專利名稱：花楸離體繁殖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及花楸的繁殖方法。
背景技術(shù)：
花楸(5brZ^; o/ma^a"m^Hendl)又名百花山花楸、花楸樹，屬薔薇科 蘋果亞科花楸屬落葉小喬木，是我國北方珍貴的觀果樹種之一。花楸兼具觀賞 性、耐寒性、適應(yīng)性，所以非常適合在冬季寒冷、色調(diào)單調(diào)的北方城市內(nèi)推廣 栽培。
目前生產(chǎn)和科學(xué)研究中采用播種方式繁殖花楸，播種繁殖花楸存在以下缺 點1、生長周期長，成型慢；2、由于采種母樹均為天然野生花楸樹，且在林 內(nèi)呈散生狀態(tài)，所以種子收集困難，來源不穩(wěn)定；3、果實出種率低、僅為1% 左右；4、種子具有深休眠特性，催芽處理技術(shù)比較復(fù)雜、不易掌握；5、種子 出苗率低，苗木產(chǎn)量低，無法滿足市場需要；6、種子(雜交)基因性狀易產(chǎn) 生變異，不能保持母本優(yōu)良性狀。所以目前花楸難以大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化繁殖、栽種。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了解決目前播種方式繁殖花楸存在生長周期長、成型 慢，種子收集困難，果實出種率低，種子催芽處理技術(shù)復(fù)雜，種子出苗率低， 苗木產(chǎn)量低和基因性狀易產(chǎn)生變異的缺陷，而提供的花楸離體繁殖的方法。
花楸按以下步驟離體繁殖 一、將經(jīng)過消毒的花楸胚接種到每升加入 0.5~1.0 mg 6-芐基氨基嘌呤和0.05~0.1 mg奈乙酸、pH值為5.5~6.0的MS固 體培養(yǎng)基上培養(yǎng)30~40天形成不定芽;二 、將不定芽轉(zhuǎn)移到每升加入0.5~1.0 mg 6-芐基氨基嘌呤和0.05 0.1 mg奈乙酸、pH值為5.5-6.0的MS固體培養(yǎng)基上 繼代培養(yǎng)，至形成微枝；三、將微枝或繼代培養(yǎng)的微枝剪切成長度為l~3cm、 帶有腋芽或頂芽的莖段，然后接種到每升加入0.5-1.0 mg 6-節(jié)基氨基嘌呤和 0.05 0.1mg奈乙酸、pH值為5.5~6.0的WPM培養(yǎng)基上培養(yǎng)至腋芽或頂芽的長 度為^lcm的無根苗；四、將無根苗轉(zhuǎn)入每升加入0.1 0.5 mg生長激素、pH 值為5.5 6.0、無機鹽濃度為1/2的MS固體培養(yǎng)基，并在每天光照時間為16~18
h，溫度為25 3(TC，濕度為60~80%的條件下培養(yǎng)誘導(dǎo)生根，即得到花楸再生 植株；其中步驟四中的生長激素為奈乙酸或吲哚-3-丁酸。
花楸也可以按以下步驟離體繁殖 一、將經(jīng)過消毒的花楸胚接種到每升加 入0.5-1.0 mg 6-節(jié)基氨基嘌呤和0.05-0.1 mg奈乙酸、pH值為5.5-6.0的MS 固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)30~40天形成不定芽；二、將不定芽轉(zhuǎn)移到每升加入0.5-1.0 mg 6-芐基氨基嘌吟和0.05~0.1mg奈乙酸、pH值為5.5-6.0的MS固體培養(yǎng)基 上繼代培養(yǎng)，至形成微枝；三、將微枝或繼代培養(yǎng)的微枝剪切成長度為1~3 cm、 帶有腋芽或頂芽的莖段，然后接種到每升加入0.5 1.0mg6-芐基氨基嘌呤和 0.05 0.1 mg奈乙酸、pH值為5.5 6.0的WPM培養(yǎng)基上培養(yǎng)至腋芽或頂芽的 長度為》2cm的無根苗；四、將無根苗剪切下來，再將剪出的新茬口插入由草 炭土、蛭石、珍珠巖按5 : 4 : 1的體積比混合而成的生根基質(zhì)中，基質(zhì)含水量 為60%~80%、在溫度為25 3(TC，濕度為60~80%的條件下馴化培養(yǎng)3~4周， 即得到花楸再生植株；其中步驟四在生根基質(zhì)中拌入菌蟲雙殺，每立方米生根 基質(zhì)中菌蟲雙殺的用藥量為2 5克。
本發(fā)明采用組織培養(yǎng)的方法繁殖花楸，有利于植株脫毒，減少病蟲害，提 高花楸苗木生長和觀賞質(zhì)量，達(dá)到快速繁殖和復(fù)壯的目的。本發(fā)明為實現(xiàn)花楸 苗木大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。
