專利名稱：高密度蛭弧菌游泳體的發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于發(fā)酵工程領(lǐng)域，具體是指一種可應(yīng)用于減少、甚至完全消除 有害菌的高密度蛭弧菌游泳體的發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)，不僅在水源性、食源性致病 菌防治方面，而且在醫(yī)學(xué)、環(huán)境污染、農(nóng)業(yè)、工業(yè)、軍事領(lǐng)域等方面將具有 巨大的應(yīng)用和發(fā)展前景。
背景技術(shù)：
雖然采用生物防治的手段消除致病菌是當(dāng)今世界工、農(nóng)、醫(yī)等各個領(lǐng)域 的研究熱點，但是目前消除致病菌的主要手段仍是各種物理和/或化學(xué)的方 法，包括各種抗生素的使用。這些方法都存在著明顯的弊端，首先，抗生素 大量濫用，會導(dǎo)致一些副作用的產(chǎn)生，如病原菌的抗藥性、抑制有益菌群等。 其次，酸堿處理的方法雖可達到一定的滅菌/殺菌效果，但在有害菌形成生 物膜后，這些方法的效果就相當(dāng)?shù)牟焕硐?。最后，物理的方法對各種致病菌 的消除作用只能應(yīng)用于相關(guān)領(lǐng)域的某一環(huán)節(jié)，而難以擴展到整個領(lǐng)域的所有 環(huán)節(jié)。然而，生物防治的方法則可具有強大的優(yōu)越性，極有可能使其服務(wù)于 日常生活的病害防治以及生物戰(zhàn)和恐怖襲擊中大規(guī)模的水源性、食源性污染 的處理等。
蛭弧菌能降解保護性細胞外聚合物并裂解宿主細胞的特性使其具有巨大 的應(yīng)用前景。首先，蛭弧菌的宿主范圍廣泛，對動物、曰常生活等常見致病 菌都有較強的清除作用，且對致病菌的裂解能力明顯大于非致病菌，蛭弧菌 制劑在清除致病菌的同時，對環(huán)境中的有益菌危害不大，而以有益菌作為宿 主菌培養(yǎng)蛭弧菌的則例外；其次，蛭弧菌作為一種抗微生物因子幾乎沒有宿 主抗性，能對致病菌發(fā)揮穩(wěn)定持久的裂解作用，它能有效地預(yù)防自身基因組 與其它細菌基因組之間發(fā)生基因重組和基因水平轉(zhuǎn)移，并且也沒有噬菌體所 具有宿主過于專一的缺點；再次，蛭弧菌還可抵御自然界中某些有毒物質(zhì)， 其基因組可以編碼多種有毒物質(zhì)的抗阻蛋白，這預(yù)示蛭弧菌有可能成為新型 抗生素或消毒劑。有研究表明，蛭弧菌不能存活于真核細胞內(nèi)，由此揭示它 對人體的危害極小；最后，蛭弧菌在沒有宿主菌存在的環(huán)境中會因為"饑餓" 而死，因此，使用蛭弧菌制劑不存在殘留問題。
目前，中國200610039346.8號發(fā)明專利申請中提出了一種生產(chǎn)噬菌蛭弧
菌制劑的方法，該方法所生產(chǎn)的蛭弧菌制劑的應(yīng)用，雖然可解決目前用抗生 素等方法導(dǎo)致的副作用問題，但其所生產(chǎn)的蛭弧菌制劑密度較低，導(dǎo)致使用 量較大，成本較高，且是以有益菌作為宿主菌培養(yǎng)蛭弧菌、以蛭質(zhì)體或/和 游泳體混合物的形式作為終產(chǎn)品，存在著雜菌帶入、作用滯后、潛在使用范 圍窄、對有益菌裂解能力過強等缺點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種高密度蛭弧菌游 泳體的發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)，進而生產(chǎn)一種能廣泛適用于水源性、食源性致病菌防 治以及醫(yī)學(xué)、環(huán)境污染、農(nóng)業(yè)、工業(yè)、軍事領(lǐng)域等的高密度的蛭弧菌游泳體 制劑。
為達到上述目的，本發(fā)明的主要技術(shù)方案如下高密度蛭弧菌游泳體發(fā)
酵培養(yǎng)技術(shù)，該技術(shù)的步驟及其工藝條件如下 步驟一宿主菌懸浮液的制備
將宿主菌接種于常規(guī)培養(yǎng)基(即營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基)中，置于20 40°C
