專利名稱：松針提取物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及組合物，涉及包含所述組合物的食品、食物添加物或者藥物組合物，涉及所述組合物的用途和產(chǎn)生所述組合物的方法。
松針是松科(Pinaceae)，包括松屬(Pinus)的植物的葉子。某些類型的松針可以大量得到并且已經(jīng)用于多種目的。已經(jīng)在JP08107778A和JP07059538中描述了可用于特定飲料的松針提取物。在JP 01218562A中描述了含有松針提取物的年糕。
在WO 94/15483中描述了從松針提取紫杉醇的方法。
已知高血壓(或者血壓過(guò)高)與許多醫(yī)學(xué)問(wèn)題有關(guān)。高血壓直接增加冠心病和中風(fēng)的危險(xiǎn)。高血壓主要在35歲以上的人中發(fā)生，但是環(huán)境和遺傳因素和某些醫(yī)學(xué)狀況，如糖尿病、通風(fēng)或者腎病可以導(dǎo)致所有年齡的人們中高血壓的危險(xiǎn)增加。
WO 98/28990公開(kāi)了使用植物甾醇和/或stanol以及水平增加的鎂、鈣和鉀的一種或多種制備食物調(diào)味品、食物成分和食品的方法。據(jù)說(shuō)攝入所述食物導(dǎo)致膽固醇水平和血壓都降低。
仍然需要可以減小高血壓的活性材料，尤其可以用作食品添加物或者用于食品的天然存在的材料。
US6,329,000公開(kāi)了某些松針提取物在治療多種疾病中的用途，所述疾病包括心肌炎、咽峽炎、心律失常、糖尿病、老年性癡呆、突發(fā)性耳聾和高血壓。使用水和醇作為溶劑，通過(guò)相對(duì)簡(jiǎn)單的提取方法得到松針提取物。
US 5,607,971公開(kāi)了使用甲醇、二乙醚和二氯甲烷從西黃松(Pinus ponderosa)提取血管活性脂類。所分離的化合物是酯化的烷二醇(alkanediols)。
US 5,690,984描述了通過(guò)在高壓容器中在高壓將松針與其他天然產(chǎn)物的混合物在水中煮沸而從松針制備的飲料。
松針和它們的提取物可以含有異柏油酸(isocupressic acid)。已經(jīng)描述異柏油酸在肉用牛中導(dǎo)致毒性問(wèn)題。在US6,329,000、US5,607,971和US 5,690,984中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在所述提取物中保留大量異柏油酸。
US 5,466,453教導(dǎo)了改善松樹(shù)提取物的味道的方法。US6,254,858涉及毛發(fā)治療組合物，其除了別的成分外含有松汁。US187,802描述了含有械糖和松針和杜松子提取物的消毒組合物。本發(fā)明人認(rèn)為所述產(chǎn)物將含有大量異柏油酸。
已經(jīng)令人驚奇地發(fā)現(xiàn)可以從松針提取物除去異柏油酸以形成仍然顯示出治療活性(如降低血壓的能力)的提取物。
根據(jù)本發(fā)明，提供了可以作為松針提取物得到的組合物，其具有治療活性并且包含量小于0.01重量％(基于組合物的總重量按重量計(jì)算)的異柏油酸化合物，并且優(yōu)選還包含一種或多種有機(jī)酸(例如，莽草酸和/或奎尼酸)。
另一方面，本發(fā)明提供了包含本發(fā)明組合物的食品(例如，基于奶制品的食品)、食物添加物或者藥物組合物。
本發(fā)明的另一方面是改善食品的一種或多種性質(zhì)的方法，所述性質(zhì)選自硬度、質(zhì)地、通氣性、流散性、經(jīng)口性質(zhì)、口感、風(fēng)味、顏色、粘性、處理容易性和健康性質(zhì)，所述方法包括向所述食品摻入包含一種或多種有機(jī)化合物的組合物，所述組合物可以作為松針提取物得到。與另外不含有所述材料的相同食品相比，所述性質(zhì)得到改善。
本發(fā)明還提供了本發(fā)明的組合物、食品、食物添加物、藥物組合物或者基于奶制品的食品，它們用于降低哺乳動(dòng)物，尤其人的血壓。
另一方面，本發(fā)明提供了包含一種或多種有機(jī)化合物的材料的用途，所述材料可以作為松針提取物得到，用于改善選自硬度、質(zhì)地、通氣性、流散性、經(jīng)口性質(zhì)、口感、風(fēng)味、顏色、粘性、處理容易性和健康性質(zhì)的一種或多種食品性質(zhì)。與另外不含有所述材料的相同食品相比，所述性質(zhì)得到改善。
