專利名稱：中國葡萄屬野生種刺葡萄抗白粉病候選基因序列及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及葡萄常規(guī)雜交育種、分子標(biāo)記輔助育種、基因定位與作圖及基因克隆的方法與技術(shù)，特別涉及抗中國葡萄屬野生種刺葡萄抗白粉病候選基因序列及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
葡萄白粉病(Uncinula necator Schw.Burr.)是危害歐洲葡萄最為嚴(yán)重的真菌病害之一，遍布于世界各葡萄產(chǎn)區(qū)。對(duì)于白粉病的防治，早期以化學(xué)防治為主，但是，化學(xué)防治不僅增加生產(chǎn)成本，造成環(huán)境污染，還可能引起葡萄病害生理小種的變異及病原菌的抗藥性，同時(shí)降低葡萄及其加工產(chǎn)品的產(chǎn)量和品質(zhì)。科學(xué)研究和生產(chǎn)實(shí)踐證明，利用植物自身抗病性，培育抗病、優(yōu)質(zhì)葡萄新品種是最經(jīng)濟(jì)有效的措施之一。歐洲葡萄抗病能力差，美洲葡萄種及其品種抗病性強(qiáng)，但果實(shí)的“狐”味及其顯性遺傳的特點(diǎn)，又限制了其進(jìn)一步應(yīng)用；圓葉葡萄與歐洲葡萄雜交效率低。中國是葡萄屬植物重要的起源地之一，我國的野生葡萄資源不僅抗病，而且和歐洲葡萄雜交親和性好，可以有效地將抗病基因與歐洲葡萄品質(zhì)性狀相結(jié)合，因而將中國野生葡萄白粉病抗性基因與歐洲葡萄品種優(yōu)良品質(zhì)基因有效結(jié)合，培育抗病優(yōu)良葡萄新品種和創(chuàng)造新型葡萄種質(zhì)是生產(chǎn)實(shí)踐中急需解決的實(shí)際問題。
植物能對(duì)特定的病原微生物進(jìn)行識(shí)別并產(chǎn)生抗性，這是由抗病基因決定的?；?qū)蚣僬f認(rèn)為，抗病基因是病原微生物致病基因的受體，能與致病因子復(fù)合物通過一系列信號(hào)傳導(dǎo)起始抗病反應(yīng)，如發(fā)生過敏性反應(yīng)、細(xì)胞壁增厚、壞死斑的出現(xiàn)以及防衛(wèi)基因的表達(dá)等。抗病基因根據(jù)編碼的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)上的異同，可以將除Hm1外的其他基因分為4大類，即含有核苷酸結(jié)合位點(diǎn)(NBS)和富含亮氨酸重復(fù)(LRR)的胞內(nèi)受體蛋白基因；絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(STK)基因；含有胞外LRR結(jié)構(gòu)的跨膜受體蛋白基因以及同時(shí)含有胞外LRR和胞內(nèi)STK結(jié)構(gòu)的跨膜受體蛋白基因，這些不同植物來源的抗病基因在結(jié)構(gòu)上的保守性暗示了利用同源序列法分離抗病基因的潛在可能性。而基于同源序列的基因分離方法目前已逐漸受到重視，其中小麥抗葉銹病基因Lr10的分離是利用同源序列法進(jìn)行抗病基因分離的首次成功報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，提供中國葡萄屬野生種刺葡萄抗白粉病候選基因基因序列及其應(yīng)用。
本發(fā)明是在對(duì)中國葡萄屬野生種進(jìn)行抗病性鑒定，獲得刺葡萄(V.davidiiFoex)福建-4、塘尾2個(gè)株系抗病種質(zhì)的基礎(chǔ)上，采用同源序列克隆法分離葡萄抗白粉病候選基因片段，進(jìn)行序列同源性分析，為進(jìn)一步利用cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)獲得抗病基因全長(zhǎng)序列奠定基礎(chǔ)。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明首次采用抗病基因同源序列技術(shù)進(jìn)行中國葡萄屬野生種抗白粉病(Uncinula necator Schw.Burr.)候選基因克隆，獲得了抗白粉病候選基因DNA片段3個(gè)，其大小分別為507bp、513bp、513bp。