搖床中培養(yǎng)12 24h，使其處于對數(shù)生長期，培養(yǎng)液在2 15°C， 5000 8000rpm離心15 40min，保留沉淀棄去上清液，往沉淀中加入與其體積比 為0.05 2%稀營養(yǎng)肉湯DNB培養(yǎng)液，即得到濃度達1018 1026CFU/mL 的宿主菌懸浮液，然后置于2 15°0冰箱中保存?zhèn)溆茫?br> 步驟二蛭弧菌游泳體濃縮液的制備
在稀營養(yǎng)肉湯DNB培養(yǎng)液中先加入步驟一制備的宿主菌懸浮液，使宿主 菌在DNB液體中的濃度達101() 1018CFU / mL,再接入用常規(guī)方法培養(yǎng)出 來的蛭弧菌斑，然后將此培養(yǎng)液在20 4CTC培養(yǎng)20 60h,再在2 15X， 5000 8000rpm離心15 40min，保留上清液棄去沉淀，將上清液再在2 15°C， 10000 20000rpm離心15 40min，保留沉淀棄去上清液，沉淀為 蛭弧菌游泳體，往沉淀中加入與其體積比為0.05 2y。DNB培養(yǎng)液，混勻即 得到濃度達106 108PFU/mL蛭弧菌游泳體濃縮液，然后將此濃縮液置于 2 15°C冰箱保存?zhèn)溆茫?br> 步驟三高密度蛭弧菌游泳體的發(fā)酵培養(yǎng)工藝
配制大量稀營養(yǎng)肉湯DNB培養(yǎng)液，并加入經(jīng)纖維素濾膜過濾處理后的谷 氨酸鈉溶液，使谷氨酸鈉溶液在培養(yǎng)液中的濃度達0.05 10mM,再接入步 驟一制得的宿主菌懸浮液，使宿主菌起始濃度達10^ 1C^CFU/mL，然后 接入步驟二制備的蛭弧菌游泳體濃縮液，使混合培養(yǎng)液中的蛭弧菌起始濃度 達1 103PFU / mL后，裝入發(fā)酵罐，于20 40°C進行常規(guī)的發(fā)酵培養(yǎng)， 培養(yǎng)過程中至少加兩次宿主菌，每次間隔18 30h，并保證每次的培養(yǎng)液中 宿主菌濃度達101Q 1018CFU/mL，發(fā)酵培養(yǎng)4 6天后，即可得到濃度達 10a 10"PFU/mL的蛭弧菌發(fā)酵液，最后將此發(fā)酵液先在2 15。C，5000 8000rpm離心15 40min,棄去沉淀，保留上清液，上清液再在2 15。C， 10000 20000rpm離心15 40min，保留沉淀棄去上清液，往沉淀中加入與 其體積比為0.05 2%稀營養(yǎng)肉湯DNB培養(yǎng)液混勻，即得到蛭弧菌游泳體發(fā) 酵濃縮液。
步驟一所述的宿主菌懸浮液的制備中優(yōu)選工藝條件為將宿主菌接種于 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，置于2S 32。C搖床中培養(yǎng)14 16h，使其處于對數(shù)生 長期，培養(yǎng)液在4 5。C， 5500 6500rpm離心化 25min，保留沉淀棄去 上清液，往沉淀中加入與其體積比為0.1 0.5%稀營養(yǎng)肉湯DNB培養(yǎng)液。
步驟三所述的高密度蛭弧菌游泳體的發(fā)酵培養(yǎng)工藝，優(yōu)選方案為發(fā)酵培 養(yǎng)5天，前3天每間隔24h加一次宿主菌，共加三次，使宿主菌在培養(yǎng)液中 的濃度維持在101Q 1018CFU / mL，然后繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)至滿5天，即得到濃 度為108 1014PFU / mL的蛭弧菌發(fā)酵液。
步驟三所述培養(yǎng)液中谷氨酸鈉的最佳濃度為0.5 1mM。
所述宿主菌是指可被蛭弧菌裂解的各種弧菌、大腸桿菌、氣單胞菌、 沙門氏菌、綠膿桿菌、單假胞菌或愛德華菌類致病菌菌株。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點
1、 本實驗中所述的宿主菌是指各種弧菌、大腸桿菌、氣單胞菌、沙門
氏菌、綠膿桿菌類、假單胞菌、愛德華菌等等一系列可被蛭弧菌裂解的致病 菌菌株。宿主菌作為一種活菌，保證了蛭弧菌的裂解活性，提高防治效果。 避免了長期使用有益菌培養(yǎng)蛭弧菌而導(dǎo)致后者對有益菌裂解能力的提升、對 真正有害菌裂解能力的鈍化的潛在結(jié)果。
