專利名稱：抗原激發(fā)得到的樹突細胞的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及可以用于疾病的預防或治療的樹突細胞。
背景技術：
(樹突細胞疫苗療法及其問題)癌癥治療等領域中，樹突細胞疫苗療法引人注目。
樹突細胞是生物體內(nèi)抗原呈遞能力最強的抗原呈遞細胞(APC)，通過將攝取的抗原表位呈遞給T細胞來激活T細胞，可以提高免疫應答。
樹突細胞疫苗療法是使用從癌細胞中提取的物質(zhì)或癌特異性抗原，在生物體外激發(fā)該樹突細胞，提高抗原呈遞能力，作為樹突細胞疫苗回到生物體內(nèi)的治療方法。
從癌細胞提取的物質(zhì)一般為多種物質(zhì)的混合物。因此，由于認為由細胞提取物質(zhì)中的多種癌抗原激發(fā)樹突細胞，所以預想用從癌細胞提取的物質(zhì)激發(fā)的樹突細胞疫苗誘導對癌的強力免疫反應。但是，這種通過多種物質(zhì)的混合物激發(fā)的場合，樹突細胞呈遞的抗原不能特定。因此，作為對于癌癥患者的治療疫苗已被批準使用，但是作為對于正常人群的疾病預防疫苗還沒有被批準使用。
另外，用癌特異性抗原激發(fā)的樹突細胞疫苗中，雖然樹突細胞呈遞的抗原能夠特定，但是存在現(xiàn)在得到鑒定的癌特異性抗原數(shù)自身還不多的問題。
作為使抗原呈遞于樹突細胞的另一形態(tài)，例如已知將來自抗原的肽編碼的基因?qū)霕渫患毎磉_的方法。但是，這樣調(diào)整的樹突細胞疫苗雖然能夠引起對特定的抗原的強力免疫應答，但是現(xiàn)階段還沒有批準將用基因操作的樹突細胞給予正常人群以預防疾病等。
(關于肝炎)肝炎是發(fā)生在肝臟的炎癥，主要由病毒、酒精、藥物的原因引起。由肝炎病毒引起的肝炎最多，至今發(fā)現(xiàn)了7種肝炎病毒。另外，日本的病毒性肝炎中，乙型、丙型占大部分。
肝炎可大致分為急性肝炎和慢性肝炎。所謂慢性肝炎，是指肝炎持續(xù)6個月以上。甲型肝炎經(jīng)口感染，為急性肝炎可治愈，不慢性化。另一方面，乙型、丙型肝炎經(jīng)血液感染、母子間的垂直感染、家族及異性間的水平感染。另外，乙型、丙型肝炎由急性肝炎發(fā)展為慢性肝炎的情況多，如果慢性化，據(jù)稱向肝硬化和肝癌等嚴重的肝臟疾病的轉(zhuǎn)變率非常高。
(關于乙型肝炎)乙型肝炎患者全世界都有分布，據(jù)稱世界上乙型肝炎病毒感染者有3億5千萬人。特別是，中國感染者非常多，估計有1億2千萬人。整個東南亞占全世界感染者人數(shù)的70％以上。另外，據(jù)報道世界上每年有約100萬人因該疾病死亡。日本乙型肝炎病毒感染者估計有100萬人以上，其中10％左右為慢性肝炎患者。
(乙型肝炎的治療方法及其問題)乙型肝炎沒有特效治療藥物。因此，治療以減少病毒數(shù)量、抑制其活動為目的。作為代表性的治療方法，已知有干擾素療法和拉米夫定療法。
干擾素療法是距今20年前開始的乙型肝炎的最初治療方法。干擾素起著幫助免疫系統(tǒng)工作、抑制病毒增殖的作用。由于干擾素療法病毒數(shù)量越少越有效果，一般在治療病毒數(shù)量為乙型肝炎的1000分之1的丙型肝炎中發(fā)揮顯著效果，而治療乙型肝炎，只有約20％的患者有效。另外，如果轉(zhuǎn)為肝硬化，干擾素更難以起作用。而且，治療使用的干擾素，至開發(fā)成產(chǎn)品要花費高成本，治療1個療程需200～300萬日元，給患者帶來沉重的經(jīng)濟負擔等的問題也很多。
已知拉米夫定本來是作為艾滋病治療藥開發(fā)的藥物，對治療乙型肝炎也有效。拉米夫定具有直接抑制病毒DNA合成的作用，具有抑制乙型肝炎急劇惡化和重癥化的效果。據(jù)報道，拉米夫定對干擾素治療無效的乙型肝炎患者也有效，但是病毒不在增殖狀態(tài)時無效。而且，由于長期給藥，存在出現(xiàn)拉米夫定耐藥病毒等問題。
另外，這些乙型肝炎治療方法由于效果的評價方法各不相同，不能一樣地比較效果。另外，認為即使使用這些治療方法，也不可能從體內(nèi)完全除掉乙型肝炎病毒。因此，為了防止上述乙型肝炎患者的增加，認為預防乙型肝炎很重要。
(乙型肝炎的預防方法及其問題)從預防乙型肝炎的觀點看，一般HB疫苗有效。
為了預防乙型慢性肝炎，即使是正常人群，體內(nèi)保持、維持抗HBs抗體也很重要?，F(xiàn)在的HB疫苗基于乙型肝炎病毒的表面抗原HBs抗原制備。通常，通過接種3次該HB疫苗，HB疫苗生效的人體內(nèi)可產(chǎn)生抗HBs抗體。認為產(chǎn)生抗體的人之后不會感染乙型肝炎，即使幾年后抗體值下降時，如果體內(nèi)產(chǎn)生一次抗HBs抗體，就可能避免感染。另外，也可通過追加接種，再次提高抗體值。
但是，HB疫苗也存在幾個問題。
首先，正常人群中約10％為HB疫苗無應答者，即使給予HB疫苗也不能產(chǎn)生抗HBs抗體。認為醫(yī)務工作者中不少人為HB疫苗無應答者，日本有數(shù)十萬人。
另外，患有伴隨免疫功能低下的疾病的人，例如，HIV患者、肝疾病患者、透析患者中，HB疫苗也不能充分發(fā)揮效果。肥胖者和吸煙者也發(fā)生免疫功能低下，這些人對HB疫苗的反應性也低。
而且，由于HB疫苗對肝移植對象等正在給予免疫抑制劑的人不起作用，所以患者不能產(chǎn)生抗HBs抗體。但是，乙型肝炎相關肝移植中，由于維持抗HBs抗體值對治療成績有很大影響，所以肝移植后，患者需要反復給予抗HBs人免疫球蛋白。給藥頻率需2周1次，這帶來一年250萬日元的沉重的經(jīng)濟負擔。今后，由于考慮到以患者特別多的東南亞為中心，乙型肝炎相關肝移植激增，所以需要世界性地解決這個經(jīng)濟性問題。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明要解決的課題本發(fā)明的目的是提供對疾病的預防或治療有效的樹突細胞，特別是，提供可以適用于乙型肝炎的預防或治療的樹突細胞。解決課題的手段1、具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞本發(fā)明是由包括用HBs抗原激發(fā)樹突細胞的步驟的方法得到的、具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞。
根據(jù)本發(fā)明得到的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞，通過將HBs抗原表位呈遞給T細胞而激活T細胞，可以提高對HBs抗原的免疫應答。因此，根據(jù)本發(fā)明，可以提供對乙型肝炎的預防或治療有效的、具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞。
本發(fā)明中，上述方法可以進一步包括從血液得到上述樹突細胞的步驟。據(jù)此，可以從來自血液的樹突細胞提供本發(fā)明有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞。另外，如果使用血液，采用現(xiàn)有公知的方法等，通過比較簡便的操作便可以得到樹突細胞。
本發(fā)明中，上述方法可以進一步包括從生物采集上述血液的步驟。
本發(fā)明中，上述生物可以為人。據(jù)此，可以得到來自人的樹突細胞，所以，本發(fā)明的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞可以給予人。因此，根據(jù)本發(fā)明，可以提供對人的乙型肝炎的預防或治療有效的、具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞。
本發(fā)明中，上述HBs抗原可以是HB疫苗中含有的HBs抗原。例如，人的場合，實際上作為HB疫苗上市的是確認對包括正常人群在內(nèi)的人有安全性、有效性，并獲得批準的疫苗。因此，根據(jù)本發(fā)明，可以提供例如可以安全且有效地用于人的、具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞。另外，由于HB疫苗對正常人群可以使用，所以，本發(fā)明有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞不只是對乙型肝炎患者等的乙型肝炎治療目的，也可以以乙型肝炎的預防為目的用于正常人群。再者，不只限于人，關于其他生物，通過使用用對該生物安全且有效的HB疫苗激發(fā)的樹突細胞，也可以預防或治療該生物的乙型肝炎。
2、具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞的制備方法本發(fā)明為包括用HBs抗原激發(fā)樹突細胞的步驟的、具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞的制備方法。據(jù)此，可以得到對乙型肝炎的預防或治療有效的、具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞。