在再一方面，本發(fā)明是產(chǎn)生本發(fā)明的組合物的方法，其包括下面的步驟用選自水、有機(jī)溶劑和其混合物(優(yōu)選水)的溶劑，優(yōu)選在40℃到110℃的升高的溫度下處理松針形成第一種提取物；從第一種提取物除去異柏油酸化合物，優(yōu)選通過(guò)用離子交換樹(shù)脂和/或活性炭(優(yōu)選在第一種提取物在水溶液中時(shí)，更優(yōu)選在升高的溫度下)處理；并任選過(guò)濾并濃縮所處理的提取物以得到組合物，其為粉末或者濃縮物。優(yōu)選地，在步驟(a)之前，將松針用非極性溶劑(例如，具有4到10個(gè)碳原子的烷，如己烷)預(yù)處理，更優(yōu)選在40℃到90℃溫度下預(yù)處理。該預(yù)處理通常除去至少部分異柏油酸。
本發(fā)明的組合物，和包含所述組合物的產(chǎn)品能夠降低哺乳動(dòng)物，尤其人的血壓。因此，本發(fā)明還涉及降低哺乳動(dòng)物中血壓(和/或治療高血壓)的方法，其包括施用本發(fā)明的組合物、食品、食物添加物、藥物組合物或者基于奶制品的食品。本發(fā)明還提供了本發(fā)明的組合物、食品、食物添加物、藥物組合物或者基于奶制品的食品在生產(chǎn)用于治療和/或預(yù)防高血壓的組合物中的用途。
本發(fā)明的組合物可以為固體或者液體的形式，包括溶液、懸浮液和分散體。優(yōu)選地，本發(fā)明的組合物為粉末或者水溶液的形式。
令人驚奇地，本發(fā)明的組合物保留治療活性，盡管已經(jīng)對(duì)它處理到這種程度以至于它包含量小于0.01重量％的異柏油酸化合物，因?yàn)橐呀?jīng)發(fā)現(xiàn)異柏油酸化合物具有降低血壓的活性。術(shù)語(yǔ)治療活性在該上下文中指用于治療、抑制或者預(yù)防疾病或者病癥。疾病和病癥包括，但不限于，高血壓(血壓過(guò)高)。
本發(fā)明可以涉及一種或多種下面的作用降低血壓；降低收縮血壓和舒張血壓；減小心搏率；減小交感神經(jīng)活性；降低冠心病的機(jī)會(huì)；減小動(dòng)脈瘤的機(jī)會(huì)；減小中風(fēng)的機(jī)會(huì)；改善血壓循環(huán)；改善心血管系統(tǒng)；改善血管健康；減小對(duì)平滑肌組織的應(yīng)激；減小胸痛的機(jī)會(huì)；提供部分健康生活方式；提高健康循環(huán)的機(jī)會(huì)；減小衰老對(duì)血管的影響；減小心區(qū)不適；和改善鍛煉后的恢復(fù)時(shí)間。
本發(fā)明的組合物含有的異柏油酸化合物的量?jī)?yōu)選小于0.005重量％，更優(yōu)選小于0.003重量％，甚至更優(yōu)選小于0.002重量％，如小于0.001重量％。術(shù)語(yǔ)“異柏油酸化合物”和“異柏油酸”在此處同義使用并且指異柏油酸自身并且優(yōu)選涉及在松針和它們的提取物中發(fā)現(xiàn)的二萜酸，如imbricatoloic acid、貝克杉酸、二氫貝克杉酸和四氫貝克杉酸。異柏油酸可以為這些酸的衍生物的形式，例如，acetylimbricatoloic acid和乙酰基異柏油酸。因此，優(yōu)選地，本發(fā)明的組合物含有異柏油酸、imbricatoloic acid、貝克杉酸、二氫貝克杉酸、四氫貝克杉酸、acetylimbricatoloic acid和乙?；惏赜退?，它們的量小于0.005重量％，更優(yōu)選小于0.003重量％，甚至更優(yōu)選小于0.002重量％，如小于0.001重量％。優(yōu)選地，所述組合物沒(méi)有異柏油酸或者基本上無(wú)異柏油酸(即，到達(dá)異柏油酸的存在不能通過(guò)常規(guī)技術(shù)檢測(cè)和/或?qū)M合物的性質(zhì)沒(méi)有影響的程度)。例如，通過(guò)GCMS可以測(cè)定異柏油酸的水平。
所述組合物是可以得到的，并且優(yōu)選從松針得到。松針優(yōu)選來(lái)自不同于西黃松的松樹(shù)物種。松樹(shù)物種包括美國(guó)白皮松(Pinusalbicaulis)、刺果松(Pinus aristata)、窄果松(Pinus attenuata)、巴耳弗氏松(Pinus balfouriana)、美國(guó)短葉松(Pinus banksiana)、白皮松(Pinus bungeana)、瑞士五針?biāo)?Pinus cembra)、墨西哥果松(Pinus cembroides)、沙松(Pinus clausa)、小干松(Pinuscontorta)、大果松(Pinus coulteri)、赤松(Pinus densiflora)、短葉松(Pinus echinata)、食松(Pinus edulis)、南濕地松(Pinuse1lliottii)、恩氏松(Pinus engelmannii)、柔松(Pinus flexilis)、光松(Pinus glabra)、巴爾干松(Pinus heldreichii)、約弗松(Pinus jeffreyi)、糖松(Pinus lambertiana)、Pinus longaeva、馬尾松(Pinus massoniana)、單葉松(Pinus