以該核苷酸序列為基礎(chǔ)，可以進(jìn)行抗白粉病基因標(biāo)記輔助育種，用作葡萄育種中檢測(cè)葡萄抗白粉病基因的探針；可以根據(jù)這些片段在中國野生葡萄與歐洲葡萄雜種后代中的分離情況，進(jìn)行中國野生葡萄抗白粉病基因定位與作圖；可以根據(jù)這些片段設(shè)計(jì)特異引物，采用cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)(Rapidamplification of cDNA ends，RACE)(Frohman et al，Proc.Natl.Acad.Sci，1988)克隆中國葡萄野生種抗白粉病基因，為通過基因工程改良葡萄品種的抗病性奠定基礎(chǔ)。


圖1是中國葡萄屬野生種刺葡萄抗白粉病特異DNA片段的獲得圖譜，其中M1.100bp DNA ladder，1、7、13引物為F1R1，2、8、14引物為F1R2，3、9、15引物為F1R3，4、10、16引物為F2R1，5、11、17引物為F2R2，6、12、18引物為F2R3；1-6.福建-4，7-12.塘尾，13-18.寧強(qiáng)-6；M.DNA Marker DGL2000；圖2是中國葡萄屬野生種刺葡萄(V.davidii Foex)福建-4抗白粉病候選基因序列；圖3是中國葡萄屬野生種刺葡萄(V.davidii Foex)刺葡萄塘尾(3)抗白粉病候選基因序列；圖4是中國葡萄屬野生種刺葡萄(V.davidii Foex)刺葡萄塘尾(5)抗白粉病候選基因序列；圖5是特異DNA片段在刺葡萄塘尾X歐洲葡萄粉紅玫瑰雜交后代中的分離情況圖譜，其中M.DNA Marker DGL 2000，1.塘尾，2-19.塘尾X粉紅玫瑰雜交后代。
以下結(jié)合發(fā)明人給出的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明獲得的中國葡萄屬野生種刺葡萄(V.davidii Foex)福建-4、塘尾2個(gè)株系共3個(gè)抗白粉病候選基因序列具體操作步驟如下A.采用改進(jìn)的CTAB法(西北植物學(xué)報(bào)，王西平等，2003，23(3)473-476)提取中國葡萄屬野生種刺葡萄福建-4、塘尾2個(gè)株系葉片基因組DNA。
B.根據(jù)抗病基因N、L6及RPS2位于P-環(huán)(P-loop)上的GVGKTT，及位于基因弱疏水區(qū)上的GLPLAL保守結(jié)構(gòu)域設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并PCR引物F1.5‘GGD GTD GGN AAR ACW AC 3’，F(xiàn)2.5‘GGT GGG GTT GGGAAG ACA AAG 3’與R1.5‘GAG GGC TAA AGG AAG GCC 3’，R2.5‘AGNGCY AAN GGY AAN CC 3’，R3.5‘CAA CGC TAG TGG CAA TCC 3’，共組成6對(duì)PCR引物進(jìn)行擴(kuò)增。這些引物由大連Takara公司合成。
在25μl PCR反應(yīng)體積中加入PCR buffer(含Mg2+)2.5μl，dNTP 0.5μl，模板DNA 100ng，引物11.5μl，引物21.5μl，Taq DNA聚合酶1U(5U/μl)，用雙蒸水補(bǔ)被齊體積至25μl，加入25.0μl礦物油。PCR擴(kuò)增程序?yàn)?4℃ 2min，94℃ 1min；50℃ 1min，72℃ 2min共35個(gè)循環(huán)；72℃，10min。取反應(yīng)產(chǎn)物6.0μl跑1.5％瓊脂糖凝膠電泳(5V·cm-1)約40min，6對(duì)引物都獲得了擴(kuò)增產(chǎn)物，其中引物對(duì)F1R3獲得了一條長(zhǎng)度約為500bp的DNA特異帶(圖1)。
C.用DNA膠回收試劑盒將獲得的這一條約500bp左右的DNA條帶回收，連接pGEM-T easy載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞，在含有Amp(100μg·ml-1)和X-gal/IPTG的LB平板上培養(yǎng)，藍(lán)、白斑篩選鑒定挑選白色菌落培養(yǎng)。用UNIQ-10柱式質(zhì)粒小量抽提試劑盒回收質(zhì)粒，用EcoR I酶切鑒定有外源DNA片段插入的陽性克隆。將陽性克隆送大連寶生生物公司測(cè)序，測(cè)序結(jié)果表明獲得刺葡萄DNA特異片段3個(gè)(圖2-圖4)，大小分別為507bp、513bp、513bp。