本發(fā)明有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞的制備方法可以進一步包括從血液得到上述樹突細胞的步驟。據(jù)此，可以從來自血液的樹突細胞得到本發(fā)明有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞。另外，如果使用血液，采用現(xiàn)有公知的方法等，通過比較簡便的操作便可以得到樹突細胞。
本發(fā)明有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞的制備方法可以進一步包括從生物采集上述血液的步驟。
本發(fā)明中，上述生物可以為人。據(jù)此，可以得到對人的乙型肝炎的預防或治療有效的、具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞。
本發(fā)明中，上述HBs抗原可以是HB疫苗中含有的HBs抗原。據(jù)此，可以提供可以安全且有效地用于生物例如包括正常人群在內(nèi)的人的、對乙型肝炎的預防或治療有效的、具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞。
3、含有具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞的組合物本發(fā)明為含有本發(fā)明有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞的組合物。據(jù)此，本發(fā)明有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞，例如，可以以與其他物質(zhì)混合的狀態(tài)、懸浮在其他物質(zhì)中的狀態(tài)、與其他物質(zhì)組合的狀態(tài)等使用。具體地說，本發(fā)明有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞，例如，可以以懸浮在PBS、生理鹽水、RPMI1640培養(yǎng)基等中的形態(tài)，以及本發(fā)明有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞中例如添加TNF-α、IL-12、HB疫苗、GM-CSF、OK432、其他免疫賦活劑等的形態(tài)使用。因此，根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞可以以適于使用目的的形態(tài)使用，或以提高本發(fā)明有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞的效果的形態(tài)使用。
本發(fā)明有關的組合物可以進一步含有HB疫苗添加劑。
本發(fā)明中，上述組合物可以為實驗試劑或?qū)嶒炘噭┖?。?jù)此，本發(fā)明有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞可以以適于研究例如免疫研究的形態(tài)使用。
本發(fā)明中，上述組合物可以為醫(yī)藥組合物。據(jù)此，本發(fā)明有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞可以以適于醫(yī)療例如乙型肝炎的預防或治療的形態(tài)使用。
本發(fā)明中，上述組合物可以是免疫應答激活制劑。據(jù)此，本發(fā)明有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞可以以適于激活對HBs抗原的免疫應答的給藥劑型使用。
本發(fā)明中，上述組合物可以是細胞疫苗。據(jù)此，本發(fā)明有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞可以直接給予生物體內(nèi)，能夠激活對HBs抗原的免疫應答。
本發(fā)明中，上述細胞疫苗可以是乙型肝炎的預防或治療疫苗。據(jù)此，上述細胞疫苗中含有的本發(fā)明有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞，通過在生物體內(nèi)激活對HBs抗原的免疫應答，可以預防或治療乙型肝炎。
4、使用具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞的乙型肝炎的預防或治療方法本發(fā)明為使用本發(fā)明有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞的乙型肝炎的預防或治療方法。據(jù)此，本發(fā)明有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞，通過激活對HBs抗原的免疫應答，可以預防或治療乙型肝炎。例如，人的場合，目前的HB疫苗無應答的正常人群或患有伴隨免疫功能低下的疾病的人、正在給予免疫抑制劑的人等目前的HB疫苗不能發(fā)揮效果的人，通過本發(fā)明有關的乙型肝炎的預防或治療方法，變得能夠產(chǎn)生抗HBs抗體，可以預防或治療乙型肝炎。
本發(fā)明中，可以包括將本發(fā)明有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞給予生物的步驟。據(jù)此，本發(fā)明有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞，通過在生物體內(nèi)激活對HBs抗原的免疫應答，可以預防或治療乙型肝炎。另外，本發(fā)明有關的乙型肝炎的預防或治療方法，與將HB疫苗直接給予生物體內(nèi)的目前的乙型肝炎的預防或治療方法相比，可以發(fā)揮高效果。
本發(fā)明中，上述生物可以為人。據(jù)此，可以預防或治療人的乙型肝炎。
5、疫苗激發(fā)樹突細胞本發(fā)明為由包括用疫苗激發(fā)樹突細胞的步驟的方法得到的疫苗激發(fā)樹突細胞。
本發(fā)明中，“疫苗激發(fā)樹突細胞”指由包括用疫苗激發(fā)的步驟的方法得到的具有抗原呈遞能力的樹突細胞。
根據(jù)本發(fā)明得到的疫苗激發(fā)樹突細胞，通過將疫苗中含有的抗原表位呈遞給T細胞而激活T細胞，可以提高對上述抗原的免疫應答。因此，根據(jù)本發(fā)明，可以提供對疾病的預防或治療有效的疫苗激發(fā)樹突細胞。
另外，例如人的場合，實際上作為疫苗上市的是確認對人有安全性、有效性，并獲得批準的疫苗。因此，根據(jù)本發(fā)明，可以提供例如可以安全且有效地用于人的疫苗激發(fā)樹突細胞。再者，不只限于人，關于其他生物，通過使用用對該生物安全且有效的疫苗激發(fā)的疫苗激發(fā)樹突細胞，可以預防或治療該生物的疾病。
本發(fā)明中，上述方法可以進一步包括從血液得到上述樹突細胞的步驟。據(jù)此，可以從來自血液的樹突細胞提供本發(fā)明有關的疫苗激發(fā)樹突細胞。另外，如果使用血液，采用現(xiàn)有公知的方法等，通過比較簡便的操作便可以得到樹突細胞。
本發(fā)明中，上述方法可以進一步包括從生物采集上述血液的步驟。
本發(fā)明中，上述生物可以為人。據(jù)此，可以得到來自人的樹突細胞，所以，可以將本發(fā)明的疫苗激發(fā)樹突細胞給予人。因此，根據(jù)本發(fā)明，可以提供對人的疾病的預防或治療有效的疫苗激發(fā)樹突細胞。
本發(fā)明中，上述疫苗可以是疾病的預防或治療疫苗。據(jù)此，可以提供這些疫苗中含有的、呈遞上述疾病有關的抗原的疫苗激發(fā)樹突細胞。因此，可以預防或治療上述疾病。
本發(fā)明中，上述疫苗可以是肝炎疫苗。作為肝炎疫苗，例如，已知有甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗等。例如人的場合，實際上作為肝炎疫苗上市的是確認對包括正常人群在內(nèi)的人有安全性、有效性，并獲得批準的疫苗。因此，根據(jù)本發(fā)明，可以提供例如可以安全且有效地用于人的、具有肝炎病毒抗原呈遞能力的肝炎疫苗激發(fā)樹突細胞。另外，由于肝炎疫苗可以用于正常人群，所以，本發(fā)明有關的肝炎疫苗激發(fā)樹突細胞，例如，不只是對肝炎患者等的肝炎的治療目的，也可以以肝炎的預防為目的用于正常人群。再者，不只限于人，關于其他生物，通過使用用對該生物安全且有效的肝炎疫苗激發(fā)的樹突細胞，可以預防或治療該生物的肝炎。
本發(fā)明中，上述肝炎疫苗可以優(yōu)選是含有HBs抗原的HB疫苗。據(jù)此，可以提供可以安全且有效地用于生物例如包括正常人群在內(nèi)的人的、對乙型肝炎的預防或治療有效的、具有HBs抗原呈遞能力的疫苗激發(fā)樹突細胞。
6、疫苗激發(fā)樹突細胞的制備方法本發(fā)明是包括用疫苗激發(fā)樹突細胞的步驟的疫苗激發(fā)樹突細胞的制備方法。據(jù)此，可以得到對疾病的預防或治療有效的疫苗激發(fā)樹突細胞。
本發(fā)明有關的疫苗激發(fā)樹突細胞的制備方法可以進一步包括從血液得到上述樹突細胞的步驟。據(jù)此，可以從來自血液的樹突細胞得到本發(fā)明有關的疫苗激發(fā)樹突細胞。另外，如果使用血液，采用現(xiàn)有公知的方法等，通過比較簡便的操作便可以得到樹突細胞。