monophylla)、山白松(Pinus monticola)、歐洲山松(Pinus mugo)、粗糙松(Pinusmuricata)、歐洲黑松(Pinus nigra)、長(zhǎng)葉松(Pinus palustris)、日本五針?biāo)?Pinus parviflora)、刺針?biāo)?Pinus pungens)、四鐘松(Pinus quadrifolia)、輻射松(Pinus radiata)、美加紅松(Pinus resinosa)、剛松(Pinus rigida)、沙濱松(Pinussabiniana)、晚松(Pinus serotina)、類球松(Pinus strobiformis)、北美喬松(Pinus strobus)、歐洲赤松(Pinus sylvestris)、油松(Pinus tabulaeformis)、火炬松(Pinus taeda)、Pinusthunbergiana、陶松(Pinus torreyana)、北美二針?biāo)?Pinusvirginiana)、云南松(Pinus yuannensis)和華樹(shù)松(Pinuswashoensis)。優(yōu)選地，所述組合物來(lái)自馬尾松、油松或云南松，更優(yōu)選地，所述材料來(lái)自馬尾松。所述組合物優(yōu)選包含一種或多種有機(jī)化合物，更優(yōu)選兩種或更多種有機(jī)化合物。有機(jī)化合物為包含碳、氫和氧原子和任選其他原子如氮、磷和硫的化合物。
組合物優(yōu)選包含至少兩種組分A和B，其中A是通過(guò)使用100％甲醇作為洗脫劑從二氧化硅柱洗脫從A和B的混合物可得到的化合物，B是在一系列隨后洗脫中使用甲醇/水混合物(按體積計(jì)5-40％)從相同二氧化硅柱可得到的化合物。A優(yōu)選選自植物甾醇、多酚、生物類黃酮、鞣酸類、有機(jī)酸和它們的復(fù)合物。B優(yōu)選選自氨基酸、肽、蛋白質(zhì)、槲皮素、萜類、黃酮醇糖苷、雙黃酮、原花色素、聚異戊烯醇、木脂體類和礦物質(zhì)。所述組合物可以包含一種或多種化合物A和一種或多種化合物B。
優(yōu)選地，組合物包含A(或者總的A化合物，其中存在一種以上的A化合物)，基于組合物的重量，A的量為5到60重量％，優(yōu)選10到50重量％，最優(yōu)選15到40重量％，并且該組合物包含B(或者總的B化合物，其中存在一種以上的A化合物)，基于組合物的重量，B的量為1到15重量％，優(yōu)選2到12重量％，最優(yōu)選3到10重量％。
因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物包含選自植物甾醇、多酚、生物類黃酮、鞣酸類、有機(jī)酸和它們的復(fù)合物至少一種化合物和選自氨基酸、肽、蛋白質(zhì)、槲皮素、萜類、黃酮醇糖苷、雙黃酮、原花色素、聚異戊烯醇、木脂體類和礦物質(zhì)的至少一種化合物。
本發(fā)明的組合物優(yōu)選包含莽草酸和/或奎尼酸。莽草酸優(yōu)選以按組合物的重量計(jì)至少10％，優(yōu)選至少12％，更優(yōu)選至少15％，如至少16％，至少17％，至少18％，至少19％或至少20％的量存在于本發(fā)明的組合物中。莽草酸的量的上限按組合物的重量計(jì)通常不超過(guò)50％，更優(yōu)選不超過(guò)40％，如不超過(guò)30％，或者不超過(guò)25％。莽草酸可以以鹽或者其他衍生物，如乙?；ゴ嬖凇?br> 奎尼酸(通常為D-奎尼酸)優(yōu)選以按組合物的重量計(jì)至少5％，優(yōu)選至少6％，更優(yōu)選至少7％，如至少8％，至少9％，至少10％，至少12％或至少15％的量存在于本發(fā)明的組合物中?？崴岬牧康纳舷薨唇M合物的重量計(jì)通常不超過(guò)30％，更優(yōu)選不超過(guò)27％，如不超過(guò)25％，或者不超過(guò)20％。莽草酸可以以鹽或者其他衍生物，如乙?；ゴ嬖?。
本發(fā)明的特別優(yōu)選的組合物包含莽草酸和奎尼酸，其量在前面的兩個(gè)段落中指定。此類組合物的實(shí)例包含按重量計(jì)至少10％莽草酸和按重量計(jì)至少5％奎尼酸，如10％到30％莽草酸和5％到20％奎尼酸。
本發(fā)明的組合物可以還包含低分子量糖，優(yōu)選具有低于1000道爾頓的分子量的糖。優(yōu)選的低分子量糖為單糖單位并且包括葡萄糖、果糖和肌醇。低分子量糖的量?jī)?yōu)選按組合物的重量計(jì)為15％到50％，如按組合物的重量計(jì)為20％到40％，或者20％到35％。
本發(fā)明的組合物可以用于食品(例如，基于奶制品的食品)、食物添加物或者藥物組合物。這些產(chǎn)品提供了遞送組合物的方便形式。本發(fā)明的組合物可以包含抗氧化劑，其量可以有效增加組合物對(duì)于氧化的穩(wěn)定性，以及任選地著色劑和/或防腐劑。