2、 本發(fā)明生產(chǎn)出來的高密度蛭弧菌游泳體制劑具有廣泛的應(yīng)用價值。例
如，在實驗中，當(dāng)九孔鮑苗大量掉板死亡時，加入本蛭弧菌游泳體制劑對致 病菌消除率達94.1%;在針對牡蠣、南美白對蝦和鱸魚等攜帶的致病菌的實
驗中，加入本蛭弧菌游泳體清除劑對副溶血弧菌的清除率可達99%以上；同 時本實驗分離的某些蛭弧菌例如BDZ - 100、 BDZ - 103等針對非01霍亂弧 菌、溶藻膠弧菌、大腸桿菌、氣單胞菌、沙門氏菌、綠膿桿菌等對人類具有 致病性、可以導(dǎo)致人類發(fā)生食物中毒的常見菌，其裂解率高達88%、 83.3%、 90.8%、 89.2%、 95%和90.7%，由此闡明蛭弧菌在食品衛(wèi)生安全等方面的 應(yīng)用價值。
3、 避免使用蛭弧菌蛭質(zhì)體或游泳體和蛭質(zhì)體的混合物而使其在應(yīng)用中的 作用時間滯后，且避免其它細菌的帶入而限制其潛在使用范圍等缺點。
4、 本發(fā)明中蛭弧菌在進行發(fā)酵培養(yǎng)時，蛭弧菌的起始密度極低，有利于 節(jié)約成本，且與其它方法相比，經(jīng)發(fā)酵后得到的發(fā)酵液中蛭弧菌的濃度高， 再經(jīng)離心濃縮后也將得到高濃度的蛭弧菌制劑，減少了實際中制劑的使用量。
5、 本技術(shù)所采用的蛭弧菌既可是實驗室菌株、野生株也可是突變株，既 可是來自海水、咸水、淡水、陸地，也可是人源、動物源和植物源的。
6、 本發(fā)明以游泳體作為終產(chǎn)品，大大拓寬其應(yīng)用范圍，使其不但在水源 性、食源性致病菌防治方面，而且在醫(yī)學(xué)、環(huán)境污染、農(nóng)業(yè)、工業(yè)、軍事領(lǐng) 域等方面均可使用。
具體實施例方式
實施例1
高密度蛭弧菌游泳體發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)，該技術(shù)的步驟及其工藝條件如下
步驟一宿主菌懸浮液的制備
將本實驗室分離出來的一株大腸桿菌/綠膿桿菌作為宿主菌接種于營養(yǎng)
肉湯培養(yǎng)基中，置于20°C搖床中培養(yǎng)14h，使其處于對數(shù)生長期，培養(yǎng)液 在4。C， 5000rpm離心35min，保留沉淀棄去上清液，往沉淀中加入與其體 積比為0.05%稀營養(yǎng)肉湯DNB培養(yǎng)液，即得到濃度達1018 1026CFU / mL 的宿主菌懸浮液，然后置于2 4。C冰箱中保存?zhèn)溆茫?br> 步驟二蛭弧菌游泳體濃縮液的制備
在稀營養(yǎng)肉湯DNB培養(yǎng)液中先加入步驟一制備的宿主菌懸浮液，使宿主 菌在DNB液體中的濃度達1012CFU / mL，再接入用常規(guī)方法培養(yǎng)出來的蛭
弧菌斑，然后將此培養(yǎng)液在20X培養(yǎng)48h，再在4°C， 5000rpm離心35min， 保留上清液棄去沉淀，將上清液再在4°C， 10000rpm離心35min，保留沉 淀棄去上清液，沉淀為蛭弧菌游泳體，往沉淀中加入與其體積比為0.O5o/。DNB 培養(yǎng)液，混勻即得到濃度達106 108PFU/mL蛭弧菌游泳體濃縮液，然后 將此濃縮液置于4°C冰箱保存?zhèn)溆茫?br> 步驟三高密度蛭弧菌游泳體的發(fā)酵培養(yǎng)工藝
配制大量DNB培養(yǎng)液，并加入經(jīng)纖維素濾膜過濾處理后的谷氨酸鈉溶 液，使谷氨酸鈉溶液在培養(yǎng)液中的濃度達0.5mM，再接入步驟一制得的宿主 菌懸浮液，使宿主菌起始濃度達10^CFU/mL，然后接入步驟二制備的蛭弧 菌游泳體濃縮液，使混合培養(yǎng)液中的蛭弧菌起始濃度達1(^PFU/mL后，將 此混合培養(yǎng)液裝入10L發(fā)酵罐，于20。C進行發(fā)酵培養(yǎng)5天，前3天內(nèi)每間 隔18h加一次宿主菌，使宿主菌在培養(yǎng)液中的濃度維持在101Q 1018CFU / mL，然后繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)至滿5天，即可得到最終濃度為10s 10"PFU/mL 的蛭弧菌發(fā)酵液。最后將此發(fā)酵液先在4。C， 5000rpm離心35min，棄去沉 淀，保留上清液，上清液再在4°C， 10000rpm離心35min，保留沉淀棄去 上清液，往沉淀中加入與其體積比為0.05%稀營養(yǎng)肉湯DNB培養(yǎng)液混勻， 即得到蛭弧菌游泳體發(fā)酵濃縮液。
