專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種多功能生物降解酶制劑(ave制劑)的制作方法一種多功能生物降解酶制劑(AVE制劑)生物降解酶制劑(AVE制劑)是通過(guò)分離于土壤的微生物-棕色固氮菌W幼"fec"rw'77^a"力7)發(fā)酵制成的一種生物酶制劑。AVE制劑可體現(xiàn)蛋白酶、脂肪酶、果膠酶、纖維素、淀粉酶活性，為生物技術(shù)、醫(yī)藥科技、基礎(chǔ)科學(xué)研究提供了一新的應(yīng)用材料。一、所屬領(lǐng)域本發(fā)明屬于一種生物酶，其具有不同功能的水解催化作用。具體涉及一種能對(duì)蛋白、脂肪、果膠、纖維素、淀粉進(jìn)行水解催化活性的制劑。二、玟術(shù)背暈生物固氮是生命科學(xué)中的重大基礎(chǔ)研究課題之一，國(guó)內(nèi)外生物固氮研究已進(jìn)入一個(gè)新階段，其特點(diǎn)是學(xué)科交叉，將基礎(chǔ)研究和應(yīng)用前景相結(jié)合。當(dāng)前生物固氮研究正在分子和原子水平上展開(kāi)13]。重點(diǎn)在固氮機(jī)理、突變株以及對(duì)該菌種產(chǎn)生的酶進(jìn)行固定化的研究。但當(dāng)固氮酶及其沒(méi)有固氮活性以后酶的功能和在其他方面的應(yīng)用未曾見(jiàn)報(bào)道。固氮菌屬中，X加to6"cferW朋/a欲份廣泛存在于自然界的土壤和水中。固氮菌屬細(xì)菌在有氧存在的時(shí)，能夠獨(dú)立地將空氣中的氮固定下來(lái)。由于固氮菌^加Zo6"c^r屬在所有已發(fā)現(xiàn)固氮微生物中的較優(yōu)特性，眾多研究者將其作為研究固氮菌及其酶的首選菌屬[1'21。棕色固氮菌J2Woto"ervf附/朋鼎'是有鞭毛游動(dòng)性革蘭氏陰性固氮菌，屬于固氮菌中科中的^zoto^"w屬,是一種典型性的固氮菌。在固氮菌中起固氮作用的是固氮酶，棕色固氮菌是產(chǎn)含鉬鐵固氮酶的菌種之一，由兩種獨(dú)立的氧敏感蛋白組成鉬鐵蛋白(MoFe蛋白，組分I)和鐵蛋白(Fe蛋白，組分II)。1965年首次以巴氏梭菌(Cp)為材料，分離純化得到了固氮酶的兩個(gè)蛋白組分W，即鐵蛋白(Fe蛋白)和鉬鐵蛋白(MoFe蛋白),鐵蛋白分子量約60KD,是由兩個(gè)相同的亞基組成的二聚體，含一個(gè)4Fe4S簇，橋聯(lián)于兩個(gè)亞基之間。鉅鐵蛋白分子量約220KD，由01262組成四聚體，含2個(gè)Mo約32個(gè)Fe和等量的S^原子。這些金屬形成兩個(gè)特殊的4F4S簇(稱(chēng)P-簇對(duì))和兩個(gè)鐵鉬輔因子(FeMo2co)4]。上述兩個(gè)蛋白組分單獨(dú)存在時(shí)不呈現(xiàn)固氮活性，只有組合在一起時(shí)，在一定條件下才有固氮功能。固氮酶兩組分蛋白都對(duì)氧極敏感，并隨純度的提高而更加敏感。在空氣中鐵蛋白的半衰期為3045秒,鉬鐵蛋白的半衰期為10分鐘["。離體研究固氮酶時(shí)為保持活性需在嚴(yán)格厭氧條件下進(jìn)行。不同固氮生物之間對(duì)氧的敏感性略有差異，并都具有不同的防氧保護(hù)方式6]。在根瘤中固氮酶存在于類(lèi)菌體中。而根瘤的特殊結(jié)構(gòu)和生理環(huán)境，不但保護(hù)了固氮酶而且還提供了合適的固氮條件,其中豆血紅蛋白起著重要的輸氧作用。固氮酶對(duì)冷敏感，一般在0'C左右易失活。其中鐵蛋白對(duì)冷最敏感，但不同固氮生物之間存在差異。然而，所有的固氮酶在-200t:下都是穩(wěn)定的,故純化的固氮酶均可保存在液氮中[7。在自然條件下，N2和質(zhì)子是固氮酶的底物。固氮酶每還原一分子N2就要釋放一分子H2。當(dāng)沒(méi)有任何其它底物時(shí)，固氮酶的全部電子都用于氮離子的還原而釋放氫。固氮酶的放氫也需要腺苷三磷酸(ATP)，這則區(qū)別于氫酶[8]。除上述天然底物外，固氮酶是生物中分離出來(lái)的唯一能還原三鍵化合物的酶。