專利名稱：生物體液與培養(yǎng)細(xì)胞作用以評(píng)價(jià)復(fù)合污染物危害的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物體液與培養(yǎng)細(xì)胞作用以評(píng)價(jià)復(fù)合污染物危害的方法。
背景技術(shù)：
環(huán)境污
物(環(huán)境化學(xué)物) 一般都具有一定的毒性，對(duì)這種毒性的檢測(cè) 以往的方法是通過染毒動(dòng)物測(cè)定動(dòng)物的毒性反應(yīng)和中毒癥狀來判定毒性大 小，或是通過染毒培養(yǎng)細(xì)胞測(cè)定細(xì)胞的死亡及致死劑量來判斷其毒性大小。 但這些方法都存在一些不足，特別是對(duì)于一些經(jīng)過體內(nèi)代謝反應(yīng)的代謝產(chǎn)物 發(fā)揮毒性效應(yīng)的化學(xué)物來說，上述測(cè)定方法會(huì)出現(xiàn)較大偏差，甚至難以檢測(cè)。
何測(cè)定這些體內(nèi)代謝物的毒性效應(yīng) 一直是毒理學(xué)界試圖解決的難題。雖然利
用現(xiàn)代分析儀器，如色譜和質(zhì)譜儀等可以很準(zhǔn)確地鑒定出代謝物的成分， 但多種復(fù)雜代謝物在體內(nèi)的綜合毒性效應(yīng)究竟如何并不清楚。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種生物體液與培養(yǎng)細(xì)胞作用以評(píng)價(jià)復(fù)合污染物 危害的方法，該方法采用HT29、 H24、 Caco-2等培養(yǎng)細(xì)胞為研究模型，檢測(cè) 不同污染地區(qū)人群的體液(代謝產(chǎn)物)對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的毒性，測(cè)定相關(guān)分子指 標(biāo)變化，結(jié)合細(xì)胞生物學(xué)特征改變，以了解環(huán)境復(fù)合污染的潛在危害性，并 藉此形成一套評(píng)價(jià)環(huán)境復(fù)合污染毒性效應(yīng)的測(cè)試評(píng)價(jià)方法。
簡(jiǎn)單地說，就是通過分析機(jī)體生物體液對(duì)相關(guān)細(xì)胞的作用，研究機(jī)體整 體生物學(xué)狀況和功能調(diào)節(jié)，從細(xì)胞和分子水平進(jìn)行細(xì)胞的毒性效應(yīng)研究，以 發(fā)現(xiàn)早期預(yù)警的生物效應(yīng)標(biāo)記物。為評(píng)價(jià)環(huán)境化學(xué)物對(duì)人體健康效應(yīng)奠定基 礎(chǔ)。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下
本發(fā)明提供的生物體液與培養(yǎng)細(xì)胞作用以評(píng)價(jià)復(fù)合污染物危害的方法，其步驟如下
1 )收集生物體的血液并制成血漿樣品；
2)將人體血漿樣品與淋巴細(xì)胞林HUT 78細(xì)胞或Molt-4細(xì)胞共同培養(yǎng)， 觀察細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)學(xué)、LDH活性、細(xì)胞活性和DNA損傷毒性終點(diǎn)。
本發(fā)明提供的生物體液與培養(yǎng)細(xì)胞作用以評(píng)價(jià)復(fù)合污染物危害的方法， 其步驟如下
1 )收集生物體的尿液并制成尿液上清液；
2)將尿液上清液與膀胱細(xì)胞抹T24或RT4細(xì)胞共同培養(yǎng)，觀察細(xì)胞的細(xì) 胞形態(tài)學(xué)、LDH活性、細(xì)胞活性和DNA損傷毒性終點(diǎn)。
本發(fā)明提供的生物體液與培養(yǎng)細(xì)胞作用以評(píng)價(jià)復(fù)合污染物危害的方法， 其步驟如下
l)收集生物體糞便，經(jīng)高速離心處理后，收集水相上清液；