本發(fā)明花楸離體繁殖方法操作簡單、易掌握，不受天氣和季節(jié)的限制，而 且不需要占用大量的土地。本發(fā)明方法繁殖出的花楸與優(yōu)良母體具有相同的基 因，保證了性狀的統(tǒng)一。本發(fā)明方法繁殖花楸具有繁殖周期短，繁殖系數(shù)高(由 一個胚形成多棵再生植株)，成活率高(成活率高達(dá)99%以上)和成型快的優(yōu) 點。
具體實施例方式
具體實施方式
一本實施方式花楸按以下步驟離體繁殖 一、將經(jīng)過消毒 的花楸胚接種到每升加入0.5 1.0 mg 6-節(jié)基氨基嘌呤和0.05 0.1mg奈乙酸、 pH值為5.5~6.0的MS固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)30~40天形成不定芽；二、將不定芽 轉(zhuǎn)移到每升加入0.5 1.0 mg 6-芐基氨基嘌呤和0.05~0.1 mg奈乙酸、pH值為 5.5~6.0的MS固體培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)，至形成微枝；三、將微枝或繼代培養(yǎng) 的微枝剪切成長度為l~3cm、帶有腋芽或頂芽的莖段，然后接種到每升加入
0.5 1.0 mg 6-節(jié)基氨基嘌呤和0.05~0.1mg奈乙酸、pH值為5.5~6.0的WPM培
養(yǎng)基上培養(yǎng)至腋芽或頂芽的長度為》lcm的無根苗；四、將無根苗轉(zhuǎn)入每升加 入0,1-0.5 mg生長激素、pH值為5.5 6.0、無機鹽濃度為1/2的MS固體培養(yǎng) 基，并在每天光照時間為16 18h，溫度為25 3(TC，濕度為60 80%的條件下 培養(yǎng)誘導(dǎo)生根，即得到花楸再生植株；其中步驟四中的生長激素為奈乙酸或吲 哚-3-丁酸。
本實施方式在無菌、無病毒的條件下繁殖花楸再生植株，再生植株為無病 毒植株。本實施方式繁殖再生植株無需占用土地，節(jié)省空間，室內(nèi)每平方米可 繁殖上千株再生植株。本實施方式步驟二形成的微枝可繼代培養(yǎng)2代以上。
具體實施方式
二本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟一中的 花楸胚為成熟的花楸胚或幼嫩的花楸胚。其它步驟及參數(shù)與實施方式一相同。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
一的不同點是還包括步驟 五將根系發(fā)達(dá)的再生植株移栽到由泥炭土和砂子按2 : 1的體積比混合而成的 馴化基質(zhì)中，在溫度為25 3(TC，濕度〉80%的條件下馴化培養(yǎng)。其它步驟及 參數(shù)與實施方式一相同。
本實施方式馴化培養(yǎng)就是陸續(xù)增加再生植株的光照時間和通風(fēng)量，經(jīng)過馴 化培養(yǎng)的再生植株可移栽到溫室或大棚中進行培養(yǎng)。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施方式
三的不同點是步驟五中馴 化基質(zhì)的含水量為60%~80%。其它步驟及參數(shù)與實施方式三相同。
具體實施方式
五本實施方式與具體實施方式
三的不同點是步驟五中先 洗掉再生植株根系上的培養(yǎng)基再移栽到馴化基質(zhì)中。其它步驟及參數(shù)與實施方 式三相同。
具體實施方式
六本實施方式與具體實施方式
三的不同點是步驟五中多
于4條根、每條根長度〉3 cm的再生植株為根系發(fā)達(dá)的再生植株。其它步驟
及參數(shù)與實施方式三相同。
具體實施方式
七本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟三中將
繼代培養(yǎng)了 3 4代的微枝剪切成長度為1.5 2.8cm、帶有腋芽或頂芽的莖段， 然后接種到WPM培養(yǎng)基上長成無根苗。其它步驟及參數(shù)與實施方式一相同。 本實施方式所選用的繼代培養(yǎng)了 3-4代的微枝具有高繁殖系數(shù)，繁殖系數(shù)
》10。
具體實施方式
八本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟二繼代 培養(yǎng)中每隔3 4周更換一次培養(yǎng)基。其它步驟及參數(shù)與實施方式一相同。
具體實施方式