以下是發(fā)明人給出的實(shí)施例，但不局限于這些實(shí)施例。
實(shí)施例1以保存于西北農(nóng)林科技大學(xué)葡萄種質(zhì)資源圃已進(jìn)行抗白粉病鑒定的中國野生葡萄刺葡萄福建-4、塘尾(賀普超等，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，1991；Wang Y etal，HortScience，1998；Wang Y et al，Vitis，1995)與歐洲葡萄粉紅玫瑰、白玉霓的種間雜交后代65株及抗病雜種后代自交179株為試材，采用改良的CTAB法提取基因組DNA，根據(jù)獲得的抗白粉病候選基因序列設(shè)計(jì)特異引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，據(jù)特異DNA片段在雜種材料中的表現(xiàn)情況(圖5)，對(duì)照上述葡萄材料的抗白粉病田間鑒定結(jié)果，獲得與葡萄抗白粉病基因緊密連鎖的DNA片段和抗白粉病基因DNA片段。
實(shí)施例2用保存于西北農(nóng)林科技大學(xué)葡萄種質(zhì)資源圃的中國葡萄屬野生種刺葡萄福建-4、塘尾、寧強(qiáng)-6等(賀普超等，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，1991；Wang Y et al，HortScience，1998；Wang Y et al，Vitis，1995)與歐洲葡萄優(yōu)良品種紅地球、皇家秋天雜交，獲得抗白粉病雜種植株。采用改良的CTAB法提取上述葡萄材料基因組DNA，根據(jù)實(shí)施例1獲得的與抗白粉病基因緊密連鎖的DNA片段設(shè)計(jì)引物，對(duì)上述葡萄材料基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，凡擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)DNA特異片段的雜種材料，為抗白粉病雜種植株，或者是抗白粉病基因的攜帶者，這些可以用做進(jìn)一步抗病品種選育的材料和育種種質(zhì)。
實(shí)施例3采用田間自然鑒定、田間接種鑒定對(duì)實(shí)施例2的葡萄雜種材料進(jìn)行抗白粉病鑒定，獲得抗病雜種與感病雜種。據(jù)實(shí)施例2獲得的與抗白粉病基因緊密連鎖的DNA片段設(shè)計(jì)的引物，對(duì)上述葡萄雜種材料進(jìn)行PCR擴(kuò)增，據(jù)DNA片段在雜種中的擴(kuò)增與分離情況，結(jié)合田間鑒定結(jié)果，利用MAPMAKER軟件進(jìn)行抗白粉病基因定位與作圖，獲得抗病基因連鎖圖譜，為進(jìn)一步通過圖譜克隆分離抗白粉病基因鑒定基礎(chǔ)。
實(shí)施例4將實(shí)施例1獲得的中國葡萄屬野生種抗白粉病基因部分DNA片段序列，用DNASTAR軟件設(shè)計(jì)特異5’RACE引物GSP1與3’RACE引物GSP2，用改進(jìn)的SDS/酚法(果樹學(xué)報(bào)，張今今等，2003，20(3)178-181)提取中國葡萄屬野生種刺葡萄福建-4、寧強(qiáng)-6、塘尾葡萄葉片總RNA，逆轉(zhuǎn)錄分別合成5’RACE與3’RACEcDNA第一鏈。用5’RACE引物GSP1與3’RACE引物GSP2分別進(jìn)行5’RACE與3’RACE PCR擴(kuò)增。將5’RACE PCR產(chǎn)物與3’RACE PCR產(chǎn)物分別進(jìn)行1.2％瓊脂糖凝膠電泳獲得5’RACE與3’RACE全長(zhǎng)序列。分別回收5’RACE與3’RACE全長(zhǎng)序列并連接T載體?？寺?、測(cè)序后，進(jìn)行序列同源性分析，據(jù)5’RACE與3’RACE序列重疊區(qū)域合并成完整的cDNA全長(zhǎng)序列，從而克隆了中國葡萄屬野生種抗白粉病基因，獲得抗白粉病基因序列，為通過基因工程提高歐洲葡萄品種的抗病性提供基因資源。
