專利名稱：一次性選擇性xv瓊脂培養(yǎng)基及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種微生物培養(yǎng)基，特別是涉及一種一次性選擇性XV瓊
脂培養(yǎng)基及其制備方法。
背景技術：
以往常用的用于嗜血桿菌的分離培養(yǎng)的培養(yǎng)基為巧克力瓊脂培養(yǎng)基，
其配制方法為在基礎培養(yǎng)基上于80-9(TC左右無菌加入脫纖維羊血，使血 球破裂釋放出X因子(氯化血紅素)和V因子(輔酶1)，以供嗜血桿菌的生長。 此種培養(yǎng)基中的嗜血桿菌生長良好，但是，在其配制過程中存在著下列不 足
1.無菌脫纖維羊血的采集費時費力；2.血球的破壞過程中不同羊血的破 壞程度不一樣，很容易出現(xiàn)批間差；3.在配制過程中，血液稍有搖動不及 時的地方，就會造成較大的顆粒，且搖動也容易出現(xiàn)大量的氣泡，給傾倒 造成很大麻煩。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種易于制備且性質(zhì)穩(wěn)定 的一次性選擇性XV瓊脂培養(yǎng)基及其制備方法。
本發(fā)明的目的在通過以下技術方案實現(xiàn)的
一種一次性選擇性XV瓊脂培養(yǎng)基，其由以下重量配比的組份制成
牛肉浸出粉 3 5
胰酪蛋白胨 10
氯化鈉 5
瓊脂 15
酵母粉 5
血紅素 0.015 0.020
輔酶I 0.015 0.020
萬古霉素 0.009蒸餾水或去離子水 1000 上述各組份的重量配比為
牛肉浸出粉3
胰酪蛋白胨10
氯化鈉5
瓊脂15
酵母粉5
血紅素0.015
輔酶I0.015
萬古霉素0.009
蒸餾水或去離子水1000
一種一次性選擇性XV瓊脂培養(yǎng)基的制備方法，包括以下步驟
1) 培養(yǎng)基基礎液的配制按照配比將牛肉浸出粉、胰酪蛋白胨、氯化
鈉和酵母粉放入蒸餾水或去離子水中，搖勻，使其完全溶解，并用lmol/L 的NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.2士0.2，然后加入瓊脂粉，煮沸溶解，分裝 制成培養(yǎng)基基礎液；
2) 高壓滅菌將分裝后的培養(yǎng)基基礎液放入滅菌器內(nèi)，在i2i±rc 滅菌15分鐘；
3) 培養(yǎng)基基礎液降溫將滅菌后的培養(yǎng)基基礎液取出，放至50 55 'C的恒溫水浴鍋內(nèi)搖勻，使培養(yǎng)基基礎液的溫度降至50 55°C;
4) 加入營養(yǎng)物質(zhì)和抑菌劑按照組份配比趁熱加入氯化血紅素(X因 子)；當降溫至50 55"C時加入輔酶1 (V因子)和萬古霉素；搖勻。
5) 傾注平板在無菌條件下，將培養(yǎng)基基礎液傾注到平皿內(nèi)并使其凝
固后的邊緣厚度達5土lmm，傾注完畢后將平皿蓋迅速蓋好，并輕輕旋轉(zhuǎn) 平皿內(nèi)的液體，以使平皿充盈均勻、減少氣泡；然后將傾注有培養(yǎng)基基礎 液的平皿放在冷卻桌上使其完全冷凝。
上述的制備方法中，所述的滅菌器為外加熱高壓蒸汽滅菌器或電力高 壓蒸汽滅菌器。
本發(fā)明的一次性選擇性XV瓊脂培養(yǎng)基省卻了無菌脫纖羊血的采集過程，在傾倒前直接加入配制好的X因子、V因子，避免了血球破裂過程中 人工搖動的繁瑣工作，為整個培養(yǎng)基的制備過程節(jié)省了大量時間，提高了 生產(chǎn)效率。另外，操作人員更易于掌握其配制方法。