九本實施方式花楸按以下步驟離體繁殖 一、將經(jīng)過消毒 的花楸胚接種到每升加入0.5-1.0 mg 6-芐基氨基嘌呤和0.05~0.1 mg奈乙酸、 pH值為5.5~6.0的MS固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)30 40天形成不定芽；二、將不定芽 轉(zhuǎn)移到每升加入0.5~1.0 mg 6-芐基氨基嘌呤和0.05~0.1mg奈乙酸、pH值為 5.5 6.0的MS固體培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)，至形成微枝；三、將微枝或繼代培養(yǎng) 的微枝剪切成長度為1 3 cm、帶有腋芽或頂芽的莖段，然后接種到每升加入 0.5 1.0mg6-芐基氨基嘌呤和0.05 0.1 mg奈乙酸、pH值為5.5~6.0的WPM培 養(yǎng)基上培養(yǎng)至腋芽或頂芽的長度為》2cm的無根苗；四、將無根苗剪切下來， 再將剪出的新茬口插入由草炭土、蛭石、珍珠巖按5 : 4 : 1的體積比混合而成 的生根基質(zhì)中，基質(zhì)含水量為60%~80%、在溫度為25 3(TC，濕度為60~80% 的條件下馴化培養(yǎng)3 4周，即得到花楸再生植株；其中步驟四在生根基質(zhì)中拌 入菌蟲雙殺，每立方米生根基質(zhì)中菌蟲雙殺的用藥量為2 5克。
本實施方式在無菌、無病毒的條件下繁殖花楸再生植株，再生植株為無病 毒植株。本實施方式繁殖再生植株無需占用土地，節(jié)省空間，室內(nèi)每平方米可 繁殖上千株再生植株。本實施方式的再生植株可移栽到溫室或大棚中進行培 養(yǎng)。本實施方式步驟二形成的微枝可繼代培養(yǎng)2代以上。本實施方式生根基質(zhì) 中拌入的藥物(菌蟲雙殺)為粉末狀。
具體實施方式
十本實施方式與具體實施方式
九的不同點是步驟四每立 方米生根基質(zhì)中菌蟲雙殺的用藥量為3~4克。其它步驟及參數(shù)與實施方式九相同。
具體實施方式
十一本實施方式與具體實施方式
九的不同點是步驟一中 的花楸胚為成熟的花楸胚或幼嫩的花楸胚。其它步驟及參數(shù)與實施方式九相 同。
具體實施方式
十二本實施方式與具體實施方式
九的不同點是步驟四中 馴化培養(yǎng)是先將蓋在無根苗上方的培養(yǎng)盒蓋一端支起1/4高度培養(yǎng)一周，再將 培養(yǎng)盒蓋一端支起1/2高度培養(yǎng)一周，然后將培養(yǎng)盒蓋一端支起3/4高度培養(yǎng)
一周，之后將培養(yǎng)盒蓋撤去繼續(xù)培養(yǎng)一周。其它步驟及參數(shù)與實施方式九相同。 本實施方式中的培養(yǎng)盒購自于長沙長錦科技有限公司。本實施方式中的
1/4、 1/2和3/4高度分別為培養(yǎng)盒蓋可支起最大高度的1/4、 1/2和3/4。
具體實施方式
十三本實施方式與具體實施方式
九的不同點是步驟三中
將繼代培養(yǎng)了 3 4代的微枝剪切成長度為1.5 2.8cm、帶有腋芽或頂芽的莖段，
然后接種到WPM培養(yǎng)基上長成無根苗。其它步驟及參數(shù)與實施方式九相同。 本實施方式所選用的繼代培養(yǎng)了 3~4代的微枝具有高繁殖系數(shù)，繁殖系數(shù)
》10。
權(quán)利要求
1、花楸離體繁殖的方法，其特征在于花楸按以下步驟離體繁殖一、將經(jīng)過消毒的花楸胚接種到每升加入0.5～1.0mg 6-芐基氨基嘌呤和0.05～0.1mg奈乙酸、pH值為5.5～6.0的MS固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)30～40天形成不定芽；二、將不定芽轉(zhuǎn)移到每升加入0.5～1.0mg 6-芐基氨基嘌呤和0.05～0.1mg奈乙酸、pH值為5.5～6.0的MS固體培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)，至形成微枝；三、將微枝或繼代培養(yǎng)的微枝剪切成長度為1～3cm、帶有腋芽或頂芽的莖段，然后接種到每升加入0.5～1.0mg 6-芐基氨基嘌呤和0.05～0.1mg奈乙酸、pH值為5.5～6.0的WPM培養(yǎng)基上培養(yǎng)至腋芽或頂芽的長度為≥1cm的無根苗；四、將無根苗轉(zhuǎn)入每升加入0.1～0.5mg生長激素、pH值為5.5～6.0、無機鹽濃度為1/2的MS固體培養(yǎng)基，并在每天光照時間為16～18h，溫度為25～30℃，濕度為60～80％的條件下培養(yǎng)誘導(dǎo)生根，即得到花楸再生植株；其中步驟四中的生長激素為奈乙酸或吲哚-3-丁酸。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的花楸離體繁殖的方法，其特征在于步驟一中的 花楸胚為成熟的花楸胚或幼嫩的花楸胚。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的花楸離體繁殖的方法，其特征在于還包括步驟 五將根系發(fā)達(dá)的再生植株移栽到由泥炭土和砂子按2 : 1的體積比混合而成的 馴化基質(zhì)中，在溫度為25 30'C，濕度〉80%的條件下馴化培養(yǎng)。