基因序列中國葡萄屬野生種刺葡萄(V.davidii Foex)福建-4抗白粉病候選基因序列1GGGGTAGGGA AGACAACGCT CGCACGGCTT GTTTACAATG ATGATTTGGC CAAAAATTTT61 GAACTAAAAG CGTGGGTTTG TGTGACTGAT GTGTTTGATG TGGAGAATAT AACAAAAGCA121 ATTCTCAATT CGGTGTTAAA TTCTGATGCA AGTGGCTCTT TGGACTTCCA ACAAATTCAA181 AGGAAATTGA CAGACACGTT AGCAGGGAAA ACTCTTTTTC TCATTCTAGA CGACGTGTGG241 AACGAAAATT ATTGTAATTG GGATCGTTTG CGGGCTCCTT TGAGTGTAGT GGCAAAAGGA301 AGCAAAGTCA TAGTTACAAC ACACAAAAAA AATGTTGCAT TGATGATGGG AGCTGCCAAG361 AATGTTCATG AACTAAACCC TTTATCTGAA GATGATTGTT GGTCTGTGTT TGAGAAGCAT421 GCATTTGAAC ATAGAAATAT CAATGATCAT CCGAATCTGG TGTCCATTGG TAGGAAAATT481 GTTGGCAAAT GTGGTGGATT GCCACTAGCG TTG中國葡萄屬野生種刺葡萄(V.davidii Foex)塘尾(3)抗白粉病候選基因序列1GGTGTTGGTA AGACTACCCT TTTGACCCAA ATCAACAATG AGTTCCTCAA AACAACTCAT61 GATTTTGATG TTGTGATCTG GGCTGTGGTG TCACGAGATC CAGACTTTCC CAAGGTTCAA121 GATGAAATTG GGAAAAAGGT TGGGTTTTGT GATGGTATAT GGAGAAATAA AAGCAAGGAT181 GAAAAAGCCA TAGACATCTT TAGAGCCTTG CGCAAAAAGA GGTTTGTGTT GTTAGATGAC241 ATATGGGAGC CGGTAAATCT ATCAGTCTTG GGTGTTCCAG TTCCAAATGA AGAAAATAAG301 TCCAAGCTAG TATTCACAAC CCGATCCGAG GATGTATGCC GCCAAATGGA AGCTCATAAG361 AATATCAAAG TGGAGTGCTT GGCATGGCAG GAATCCTGGG ATTTGTTTCA GAAGAAGGTT421 GGACAAGATA CTCTTGACTC CCATGCAGAA ATCCCCATGC AAGCTGAAAT GGTTGCCAAA481 GAATGTTGCG GATTGCCACT AGCGTTG中國葡萄屬野生種刺葡萄(V.davidii Foex)刺葡萄塘尾(5)抗白粉病候選基因序列1GGTGTGGGTA AGACTACGCT CGCACGGCTT GTTTACAATG ATGATTTGGC CAAAAATTTT61 GAACTAAAAG CGTGGGTTTG TGTGACTGAT GTGTTTGATG TGGAGAATAT AACAAAAGCA121 ATTCTCAATT CGGTGTTAAA TTCTGATGCA AGCGGCTCTT TGGACTTCCA ACAAGTTCAA181 CGGAAATTGA CAGTCACATT AGCAGGGAAA ACTCTTTTAC TCATTCTAGA TGACGTGCGG241 AACGAAAATT ATTGTAATTG GGATCGTTTG CGGGCTCCTT TGAGTGTAGT GGCAAAAGGA301 AGCAAAGTCA TAGTTACAAC ACGCAATAAA AATGTTGCAT TGATGATGGG AGCTGCCAAG361 AATGTTCATA AACTAAACCC TTTATCTAAA GATGATTGTT GGTCTGTGTT TGAGAAGCAT421 GCATTTGAAC ATAGGAATAT GGAAGATCAT CCAAACTTGG TGTCCATTGG TAGGAAAATT481 GTTGGCAAGT GTGGGGGATT GCCACTAGCG TTG
權(quán)利要求