根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選的組合物為食品。食品包括液體(例如，飲料)和固體。適宜地，將食品包裝并標(biāo)記為食品。常規(guī)食品可以摻入適宜量的本發(fā)明組合物。
藥物組合物可以例如，為片劑、丸劑、膠囊、囊片(caplet)、多顆粒，包括顆料、珠、丸和微囊化顆粒；粉末、酏劑、糖漿、懸浮液和溶液。藥物組合物將包含可藥用稀釋劑或者載體。藥物組合物優(yōu)選適于腸胃外施用(例如，經(jīng)口)。可經(jīng)口施用的組合物可以為固體或者液體形式并且可以為片劑、粉末、懸浮液和糖漿的形式。任選地，組合物包含一種或多種調(diào)味劑和/或著色劑。適于用于此類組合物的可藥用載體是藥劑學(xué)領(lǐng)域公知的。本發(fā)明的藥物組合物可以含有按重量計(jì)0.1-99％的本發(fā)明組合物。本發(fā)明的藥物組合物通常以單位劑量形式制備。
包含所述組合物的產(chǎn)品形式的其他實(shí)例為食物添加物，如軟凝膠或者硬膠囊的形式，優(yōu)選包含膠囊化材料，其選自明膠、淀粉、修飾的淀粉、淀粉衍生物，如葡萄糖、蔗糖、乳糖和果糖。膠囊化材料可以任選含有交聯(lián)劑或者聚合劑、穩(wěn)定劑、抗氧化劑、用于保護(hù)光敏填充物的光吸收劑、防腐劑等等。優(yōu)選地，食物添加物中本發(fā)明組合物的單位劑量為1mg到1000mg(更優(yōu)選100mg到750mg)。
本發(fā)明的食品優(yōu)選為基于奶制品的食品。基于奶制品的食品含有的組合物的量為基于基于奶制品的食品的總重量和基于組合物的干重0.01重量％到10重量％，更優(yōu)選0.05重量％到5重量％，甚至更優(yōu)選0.1重量％到2重量％?；谀讨破返氖称钒墒秤卯a(chǎn)品，其包含來(lái)自奶的一種或多種蛋白質(zhì)、脂肪和/或糖。奶蛋白質(zhì)包括，例如，酪蛋白，且奶糖包括例如，乳糖。優(yōu)選地，基于奶制品的食品包含的奶蛋白質(zhì)的量為基于基于奶制品的食品的重量，按重量計(jì)至少0.01％，更優(yōu)選按重量計(jì)0.1％，甚至更優(yōu)選按重量計(jì)1％。
本發(fā)明的基于奶制品的食品優(yōu)選具有0.5到99.5重量％，優(yōu)選20到90重量％，最優(yōu)選30到85重量％的水含量。
基于奶制品的食品通常為水包油(O/W)乳劑、雙連續(xù)乳劑或者雙重W/O/W(水包油包水)乳劑。
本發(fā)明的某些基于奶制品的食品包含脂肪相。脂肪相優(yōu)選在顯示出的固體脂肪含量(通過(guò)非穩(wěn)定化脂肪的NMR測(cè)量)為在5℃時(shí)(＝N5)＞10，優(yōu)選＞20，且在35℃時(shí)(＝N35)＜20，優(yōu)選＜10，最優(yōu)選小于5。通過(guò)非穩(wěn)定化脂肪的NMR確定固體脂肪含量的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的并且包括Fette，Seifen，Anstrichmittel，80(1978)，180-186中描述的方法。非穩(wěn)定化指在80℃以上首次熔化脂肪后測(cè)量N值，隨之將熔化物冷卻到0℃并在0℃保持30分鐘，然后將脂肪加熱以測(cè)量溫度并保持在該溫度30分鐘，隨之測(cè)量N-值。
本發(fā)明的基于奶制品的食品的實(shí)例是奶油、奶、水連續(xù)的或者雙連續(xù)的涂抹料、糖果或甜食涂抹料、巧克力、小吃棒(snackbar)、營(yíng)養(yǎng)棒、冰淇淋、糖果填充物或者澆頭、面包房填充物或者澆頭、酸乳酪，包括可飲用的酸乳酪、農(nóng)舍凝乳干酪、牛奶冰淇淋、減肥飲料、干酪和干酪涂抹料。
優(yōu)選地，本發(fā)明的基于奶制品的食品基本上無(wú)反式脂肪酸(其是含有12到24個(gè)碳原子并且具有一個(gè)碳-碳雙鍵的羧酸)，即它們含有按重量計(jì)小于1％，優(yōu)選按重量計(jì)小于0.5％，更優(yōu)選按重量計(jì)小于0.1％，如按重量計(jì)小于0.05％或者小于0.01％的量的反式脂肪酸。
本發(fā)明的基于奶制品的食品與不含有所述組合物的相應(yīng)產(chǎn)品相比具有一種或多種下面的性質(zhì)改善的硬度、改善的質(zhì)地、改善的通氣性、改善的流散性、改善的經(jīng)口性質(zhì)、改善的口感、改善的風(fēng)味、更好的顏色、改善的粘性、更好的形狀保持、改善的攪打性質(zhì)和改善的處理容易性。與不含有所述材料的另外的相同食品相比性質(zhì)得到改善。根據(jù)本發(fā)明改善的優(yōu)選性質(zhì)為經(jīng)口性質(zhì)和/或外觀，尤其在經(jīng)口性質(zhì)和/或外觀方面更像奶油。