實施例2
高密度蛭弧菌游泳體發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)，該技術(shù)的步驟及其工藝條件如下
步驟一宿主菌懸浮液的制備
將本實驗室分離出來的一株副溶血弧菌或溶澡弧菌或愛德華菌作為宿主
菌接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，置于26°C搖床中培養(yǎng)18h，使其處于對數(shù)生 長期，培養(yǎng)液在10°C， 6000rpm離心20min，保留沉淀棄去上清液，往沉 淀中加入與其體積比為0.5%稀營養(yǎng)肉湯DNB培養(yǎng)液，即得到濃度達1018 1026CFU / mL的宿主菌懸浮液，然后置于2 4°C冰箱中保存?zhèn)溆茫?br> 步驟二蛭弧菌游泳體濃縮液的制備
在稀營養(yǎng)肉湯DNB培養(yǎng)液中先加入步驟一制備的宿主菌懸浮液，使宿主 菌在DNB液體中的濃度達1014CFU / mL,再接入用常規(guī)方法培養(yǎng)出來的蛭 弧菌斑，然后將此培養(yǎng)液在26°C培養(yǎng)36h，再在10X，6000rpm離心20min， 保留上清液棄去沉淀，將上清液再在1(TC， 16000rpm離心20min,保留沉淀棄去上清液，沉淀為蛭弧菌游泳體，往沉淀中加入與其體積比為0.5y。DNB 培養(yǎng)液，混勻即得到濃度達106 108PFU/mL蛭弧菌游泳體濃縮液，然后 將此濃縮液置于6 8°C冰箱保存?zhèn)溆茫?br> 步驟三高密度蛭弧菌游泳體的發(fā)酵培養(yǎng)工藝
配制大量DNB培養(yǎng)液，并加入經(jīng)纖維素濾膜過濾處理后的谷氨酸鈉溶 液，使谷氨酸鈉溶液在培養(yǎng)液中的濃度達5mM，再接入步驟一制得的宿主菌 懸浮液，使宿主菌起始濃度達10"CFU/mL，然后接入步驟二制備的蛭弧菌 游泳體濃縮液，使混合培養(yǎng)液中的蛭弧菌起始濃度達1(^PFU/mL后，將此 混合培養(yǎng)液裝入10L發(fā)酵罐，于26。C進行發(fā)酵培養(yǎng)5天，前3天內(nèi)每間隔 24h加一次宿主菌，使宿主菌在培養(yǎng)液中的濃度維持在10^ 10^CFU/mL， 然后繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)至滿5天，即可得到最終濃度為108 10"PFU / mL的蛭 弧菌發(fā)酵液。最后將此發(fā)酵液先在1CTC， 6000rpm離心20min，棄去沉淀， 保留上清液，上清液再在1CTC, 16000rpm離心20min，保留沉淀棄去上清 液，往沉淀中加入與其體積比為0.5M稀營養(yǎng)肉湯DNB培養(yǎng)液混勻，即得到 蛭弧菌游泳體發(fā)酵濃縮液。
實施例3
高密度蛭弧菌游泳體發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)，該技術(shù)的步驟及其工藝條件如下
步驟一宿主菌懸浮液的制備
將本實驗室分離出來的一株氣單胞菌或沙門氏菌或假單胞菌，作為宿主
菌接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，置于32°C搖床中培養(yǎng)24h，使其處于對數(shù)生 長期，培養(yǎng)液在15°C, 8000rpm離心15min，保留沉淀棄去上清液，往沉 淀中加入與其體積比為2%稀營養(yǎng)肉湯DNB培養(yǎng)液，即得到濃度達1018 1026CFU / mL的宿主菌懸浮液，然后置于2 4°C冰箱中保存?zhèn)溆茫?br> 步驟二蛭弧菌游泳體濃縮液的制備