1.中國葡萄屬野生種刺葡萄抗白粉病候選基因序列，其特征在于，包括福建-4、塘尾2個(gè)株系共3個(gè)中國葡萄屬野生種刺葡萄抗白粉病候選基因序列，這些中國葡萄屬野生種刺葡萄抗白粉病候選基因序列分別是刺葡萄福建-4抗白粉病候選基因序列1 GGGGTAGGGA AGACAACGCT CGCACGGCTT GTTTACAATG ATGATTTGGC CAAAAATTTT61 GAACTAAAAG CGTGGGTTTG TGTGACTGAT GTGTTTGATG TGGAGAATAT AACAAAAGCA121ATTCTCAATT CGGTGTTAAA TTCTGATGCA AGTGGCTCTT TGGACTTCCA ACAAATTCAA181AGGAAATTGA CAGACACGTT AGCAGGGAAA ACTCTTTTTC TCATTCTAGA CGACGTGTGG241AACGAAAATT ATTGTAATTG GGATCGTTTG CGGGCTCCTT TGAGTGTAGT GGCAAAAGGA301AGCAAAGTCA TAGTTACAAC ACACAAAAAA AATGTTGCAT TGATGATGGG AGCTGCCAAG361AATGTTCATG AACTAAACCC TTTATCTGAA GATGATTGTT GGTCTGTGTT TGAGAAGCAT421GCATTTGAAC ATAGAAATAT CAATGATCAT CCGAATCTGG TGTCCATTGG TAGGAAAATT481GTTGGCAAAT GTGGTGGATT GCCACTAGCG TTG刺葡萄塘尾(3)抗白粉病候選基因序列1 GGTGTTGGTA AGACTACCCT TTTGACCCAA ATCAACAATG AGTTCCTCAA AACAACTCAT61 GATTTTGATG TTGTGATCTG GGCTGTGGTG TCACGAGATC CAGACTTTCC CAAGGTTCAA121GATGAAATTG GGAAAAAGGT TGGGTTTTGT GATGGTATAT GGAGAAATAA AAGCAAGGAT181GAAAAAGCCA TAGACATCTT TAGAGCCTTG CGCAAAAAGA GGTTTGTGTT GTTAGATGAC241ATATGGGAGC CGGTAAATCT ATCAGTCTTG GGTGTTCCAG TTCCAAATGA AGAAAATAAG301TCCAAGCTAG TATTCACAAC CCGATCCGAG GATGTATGCC GCCAAATGGA AGCTCATAAG361AATATCAAAG TGGAGTGCTT GGCATGGCAG GAATCCTGGG ATTTGTTTCA GAAGAAGGTT421GGACAAGATA CTCTTGACTC CCATGCAGAA ATCCCCATGC AAGCTGAAAT GGTTGCCAAA481GAATGTTGCG GATTGCCACT AGCGTTG刺葡萄塘尾(5)抗白粉病候選基因序列1 GGTGTGGGTA AGACTACGCT CGCACGGCTT GTTTACAATG ATGATTTGGC CAAAAATTTT61 GAACTAAAAG CGTGGGTTTG TGTGACTGAT GTGTTTGATG TGGAGAATAT AACAAAAGCA121ATTCTCAATT CGGTGTTAAA TTCTGATGCA AGCGGCTCTT TGGACTTCCA ACAAGTTCAA181CGGAAATTGA CAGTCACATT AGCAGGGAAA ACTCTTTTAC TCATTCTAGA TGACGTGCGG241AACGAAAATT ATTGTAATTG GGATCGTTTG CGGGCTCCTT TGAGTGTAGT GGCAAAAGGA301AGCAAAGTCA TAGTTACAAC ACGCAATAAA AATGTTGCAT TGATGATGGG AGCTGCCAAG361AATGTTCATA AACTAAACCC TTTATCTAAA GATGATTGTT GGTCTGTGTT TGAGAAGCAT421GCATTTGAAC ATAGGAATAT GGAAGATCAT CCAAACTTGG TGTCCATTGG TAGGAAAATT481GTTGGCAAGT GTGGGGGATT GCCACTAGCG TTG。