4、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的花楸離體繁殖的方法，其特征在于步驟五中馴 化基質(zhì)的含水量為60% 80%。
5、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的花楸離體繁殖的方法，其特征在于步驟五中先 洗掉再生植株根系上的培養(yǎng)基再移栽到馴化基質(zhì)中。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的花楸離體繁殖的方法，其特征在于步驟三中用 繼代培養(yǎng)了3 4代的微枝剪切成長度為L5 2.8cm、帶有腋芽或頂芽的莖段后 接種到WPM培養(yǎng)基上長成無根苗。
7、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的花楸離體繁殖的方法，其特征在于步驟二繼代 培養(yǎng)中每隔3~4周更換一次培養(yǎng)基。
8、 花楸離體繁殖的方法，其特征在于花楸按以下步驟離體繁殖 一、將 經(jīng)過消毒的花楸胚接種到每升加入0.5-1.0 mg 6-節(jié)基氨基嘌呤和0.05-0.1 mg 奈乙酸、pH值為5.5-6.0的MS固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)30 40天形成不定芽；二、 將不定芽轉(zhuǎn)移到每升加入0.5 1.0 mg 6-芐基氨基嘌呤和0.05-0.1 mg奈乙酸、 pH值為5.5 6.0的MS固體培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)，至形成微枝；三、將微枝或繼 代培養(yǎng)的微枝剪切成長度為1~3 cm、帶有腋芽或頂芽的莖段，然后接種到每 升加入0.5~1.0 mg 6-芐基氨基嘌呤和0.05-0.1 mg奈乙酸、pH值為5.5-6.0的 WPM培養(yǎng)基上培養(yǎng)至腋芽或頂芽的長度為》2cm無根苗；四、將無根苗剪切 下來，再將剪出的新茬口插入由草炭土、蛭石、珍珠巖按5 : 4 : 1的體積比混 合而成的生根基質(zhì)中，基質(zhì)含水量為60% 80%、在溫度為25~30°C，濕度為 60~80%的條件下馴化培養(yǎng)3 4周，即得到花楸再生植株；其中步驟四在生根 基質(zhì)中拌入菌蟲雙殺，每立方米生根基質(zhì)中菌蟲雙殺的用藥量為2 5克。
9、 根據(jù)權(quán)利要求8所述的花楸離體繁殖的方法，其特征在于步驟四每立 方米生根基質(zhì)中菌蟲雙殺的用藥量為3~4克。
10、 根據(jù)權(quán)利要求8所述的花楸離體繁殖的方法，其特征在于步驟四中馴 化培養(yǎng)是先將蓋在無根苗上方的培養(yǎng)盒蓋一端支起1/4高度培養(yǎng)一周，再將培 養(yǎng)盒蓋一端支起1/2高度培養(yǎng)一周，然后將培養(yǎng)盒蓋一端支起3/4高度培養(yǎng)一 周，之后將培養(yǎng)盒蓋撤去繼續(xù)培養(yǎng)一周。
全文摘要
花楸離體繁殖的方法，它涉及花楸的繁殖方法。它解決了目前播種方式繁殖花楸存在生長周期長、成型慢，種子收集困難，果實出種率低，種子催芽處理技術(shù)復(fù)雜，種子出苗率低，苗木產(chǎn)量低和基因性狀易產(chǎn)生變異的缺陷。離體繁殖先形成不定芽，再形成微枝，然后微枝或繼代培養(yǎng)的微枝增殖形成無根苗，再生根，即得到花楸再生植株。本發(fā)明花楸離體繁殖方法操作簡單、易掌握，不受天氣和季節(jié)的限制，而且不需要占用大量的土地。本發(fā)明方法繁殖出的花楸與優(yōu)良母體具有相同的基因，保證了性狀的統(tǒng)一。本發(fā)明方法繁殖花楸具有繁殖周期短，繁殖系數(shù)高，成活率高和成型快的優(yōu)點。
文檔編號C12N5/04GK101103702SQ200710072700
公開日2008年1月16日 申請日期2007年8月24日 優(yōu)先權(quán)日2007年8月24日
發(fā)明者玲 楊, 沈海龍, 王愛芝 申請人:東北林業(yè)大學(xué);沈海龍;王愛芝;楊 玲