在稀營養(yǎng)肉湯DNB培養(yǎng)液中先加入步驟一制備的宿主菌懸浮液，使宿主 菌在DNB液體中的濃度達1018CFU / mL，再接入用常規(guī)方法培養(yǎng)出來的蛭 弧菌斑，然后將此培養(yǎng)液在32X培養(yǎng)24h，再在15X,8000rpm離心15min， 保留上清液棄去沉淀，將上清液再在15。C， 20000rpm離心15min，保留沉 淀棄去上清液，沉淀為蛭弧菌游泳體，往沉淀中加入與其體積比為2%DNB 培養(yǎng)液，混勻即得到濃度達106 108PFU/mL蛭弧菌游泳體濃縮液，然后
將此濃縮液置于4°C冰箱保存?zhèn)溆茫?br> 步驟三高密度蛭弧菌游泳體的發(fā)酵培養(yǎng)工藝
配制大量DNB培養(yǎng)液，并加入經(jīng)纖維素濾膜過濾處理后的谷氨酸鈉溶 液，使谷氨酸鈉在培養(yǎng)液中的濃度達10mM，再接入步驟一制得的宿主菌懸 浮液，使宿主菌起始濃度達10"CFU/mL，然后接入步驟二制備的蛭弧菌游 泳體濃縮液，使混合培養(yǎng)液中的蛭弧菌起始濃度達10PFU/mL后，將此混 合培養(yǎng)液裝入10L發(fā)酵罐，于32aC進行發(fā)酵培養(yǎng)5天，前4天內(nèi)每間隔30h 加一次宿主菌，使宿主菌在培養(yǎng)液中的濃度維持在10^ 10^CFU/mL,然 后繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)至滿五天，即可得到最終濃度為10s 10WpFU/mL的蛭弧 菌發(fā)酵液。最后將此發(fā)酵液先在15°C， 8000rpm離心15min，棄去沉淀， 保留上清液，上清液再在15。C， 20000rpm離心15min，保留沉淀棄去上清 液，往沉淀中加入與其體積比為2yo稀營養(yǎng)肉湯DNB培養(yǎng)液混勻，即得到蛭 弧菌游泳體發(fā)酵濃縮液。
權(quán)利要求
1、高密度蛭弧菌游泳體的發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)，其特征在于該技術(shù)的步驟及其工藝條件如下步驟一宿主菌懸浮液的制備將宿主菌接種于常規(guī)培養(yǎng)基中，置于20～40℃搖床中培養(yǎng)12～24h，使其處于對數(shù)生長期，培養(yǎng)液在2～15℃，5000～8000rpm離心15～40min，保留沉淀棄去上清液，往沉淀中加入與其體積比為0.05～2％稀營養(yǎng)肉湯DNB培養(yǎng)液，即得到濃度達1018～1026CFU/mL的宿主菌懸浮液，然后置于2～15℃冰箱中保存?zhèn)溆?；步驟二蛭弧菌游泳體濃縮液的制備在稀營養(yǎng)肉湯DNB培養(yǎng)液中先加入步驟一制備的宿主菌懸浮液，使宿主菌在DNB液體中的濃度達1010～1018CFU/mL，再接入用常規(guī)方法培養(yǎng)出來的蛭弧菌斑，然后將此培養(yǎng)液在20～40℃培養(yǎng)20～60h，再在2～15℃，5000～8000rpm離心15～40min，保留上清液棄去沉淀，將上清液再在2～15℃，10000～20000rpm離心15～40min，保留沉淀棄去上清液，沉淀為蛭弧菌游泳體，往沉淀中加入與其體積比為0.05～2％DNB培養(yǎng)液，混勻即得到濃度達106～108PFU/mL蛭弧菌游泳體濃縮液，然后將此濃縮液置于2～15℃冰箱保存?zhèn)溆?；步驟三高密度蛭弧菌游泳體的發(fā)酵培養(yǎng)工藝配制大量稀營養(yǎng)肉湯DNB培養(yǎng)液，并加入經(jīng)纖維素濾膜過濾處理后的谷氨酸鈉溶液，使谷氨酸鈉溶液在培養(yǎng)液中的濃度達0.05～10mM，再接入步驟一制得的宿主菌懸浮液，使宿主菌起始濃度達1010～1018CFU/mL，然后接入步驟二制備的蛭弧菌游泳體濃縮液，使混合培養(yǎng)液中的蛭弧菌起始濃度達1～103pFU/mL后，裝入發(fā)酵罐，于20～40℃進行常規(guī)發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中至少加兩次宿主菌，每次間隔18～30h，并保證每次的培養(yǎng)液中宿主菌濃度達1010～1018CFU/mL，發(fā)酵培養(yǎng)4～6天后，即可得到濃度達108～1014pFU/mL的蛭弧菌發(fā)酵液，最后將此發(fā)酵液先在2～15℃，5000～8000rpm離心15～40min，棄去沉淀，保留上清液，上清液再在2～15℃，10000～20000rpm離心15～40min，保留沉淀棄去上清液，往沉淀中加入與其體積比為0.05～2％稀營養(yǎng)肉湯DNB培養(yǎng)液混勻，即得到蛭弧菌游泳體發(fā)酵濃縮液。