其底物多數(shù)是具有三鍵或潛在三鍵的分子，如H-S-ON、CHrN^C-S，NsC-C=N，CH2《H-N-C,以及最近剛得到證明的氧硫化碳(COS)和C02也是固氮酶的底物，然而其類(lèi)似物CS2則是抑制劑^。在底物中引起人們廣泛應(yīng)用的是乙炔，因乙炔還原被人們用來(lái)作為測(cè)定固氮酶活性的簡(jiǎn)便而靈敏的方法(使用氣相色譜)。固氮酶的腺苷三磷酸和還原劑"W。固氮生物能將空氣中的氮還原成氨，是因其體內(nèi)存在生物催化劑固氮酶。生物固氮也是一個(gè)耗能的反應(yīng)，為了還原上述底物，則需要有ATP和還原劑(電子)。在完整固氮有機(jī)體中一般ATP與Mg2+是以l:l的復(fù)合物形式存在，大量實(shí)驗(yàn)表明固氮酶每提供一個(gè)電子給N2需要水解2個(gè)分子的ATP(生成產(chǎn)物ADP和無(wú)機(jī)磷)，即ATP/e'比為2。因此，固氮酶催化N2還原的反應(yīng)式可寫(xiě)作N2+8H"+8e-+16MgATP—2NH3+H2+16MgAD十16Pi。方程式中ATP:腺苷三磷酸，是由呼吸、厭氧呼吸、發(fā)酵、或光合作用所提供的；ADP:腺苷二磷酸；Pi:無(wú)機(jī)磷酸鹽。固氮酶催化作用機(jī)理。固氮酶作用機(jī)理包括電子的傳遞、底物的絡(luò)合和還原兩部分。通過(guò)固氮酶系統(tǒng)的電子流，由鐵蛋白進(jìn)入,而以被還原了的底物形式由鉬鐵蛋白放出。從固氮酶兩組分蛋白結(jié)構(gòu)分析的結(jié)果推測(cè)，固氮酶系統(tǒng)內(nèi)電子傳遞的順序是Fe蛋白—MoFe蛋白的P2簇對(duì)—FeMo2co—底物MgATP的水解是與電子傳遞的第一步偶聯(lián)，而當(dāng)?shù)孜锱cFeMo2co絡(luò)合時(shí)，電子和質(zhì)子傳遞給底物"1。動(dòng)力學(xué)研究也表明，鐵蛋白一次傳遞一個(gè)電子給鉬鐵蛋白，這種一個(gè)電子傳遞過(guò)程又包含著鐵蛋白和鉬鐵蛋白之間偶聯(lián)和解偶聯(lián)的循環(huán)過(guò)程,而解偶聯(lián)也是決定酶促反應(yīng)速率的限制步驟12。因此,了解固氮酶兩組分之間的關(guān)系，電子的傳遞以及底物^絡(luò)合和還原，是了解固氮酶作用機(jī)理所必須。固氮酶的固氮機(jī)理有一個(gè)復(fù)雜的電子傳遞路徑，其沒(méi)有固氮能力后的鐵蛋白和鉬鐵蛋白組合體在其他催化功能方面給研究她的人們留下了很大的研究空間。三、發(fā)明內(nèi)賽名稱(chēng)一種多功能生物降解酶制劑(AVE制劑)通過(guò)分離于土壤的革蘭氏陰性棕色固氮菌(Azotobactrevinelandii)發(fā)酵、離心分離得到的一種具有蛋白酶、脂肪酶、果膠酶、纖維素酶、淀粉酶活性的多功能生物酶制劑(AVE制劑)。其使用條件溫度，0-40'C,最佳溫度，30"C;pH值,4.5-8.5;時(shí)間，0.5小時(shí)以上。功能生物酶制劑(AVE制劑)具有同時(shí)或單獨(dú)作用具有蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、果膠酶和纖維素酶活性。在生物技術(shù)、醫(yī)藥醫(yī)療技術(shù)、基礎(chǔ)科學(xué)研究上有廣泛的應(yīng)用和研究前景。適用范圍蛋白、脂肪、淀粉、果膠、纖維素的水解、降解。AVE制劑性能測(cè)試本實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的AVE制劑含酶蛋白質(zhì)量為28g/L。1.固氮活性擁試1141野生株棕色固氮菌(Azotobactervinelandii)發(fā)酵最初產(chǎn)出的AVE制劑，能催化乙炔還原為乙烯，其氣相色譜分析如附圖1所示-2.蛋白酶活性擁試蛋白酶活性實(shí)驗(yàn)是通過(guò)AVE制劑催化水解酪蛋白為酪氨酸進(jìn)行測(cè)試的。2.1蛋白酶活的測(cè)定方法l151根據(jù)蛋白酶催化蛋白質(zhì)水解生成的含酚基的氨基酸(色氨酸、酪氨酸)與福林-酚試劑反應(yīng)，生成藍(lán)色復(fù)合物。