本發(fā)明有關的疫苗激發(fā)樹突細胞的制備方法可以進一步包括從生物采集上述血液的步驟。
本發(fā)明中，上述生物可以為人。據(jù)此，可以得到對人的疾病的預防或治療有效的疫苗激發(fā)樹突細胞。
本發(fā)明中，上述疫苗可以是疾病的預防或治療疫苗。據(jù)此，可以提供對上述疾病的預防或治療有效的疫苗激發(fā)樹突細胞。
本發(fā)明中，上述疫苗可以是肝炎疫苗。據(jù)此，可以提供可以安全且有效地用于生物例如包括正常人群在內(nèi)的人的、對肝炎的預防或治療有效的、具有肝炎病毒抗原呈遞能力的肝炎疫苗激發(fā)樹突細胞。
本發(fā)明中，上述肝炎疫苗可以優(yōu)選是含有HBs抗原的HB疫苗。據(jù)此，可以提供可以安全且有效地用于生物例如包括正常人群在內(nèi)的人的、對乙型肝炎的預防或治療有效的、具有HBs抗原呈遞能力的疫苗激發(fā)樹突細胞。
7、含有疫苗激發(fā)樹突細胞的組合物本發(fā)明為含有本發(fā)明有關的疫苗激發(fā)樹突細胞的組合物。據(jù)此，本發(fā)明有關的疫苗激發(fā)樹突細胞可以以例如與其他物質(zhì)混合的狀態(tài)、懸浮在其他物質(zhì)中的狀態(tài)、與其他物質(zhì)組合的狀態(tài)等使用。具體地說，本發(fā)明有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞可以以例如懸浮在PBS、生理鹽水、RPMI 1640培養(yǎng)基等中的形態(tài)，以及本發(fā)明有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞中例如添加TNF-α、IL-12、HB疫苗、GM-CSF、OK432、其他免疫賦活劑等的形態(tài)使用。因此，根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明有關的疫苗激發(fā)樹突細胞可以以適于使用目的的形態(tài)使用，或以提高本發(fā)明有關的疫苗激發(fā)樹突細胞的效果的形態(tài)使用。
本發(fā)明有關的組合物可以進一步含有疫苗添加劑。
本發(fā)明中，上述組合物可以為實驗試劑或?qū)嶒炘噭┖?。?jù)此，本發(fā)明有關的疫苗激發(fā)樹突細胞可以以適于研究例如免疫研究的形態(tài)使用。
本發(fā)明中，上述組合物可以為醫(yī)藥組合物。據(jù)此，本發(fā)明有關的疫苗激發(fā)樹突細胞可以以適于醫(yī)療例如疾病的預防或治療的形態(tài)使用。
本發(fā)明中，上述組合物可以是免疫應答激活制劑。據(jù)此，本發(fā)明有關的疫苗激發(fā)樹突細胞可以以適于激活對疫苗中含有的抗原的免疫應答的給藥劑型使用。
本發(fā)明中，上述組合物可以是細胞疫苗。據(jù)此，本發(fā)明有關的疫苗激發(fā)樹突細胞可以直接給予生物體內(nèi)，能夠激活對疫苗中含有的抗原的免疫應答。
本發(fā)明中，上述細胞疫苗可以是疾病的預防或治療疫苗。據(jù)此，上述細胞疫苗中含有的本發(fā)明有關的疫苗激發(fā)樹突細胞，通過在生物體內(nèi)激活對疫苗中含有的抗原的免疫應答，可以預防或治療上述疾病。
8、使用疫苗激發(fā)樹突細胞的疾病的預防或治療方法本發(fā)明為使用本發(fā)明有關的疫苗激發(fā)樹突細胞的疾病的預防或治療方法。據(jù)此，本發(fā)明有關的疫苗激發(fā)樹突細胞，通過激活對疫苗中含有的抗原的免疫應答，可以預防或治療上述疾病。例如，人的場合，目前使用預防或治療上述疾病的疫苗無應答的正常人群，或患有伴隨免疫功能低下的疾病的人、正在給予免疫抑制劑的人等疫苗不能充分發(fā)揮效果的人，通過本發(fā)明有關的疾病的預防或治療方法，變得能夠產(chǎn)生抗體，可以預防或治療上述疾病。
本發(fā)明中，可以包括將本發(fā)明有關的疫苗激發(fā)樹突細胞給予生物的步驟。據(jù)此，本發(fā)明有關的疫苗激發(fā)樹突細胞，通過在生物體內(nèi)激活對疫苗中含有的抗原的免疫應答，可以預防或治療上述疾病。另外，本發(fā)明有關的疾病的預防或治療方法，與目前的將疫苗直接給予生物體內(nèi)的疾病的預防或治療方法相比，可以發(fā)揮高效果。
本發(fā)明中，上述生物可以為人。據(jù)此，可以預防或治療人的疾病。


圖1表示給予HB疫苗激發(fā)樹突細胞前的抗HBs抗體值。
圖2是表示HB疫苗激發(fā)引起的樹突細胞的HLA-DR及CD86的變化的圖。
圖3是表示HB疫苗激發(fā)引起的樹突細胞的T細胞幼稚化輔助能力的變化的圖。
圖4是表示使用HBs記憶-T細胞的HB疫苗激發(fā)樹突細胞對HBs記憶-T細胞的增殖能力帶來的效果的圖。
圖5表示使用HBs記憶-T細胞的HB疫苗激發(fā)樹突細胞對HBs抗體產(chǎn)生能力帶來的效果的圖。
圖6表示采用血液生化檢查的HB疫苗激發(fā)樹突細胞的安全性試驗的檢查項目。
圖7是表示ALT檢查結(jié)果的圖。
圖8是表示CRP檢查結(jié)果的圖。
圖9是表示PT檢查結(jié)果的圖。
圖10是表示肌酸酐檢查結(jié)果的圖。
圖11表示采用血清生化檢查的關于自體免疫反應的安全性試驗的結(jié)果。
圖12是表示給予HB疫苗激發(fā)樹突細胞引起的抗HBs抗體值的變化的圖。
圖13表示給予HB疫苗激發(fā)樹突細胞引起的抗HBs抗體值的變化。
圖14是表示給予HB疫苗激發(fā)樹突細胞引起的HB疫苗無應答者的抗HBs抗體值的變化的圖。
具體實施例方式
下面說明本發(fā)明的最佳實施方式。本發(fā)明并不只限于以下實施方式，可以在不超出本發(fā)明的要點的范圍內(nèi)做各種變更。
1、具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞本實施方式有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞由包括用HBs抗原激發(fā)樹突細胞的步驟的方法得到。根據(jù)本實施方式有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞，可以提供對乙型肝炎的預防或治療有效的、具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞。
本實施方式中，“用抗原激發(fā)樹突細胞”指使樹突細胞攝取抗原，在上述樹突細胞內(nèi)分解，上述分解的抗原可以作為肽呈遞的狀態(tài)。
本實施方式中，作為用抗原激發(fā)樹突細胞的具體方法，例如，在適當?shù)募毎蜃拥却嬖谙拢箍乖蜆渫患毎泊孢M行培養(yǎng)的方法。
得到樹突細胞的方法，只要攝取抗原、最終能得到呈遞該抗原的樹突細胞，沒有特別限制，可以采用各種方法。
例如，可以從血液中得到樹突細胞。具體地說，例如，利用本領域技術人員公知的方法，從含有樹突細胞的前體細胞的血液中分化誘導樹突細胞的方法，或可以使用從血液中直接分離樹突細胞的方法。更具體地說，例如，根據(jù)下述方法可以得到樹突細胞從骨髓細胞、臍帶血或末梢血的CD34陽性前體細胞中主要使用GM-CSF和TNF-α誘導的方法、從臍帶血單核細胞或末梢血單核細胞中主要使用GM-CSF和IL-4誘導的方法、從末梢血單核細胞中主要使用GM-CSF和IFN-α誘導的方法、從末梢血單核細胞中直接分離的方法等。
另外，這些得到樹突細胞的方法，根據(jù)需要，也可以進一步包括從生物采集血液的步驟。上述生物，根據(jù)有無感染乙型肝炎的可能性，并沒有特別限定，例如，可以是能夠感染乙型肝炎的生物。上述能夠感染乙型肝炎的生物中，可以包括能夠自然感染乙型肝炎的生物和能夠人工感染乙型肝炎的生物。具體地說，作為上述能夠自然感染乙型肝炎的生物，例如有人、黑猩猩等靈長類、土撥鼠、北京鴨等鴨類等；作為上述能夠人工感染乙型肝炎的生物，例如有松鼠、大鼠、野鴨、鵝、鷺、鶴、小鼠等。特別是，從世界上乙型肝炎引起的死亡人數(shù)在增加的觀點看，可以將本發(fā)明用于上述生物為人時的效果大。
另外，作為不利用血液得到樹突細胞的方法，例如，將ES細胞分化誘導得到樹突細胞的方法。具體地說，例如，通過將由胚盤胞內(nèi)部存在的內(nèi)部細胞塊制成的ES細胞與適當?shù)娘曫B(yǎng)細胞和細胞因子一起培養(yǎng)，可以分化誘導為樹突細胞。
本實施方式中，關于培養(yǎng)樹突細胞的培養(yǎng)基，只要不阻礙由樹突細胞的前體細胞向樹突細胞的分化誘導、樹突細胞的生存、抗原對樹突細胞的激發(fā)等，沒有特別限定，例如，可以使用RPMI 1640培養(yǎng)基等。另外，優(yōu)選RPMI 1640培養(yǎng)基。
本實施方式中，樹突細胞的誘導可以使用細胞因子。作為樹突細胞的誘導使用的細胞因子，只要不阻礙向樹突細胞的分化誘導、樹突細胞的生存、抗原對樹突細胞的激發(fā)等，沒有特別限定，例如，可以使用GM-CSF、TNF-α、IL-4、IFN-α等。
本實施方式中，HBs抗原的形態(tài)，只要最終能通過樹突細胞呈遞，沒有特別限制，可以是完全蛋白質(zhì)抗原，也可以是肽抗原。