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高密度蛭弧菌游泳體的發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)，其特 征在于；步驟一所述的宿主菌懸浮液的制備中工藝條件為將宿主菌接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，置于28 32°C搖床中培養(yǎng)14 16h，使其處于對數(shù)生 長期，培養(yǎng)液在4 5。C， 5500 6500rpm離心18 25min,保留沉淀棄去 上清液，往沉淀中加入與其體積比為0.1 0.5%稀營養(yǎng)肉湯DNB培養(yǎng)液。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高密度蛭弧菌游泳體的發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)，其特 征在于步驟三所述的高密度蛭弧菌游泳體的發(fā)酵培養(yǎng)工藝，發(fā)酵培養(yǎng)5天， 前3天每間隔24h加一次宿主菌，共加三次，使宿主菌在培養(yǎng)液中的濃度維 持在10W 10"CFU/mL，然后繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)至滿5天，即得到最終濃度為 108 1014PFU / mL的蛭弧菌發(fā)酵液。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的高密度蛭弧菌游泳體的發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)， 其特征在于步驟三所述培養(yǎng)液中谷氨酸鈉的濃度為0.5 1mM。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的高密度蛭弧菌游泳體的發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)，其特征在于所述宿主菌是指可被蛭弧菌裂解的各種弧菌、大腸桿菌、氣單胞菌、沙門氏菌、綠膿桿菌、假單胞菌或愛德華菌類致病菌菌株。
全文摘要
本發(fā)明是指一種高密度蛭弧菌游泳體的發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)，其技術(shù)包括如下步驟1)將宿主菌搖床培養(yǎng)，離心后加入DNB液后得宿主菌懸浮液；2)在DNB液中加入宿主菌懸浮液，再接入蛭弧菌斑后培養(yǎng)，離心后加入DNB液即得蛭弧菌濃縮液；3)往DNB液中先加入谷氨酸鈉，再接入宿主菌懸浮液，最后接入蛭弧菌濃縮液，使其濃度為1～10³PFU/mL，然后置于發(fā)酵罐中培養(yǎng)4～6天，即得到密度為10⁸～10¹⁴PFU/mL的蛭弧菌發(fā)酵液體，離心濃縮即得蛭弧菌游泳體濃縮液。本發(fā)明成本低，蛭弧菌終濃度高，應(yīng)用范圍廣，使其不但在水源性、食源性致病菌防治方面，而且在醫(yī)學(xué)、環(huán)境污染、農(nóng)業(yè)、工業(yè)、軍事領(lǐng)域等方面均可使用。
文檔編號C12N1/20GK101173231SQ20071003116
公開日2008年5月7日 申請日期2007年10月30日 優(yōu)先權(quán)日2007年10月30日
發(fā)明者王澤秀, 蔡俊鵬 申請人:華南理工大學(xué)