藍(lán)色深淺與含酚氨基酸的量成正比，可以以此測(cè)定蛋白酶的活力。采用福林-酚法測(cè)定AVE制劑酶活。取AVE制劑溶液lOmL,在25"C時(shí)加入預(yù)熱的2%酪蛋白溶液lmL，反應(yīng)10min，反應(yīng)結(jié)束時(shí)加入10%三氯醋酸溶液2mL,立即搖勻。靜置lOmin后過(guò)濾。取濾液lmL，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制作時(shí)相同的步驟測(cè)定OD值。空白試驗(yàn)時(shí)，先加三氯醋酸溶液，后加底物和酶液，測(cè)量OD值。活力計(jì)算按照上述條件下，每分鐘催化酪蛋白水解生成l嗎酪氨酸的酶量定義為一個(gè)酶活力單位。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>式中OD"在合適波長(zhǎng)下測(cè)定樣品與空白樣品的吸光度之差；K一常數(shù)，由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)得出，數(shù)值上等于厶O(píng)D為l時(shí)相當(dāng)酪氨酸的微克數(shù)；n—酶液稀釋倍數(shù)；IO"—反應(yīng)時(shí)間，min;4一酶促反應(yīng)試管內(nèi)溶液的體積(酶液lmL+酪蛋白溶液lmL+三氯醋酸2mL)。本實(shí)驗(yàn)中，K為100,n取發(fā)酵出的酶溶液，不進(jìn)行稀釋?zhuān)。2.2酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作:將標(biāo)準(zhǔn)酪氨酸溶液配制成0"100ng/mL的各種不同溶液。分別吸取lmL，各加入0.5mol/LNa2CO3溶液5mL及福林-酚試劑lmL，置于40X:水浴中顯色15min，分別測(cè)定OD，以酪氨酸的濃度為橫坐標(biāo)，OD為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。按照表2-2-1配制各種不同濃度的酪氨酸溶液表2-2-1酪氨酸的濃度<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>每個(gè)樣品測(cè)三次，取平均值。將16號(hào)管所測(cè)得的光密度(OD)減去1號(hào)管(蒸餾水空白試驗(yàn))所測(cè)得的光密度為凈OD數(shù)。以?xún)鬙D值為橫坐標(biāo)，酪氨酸的濃度為縱坐標(biāo)，繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，如附圖2所示。表2-2-2酪氨酸的濃度與OD值的關(guān)系<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>水解蛋白酶性能的測(cè)試取發(fā)酵生產(chǎn)的AVE制劑，在溫度為25'C，pH值為7.0。其中k為100，n為l,OD值為0.046。根據(jù)公式2-1可得蛋白酶活力-M^M-o.46^/加"20x2x1「實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示AVE制劑具有水解蛋白質(zhì)的活性。3.脂肪瞎活的淵試3.1脂肪酶酶活的測(cè)量方法"51脂肪酶在一定條件下，可以將甘油三脂水解并釋放出脂肪酸、甘油二酯、甘油單酯和甘油，水解的脂肪酸可以用標(biāo)準(zhǔn)堿液滴定，從而測(cè)定酶活力。在25X:,pH為7.0的條件下，每分鐘催化脂肪水解生成的ljanol脂肪酸的酶量定義為一個(gè)酶活力單位。測(cè)試方法向100ml三角燒瓶中，分別加入PVA橄欖油乳化液4ml和pH為7.5的磷酸緩沖溶液5ml，至于37匸水浴鍋中預(yù)熱5min,加入酶20ml，立即計(jì)時(shí)，反應(yīng)40min。加入95%乙醇終止反應(yīng)。加入酚酞3滴，用0.05%的氫氧化鈉溶液滴定紅色。