木發(fā)明的一次性選擇性XV瓊脂培養(yǎng)基除涵蓋了嗜血桿菌所需要的營 養(yǎng)成分外，還加入萬古霉素來抑制其他雜菌的生長，從而排除了干擾，更 加有利于目的菌的生長。
此外，本發(fā)明的一次性選擇性XV瓊脂培養(yǎng)基還可以用于細菌學基因
重組中用萬古霉素抗性基因標記的細菌的選擇、分離純化。
具體實施例方式
下面結(jié)合具體的實施例對本發(fā)明的一次性選擇性XV瓊脂培養(yǎng)基的制
備方法進行說明。 實施例1
按照表l中的配比將牛肉浸出粉、胰酪蛋白胨、氯化鈉和酵母粉放入
蒸餾水中，搖勻，使其完全溶解。溶解完全后先用pH試紙粗測一下溶液 的pH值，然后用lmol/L的NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值為7.2。然后加入瓊脂 粉，煮沸溶解后，分裝在在兩個三角燒瓶中(500ml/瓶)，制成培養(yǎng)基基礎 液。
將分裝后的培養(yǎng)基基礎液放入外加熱高壓蒸汽滅菌器內(nèi)，在12rc滅
菌15分鐘。滅菌結(jié)束后，關閉外加熱高壓蒸汽滅菌器的煤氣開關，待滅菌 器壓力表指針降至零點時，打開蓋上的固定旋扭并將蓋打開，待熱氣完全 散盡，工作人員戴上工作手套，將瓶裝培養(yǎng)基基礎液取出，放至52"C的恒 溫水浴鍋內(nèi)搖勻，使培養(yǎng)基基礎液的溫度降至52"C。
趁熱向上述的培養(yǎng)基基礎液中加入氯化血紅素(X因子)；當降溫至 52"C時加入輔酶I (V因子)和萬古霉素，搖勻。
在無菌條件下，將三角燒瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒入平皿中，并使其凝固后的 邊緣厚度為4mm，傾注完畢后將平皿蓋迅速蓋好，并輕輕旋轉(zhuǎn)平皿內(nèi)液體， 以使平皿充盈均勻、減少氣泡。然后將盛有培養(yǎng)基的平皿放置冷卻桌上， 使其完全冷凝，制成本發(fā)明的XV瓊脂培養(yǎng)基。
實施例2
6按照表1中的配比將牛肉浸出粉、胰酪蛋白胨、氯化鈉和酵母粉放入 去離子水中，搖勻，使其完全溶解。溶解完全后先用pH試紙粗測一下溶 液的pH值，然后用lmol/LNaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值為7.3。然后加入瓊脂 粉，煮沸溶解后，分裝在三角燒瓶中，制成培養(yǎng)基基礎液。
將分裝后的培養(yǎng)基基礎液放入電力高壓蒸汽滅菌器內(nèi)，在12rc滅菌 15分鐘。滅菌結(jié)束后，關閉電力高壓蒸汽滅菌器的電源開關，待滅菌器壓 力表指針降至零點時，打開蓋上的固定旋扭并將蓋打開，待熱氣完全散盡， 工作人員戴上工作手套，將瓶裝培養(yǎng)基基礎液取出，放至54。C的恒溫水浴 鍋內(nèi)搖勻，使培養(yǎng)基基礎液的溫度降至54。C。
趁熱向上述的培養(yǎng)基基礎液中加入氯化血紅素(X因子)；當降溫至 54"C時加入輔酶I (V因子)和萬古霉素，搖勻。
在無菌條件下，將三角燒瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒入平皿中，并使其凝固后的 邊緣厚度達5mm，傾注完畢后將平皿蓋迅速蓋好，并輕輕旋轉(zhuǎn)平皿內(nèi)液體， 以使平皿充盈均勻、減少氣泡。然后將盛有培養(yǎng)基的平皿放置冷卻桌上， 使其完全冷凝，制成本發(fā)明的XV瓊脂培養(yǎng)基。