下面的非限制性實(shí)施例闡明本發(fā)明并且不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。在該說(shuō)明書(shū)的實(shí)施例和全文中，除非另外指出，所有百分?jǐn)?shù)、份數(shù)和比率都是按重量計(jì)的。
實(shí)施例在實(shí)施例中參考

圖1。
圖1顯示了脫羥腎上腺素導(dǎo)致的大鼠主動(dòng)脈的劑量依賴的收縮和通過(guò)本發(fā)明的松針提取物對(duì)該作用的抑制。
實(shí)施例1松針提取物將來(lái)自馬尾松(異柏油酸(ICA)含量0.33重量％)的100g松針用水清潔，切成小段(3-4cm)并置入燒瓶中。向燒瓶中加入500g己烷并在攪拌下加熱回流(～60℃)約3到5小時(shí)。所得松針溶液通過(guò)布氏漏斗過(guò)濾并使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去己烷。粗提取物含有8重量％的異柏油酸家族化合物。該提取物不用于進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。
將用己烷處理后剩余的殘余物轉(zhuǎn)移到燒瓶中并加入500ml去礦質(zhì)水。在100℃攪拌混合物約3-5小時(shí)。然后將提取物通過(guò)布氏漏斗過(guò)濾并濃縮到150ml。向該提取物加入12.5g樹(shù)脂(Dowex MarathonA，Polysep Industrial Consultants)；溫度保持在50℃3小時(shí)。通過(guò)布氏漏斗過(guò)濾除去樹(shù)脂后，將溶液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中干燥以產(chǎn)生松針?lè)勰?ICA含量0.003重量％)。
實(shí)施例2從自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)得到胸主動(dòng)脈。將胸主動(dòng)脈切成長(zhǎng)4到6mm的環(huán)并且每個(gè)環(huán)連接到張力轉(zhuǎn)換器，其處于恒溫控制和充氧的含有改性的Krebs-Henselheit緩沖液的器官浴中。在等張條件下連續(xù)記錄主動(dòng)脈環(huán)的收縮。平衡組織后，給予單劑的1μM脫羥腎上腺素以敏化組織，然后清洗。之后，產(chǎn)生脫羥腎上腺素的兩種累積劑量反應(yīng)曲線。在沒(méi)有提取物時(shí)得到第一種劑量反應(yīng)曲線并且將其用作對(duì)照曲線。充分洗滌(7次)后，將組織與松針提取物溫育1小時(shí)。該溫育期后，在提取物的濃縮形式存在下得到第二種劑量反應(yīng)曲線。將參照曲線的最大反應(yīng)作為對(duì)照來(lái)分析數(shù)據(jù)。
圖1表明脫羥腎上腺素導(dǎo)致大鼠主動(dòng)脈的劑量依賴性收縮(圖中的上方曲線)。與實(shí)施例1的松針提取物溫育后，脫羥腎上腺素對(duì)大鼠主動(dòng)脈的收縮受到明顯抑制(圖中的下方曲線)。
實(shí)施例3
提取物的制備產(chǎn)生兩種松針提取物。第一種提取物(提取物1)是含有異柏油酸的比較實(shí)例。第二種實(shí)例(提取物2)是第一種提取物的純化形式并且是根據(jù)本發(fā)明的實(shí)例。
如下得到提取物1●將來(lái)自馬尾松的100g松針清潔，切成小段(約3到4cm)并置入燒瓶中。
●加入1升水●將混合物加熱并保持在回流溫度(約100℃)5小時(shí)●從混合物除去松針殘余物●通過(guò)用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去水得到松針提取物(提取物1)。
通過(guò)如下進(jìn)一步處理提取物1得到提取物2●將如上得到的200g松針提取物作為提取物2(含有～5-10％水)與1.2升去礦質(zhì)水混合。將其在70℃水浴中靜置半小時(shí)以溶解。
●將該混合物轉(zhuǎn)移到反應(yīng)容器中并在70℃攪拌15分鐘。
●加入40g樹(shù)脂(Dowex 50W)并在50℃繼續(xù)攪拌3小時(shí)，然后過(guò)濾混合物。過(guò)濾后，重復(fù)該步驟(即，加入樹(shù)脂，攪拌并過(guò)濾)。
●加入0.8g Norit SA4活性炭。
●攪拌所得混合物1小時(shí)同時(shí)保持溫度在85℃。
●將所得混合物通過(guò)布氏濾器(54；Φ185mm)過(guò)濾3次。