在作空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)時(shí)，在加入酶液之前加入95%的乙醇。活力計(jì)算方法酵活力(IU)=N(A-B)公式2-2t式中A—樣品滴定耗堿液的mL數(shù)；B—空白滴定耗堿液的mL數(shù)；t一反應(yīng)時(shí)間，min;N—每mL堿液中含NaOH的微摩爾數(shù)。取發(fā)酵的AVE制劑溶液體積20mL,在AVE制劑溶液里加入磷酸緩沖溶液5mL，再加入分析純橄欖油0.5mL，在25"水浴鍋恒溫反應(yīng)40min，再取lOmL乙醇用于終止實(shí)驗(yàn)。將此過(guò)程與10mL乙醇先加入溶液做對(duì)比，研究AVE制劑在反應(yīng)過(guò)程中催化水解的橄欖油量。按照2.3.2方法進(jìn)行試驗(yàn)。表3-3測(cè)定A.v酶活時(shí)NaOH消耗的體積條件VNaoH/mL乙醇先加1.72乙醇后加2.23脂肪酶活計(jì)算如下式所示Kj-48.9x(2:3-1.72)=06235(/OTlo/.mi//min)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示AVE制劑有水解脂肪的活性。4.果膠籌活性擁試1151果膠酶包括果膠酯酶(PE)、聚半乳糖醛酸(PG)和聚半乳糖醛酸裂解酶(PGL)等多種，他們的作用方式和產(chǎn)物各不相同，無(wú)法找到一種適用于所有果膠酶的活力測(cè)定方法，故采用混合果膠酶一般采用的次碘酸鈉法。次碘酸鈉法測(cè)定原理果膠酶對(duì)果膠質(zhì)起解酯、裂解、水解作用，產(chǎn)生半乳糖醛酸和寡聚半乳糖醛酸等，它們均含有醛基，因此具有一定的還原性。在一定條件下，可以和具有氧化性的物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)。因此可以通過(guò)次碘酸鈉進(jìn)行半乳糖醛酸的定量測(cè)定，從而間接的定果膠酶的活力。按照國(guó)標(biāo)GB-601配制標(biāo)準(zhǔn)配制并標(biāo)定硫代硫酸鈉溶液。(濃度為0.05216mol/L)。實(shí)驗(yàn)方法在100ml的碘量瓶中，加入10ml的10%的果膠溶液，在50。C的水浴條件下恒溫，加入預(yù)先在水浴鍋中恒溫的酶也20ml，酶解40min。40min后煮沸滅活。加入濃度為0.lmol/L的碘標(biāo)準(zhǔn)溶液10ml,加上瓶蓋，在暗處反應(yīng)30min，用濃度為0.05mol/L的硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至淡黃，加入3ml的淀粉指示劑，滴定至無(wú)色，消耗的硫代硫酸鈉的體積為V,ml。同樣，以培養(yǎng)酶的培養(yǎng)基代替酶，用硫代硫酸鈉滴定，消耗體積為Voml酶活的計(jì)算方法-生成的半乳糖醛酸質(zhì)量(rag)=(V。-V》釔W94.14果膠酶活力[mg/(g']=生成的半乳糖醛酸質(zhì)量(mg)*N/(W2，t)式中-V。一滴定空白液消耗的硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積(ml)V,—滴定酶液消耗的硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積(ml)C一硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度(mol/L)194.14—半乳糖醛酸的摩爾質(zhì)量，(g/mol)N—果膠酶制劑的量W2—試驗(yàn)中加入的酶制劑的量，(g)t_酶解反應(yīng)的時(shí)間，(h)N本研究采用工藝參數(shù)為-酶溶液(Vo:mL)培養(yǎng)基空白樣(V,:mL)V0-Vi硫代硫酸鈉19.3618.780.58生成的半乳糖醛酸的質(zhì)量(mg)=0.58*0.05216*194.14=5.8733果膠酶活力[1118/(8*11)=5.8733/(20*2.2420*0.67)=0.1955實(shí)驗(yàn)顯示AVE制劑具有果膠酶活性。