另外，本實施方式有關的HBs抗原，例如，可以以與各種物質(zhì)和液體組合的形態(tài)使用。具體地說，例如，可以將HBs抗原用核糖體等磷脂雙層膜導入樹突細胞內(nèi)，以及將HBs抗原懸浮在緩沖液例如PBS、培養(yǎng)基例如RPMI 1640培養(yǎng)基中而導入樹突細胞內(nèi)。
另外，HBs抗原的添加時期，只要結(jié)果上HBs抗原能通過樹突細胞呈遞，沒有特別限定，例如，可以在分化誘導樹突細胞后添加。另外，也可以在分化誘導時添加HBs抗原，一起培養(yǎng)。另外，HBs抗原的激發(fā)時間，只要結(jié)果上HBs抗原能通過樹突細胞呈遞，沒有特別限定，例如可以為8小時～24小時。
另外，HBs抗原可以是HB疫苗中含有的HBs抗原。
疫苗中，例如，存在活性疫苗、非活性疫苗和類毒素等幾個種類。活性疫苗，例如，指將病原性減弱的活的病毒或細菌直接接種的疫苗。非活性疫苗，例如，是將病毒的微?；蚣毦木w等精制、加熱和用福爾馬林等藥劑處理，使病原性消失或無毒化而制成的疫苗。類毒素，例如，指只取出細菌的毒素進行精制，加入福爾馬林無毒化處理而不失去免疫原性。
本實施方式的HB疫苗，只要含有HBs抗原，其種類并沒有限定，現(xiàn)在日本批準用于人而上市的HB疫苗屬于非活性疫苗。本實施方式中，使用非活性疫苗HB疫苗時，例如，可以使用重組沉降乙型肝炎疫苗或沉降乙型肝炎疫苗。
作為重組沉降乙型肝炎疫苗，例如，可以使用將相當于乙型肝炎病毒DNA的HBs抗原的部分插入到酵母菌或動物細胞等的DNA中表達，制成疫苗的有效成分HBs抗原，加入免疫增強劑鋁膠調(diào)整的疫苗。作為動物細胞，例如，可以使用用CHO細胞調(diào)整的疫苗。
作為沉降乙型肝炎疫苗，例如，可以使用將由動物細胞等生產(chǎn)的HBs抗原精制后，加入鋁膠調(diào)整的疫苗。作為動物細胞，例如，可以使用用huGK-14細胞調(diào)整的疫苗。
2、具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞的制備方法本實施方式有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞的制備方法包括用HBs抗原激發(fā)樹突細胞的步驟。據(jù)此，可以得到對乙型肝炎的預防或治療有效的、具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞。
上述制備方法可以進一步包括從血液得到上述樹突細胞的步驟。據(jù)此，可以從來自血液的樹突細胞得到本發(fā)明有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞。另外，如果使用血液，采用現(xiàn)有公知的方法等，通過比較簡便的操作便可以得到樹突細胞。
另外，上述制備方法可以進一步包括從生物采集上述血液的步驟。
上述生物可以為人。據(jù)此，可以得到對人的乙型肝炎的預防或治療有效的、具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞。
另外，上述HBs抗原可以是HB疫苗中含有的HBs抗原。據(jù)此，可以提供可以安全且有效地用于生物例如包括正常人群在內(nèi)的人的、對乙型肝炎的預防或治療有效的、具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞。
3、含有具有HB8抗原呈遞能力的樹突細胞的組合物本實施方式有關的組合物可以含有本實施方式有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞。
另外，本實施方式有關的組合物可以進一步含有HB疫苗添加劑。
本實施方式中，“本實施方式有關的組合物可以進一步含有HB疫苗添加劑”指HB疫苗添加劑包含在本實施方式有關的組合物全體中的某處的狀態(tài)。即，含有HB疫苗添加劑的場所沒有特別限定，可以是本實施方式有關的組合物中的樹突細胞之外、之中、細胞膜上等任一場所?？梢耘卸?，本實施方式有關的組合物通過含有疫苗添加劑，作為HBs抗原使用HB疫苗中含有的HBs抗原，可得到本實施方式有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞。
作為HB疫苗添加劑，例如，可列舉保存劑、抗生素、穩(wěn)定劑、防腐劑、免疫增強劑、緩沖劑、等滲透劑等。作為具體實例，例如有乙基汞硫代水楊酸鈉、硫酸鋁鉀、氫氧化鈉、氯化鋁、醋酸、乙酸鈉、氯化鈉等。再者，HB疫苗添加劑并不局限于這些。
作為HB疫苗添加劑的檢測方法，例如，可以使用公知的分析方法。具體地說，例如，可列舉通過使用各種色譜的分離分析、定量分析、紅外分光分析、核磁共振分析、質(zhì)量分析、元素分析等的結(jié)構(gòu)分析等。
本實施方式有關的組合物可以為實驗試劑或?qū)嶒炘噭┖?。?jù)此，本實施方式有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞可以以適于各種研究的方式使用。作為可以使用的研究領域，例如，有關免疫應答、免疫耐受性、細胞因子產(chǎn)生的信號傳遞機制的研究、關于使用樹突細胞的免疫療法的研究。另外，例如，也可以用于關于乙型肝炎的預防或治療研究，例如基因、RNA、肽、蛋白質(zhì)、化合物、醫(yī)藥、細胞因子等的篩選等目的。
另外，本實施方式有關的組合物可以為醫(yī)藥組合物。本實施方式有關的醫(yī)藥組合物，例如，可以以直接給予生物體內(nèi)的形態(tài)、在生物體外與其他物質(zhì)和細胞混合的形態(tài)使用。
另外，本實施方式有關的組合物可以是免疫應答激活制劑。本實施方式有關的免疫應答激活制劑，例如，可以以直接給予生物體內(nèi)的形態(tài)、在生物體外與其他物質(zhì)和細胞混合的形態(tài)使用。
作為在生物體外使用本實施方式有關的組合物的方式，例如，本實施方式有關的免疫應答激活制劑與T細胞混合，通過將HBs抗原表位呈遞給T細胞而激活T細胞的使用方法。另外，該T細胞可以給予生物體內(nèi)使用。
另外，作為將本實施方式有關的組合物直接給予生物體內(nèi)的形態(tài)，例如有作為細胞疫苗的注射和滴注。作為細胞疫苗，優(yōu)選乙型肝炎的預防或治療疫苗。另外，作為將本實施方式有關的組合物直接給予生物體內(nèi)的部位，例如有靜脈內(nèi)給藥、動脈內(nèi)給藥、胸腔內(nèi)給藥、腹腔內(nèi)給藥、皮下給藥、肌肉內(nèi)給藥、組織內(nèi)(例如肝臟內(nèi))給藥、淋巴結(jié)給藥等。從給藥的簡便性的觀點看，優(yōu)選皮下注射。
4、使用具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞預防或治療乙型肝炎本實施方式有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞，例如，可以用于乙型肝炎的預防或治療。
使用具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞預防或治療乙型肝炎，例如，可以與現(xiàn)有的乙型肝炎的預防或治療方法組合使用。
另外，使用本實施方式有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞預防或治療乙型肝炎，可以包括將具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞給予生物的步驟。作為上述生物，例如，可以是能夠感染上述乙型肝炎的生物。另外，如果能抑制排斥反應，產(chǎn)生樹突細胞的生物和成為給藥對象的生物可以是同種生物，也可以是異種生物。同種生物的場合，可以將本實施方式有關的樹突細胞給予取出樹突細胞的自體內(nèi)，也可以給予組織適合性抗原一致到可以給藥的程度的異體內(nèi)。
例如，上述生物可以為人。這種場合，希望HLA配型盡可能一致。因此，樹突細胞的由來優(yōu)選有血緣關系的提供者由來的樹突細胞。如果使用自家細胞，則不需考慮HLA配型適合性，所以更加優(yōu)選來自給藥對象本人的樹突細胞。
本實施方式有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞，如上所述，可以以直接給予生物體內(nèi)的形態(tài)使用，以及在生物體外與T細胞混合而激活T細胞，該T細胞可以以給予生物體內(nèi)的形態(tài)使用。但是，由于T細胞為效應細胞，起一次作用后，短時間內(nèi)便死亡、消失。因此，為了預防、治療乙型肝炎，需要高頻率反復給予T細胞。而樹突細胞也作用于原初T細胞、HBs記憶-T細胞、B細胞，由于反復給與刺激，因此具有長時間且強力的效果。由此，認為本實施方式有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞更加優(yōu)選以直接給予生物體內(nèi)的形態(tài)使用。