2 )將收集到的糞便水相上清液與結(jié)腸細(xì)胞抹CACO-2細(xì)胞或HT29細(xì)胞共 同培養(yǎng)，觀察細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)學(xué)、LDH活性、細(xì)胞活性和DNA損傷毒性終點(diǎn)。
本發(fā)明根據(jù)化學(xué)物在生物體內(nèi)代謝的環(huán)境所接觸的組織選用相應(yīng)來源 作為細(xì)胞模型，例如粘液所接觸的膀胱組織，選用膀胱來源細(xì)胞；血液接觸 的淋巴細(xì)胞，選用淋巴細(xì)胞作為研究模型；選用糞便接觸的腸道組織，選用 腸上皮來源細(xì)胞作為細(xì)胞模型；在建立相應(yīng)的培養(yǎng)細(xì)胞模型后，收集目標(biāo)生 物體的相應(yīng)體液，經(jīng)適當(dāng)處理后，與上述相應(yīng)的作為細(xì)胞模型的培養(yǎng)細(xì)胞共 同培養(yǎng)，通過觀察細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)學(xué)、LDH活性、細(xì)胞活性和DNA損傷毒性終 點(diǎn)；以測(cè)定細(xì)胞毒性以及相關(guān)生化與分子指標(biāo)(如乙酰膽堿酯酶、神經(jīng)病 耙酯酶、細(xì)胞色素氧化酶系等的活性，以及相關(guān)蛋白質(zhì)的表達(dá)水平)的變化 研究化學(xué)物代謝的毒性作用機(jī)制，揭示細(xì)胞或分子水平的暴露-效應(yīng)關(guān)系， 闡明化學(xué)物對(duì)體內(nèi)多種酶系的影響并探討酶系與其相關(guān)分子的相互作用及 其下游分子網(wǎng)絡(luò)調(diào)控的改變，并籍此尋找與之相關(guān)的生物標(biāo)志物分子。
主要技術(shù)路線包括 (l)細(xì)胞培養(yǎng)及細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)；(2) 實(shí)時(shí)定量PCR測(cè)定靶基因氷平；
(3) 流式細(xì)胞儀對(duì)包括細(xì)胞凋亡在內(nèi)的毒性檢測(cè)；
(4) 免疫印跡技術(shù)測(cè)定特異蛋白質(zhì)的表達(dá)；
(5) 免疫組化、酶組化法分析靶酶或蛋白水平的改變；
(6) 其它分子生物學(xué)技術(shù)研究化學(xué)物對(duì)細(xì)胞的毒性。
本發(fā)明提供的生物體液與培養(yǎng)細(xì)胞作用以評(píng)價(jià)復(fù)合污染物危害的方法 具有如下優(yōu)點(diǎn)
本發(fā)明方法采用HT29、 H24、 Caco-2等培養(yǎng)細(xì)胞為研究模型，檢測(cè)不同 污染地區(qū)人群的體液(代謝產(chǎn)物)對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的毒性，測(cè)定相關(guān)分子指標(biāo)變 化，結(jié)合細(xì)胞生物學(xué)特征改變，以了解環(huán)境復(fù)合污染的潛在危害性，并藉此 形成一套評(píng)價(jià)環(huán)境復(fù)合污染毒性效應(yīng)的測(cè)試評(píng)價(jià)方；即通過分析機(jī)體生物體 液對(duì)相關(guān)細(xì)胞的作用，研究機(jī)體整體生物學(xué)狀況和功能調(diào)節(jié)，從細(xì)胞和分子 水平進(jìn)行細(xì)胞的毒性效應(yīng)研究，以發(fā)現(xiàn)早期預(yù)警的生物效應(yīng)標(biāo)記物。為評(píng)價(jià) 環(huán)境化學(xué)物對(duì)人體健康效應(yīng)奠定基礎(chǔ)；從全新角度揭示化學(xué)物在機(jī)體內(nèi)代謝 后對(duì)細(xì)胞的影響，以發(fā)現(xiàn)新的早期毒性效應(yīng)的生物標(biāo)志物分子?？梢詾橥茝V 評(píng)價(jià)其它各種污染特點(diǎn)類型的化學(xué)物對(duì)人體的健康效應(yīng)。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1:
糞便液體對(duì)結(jié)腸細(xì)胞的毒性作用
收集人體糞便，經(jīng)高速離心等處理后，收集水相上清液； 將收集到的糞便水相上清液與結(jié)腸細(xì)胞抹CACO-2細(xì)胞或HT29細(xì)胞共同 培養(yǎng)，觀察細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)學(xué)、LDH活性、細(xì)胞活性和DNA損傷毒性終點(diǎn)。
實(shí)施例2:
血漿成分對(duì)淋巴細(xì)胞的毒性作用 收集人體的血樣，制備人體血漿樣品；
將人體血漿樣品與淋巴細(xì)胞4朱HUT 78細(xì)胞或Molt-4細(xì)月包共同培養(yǎng)，觀 察細(xì)胞的細(xì)力包形態(tài)學(xué)、LDH活性、細(xì)力包活性和DM損傷毒性終點(diǎn)。實(shí)施例3:
尿液成分對(duì)膀胱細(xì)胞的毒性作用 收集人體尿液，經(jīng)離心處理后獲得尿液上清液；
將尿液上清液與膀胱細(xì)胞林T 24或RT 4細(xì)胞共同培養(yǎng)，觀察細(xì)胞的細(xì) 胞形態(tài)學(xué)、LDH活性、細(xì)胞活性和顧A損傷毒性終點(diǎn)。
權(quán)利要求
1、一種生物體液與培養(yǎng)細(xì)胞作用以評(píng)價(jià)復(fù)合污染物危害的方法，其步驟如下1)收集生物體的血液并制成血漿樣品；2)將人體血漿樣品與淋巴細(xì)胞株HUT 78細(xì)胞或Molt-4細(xì)胞共同培養(yǎng)，觀察細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)學(xué)、LDH活性、細(xì)胞活性和DNA損傷毒性終點(diǎn)。
2、 一種生物體液與培養(yǎng)細(xì)胞作用以評(píng)價(jià)復(fù)合污染物危害的方法，其步 驟如下1 )收集生物體的尿液并制成尿液上清液；2) 將尿液上清液與膀胱細(xì)胞4朱T24或RT4細(xì)胞共同培養(yǎng)，觀察細(xì)胞的細(xì) 胞形態(tài)學(xué)、LDH活性、細(xì)胞活性和DNA損傷毒性終點(diǎn)。
3、 一種生物體液與培養(yǎng)細(xì)胞作用以評(píng)價(jià)復(fù)合污染物危害的方法，其步 驟如下l)收集生物體糞便，經(jīng)高速離心處理后，收集水相上清液；2 )將收集到的糞便水相上清液與結(jié)腸細(xì)胞株CACO-2細(xì)胞或HT29細(xì)胞共 同培養(yǎng)，觀察細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)學(xué)、LDH活性、細(xì)胞活性和DNA損傷毒性終點(diǎn)。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物體液與培養(yǎng)細(xì)胞作用以評(píng)價(jià)復(fù)合污染物危害的方法，其步驟為采用收集環(huán)境污染地區(qū)目標(biāo)人群的體液，該體液包括血液、尿液或糞便液，經(jīng)適當(dāng)處理后再作用與體液環(huán)境相關(guān)的培養(yǎng)細(xì)胞，檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞在與受檢體液共培養(yǎng)后一定時(shí)間后的生物學(xué)特性的改變，以判定環(huán)境復(fù)合污染的潛在危害。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK101624619SQ200810116570
公開日2010年1月13日 申請(qǐng)日期2008年7月11日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月11日
發(fā)明者伍一軍, 薇 李, 梁宇杰, 王會(huì)平, 龍鼎新 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院動(dòng)物研究所