5.淀粉鶄活性擁試5.1淀粉酶活的測(cè)定方法[15采用D60^消色法與藍(lán)值法相結(jié)合的方法來(lái)測(cè)量的AVE制劑的淀粉酶活性。這是測(cè)量淀粉酶活力的普遍方法。1個(gè)酶活力單位為在最佳條件下，60min催化lg淀粉水解為糊精的酶量。該方法根據(jù)淀粉遇碘變藍(lán)的原理，可以在淀粉溶液中加入不同量的AVE制劑，一定時(shí)間后，可選則不出現(xiàn)藍(lán)色的酶制劑用量最小的那個(gè)試液可以被認(rèn)為是剛好將淀粉全部分解，可以根據(jù)酶制劑的用量，淀粉的用量以及反應(yīng)時(shí)間來(lái)計(jì)算淀粉酶的活力。同時(shí)采用藍(lán)值法來(lái)確定AVE制劑的酶體積。如附圖3淀粉酶酶活的測(cè)量方法(藍(lán)值法反應(yīng)流程)。淀粉遇碘會(huì)產(chǎn)生藍(lán)色，可以在一定量的淀粉中加入不同量的淀粉酶制劑，不同體積的AVE制劑溶液與淀粉反應(yīng)，將逐漸由紫色變?yōu)樽爻壬?，直到與標(biāo)準(zhǔn)比色液顏色相同時(shí)，即為反應(yīng)終點(diǎn)，認(rèn)為AVE制劑將淀粉全部分解?？筛鶕?jù)酶制劑的用量，淀粉的用量及反應(yīng)時(shí)間來(lái)計(jì)算代淀粉酶的活力。淀粉酶活力二(60/t)X20Xl％/B式中t一反應(yīng)時(shí)間n—酶液的稀釋倍數(shù)B—反應(yīng)中酶液的體積AVE制劑淀粉酶活計(jì)算淀粉酶活力(mg/(g.h))=WZ(W具)=1000/10.8*13=7.12*103實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示AVE制劑具有淀粉酶活性。經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)AVE制劑不僅可以單獨(dú)顯現(xiàn)上述的性質(zhì)，而且可以水解、降解上述底物的混合物，如水解蛋白和脂類(lèi)的結(jié)合物等。四、AVE制劑構(gòu)成材料本生物AVE制劑是由酶蛋白、水、少量無(wú)機(jī)鹽構(gòu)成；主要酶經(jīng)過(guò)性能測(cè)試及電泳分析，得知其酶蛋白組分是Fe蛋白和MoFe蛋白。構(gòu)成法棕色固氮菌和鉬酸鹽，磷酸鹽，鐵鹽等發(fā)酵、離心分離提取。五具體實(shí)施例方式將AVE制劑直接撒入脂肪、蛋白、果膠、淀粉液中或?qū)⒅尽⒌鞍?、果膠、淀粉直接侵入AVE制劑中，進(jìn)行水解。六圖1是棕色固氮菌產(chǎn)出的固氮酶還原乙炔實(shí)驗(yàn)的氣相色譜圖；其中，(1)乙炔與乙烯單體氣相色譜圖；(2)乙炔及AVE制劑還原產(chǎn)物氣相色譜圖。圖2是酪氨酸與OD值的關(guān)系；圖3是淀粉酶酶活的測(cè)量方法。參考文獻(xiàn)JohnPostgate.NitrogenFixation.TheinstituteofBiology'sStudiesinBiology.1978(92):45-50.[4]李佳格，徐繼.生物固氮作用機(jī)理.ChineseBulletinofBotany.1997,14:1-13.邊少敏.棕色固氮菌變株DJ中鉬鐵蛋白和HBP59蛋白的研究一純化、特性及晶體生長(zhǎng).中國(guó)科學(xué)院研究生院博士研究生學(xué)位論文.2005:1-4.Shah,V.K，eto/.ProcNatlAcad.Sci.USA.1999,74:3249-3253.Evans,H.丄etc.BiologicalNitrogenFixation.ChapmanandHall.NewYork.1997:1-42.PapasaniV.Subbaiah，PeterHorvatheto/.RegulationoftheActivityandFattyAcidSpecificityofLecithin-CholesterolAcyltransferasebySphingomyelinandItsMetabolites,CeramideandCeramidePhosphate.Biochemistry.2006,45:5029-5038.