5、本實施方式有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞的使用例及其效果下面示出本實施方式有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞的使用例及其效果。本使用例中，可以包括將本實施方式有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞給予人的步驟。本使用例可以適用于乙型肝炎的預防或治療。再者，本使用例不只限于以下的場合，本使用例有關的樹突細胞的使用形態(tài)，可以在不超出本發(fā)明的要點的范圍內(nèi)做各種變更。
5-1、適用于乙型肝炎的預防已知正常人群中約10％為對HB疫苗無應答者，即使給予HB疫苗也不能產(chǎn)生抗HBs抗體。由于乙型肝炎通過血液感染，所以認為醫(yī)務工作者等抗HBs抗體的必要性特別高，這些人中也有不少是HB疫苗無應答者。
因此，通過將本實施方式有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞給予這些HB疫苗無應答者，這些人可產(chǎn)生抗HBs抗體。據(jù)稱，為了預防乙型肝炎的感染，抗HBs抗體值至少需維持在10mIU/ml。根據(jù)后述實驗例11的結(jié)果可知，給予1次本實施方式有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞，HB疫苗無應答者的抗HBs抗體值平均上升到30mIU/ml，10mIU/ml以上的值可以維持約3～6個月。因此，通過本實施方式有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞，可以使現(xiàn)在的HB疫苗無應答者變得能夠產(chǎn)生抗HBs抗體，能夠預防感染乙型肝炎。
另外，現(xiàn)在預防乙型肝炎使用的HB疫苗，通常需間隔一定時間接種3次。根據(jù)后述實驗例11的結(jié)果可知，通過給予1次本實施方式有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞，不只是HB疫苗無應答者，HB疫苗起作用的正常人群(應答者)的抗HBs抗體值也能夠提高。因此，本實施方式有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞，不只是HB疫苗無應答者，對于HB疫苗應答者，也可以作為新的乙型肝炎的預防手段使用，能夠減少接種次數(shù)、減輕經(jīng)濟負擔。
另外，已知對于HIV患者、肝疾病患者、透析患者、肥胖者和吸煙者等免疫功能低下的人，現(xiàn)有的HB疫苗不能充分發(fā)揮效果。認為這些人通過使用本實施方式有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞，也可以產(chǎn)生抗HBs抗體。
5-2、適用于乙型肝炎的治療治療乙型肝炎，目前主要使用抗病毒劑。但是，已知由于長期給予抗病毒劑，抗病毒劑不起作用的變異病毒高頻率出現(xiàn)。結(jié)果，乙型肝炎病毒量再度上升，有導致肝炎惡化的危險性。
因此，如果使用本實施方式有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞，預想可以降低這種變異病毒的出現(xiàn)頻率，認為這是乙型肝炎的治療中的一大優(yōu)點。
另外，肝移植對象等正在給予免疫抑制劑的人，由于處于免疫抑制狀態(tài)，通常的HB疫苗不起作用，不能產(chǎn)生抗HBs抗體。但是，已知乙型肝炎相關肝移植中，維持抗HBs抗體值對治療成績有很大的好的影響，所以患者移植后，需要以2周1次的頻率給予抗HBs人免疫球蛋白。這給患者帶來一年約250萬日元的負擔，需要世界性地來解決這個經(jīng)濟性問題。
因此，認為通過將本實施方式有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞給予患者，患者變得能夠產(chǎn)生抗HBs抗體。而且，根據(jù)后述實驗例11的結(jié)果，預想將本實施方式有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞，例如以3～6個月1次的頻率給藥，可以維持10mIU/ml以上的抗HBs抗體值。由此認為，如果使用本實施方式有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞，與使用抗HBs人免疫球蛋白相比，可以大幅降低給藥頻率，結(jié)果可以大幅度減輕患者的經(jīng)濟負擔。
另外，現(xiàn)有的HB疫苗為乙型肝炎的預防疫苗，乙型肝炎的治療疫苗始終只是用于試驗。
相反，如上所述，根據(jù)本實施方式，使用HB疫苗制備的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞，使現(xiàn)有的HB疫苗不僅能用于乙型肝炎的預防，還能用于治療。這可以說，擴大了現(xiàn)在實際中使用的、確認了安全性、有效性的HB疫苗的使用用途，可以進一步說，發(fā)現(xiàn)了提高現(xiàn)有的HB疫苗的效果的新的使用形態(tài)。
由此斷定，本實施方式有關的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞具有廣泛的使用用途和很大的優(yōu)點。
6、疫苗激發(fā)樹突細胞本實施方式有關的疫苗激發(fā)樹突細胞由包括用疫苗激發(fā)樹突細胞的步驟的方法得到。據(jù)此，可以提供對疾病的預防或治療有效的疫苗激發(fā)樹突細胞。
上述方法可以進一步包括從血液得到樹突細胞的步驟。
另外，上述方法可以進一步包括從生物采集上述血液的步驟。上述生物可以為人。
另外，疫苗的添加時期，只要結(jié)果上疫苗中含有的抗原能通過樹突細胞呈遞，沒有特別限定，例如，可以在分化誘導樹突細胞后添加。另外，也可以在分化誘導時添加疫苗，一起培養(yǎng)。另外，疫苗的激發(fā)時間，只要結(jié)果上疫苗中含有的抗原能通過樹突細胞呈遞，沒有特別限定，例如可以為8小時～24小時。
作為疫苗，只要結(jié)果上上述疫苗中含有的抗原能通過樹突細胞呈遞，沒有特別限定，例如，可以使用活性疫苗、非活性疫苗、類毒素、抗毒素等。另外，疫苗的形態(tài)，只要結(jié)果上上述疫苗中含有的抗原能通過樹突細胞呈遞，沒有特別限定，例如，可以使用液狀疫苗、沉降型疫苗、凍干疫苗等。
作為本實施方式可以使用的疫苗的例子，例如有百日咳疫苗、白喉類毒素、破傷風類毒素、脊髓灰質(zhì)炎疫苗、麻疹疫苗、風疹疫苗、日本腦炎疫苗、流感疫苗、BCG疫苗等結(jié)核疫苗、流行性腮腺炎疫苗、水痘疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、肺炎球菌疫苗、黃熱疫苗、狂犬病疫苗、霍亂疫苗、秋令熱鉤端螺旋體病混合疫苗、飯匙倩抗毒素、蝮蛇抗毒素、鼠疫疫苗、MMR疫苗、腸傷寒疫苗、流感b菌結(jié)合型疫苗、髓膜炎菌疫苗、痢疾疫苗、瘧疾疫苗等。再者，本實施方式可以使用的疫苗并不只限于這里例示的。
上述疫苗可以是疾病的預防或治療疫苗。例如，上述疫苗可以是肝炎疫苗。上述肝炎疫苗，例如，可以是含有HBs抗原的HB疫苗。
7、疫苗激發(fā)樹突細胞的制備方法本實施方式有關的疫苗激發(fā)樹突細胞的制備方法包括用疫苗激發(fā)樹突細胞的步驟。據(jù)此，可以得到對疾病的預防或治療有效的疫苗激發(fā)樹突細胞。
上述制備方法可以進一步包括從血液得到上述樹突細胞的步驟。據(jù)此，可以從來自血液的樹突細胞得到本發(fā)明有關的疫苗激發(fā)樹突細胞。另外，如果使用血液，采用現(xiàn)有公知的方法等，通過比較簡便的操作便可以得到樹突細胞。
另外，上述制備方法可以進一步包括從生物采集上述血液的步驟。
上述生物可以為人。據(jù)此，可以得到對人的疾病的預防或治療有效的疫苗激發(fā)樹突細胞。
另外，上述疫苗可以是疾病的預防或治療疫苗。據(jù)此，可以提供對上述疾病的預防或治療有效的疫苗激發(fā)樹突細胞。
上述疫苗可以是肝炎疫苗。據(jù)此，可以提供能夠安全且有效地用于生物例如包括正常人群在內(nèi)的人的、對肝炎的預防或治療有效的、具有肝炎病毒抗原呈遞能力的肝炎疫苗激發(fā)樹突細胞。
上述肝炎疫苗，例如，可以是含有HBs抗原的HB疫苗。據(jù)此，可以提供能夠安全且有效地用于生物例如包括正常人群在內(nèi)的人的、對乙型肝炎的預防或治療有效的、具有HBs抗原呈遞能力的肝炎疫苗激發(fā)樹突細胞。
8、含有疫苗激發(fā)樹突細胞的組合物本實施方式有關的組合物可以含有本實施方式有關的疫苗激發(fā)樹突細胞。
另外，本實施方式有關的組合物可以進一步含有疫苗添加劑。
本實施方式中，“本實施方式有關的組合物進一步含有疫苗添加劑”指疫苗添加劑包含在本實施方式有關的組合物全體中的某處的狀態(tài)。即，含有疫苗添加劑的場所沒有特別限定，可以是本實施方式有關的組合物中的樹突細胞之外、之中、細胞膜上等任一處?？梢耘卸ǎ緦嵤┓绞接嘘P的組合物通過含有疫苗添加劑，作為抗原使用疫苗中含有的抗原，可得到本實施方式有關的疫苗激發(fā)樹突細胞。