●使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器從濾液蒸發(fā)水以得到提取物2。
用于確定異柏油酸(ICA)的分析方法的一般步驟如下通過(guò)基于Soxhlet提取的方法用50mL二氯甲烷提取樣品約3小時(shí)。提取后，通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去二氯甲烷。該步驟后，加入十七酸作為內(nèi)標(biāo)。該組分用于能夠最終定量。然后將樣品溶于少量二氯甲烷中并放置在含有500mg氨丙基吸著劑的SPE柱上，該柱子已經(jīng)事先用適當(dāng)溶劑調(diào)節(jié)。將樣品置于SPE柱上后，用含有體積比為9∶1的二乙醚∶甲醇的溶劑洗脫可能存在的“中性”組分。該凈化步驟后，用含有額外的1％乙酸的相同溶劑洗脫所述酸。除去加熱塊中的溶劑后，將樣品通過(guò)溶于乙醚中的2M重氮甲烷進(jìn)行衍生化(制備羧酸基團(tuán)的甲酯)，并通過(guò)使用MSTFA(N-甲基-N-三甲基甲硅烷基三氟乙酰胺)甲硅烷化任何剩余的游離羥基。該衍生化步驟順序進(jìn)行。衍生化后，用異辛烷適當(dāng)稀釋樣品并向GC-MS中注射1μl樣品。GC-MS使用內(nèi)徑為0.25mm的30m CP-Sil5柱(DB-1)分離組分。使用溫度編程100C，保持1分鐘，以40℃/分鐘直線上升到200C，之后溫度以2℃/分鐘直線上升到250℃。氦氣載體氣流保持恒定在1.0mL/分鐘(在100℃下＝+/-68kPa表壓)。使用無(wú)分流注射并且注射器溫度保持恒定在250℃。MS輸送線也保持恒定在250℃。將MS檢測(cè)器設(shè)置成EI模式，電離能為70eV。使用1250V的電子倍增器電壓收集的質(zhì)量范圍為50到550Da。
松針提取物的血壓降低作用在該實(shí)施例中參考表1。
表1顯示了松針提取物對(duì)如下性質(zhì)的作用-脫羥腎上腺素的半數(shù)有效濃度(EC50)和DRC1和DRC2之間的差異-相對(duì)于脫羥腎上腺素的最大作用(Emax)；該值越低提取物越有效。
將從自發(fā)性高血壓大鼠(SHR大鼠)分離的主動(dòng)脈環(huán)用作測(cè)試血管活性作用的模型。從SHR大鼠得到胸主動(dòng)脈。將胸主動(dòng)脈切成長(zhǎng)4到6mm的環(huán)，然后將每個(gè)環(huán)連接到張力轉(zhuǎn)換器，其處于恒溫控制和carbogenated含有改性的Krebs-Henseleit緩沖液的器官浴中。在等張條件下連續(xù)記錄主動(dòng)脈環(huán)的收縮。平衡組織后，給予單劑的1μM脫羥腎上腺素以敏化組織，然后清洗。脫羥腎上腺素是α-腎上腺素能激動(dòng)劑，并且用于該實(shí)驗(yàn)中誘導(dǎo)主動(dòng)脈環(huán)的收縮。之后，產(chǎn)生脫羥腎上腺素的兩種累積劑量反應(yīng)曲線(DRC1和DRC2)。在沒(méi)有提取物時(shí)得到DRC1并且將其用作對(duì)照曲線，且在與50μg/ml松針提取物溫育后得到DRC2。充分洗滌后，將組織與松針提取物溫育5分鐘。該溫育期后，在提取物的濃縮形式存在下得到第二種劑量反應(yīng)曲線。用-半數(shù)有效濃度(EC50)-相對(duì)于脫羥腎上腺素的最大作用(Emax)分析數(shù)據(jù)。
測(cè)試下面的提取物1.Norit/離子交換樹(shù)脂處理前的馬尾松(提取物1)2.Norit/離子交換樹(shù)脂處理后的馬尾松(提取物2)3.比較實(shí)例根據(jù)US-B 1-6,329,000(Ji Ling)的提取物4.比較實(shí)例根據(jù)US 5,690,984(Lim Jung Geun)的提取物5.比較實(shí)例根據(jù)US 5,607,971(Al-Mahmoud Mohsen)的醚提取物6.比較實(shí)例根據(jù)US 5,607,971(Al-Mahmoud Mohsen)的二氯甲烷提取物7.比較實(shí)例根據(jù)US 5,607,971(Al-Mahmoud Mohsen)的甲醇提取物表1
1ICA家族由二氫貝克杉酸、imbricatoloic acid、異柏油酸、貝克杉酸、acetylimbricatoloic acid和乙?；惏赜退峤M成。
2低分子量糖是單糖單位并且包括葡萄糖、果糖和肌醇結(jié)構(gòu)。
與提取物1溫育后，脫羥腎上腺素對(duì)大鼠主動(dòng)脈的收縮明顯受到抑制(Emax 54)。通過(guò)Norit處理和離子交換除去異柏油酸后，提取物2仍然顯示出類似于含有高異柏油酸的提取物5、6和7的活性(Emax 79)。
實(shí)施例4制備冰淇淋根據(jù)下面的配方和步驟制備2種冰淇淋產(chǎn)品。
配方