尤崇杓.生物固氮.北京科學(xué)出版社.1987:71-80.Seefeldt，L.C.eto/.Biochemistry.1995,34:5382-5389.Burgess,B.K.Molybdenum.Enzyme.Wiley-Interscience.1985:161-219.Ress，D.C.汰al.BiologicalChemistry.1999,269:2876-28083.Howard,J.B.Biochemistry.1994,63:2798-2808.WeiHao.NitrogenFixationandAmmoniaproductionbyNitrogenase.ThesisofGraduateSchoolofTayamaIMversity.2000:l-48.周文龍.酶在紡織中的應(yīng)用.北京中國(guó)紡織出版社.2002:352-354.權(quán)利要求1.一種多功能生物降解酶制劑(AVE制劑)是利用分離于土壤的微生物，革蘭氏陰性棕色固氮菌(Azotobactervinelandii)和磷酸鹽、鐵鹽、鉬酸鹽等發(fā)酵產(chǎn)出的生物酶制劑。其方法是在一定溫度、pH值下，將AVE制劑直接撒入脂肪、蛋白、果膠、纖維、淀粉液中或?qū)⒅尽⒌鞍?、果膠、淀粉直接侵入AVE制劑中進(jìn)行水解、降解。其特征是利用棕色固氮菌(Azotobactervinelandii)在培養(yǎng)基中發(fā)酵制成的AVE制劑，具有催化水解脂肪、蛋白、果膠、纖維、淀粉的多功能生物酶制劑。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種多功能生物降解酶制劑(AVE制劑)，其特征是棕色固氮菌04zototoc敏v/加/朋鼎')在培養(yǎng)基中發(fā)酵制成AVE制劑的溫度是(MO'C，pH值是4.5-8.5;對(duì)脂肪、蛋白、果膠、纖維、淀粉底物具有進(jìn)行催化水解功效時(shí)間0.5小時(shí)以上。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種多功能生物降解酶制劑(AVE制劑)，其特征是AVE制劑的多功能水解作用，在溫度25-35C,pH值是7.0左右；對(duì)脂肪、蛋白、果膠、纖維、淀粉底物水解效果較好。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種多功能生物降解酶制劑(AVE制劑)，其特征在于AVE制劑是棕色固氮菌在培養(yǎng)基中發(fā)酵制得。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種多功能生物降解酶制劑(AVE制劑)，其特征在于AVE制劑是棕色固氮菌在培養(yǎng)基中發(fā)酵制成AVE制劑或棕色固氮菌和培養(yǎng)基構(gòu)成的生物材料，對(duì)脂肪、蛋白、果膠、纖維、淀粉底物有水解性能。全文摘要本發(fā)明涉及利用一種分離于土壤的微生物，革蘭氏陰性棕色固氮菌(Azotobactervinelandii)和磷酸鹽、鐵鹽、鉬酸鹽等發(fā)酵產(chǎn)出的一種多功能生物降解酶制劑(AVE制劑)。其方法是在一定溫度、pH值下，將AVE制劑直接撒入脂肪、蛋白、果膠、纖維、淀粉液中或?qū)⒅?、蛋白、果膠、淀粉直接侵入AVE制劑中進(jìn)行催化水解、降解。其特征是利用棕色固氮菌(Azotobactervinelandii)在培養(yǎng)基中發(fā)酵制成的AVE制劑，具有催化水解脂肪、蛋白、果膠、纖維、淀粉的多功能生物酶制劑。文檔編號(hào)C12R1/065GK101298609SQ20071017351公開(kāi)日2008年11月5日申請(qǐng)日期2007年12月28日優(yōu)先權(quán)日2007年12月28日公開(kāi)號(hào)200710173516.發(fā)明者煒郝,郝陽(yáng)帆申請(qǐng)人:上海居知園生物技術(shù)有限公司