作為疫苗添加劑，例如可列舉保存劑、抗生素、穩(wěn)定劑、防腐劑、免疫增強劑、緩沖劑、等滲透劑、著色劑等。作為具體實例，作為保存劑，例如有乙基汞硫代水楊酸鈉、福爾馬林等；作為抗生素，例如有紅霉素、紅霉素乳糖酸鹽、硫酸卡那霉素等及其他添加劑。作為其他添加劑，例如有精制白糖、L-谷氨酸一鈉、明膠、乳糖、谷氨酸鉀、D-山梨糖醇、人血清白蛋白、聚山梨酸酯80、甘氨酸、葡萄糖、氫氧化鈉、硫酸鋁鉀、氯化鋁、醋酸、乙酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、磷酸二氫鉀、磷酸氫鈉、氯化鈉、酚紅、L-鹽酸精氨酸、磷酸氫二鈉、磷酸一鉀、L-精氨酸、鹽酸賴氨酸等。這些其他添加劑，可以作為穩(wěn)定劑、防腐劑、免疫增強劑、緩沖劑、等滲透劑、著色劑添加。再者，疫苗添加劑并不局限于這些。
本實施方式有關的組合物可以為實驗試劑或?qū)嶒炘噭┖小?jù)此，本實施方式有關的疫苗激發(fā)樹突細胞可以以適于各種研究的形態(tài)使用。作為可以使用的研究領域，例如，有關該疾病的信號傳遞機制的研究、關于使用樹突細胞的免疫療法的研究。另外，例如，也可以用于關于該疾病的預防或治療研究，例如基因、RNA、肽、蛋白質(zhì)、化合物、醫(yī)藥、細胞因子等的篩選等目的。
另外，本實施方式有關的組合物可以為醫(yī)藥組合物。本實施方式有關的醫(yī)藥組合物，例如，可以以直接給予生物體內(nèi)的形態(tài)使用，以及在生物體外與其他物質(zhì)和細胞混合的形態(tài)使用。
另外，本實施方式有關的組合物可以是免疫應答激活制劑。本實施方式有關的免疫應答激活制劑，例如可以以直接給予生物體內(nèi)的形態(tài)使用，以及在生物體外與其他物質(zhì)和細胞混合的形態(tài)使用。
作為本實施方式有關的組合物在生物體外使用的形態(tài)，例如，本實施方式有關的免疫應答激活制劑與T細胞混合，通過將疫苗中含有的抗原表位呈遞給T細胞而激活T細胞的使用方法。另外，該T細胞可以給予生物體內(nèi)使用。
另外，作為將本實施方式有關的組合物直接給予生物體內(nèi)的形態(tài)，例如，作為細胞疫苗的注射和滴注。作為細胞疫苗，優(yōu)選疾病的預防或治療疫苗。另外，作為將本實施方式有關的組合物直接給予生物體內(nèi)的部位，例如有靜脈內(nèi)給藥、動脈內(nèi)給藥、胸腔內(nèi)給藥、腹腔內(nèi)給藥、皮下給藥、肌肉內(nèi)給藥、組織內(nèi)(例如肝臟等)給藥、淋巴結(jié)給藥等。從給藥的簡便性的觀點看，優(yōu)選皮下注射。
9、使用疫苗激發(fā)樹突細胞預防或治療疾病本實施方式有關的疫苗激發(fā)樹突細胞可以用于疾病的預防或治療。
本實施方式有關的疫苗激發(fā)樹突細胞，例如，可以與現(xiàn)有的該疾病的預防或治療方法組合使用。
另外，本實施方式有關的疾病的預防或治療可以包括將疫苗激發(fā)樹突細胞給予生物的步驟。作為上述生物，例如可以是能夠感染上述疾病的生物。另外，如果能抑制排斥反應，產(chǎn)生樹突細胞的生物和成為給藥對象的生物可以是同種生物，也可以是異種生物。同種生物的場合，可以將本實施方式有關的樹突細胞給予取出樹突細胞的自體內(nèi)，也可以給予組織適合性抗原一致到可以給藥的程度的異體內(nèi)。
例如上述生物可以為人。這種場合，希望HLA配型盡可能一致。因此，樹突細胞的由來優(yōu)選來自于有血緣關系的提供者的樹突細胞。如果使用自家細胞，不需考慮HLA配型適合性，所以更加優(yōu)選來自給藥對象本人的樹突細胞。
本實施方式有關的疫苗激發(fā)樹突細胞，如上所述，可以以直接給予生物體內(nèi)的形態(tài)使用，以及在生物體外與T細胞混合而激活T細胞，該T細胞可以以給予生物體內(nèi)的形態(tài)使用。但是，由于T細胞為效應細胞，起一次作用后，短時間內(nèi)便死亡、消失。因此，為了預防、治療疾病，需要高頻率反復給予T細胞。而樹突細胞也作用于原初T細胞、記憶T細胞、B細胞，由于反復給與刺激，具有長時間且強力的效果。由此，認為本實施方式有關的疫苗激發(fā)樹突細胞更加優(yōu)選以直接給予生物體內(nèi)的形態(tài)使用。
10、本實施方式有關的疫苗激發(fā)樹突細胞的使用例及其效果下面示出本實施方式有關的疫苗激發(fā)樹突細胞的使用例及其效果。本使用例中，可以包括將本實施方式有關的疫苗激發(fā)樹突細胞給予人的步驟。本使用例可以適用于疾病的預防或治療。再者，本使用例不只限于以下的場合，本使用例有關的樹突細胞的使用形態(tài)，可以在不超出本發(fā)明的要點的范圍內(nèi)做各種變更。
目前，癌癥治療等中進行的樹突細胞疫苗療法中，使用從癌細胞提取的物質(zhì)激發(fā)樹突細胞。如背景技術項中所述，從細胞提取的物質(zhì)一般為多種物質(zhì)的混合物。因此，認為使用細胞提取物質(zhì)激發(fā)的樹突細胞通過細胞提取物質(zhì)中的多種抗原被激發(fā)。認為這樣處理的樹突細胞是包括呈遞不能特定的抗原以及與疾病無關的抗原的樹突細胞的、具有抗原呈遞能力的多種樹突細胞的集團。這樣制成的樹突細胞疫苗在癌癥治療等領域已經(jīng)批準用于治療患病患者，但沒有批準給予正常人群。因此，還不能作為正常人群為了預防疾病用的樹突細胞疫苗。
對此，本實施方式的疫苗激發(fā)樹突細胞可以通過使用疫苗激發(fā)樹突細胞而制備。實際上作為疫苗上市的是確認對包括正常人群在內(nèi)的人有安全性、有效性，并獲得批準的疫苗。因此，本實施方式的用疫苗激發(fā)的樹突細胞，作為用于疾病的治療樹突細胞疫苗，不僅可以用于患者，作為用于疾病的預防樹突細胞疫苗，也可以用于正常人群。
另外，例如關于結(jié)核，日本戰(zhàn)后患者數(shù)雖然順利減少，但是，從1980年前后起，減少率變慢，1997年起患者數(shù)連續(xù)3年增加。另外，治療結(jié)核必需長期給予抗結(jié)核劑，由此產(chǎn)生耐藥菌的可能性非常高，為了防止耐藥菌的產(chǎn)生，2種以上多劑并用是鐵的規(guī)則。
本實施方式有關的疫苗激發(fā)樹突細胞可以用于治療結(jié)核。這里，作為本實施方式有關的疫苗激發(fā)樹突細胞，可以使用由用包括BCG疫苗等結(jié)核疫苗激發(fā)的步驟的方法得到的疫苗激發(fā)樹突細胞。據(jù)此，預想可以降低如上所述的耐藥菌的出現(xiàn)頻率，認為這是結(jié)核的治療中的一大優(yōu)點。另外，關于其他疾病，通過用疫苗激發(fā)樹突細胞治療可以期待同樣的效果，預想治療該疾病也有很大優(yōu)點。
另外，作為使樹突細胞呈遞抗原的另一方法，已知通過將抗原編碼基因插入質(zhì)粒載體等中轉(zhuǎn)染，或插入病毒載體等中使感染，在樹突細胞內(nèi)使目的抗原表達的方法。但是，現(xiàn)在，雖然已經(jīng)批準了將進行這種基因操作的樹突細胞用于治療患病患者，但是還沒有批準用于正常人群預防疾病。
對此，本實施方式的疫苗激發(fā)樹突細胞，如上所述，不僅可以作為對患者疾病的治療疫苗使用，還可以作為對正常人群疾病的預防疫苗使用。
另外，疫苗無效的患者，認為原因之一是樹突細胞功能低下。即，認為目前的只給予生物體的疫苗，為不能充分激活樹突細胞的狀態(tài)。
因此，本實施方式有關的疫苗激發(fā)樹突細胞，例如，通過以直接給予生物體內(nèi)的形態(tài)使用，以及在生物體外與T細胞混合而激活T細胞，將該T細胞給予生物體內(nèi)的形態(tài)使用，對于目前疫苗無效、不能產(chǎn)生抗體的正常人群，也能使產(chǎn)生對目的抗原的抗體。
由此認為，本實施方式有關的疫苗激發(fā)樹突細胞具有廣泛的使用用途和很大的優(yōu)點。另外，認為使用本實施方式有關的疫苗激發(fā)樹突細胞預防或治療疾病，與以往的樹突細胞疫苗療法完全區(qū)分開。
再者，具體實施方式
項中的6～10中的激發(fā)的定義、激發(fā)的具體方法、得到樹突細胞的方法、培養(yǎng)樹突細胞的培養(yǎng)基和細胞因子、疫苗添加劑的檢測方法等，只要沒有特別記載，可以使用與該項的1～5中記載的相同的解釋、方法、物質(zhì)。
實施例1下面根據(jù)實驗例具體說明本發(fā)明，可是本發(fā)明并不只限于本實施例。
(實驗例1)樹突細胞的配制(1)使用用肝素(Novo-heparin注1000Aventis公司生產(chǎn))潤濕內(nèi)腔的注射器(Terumo Syringe SS-50ESZTerumo公司生產(chǎn))，從每個受試者(以已經(jīng)有反復給予HB疫苗經(jīng)驗的健康志愿者5人為對象)采血40～60ml。將得到的血液與和血液同量的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)在專用潔凈工作臺內(nèi)充分混合。然后，根據(jù)使用Ficoll-Conray液(比重1.077)的比重離心法，分離單核細胞。于室溫、1800rpm～3000rpm下離心30分鐘，將離心后的中間層作為單核細胞取出。