步驟●混合糖、奶粉和葡萄糖●加入水中并混合●用微波加熱混合物到最高70℃●加入葡萄糖糖漿、棕櫚油、乳化劑和松針提取物●在室溫用ultra-turrax以速度9500攪拌4分鐘●置于裝有冰水的碗中并繼續(xù)使用ultra-turax直到溫度達(dá)到21℃●將乳劑留在冰箱中在7℃過(guò)夜●將制冰機(jī)置于制冷器中過(guò)夜●在制冰機(jī)中攪拌乳劑40分鐘●在該過(guò)程中觀察并將樣品在冰箱中于-21℃保存評(píng)價(jià)發(fā)現(xiàn)具有松針提取物的冰淇淋在較長(zhǎng)時(shí)間段內(nèi)保持它的性狀，表明松針提取物對(duì)乳劑的微觀結(jié)構(gòu)具有積極作用。
實(shí)施例5制備牛奶什錦早餐(muesli)棒配方結(jié)合混合物脂肪Centremelt ES-HC 110 P 04* 40％酸乳酪粉 4％全脂奶粉 7％脫脂奶粉 5％糖 30％葡萄糖 14％卵磷脂 0.4％*來(lái)自Loders Croklaan BV涂層脂肪Couva 500 HD495P04* 32％全脂奶粉 10％脫脂奶粉 10％糖 48％卵磷脂 0.4％奶油香蘭素DU-00569 0.03％*來(lái)自Loders Croklaan BV牛奶什錦早餐棒的制備制備結(jié)合混合物-將700g(35％)牛奶什錦早餐壓碎成細(xì)顆粒-加入200g(10％)大米松脆物(rice crisps)-與1100g(55％)結(jié)合混合物混合基于用于28g涂覆的棒的約20g結(jié)合混合物，混合下面的劑量
-將混合物在模子中擠壓-將模子置于冷卻室中直到形成固體棒-脫模-用白色couva 500涂層涂覆棒-在冷卻室中冷卻加入松針提取物對(duì)該過(guò)程沒(méi)有不利作用。
權(quán)利要求
1.組合物，其可以作為松針提取物得到，具有治療活性，包含量小于0.01重量％的異柏油酸化合物并且還包含一種或多種有機(jī)酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其含有量小于0.005重量％，優(yōu)選小于0.003重量％的異柏油酸化合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的組合物，其包含至少兩種組分A和B，其中A是通過(guò)用100％甲醇作為洗脫劑從二氧化硅柱洗脫A和B的混合物可得到的化合物，且B是在一系列隨后洗脫中使用甲醇/水混合物(按體積計(jì)5-40％)從相同二氧化硅柱可得到的化合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的組合物，其中所述化合物A選自植物甾醇、多酚、生物類黃酮、鞣酸類、有機(jī)酸和它們的復(fù)合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或權(quán)利要求4的組合物，其中所述化合物B選自氨基酸、肽、蛋白質(zhì)、槲皮素、萜類、黃酮醇糖苷、雙黃酮、原花色素、聚異戊烯醇、木脂體類和礦物質(zhì)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2中要求保護(hù)的組合物，其包含選自植物甾醇、多酚、生物類黃酮、鞣酸類、有機(jī)酸和它們的復(fù)合物的化合物A和選自氨基酸、肽、蛋白質(zhì)、槲皮素、萜類、黃酮醇糖苷、雙黃酮、原花色素、聚異戊烯醇、木脂體類和礦物質(zhì)的化合物B。
7.根據(jù)權(quán)利要求3到6任一項(xiàng)的組合物，其中基于組合物的重量，A以5到60重量％，優(yōu)選10到50重量％，最優(yōu)選15到40重量％的量存在，B以1到15重量％，優(yōu)選2到12重量％，最優(yōu)選3到10重量％的量存在。
8.根據(jù)前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的組合物，其包含按組合物的重量計(jì)量為10％到50％的莽草酸。
9.根據(jù)前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的組合物，其包含按組合物的重量計(jì)量為5％到30％的奎尼酸。
10.食品、食物添加物或者藥物組合物，其包含權(quán)利要求1到9任一項(xiàng)的組合物。
11.基于奶制品的食品，其包含權(quán)利要求1到9任一項(xiàng)中要求保護(hù)的組合物。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的基于奶制品的食品，其具有0.5到99.5重量％，優(yōu)選20到90重量％，最優(yōu)選30到85重量％的水含量。