在本發(fā)明的實施例中，使用的輔酶I (V因子)為50mg/10ml;使用的 氯化血紅素(X因子)為50mg/10ml;使用的萬古霉素為90mg/10ml。
表1
各組份 含量牛肉 浸出粉胰酪 蛋白胨氯化鈉瓊脂酵母粉血紅素輔酶i萬古 霉素蒸餾水/去 離子水
實施例13g10g5g15g5g15mg15mg9mg訓Oml
實施例24g10g5g15g5g17mgl"7mg9mglOOOml
權利要求
1. 一種一次性選擇性XV瓊脂培養(yǎng)基，其特征在于由以下重量配比的組份制成牛肉浸出粉 3～5胰酪蛋白胨 10氯化鈉 5瓊脂15酵母粉 5血紅素 0.015～0.020輔酶I 0.015～0.020萬古霉素0.009蒸餾水或去離子水1000。
2.根據(jù)權利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征在于各組份的重量配比為:牛肉浸出粉 3胰酪蛋白胨 10氯化鈉 5瓊脂 15酵母粉 5血紅素 0.015輔酶I 0.015萬古霉素 0.009蒸餾水或去離子水 1000 。
3. —種一次性選擇性XV瓊脂培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于包括以下步驟1)培養(yǎng)基基礎液的配制按照配比將牛肉浸出粉、胰酪蛋白胨、氯化鈉和酵母粉放入蒸餾水或去離子水中，搖勻，使其完全溶解，并用lmol/L的NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.2士0.2，然后加入瓊脂粉，煮沸溶解，分裝制成培養(yǎng)基基礎液；2) 高壓滅菌將分裝后的培養(yǎng)基基礎液放入滅菌器內(nèi)，在121±TC滅菌15分鐘；3) 培養(yǎng)基基礎液降溫將滅菌后的培養(yǎng)基基礎液取出，放至50 55"的恒溫水浴鍋內(nèi)搖勻，使培養(yǎng)基基礎液的溫度降至50 55°C;4) 加入營養(yǎng)物質(zhì)和抑菌劑按照組份配比趁熱加入氯化血紅素(X因子)；當降溫至50 55"C時加入輔酶I (V因子)和萬古霉素；搖勻；5) 傾注平板在無菌條件下，將培養(yǎng)基基礎液傾注到平皿內(nèi)并使其凝固后的邊緣厚度達5土lmm，傾注完畢后將平皿蓋迅速蓋好，并輕輕旋轉(zhuǎn)平皿內(nèi)的液體，以使平皿充盈均勻、減少氣泡；然后將傾注有培養(yǎng)基基礎液的平皿放在冷卻桌上使其完全冷凝。
4.根據(jù)權利要求3所述的制備方法，其特征在于所述的滅菌器為外加熱高壓蒸汽滅菌器或電力高壓蒸汽滅菌器。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種一次性選擇性XV瓊脂培養(yǎng)基，其特征在于由以下配比的組份組成牛肉浸出粉3g～5g，胰酪蛋白胨10g，氯化鈉5g，瓊脂15g，酵母粉5g，血紅素15mg～20mg，輔酶I 15mg～20mg，萬古霉素9mg，蒸餾水或去離子水1000ml。本發(fā)明的培養(yǎng)基省卻了無菌脫纖羊血的采集過程，在制備過程中進行傾倒前直接加入配制好的X因子、V因子，避免了血球破裂過程中人工搖動的繁瑣工作，并大大節(jié)省了制備時間，提高了生產(chǎn)效率。
文檔編號C12N1/20GK101481663SQ20081005203
公開日2009年7月15日 申請日期2008年1月9日 優(yōu)先權日2008年1月9日
發(fā)明者李立津 申請人:天津市金章科技發(fā)展有限公司