(2)同時，按以下步驟，從各受試者得到自身血清。首先，使用不用肝素的另一注射器(Terumo Syringe SS-10ESZTerumo公司生產(chǎn))，從每個受試者采血約10ml。然后，將得到的血液用滅菌過的Vacutainer真空采血管(Becton Dickinson公司生產(chǎn))，于3000rpm下離心，分離血清。
(3)在(1)得到的單核細胞中加入PBS，充分混合。然后，將該樣品于4℃、1800rpm～2700rpm下離心10分鐘，按與(1)同樣的步驟，再度回收單核細胞。將該操作最低重復2次，充分洗滌單核細胞。
(4)計數(shù)由(3)得到的單核細胞，以2×106～2×107/ml的細胞密度，每個35mm培養(yǎng)皿中加入2ml。培養(yǎng)基使用以1～5％濃度加入(2)得到的各受試者的自身血清的RPMI 1640培養(yǎng)基(Nipro公司生產(chǎn)、)。在專用培養(yǎng)室內(nèi)，于37℃、5％CO2濃度、75％空氣的條件下進行培養(yǎng)。
(5)將(4)的單核細胞培養(yǎng)90分鐘后，按以下步驟，分離附著細胞。首先，從培養(yǎng)室取出培養(yǎng)皿，在潔凈工作臺內(nèi)靜置5分鐘。然后，使培養(yǎng)皿傾斜，培養(yǎng)液慢慢撒到附著細胞全體，洗滌，去除淋巴細胞。
(6)將(5)得到的附著細胞(單核細胞)，關于每個培養(yǎng)皿，用加入GM-CSF(PeproTech EC公司生產(chǎn))800U/ml、IL-4(PeproTech EC公司生產(chǎn))500U/ml、自身血清1～5％的RPMI 1640培養(yǎng)基2ml，培養(yǎng)4天。
(7)培養(yǎng)第4天，棄去1ml培養(yǎng)上清，新加入(6)記載的組成的培養(yǎng)基1ml，再培養(yǎng)4天。
(8)培養(yǎng)第8天，從培養(yǎng)皿回收樹突細胞，測定樹突細胞數(shù)。
(實驗例2)用HB疫苗激發(fā)樹突細胞(1)將實驗例1得到的樹突細胞分成2份。1份樹突細胞中添加HB疫苗(r-HB疫苗“Mitsubishi”三菱welpharm公司生產(chǎn))，使最終濃度達到2.5～5μg/ml，培養(yǎng)8～24小時，制備用HBs抗原激發(fā)的樹突細胞(以下，將該細胞記為“HB疫苗激發(fā)樹突細胞”)。在專用培養(yǎng)室內(nèi)，于37℃、5％CO2濃度、75％空氣的條件下進行培養(yǎng)。另一份樹突細胞，不添加HB疫苗，培養(yǎng)，作為陰性對照。
(2)培養(yǎng)后，從培養(yǎng)皿回收HB疫苗激發(fā)樹突細胞。將回收的細胞與PBS混合，于4℃、1500rpm下離心5分鐘后，棄去上清。通過重復5次該操作，將樹突細胞充分洗滌。將得到的樹突細胞加到500μlPBS中。另外，關于陰性對照的樹突細胞也進行同樣的操作。
(實驗例3)給予HB疫苗激發(fā)樹突細胞(1)測定給予HB疫苗激發(fā)樹突細胞前的抗HBs抗體。首先，從5名受試者(已經(jīng)有反復給予HB疫苗經(jīng)驗的健康志愿者)采血，用與實驗例1(2)同樣的方法，從各受試者得到血清。使用該血清，根據(jù)CLIA法測定抗HBs抗體值。結(jié)果如圖1所示。由圖1可知，受試者5人中，2人能夠產(chǎn)生抗HBs抗體(抗HBs抗體陽性，應答者)，3人不能產(chǎn)生抗HBs抗體(抗HBs抗體陰性，無應答者)。
(2)給予受試者HB疫苗激發(fā)樹突細胞。首先，使用實驗例2得到的HB疫苗激發(fā)樹突細胞500μl中的50μl，對各受試者進行對于各自樹突細胞的刺皮試驗。結(jié)果，全部受試者中刺皮試驗均為陰性。然后，各受試者皮下給予各自的HB疫苗激發(fā)樹突細胞450μl。再者，實驗例1～實驗例3所示的HB疫苗激發(fā)樹突細胞的制備、給予過程中，作業(yè)者應穿戴滅菌工作服、滅菌口罩、滅菌帽子進行作業(yè)，操作盡可能在潔凈工作臺內(nèi)進行。使用試劑為購入的滅菌過的試劑(PBSInvitrogen公司生產(chǎn)，RPMI 1640Nipro公司生產(chǎn)等)。使用時，用肉眼及顯微鏡確認試劑不混濁。另外，通過測定培養(yǎng)上清中的內(nèi)毒素，確認培養(yǎng)過程中沒有微生物引起的污染。
(實驗例4)HB疫苗激發(fā)樹突細胞的表面抗原解析使用流式細胞儀進行細胞表面抗原的解析。
(1)將實驗例2得到的HB疫苗激發(fā)樹突細胞以及沒有激發(fā)的樹突細胞于5℃、1500rpm下離心5分鐘，回收?；厥盏募毎肍CM PBS(pH7.22Kibco公司生產(chǎn))洗滌，再于5℃、1500rpm下離心5分鐘，回收。
(2)將(1)得到的各樹突細胞分到4個Spitz管中，加入(a)FITC標記小鼠IgG(Cat.No.349041Becton Dickinson公司生產(chǎn))10μl、(b)PE標記小鼠IgG(Cat.No.349043Becton Dickinson公司生產(chǎn))2μl、(c)FITC標記小鼠抗人HLA-DR單克隆抗體(PM-32414XBectonDickinson公司生產(chǎn))10μl、(d)PE標記抗人CD86(B70/B7-2)(Mat.No.555658Pharmingen公司生產(chǎn))10μl，制備樣品。將其在冰中放置30分鐘，加入溶胞溶液(lysing solution)(Becton Dickinson公司生產(chǎn))2ml，混合，于5℃、2000rpm下離心5分鐘。
(3)將回收的樹突細胞用FCM PBS(PH7.22)反復充分洗滌后，使用FACScalibur(Becton Dickinson公司生產(chǎn))解析表面抗原。
(4)解析的結(jié)果如圖2所示。圖2的橫坐標軸表示解析的表面抗原，縱坐標軸表示表面抗原的相對濃度。由該結(jié)果可知，HB疫苗激發(fā)樹突細胞與沒有激發(fā)的樹突細胞相比，HLA-DR的表達上升1.2倍，CD86的表達上升1.6倍。由這些結(jié)果可知，HB疫苗激發(fā)樹突細胞成熟。
(實驗例5)HB疫苗激發(fā)樹突細胞的功能解析-1(1)從沒有注射疫苗的他人的末梢血中，與實驗例1(1)同樣地采集單核細胞。
(2)使用autoMACS(Miltenyi Biotec公司生產(chǎn))、PanT細胞分離試劑盒(Miltenyi Biotec公司生產(chǎn))，進行從單核細胞分離T細胞的操作。首先，每1×107的單核細胞中加入MACS-Buffer，達80μl，再加入20μl半抗原標記抗體混合物(CD11b、CD16、CD19、CD36、CD56、)，于6～12℃下混合10分鐘。然后，加入MACS-Buffer洗滌，進行2次除去上清的操作。接著，每1×107的單核細胞中加入MACS-Buffer，達80μl，再加入20μl MACS抗半抗原抗體標記玻璃細珠，于6～12℃下混合15分鐘。然后，加入MACS-Buffer洗滌，除去上清。接著，每1×107的單核細胞中加入500μl MACS-Buffer，用autoMACS分選程序進行分選，采集T細胞。
(3)在(a)沒有激發(fā)的樹突細胞1×104細胞、(b)HB疫苗激發(fā)樹突細胞1×104細胞中，分別加入(2)得到的T細胞2×105細胞，培養(yǎng)108小時。培養(yǎng)基使用加入了10％FCS(Filtron公司生產(chǎn))的RPMI 1640培養(yǎng)基。
(4)分別添加用3H標記的胸苷，再培養(yǎng)12小時后，從培養(yǎng)皿回收細胞。
(5)使用γ線計數(shù)器(LS6500Beckman公司生產(chǎn))，評價攝取能力，結(jié)果如圖3所示。圖3的縱坐標軸表示胸苷的攝取能力、橫坐標軸從左邊起表示(3)中所示的(a)、(b)的場合。由該結(jié)果可知，對于HLA不一致的T細胞，HB疫苗激發(fā)樹突細胞與沒有激發(fā)的樹突細胞相比，T細胞幼稚化輔助能力上升1.5～2倍。
(實驗例6)HB疫苗激發(fā)樹突細胞的功能解析-2(1)從受試者(已經(jīng)有反復給予HB疫苗經(jīng)驗的健康志愿者，且是HB疫苗應答者)每人采血60ml，用實驗例1(1)、實驗例5(2)的方法采集T細胞(以下，將該T細胞記為“HBs記憶-T細胞”)。
(2)用實驗例1的方法從相同受試者采集樹突細胞，分成2份。1份樹突細胞用實驗例2的方法，作為HB疫苗激發(fā)樹突細胞，另一份樹突細胞，不用HB疫苗激發(fā)，作為陰性對照。
(3)將(a)HBs記憶-T細胞1×105細胞和HB疫苗10μg、(b)HBs記憶-T細胞1×105細胞和沒有激發(fā)的樹突細胞1×104細胞、(c)HBs記憶-T細胞1×105細胞和HB疫苗激發(fā)樹突細胞1×104細胞，分別混合培養(yǎng)。
(4)7天后，在測定的12小時前，給予用3H標記的胸苷，與實驗例5(5)同樣地，使用γ線計數(shù)器測定胸苷攝取能力。
(5)結(jié)果如圖4所示。圖4的縱坐標軸表示相對cpm比，橫坐標軸從左邊起表示(3)中記載的(a)、(b)、(c)的場合。由該結(jié)果可知，與(b)的與沒有激發(fā)的樹突細胞混合培養(yǎng)的場合相比，(c)的與HB疫苗激發(fā)樹突細胞混合培養(yǎng)的cpm達到7倍，HBs記憶-T細胞增殖。