塘尾(3)抗白粉病候選基因序列1 GGTGTTGGTA AGACTACCCT TTTGACCCAA ATCAACAATG AGTTCCTCAA AACAACTCAT61 GATTTTGATG TTGTGATCTG GGCTGTGGTG TCACGAGATC CAGACTTTCC CAAGGTTCAA121GATGAAATTG GGAAAAAGGT TGGGTTTTGT GATGGTATAT GGAGAAATAA AAGCAAGGAT181GAAAAAGCCA TAGACATCTT TAGAGCCTTG CGCAAAAAGA GGTTTGTGTT GTTAGATGAC241ATATGGGAGC CGGTAAATCT ATCAGTCTTG GGTGTTCCAG TTCCAAATGA AGAAAATAAG301TCCAAGCTAG TATTCACAAC CCGATCCGAG GATGTATGCC GCCAAATGGA AGCTCATAAG361AATATCAAAG TGGAGTGCTT GGCATGGCAG GAATCCTGGG ATTTGTTTCA GAAGAAGGTT421GGACAAGATA CTCTTGACTC CCATGCAGAA ATCCCCATGC AAGCTGAAAT GGTTGCCAAA481GAATGTTGCG GATTGCCACT AGCGTTG塘尾(5)抗白粉病候選基因序列1 GGTGTGGGTA AGACTACGCT CGCACGGCTT GTTTACAATG ATGATTTGGC CAAAAATTTT61 GAACTAAAAG CGTGGGTTTG TGTGACTGAT GTGTTTGATG TGGAGAATAT AACAAAAGCA121ATTCTCAATT CGGTGTTAAA TTCTGATGCA AGCGGCTCTT TGGACTTCCA ACAAGTTCAA181CGGAAATTGA CAGTCACATT AGCAGGGAAA ACTCTTTTAC TCATTCTAGA TGACGTGCGG241AACGAAAATT ATTGTAATTG GGATCGTTTG CGGGCTCCTT TGAGTGTAGT GGCAAAAGGA301AGCAAAGTCA TAGTTACAAC ACGCAATAAA AATGTTGCAT TGATGATGGG AGCTGCCAAG361AATGTTCATA AACTAAACCC TTTATCTAAA GATGATTGTT GGTCTGTGTT TGAGAAGCAT421GCATTTGAAC ATAGGAATAT GGAAGATCAT CCAAACTTGG TGTCCATTGG TAGGAAAATT481GTTGGCAAGT GTGGGGGATT GCCACTAGCG TTG。
2.中國葡萄屬野生種刺葡萄抗白粉病候選基因序列，包括福建-4、塘尾2個(gè)株系共3個(gè)中國葡萄屬野生種刺葡萄抗白粉病候選基因序列在進(jìn)行抗白粉病標(biāo)記輔助育種，用作葡萄育種中檢測(cè)葡萄抗白粉病基因的探針，以及抗病基因定位與作圖、克隆中國葡萄屬野生種抗白粉病基因的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及葡萄常規(guī)雜交育種、分子標(biāo)記輔助育種、基因定位與作圖及基因克隆的方法與技術(shù)。本發(fā)明采用抗病基因同源序列法(Resistant geneanalogus，RGAs)獲得中國葡萄屬野生種刺葡萄(V.davidii Foex)福建－4、塘尾2個(gè)株系抗白粉病候選基因DNA片段3個(gè)，對(duì)這些片段克隆測(cè)序后，其大小分別為507bp、513bp、513bp。以這些序列為依據(jù)，可以進(jìn)行抗白粉病標(biāo)記輔助育種，用作葡萄育種中檢測(cè)葡萄抗白粉病基因的探針；可以根據(jù)這些片段在中國野生葡萄與歐洲葡萄雜種后代中的分離情況，進(jìn)行抗白粉病基因定位與作圖；也可以根據(jù)這些片段設(shè)計(jì)特異引物，采用cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)(Rapid amplification of cDNA ends，RACE)(Frohman etal，Proc.Natl.Acad.Sci，1988)克隆中國野生葡萄刺葡萄抗白粉病基因，為通過基因工程改良葡萄品種的抗病性奠定基礎(chǔ)。
文檔編號(hào)C12N15/82GK1683538SQ200510041759
公開日2005年10月19日 申請(qǐng)日期2005年3月7日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月7日
發(fā)明者王躍進(jìn), 王西平 申請(qǐng)人:西北農(nóng)林科技大學(xué)