13.根據(jù)權(quán)利要求11或者權(quán)利要求12的基于奶制品的食品，其是水包油(O/W)乳劑、雙連續(xù)乳劑或者雙重W/O/W乳劑。
14.根據(jù)權(quán)利要求11的基于奶制品的食品，其是奶油、奶、水連續(xù)的或者雙連續(xù)的涂抹料、糖果或甜食涂抹料、巧克力、小吃棒、營(yíng)養(yǎng)棒、冰淇淋、糖果填充物或者澆頭、面包房填充物或者澆頭、酸乳酪、可飲用的酸乳酪、農(nóng)舍凝乳干酪、牛奶冰淇淋、減肥飲料、干酪和干酪涂抹料。
15.根據(jù)權(quán)利要求11到14任一項(xiàng)的基于奶制品的食品，其包含脂肪相，該脂肪相顯示出的固體脂肪含量(通過(guò)非穩(wěn)定化脂肪的NMR測(cè)量)為在5℃時(shí)(＝N5)＞10，優(yōu)選＞20，且在35℃時(shí)(＝N35)＜20，優(yōu)選＜10，最優(yōu)選小于5。
16.如權(quán)利要求11到15任一項(xiàng)中要求保護(hù)的基于奶制品的食品，其基本上無(wú)反式脂肪酸。
17.根據(jù)權(quán)利要求11到16任一項(xiàng)的基于奶制品的食品，其包含0.05重量％到10重量％權(quán)利要求1到9任一項(xiàng)的組合物。
18.根據(jù)權(quán)利要求11到17任一項(xiàng)的基于奶制品的食品，其與不含有所述組合物的相應(yīng)產(chǎn)品相比具有一種或多種下面的性質(zhì)改善的硬度、改善的質(zhì)地、改善的通氣性、改善的流散性、改善的經(jīng)口性質(zhì)、改善的口感、改善的風(fēng)味、更好的顏色、改善的粘性、改善的攪打性質(zhì)和改善的處理容易性。
19.權(quán)利要求1到9任一項(xiàng)要求保護(hù)的組合物，權(quán)利要求10中要求保護(hù)的食品、食物添加物或者藥物組合物或者權(quán)利要求11到17任一項(xiàng)中要求保護(hù)的基于奶制品的食品，其用于降低哺乳動(dòng)物，尤其人的血壓。
20.權(quán)利要求1到9任一項(xiàng)要求保護(hù)的組合物，權(quán)利要求10中要求保護(hù)的食品、食物添加物或者藥物組合物或者權(quán)利要求11到17任一項(xiàng)中要求保護(hù)的基于奶制品的食品在生產(chǎn)用于降低哺乳動(dòng)物，尤其人的血壓的試劑中的用途。
21.降低哺乳動(dòng)物，尤其人的血壓的方法，其包括對(duì)該哺乳動(dòng)物提供有效量的權(quán)利要求1到9任一項(xiàng)要求保護(hù)的組合物，權(quán)利要求10中要求保護(hù)的食品、食物添加物或者藥物組合物或者權(quán)利要求11到17任一項(xiàng)中要求保護(hù)的基于奶制品的食品。
22.改善選自硬度、質(zhì)地、通氣性、流散性、經(jīng)口性質(zhì)、口感、風(fēng)味、顏色、粘性、形狀保持、處理容易性和健康性質(zhì)的一種或多種食品性質(zhì)的方法，其包括向所述食品摻入包含一種或多種有機(jī)化合物的組合物，所述組合物可以作為松針提取物得到，具有治療活性，并且包含量小于0.01重量％的異柏油酸化合物，并且還包含一種或多種有機(jī)酸。
23.包含一種或多種有機(jī)化合物的材料在改善選自硬度、質(zhì)地、通氣性、流散性、經(jīng)口性質(zhì)、口感、風(fēng)味、顏色、粘性、形狀保持、處理容易性和健康性質(zhì)的一種或多種食品性質(zhì)中的用途，所述材料可以作為松針提取物得到，具有治療活性，并且包含量小于0.01重量％的異柏油酸化合物，并且還包含一種或多種有機(jī)酸。
24.生產(chǎn)權(quán)利要求1到9任一項(xiàng)的組合物的方法，其包括下面的步驟(a)用選自水、有機(jī)溶劑和其混合物的溶劑處理松針形成第一種提取物；(b)從第一種提取物除去異柏油酸化合物，優(yōu)選通過(guò)用離子交換樹(shù)脂處理除去異柏油酸化合物；和(c)任選過(guò)濾并濃縮所處理的提取物以得到組合物，其為粉末或者濃縮物。
25.如權(quán)利要求24中要求保護(hù)的方法，其中在步驟(a)之前，用非極性溶劑預(yù)處理松針。
全文摘要
組合物，其可以作為松針提取物得到，具有治療活性，包含量小于0.01重量％的異柏油酸化合物，并且還包含一種或多種有機(jī)酸，所述組合物可以用于食品、藥物組合物和食物添加物。
文檔編號(hào)A23C9/00GK1874687SQ200480032233
公開(kāi)日2006年12月6日 申請(qǐng)日期2004年10月29日 優(yōu)先權(quán)日2003年10月30日
發(fā)明者Y·顏, F·W·凱恩, W·斯塔姆, U·施密德, J·格里特森 申請(qǐng)人:荷蘭洛德斯克羅科蘭有限公司