(實驗例7)HB疫苗激發(fā)樹突細胞的功能解析-3(1)從受試者(已經(jīng)有反復給予HB疫苗經(jīng)驗的健康志愿者，且是HB疫苗應答者)每人采血60ml，用實驗例1(1)的方法采集單核細胞。
(2)將單核細胞6×107細胞與(a)什么也不混合、(b)HB疫苗10μg、(c)沒有激發(fā)的樹突細胞1×105細胞、(d)HB疫苗激發(fā)樹突細胞1×105細胞，分別混合培養(yǎng)。培養(yǎng)條件與實驗例1(4)相同。
(3)5天后，回收培養(yǎng)上清，根據(jù)CLIA法測定抗HBs抗體值。
(4)結(jié)果如圖5所示。圖5的縱坐標軸表示抗HBs抗體值，橫坐標軸從左邊起表示(2)中記載的(a)、(b)、(c)、(d)的場合。由該結(jié)果可知，HB疫苗和沒有激發(fā)的樹突細胞混合的場合，不能產(chǎn)生抗HBs抗體，HB疫苗激發(fā)樹突細胞混合的場合，能夠產(chǎn)生15～56mIU/ml抗HBs抗體。
(實驗例8)給予HB疫苗激發(fā)樹突細胞伴隨的過敏反應試驗(0～24小時)(1)實驗例3中，各受試者皮下給予HB疫苗激發(fā)樹突細胞后，于0～24小時確認有無給予疫苗伴隨的炎癥等過敏反應。
(2)其結(jié)果，給予HB疫苗激發(fā)樹突細胞的受試者5人，均沒有出現(xiàn)發(fā)熱、發(fā)紅、休克等急性期過敏反應。因此，確認HB疫苗激發(fā)樹突細胞安全。
(實驗例9)通過血液生化檢查的安全性試驗(第0、1、3、14天)(1)為了進一步確認實驗例3中給予受試者HB疫苗激發(fā)樹突細胞的安全性，對于各受試者，進行關于CBC、肝功能、腎功能等的50個項目以上的檢查。代表性檢查項目如圖6所示。
(2)ALT、CRP、PT、肌酸酐檢查結(jié)果如圖7～10所示。各圖的橫坐標軸表示自給予起的天數(shù)，縱坐標軸表示檢查項目及其值。結(jié)果，給予HB疫苗激發(fā)樹突細胞的受試者5人，血液生化檢查均未見異常。由此可知HB疫苗激發(fā)樹突細胞安全。
(實驗例10)關于使用血清生化檢查的自體免疫反應的安全性試驗(第0、14天)(1)為了研究實驗例3中給予受試者的HB疫苗激發(fā)樹突細胞有無引起自體免疫反應，進行了IgG量、IgM量的測定、甲狀腺試驗、微粒體試驗、抗核抗體等自身抗體檢查。
(2)結(jié)果如圖11所示。結(jié)果，給予HB疫苗激發(fā)樹突細胞的受試者5人，均沒有發(fā)現(xiàn)自體免疫反應。由此可知，HB疫苗激發(fā)樹突細胞安全。
(實驗例11)體內(nèi)HB疫苗激發(fā)樹突細胞的抗HBs抗體誘導能力的評價(第0天、第2、3、4、12周)(1)用實驗例1(2)的方法，從實驗例3中給予HB疫苗激發(fā)樹突細胞的各受試者采集血清，根據(jù)CLIA法測定抗HBs抗體值。
(2)結(jié)果如圖12、13、14所示。圖12、14的橫坐標軸表示自給予起的周數(shù)、縱坐標軸表示抗HBs抗體值。另外，圖13是將圖12的圖表的值數(shù)值化。圖14是表示HB疫苗無應答者的受試者的抗HBs抗體值的變化的圖。圖12、13的結(jié)果，通過給予1次HB疫苗激發(fā)樹突細胞，關于HB疫苗無應答的受試者3人，有2人變得可以產(chǎn)生抗HBs抗體。另外，關于HB疫苗應答者的受試者2人，抗HBs抗體值也上升。由于這4例受試者抗HBs抗體值為10mIU/ml以上，所以認為通過給予1次HB疫苗激發(fā)樹突細胞，便可產(chǎn)生預防或治療乙型肝炎的充足量的抗體。另外，由圖14的結(jié)果可知，該HB疫苗應答者的受試者，10mIU/ml以上的抗HBs抗體值至少可以維持3個月。
權利要求
1.具有HB s抗原呈遞能力的樹突細胞，其由包括用HB s抗原激發(fā)樹突細胞的步驟的方法得到。
2.權利要求1所述的具有HB s抗原呈遞能力的樹突細胞，其中，上述方法進一步包括從血液得到上述樹突細胞的步驟。
3.權利要求2所述的具有HB s抗原呈遞能力的樹突細胞，其中，上述方法進一步包括從生物采集上述血液的步驟。
4.權利要求3所述的具有HB s抗原呈遞能力的樹突細胞，其中，上述生物為人。
5.權利要求1所述的具有HB s抗原呈遞能力的樹突細胞，其中，上述HB s抗原是HB疫苗中含有的HB s抗原。
6.具有HB s抗原呈遞能力的樹突細胞的制備方法，所述方法包括用HB s抗原激發(fā)樹突細胞的步驟。
7.權利要求6所述的具有HB s抗原呈遞能力的樹突細胞的制備方法，所述方法進一步包括從血液得到上述樹突細胞的步驟。
8.權利要求7所述的具有HB s抗原呈遞能力的樹突細胞的制備方法，所述方法進一步包括從生物采集上述血液的步驟。
9.權利要求8所述的具有HB s抗原呈遞能力的樹突細胞的制備方法，其中，上述生物為人。
10.權利要求6所述的具有HB s抗原呈遞能力的樹突細胞的制備方法，其中，上述HB s抗原為HB疫苗中含有的HB s抗原。
11.含有權利要求1～5之任一項所述的具有HB s抗原呈遞能力的樹突細胞的組合物。
12.權利要求11所述的組合物，其進一步含有HB疫苗添加劑。
13.權利要求11或12所述的組合物，其中，上述組合物為實驗試劑或?qū)嶒炘噭┖小?br> 14.權利要求11或12所述的組合物，其中，上述組合物為醫(yī)藥組合物。
15.權利要求11或12所述的組合物，其中，上述組合物為免疫應答激活制劑。
16.權利要求11或12所述的組合物，其中，上述組合物為細胞疫苗。
17.權利要求16所述的組合物，其中，上述細胞疫苗為乙型肝炎的預防或治療疫苗。
18.乙型肝炎的預防或治療方法，所述方法使用權利要求1～5之任一項所述的具有HB s抗原呈遞能力的樹突細胞。
19.乙型肝炎的預防或治療方法，所述方法包括將權利要求1～5之任一項所述的具有HB s抗原呈遞能力的樹突細胞給予生物的步驟。
20.權利要求19所述的乙型肝炎的預防或治療方法，其中，上述生物為人。
21.疫苗激發(fā)樹突細胞，其由包括用疫苗激發(fā)樹突細胞的步驟的方法得到。
22.權利要求21所述的疫苗激發(fā)樹突細胞，其中，上述方法進一步包括從血液得到上述樹突細胞的步驟。
23.權利要求22所述的疫苗激發(fā)樹突細胞，其中，上述方法進一步包括從生物采集上述血液的步驟。
24.權利要求23所述的疫苗激發(fā)樹突細胞，其中，上述生物為人。
25.權利要求21所述的疫苗激發(fā)樹突細胞，其中，上述疫苗為疾病的預防或治療疫苗。
26.權利要求21所述的疫苗激發(fā)樹突細胞，其中，上述疫苗為肝炎疫苗。
27.權利要求26所述的疫苗激發(fā)樹突細胞，其中，上述肝炎疫苗為含有HB s抗原的HB疫苗。
28.疫苗激發(fā)樹突細胞的制備方法，所述方法包括用疫苗激發(fā)樹突細胞的步驟。
29.權利要求28所述的疫苗激發(fā)樹突細胞的制備方法，其進一步包括從血液得到上述樹突細胞的步驟。
30.權利要求29所述的疫苗激發(fā)樹突細胞的制備方法，其進一步包括從生物采集上述血液的步驟。
31.權利要求30所述的疫苗激發(fā)樹突細胞的制備方法，其中，上述生物為人。
32.權利要求28所述的疫苗激發(fā)樹突細胞的制備方法，其中，上述疫苗為疾病的預防或治療疫苗。
33.權利要求28所述的疫苗激發(fā)樹突細胞的制備方法，其中，上述疫苗為肝炎疫苗。
34.權利要求33所述的疫苗激發(fā)樹突細胞的制備方法，其中，上述肝炎疫苗為含有HB s抗原的HB疫苗。
35.含有權利要求21～27之任一項所述的疫苗激發(fā)樹突細胞的組合物。
36.權利要求35所述的組合物，其進一步含有疫苗添加劑。
37.權利要求35或36所述的組合物，其中，上述組合物為實驗試劑或?qū)嶒炘噭┖小?br> 38.權利要求35或36所述的組合物，其中，上述組合物為醫(yī)藥組合物。
39.權利要求35或36所述的組合物，其中，上述組合物為免疫應答激活制劑。
40.權利要求35或36所述的組合物，其中，上述組合物為細胞疫苗。
41.權利要求40所述的組合物，其中，上述細胞疫苗為疾病的預防或治療疫苗。
42.疾病的預防或治療方法，所述方法使用權利要求21～27之任一項所述的疫苗激發(fā)樹突細胞。
43.疾病的預防或治療方法，所述方法包括將權利要求21～27之任一項所述的疫苗激發(fā)樹突細胞給予生物的步驟。
44.權利要求43所述的疾病的預防或治療方法，其中，上述生物為人。
全文摘要
本發(fā)明提供對疾病，主要是乙型肝炎的預防、治療有效的樹突細胞。由包括用HBs抗原激發(fā)樹突細胞的步驟的方法得到的具有HBs抗原呈遞能力的樹突細胞，作為樹突細胞疫苗，對乙型肝炎的預防、治療有效。作為HBs抗原，可以使用HB疫苗中含有的HBs抗原。由包括用疫苗激發(fā)樹突細胞的步驟的方法得到的疫苗激發(fā)樹突細胞，作為樹突細胞疫苗，不僅可以用于患者，也可以用于正常人群。作為激發(fā)中使用的疫苗，可以使用各種疫苗。
文檔編號C12N5/08GK1680549SQ20041007862
公開日2005年10月12日 申請日期2004年9月14日 優(yōu)先權日2004年4月6日
發(fā)明者Sk.·Md.·法茲勒·阿克巴爾, 恩地森一 申請人:四國技術網(wǎng)絡株式會社