效；也可有效避免剝離時對羊膜造成的損傷及破壞。
[0021]所述(2)步驟中采用羊膜裁剪裝置裁剪羊膜膜片，所述羊膜裁切裝置，包括平板載體和裁刀，若干所述裁刀排列固定在所述平板載體一側(cè)表面上；所述裁刀的邊長為11?70_，厚度為0.1?0.5_。可以在極短時間內(nèi)將所取羊膜迅速裁剪為所需大小形狀，進一步有效避免羊膜長時間暴露于常溫條件造成羊膜活性的降低，保證羊膜植入后的抗瘢痕抗炎癥的能力。
[0022]所述羊膜膜片的長度為10?70mm，寬度為10?70mm的矩形或正方形，也可裁剪為類似大小的梯形、圓形、三角形羊膜膜片。
[0023]本發(fā)明得到的生物羊膜，在確保生物羊膜的生物安全性的同時，有效保留及發(fā)揮羊膜的天然活性功能，應(yīng)用于眼表損傷時可引導上皮生長，抑制新生血管長入角膜，后期抑制瘢痕形成，可有效形成長期物理屏障保護創(chuàng)面，具有極好的臨床應(yīng)用前景。
[0024]上述羊膜取材裝置，可使胎盤之外的羊膜迅速裁切取得，減少羊膜取材所需操作時間。本發(fā)明之羊膜裁切裝置，通過多個均勻排列的小型裁刀沖壓裁切羊膜，可迅速將羊膜裁切為所需規(guī)格及大小，大大減少羊膜裁切所需操作時間。經(jīng)本發(fā)明人驗證，在操作人員