專利名稱：測(cè)定對(duì)溶解細(xì)胞的抗生素具有抗性的細(xì)菌存在的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及測(cè)定樣品中是否存在一種或一種以上的耙細(xì)菌的方法， 其中所述的靶細(xì)菌對(duì)一種或一種以上的溶解細(xì)胞的抗生素具有抗性。本 發(fā)明具體但非限制性地涉及測(cè)定在臨床樣品中是否存在一種或一種以上 耐甲氧苯青霉素的細(xì)菌的方法。
背景技術(shù)：
對(duì)常用抗生素具有抗性的細(xì)菌的出現(xiàn)是一個(gè)越來(lái)越普遍的問(wèn)題，這 個(gè)問(wèn)題與對(duì)感染患者的治療密切相關(guān)。事實(shí)上，這些所謂的超級(jí)病菌例 如金黃色葡萄球菌"to; /^/ococcw m/"w)幾乎對(duì)最有效的抗生素都產(chǎn) 生了抗性。在醫(yī)院環(huán)境中，這個(gè)問(wèn)題變得更加嚴(yán)重，因?yàn)槊庖呦到y(tǒng)弱的 患者在醫(yī)院內(nèi)感染對(duì)抗生素具有抗性的細(xì)菌時(shí)，可引發(fā)嚴(yán)重的并發(fā)癥， 甚至死亡。因此，在這種環(huán)境中需要使感染的危險(xiǎn)性降至最低。使這種 危險(xiǎn)性降至最低的方法之一在于早期測(cè)定此類細(xì)菌的存在，以對(duì)個(gè)體和 環(huán)境進(jìn)行仔細(xì)監(jiān)測(cè)，并且如果必要，進(jìn)行早期治療。
然而，目前測(cè)定對(duì)抗生素具有抗性的細(xì)菌存在的方法耗時(shí)過(guò)多，此 類方法需要首先培養(yǎng)純態(tài)的細(xì)菌，然后將該細(xì)菌與一系列抗生素接觸， 以檢查其生長(zhǎng)是否受到抑制。整個(gè)過(guò)程可能需要至少2天，因而導(dǎo)致在 對(duì)患者采取最佳治療方案前的經(jīng)常性的臨界延誤。當(dāng)然，這種延誤不僅 僅對(duì)患者的健康不利，而且會(huì)使其在醫(yī)院環(huán)境中逗留更長(zhǎng)的時(shí)間。
因此，需要一種快速測(cè)定存在于患者體內(nèi)或環(huán)境中的、對(duì)某種抗生素具有抗性的細(xì)菌的方法。
申請(qǐng)人同時(shí)待審的專利申請(qǐng)WO 99/37799提供了一種快速測(cè)定已知 存在于培養(yǎng)物中的特定細(xì)菌是否對(duì)特定抗生素敏感或具有抗性的方法。 然而，該方法的局限性在于其優(yōu)選需要細(xì)菌以純培養(yǎng)物或純分離菌形式 存在。然而，所述方法可適用于測(cè)定混合培養(yǎng)物中的特定細(xì)菌對(duì)抗生素 的抗性或敏感性。在所述情況下，.所述方法通常取決于在用特定抗生素 處理前或?qū)ｉT針對(duì)該特定細(xì)菌的其他作用之前的初步分離步驟。
作為選擇，如果抗生素的作用方式是已知的，所述方法可以揭示已 知存在于混合培養(yǎng)物中的特定細(xì)菌對(duì)抗生素的抗性或敏感性。該方法具 體采用以下方法，即，從混合培養(yǎng)物獲得四等分培養(yǎng)物，并在下列情況 下分別培養(yǎng)這四等分培養(yǎng)物i )無(wú)抗生素、ii)具有抗生素、iii)存在 特異性針對(duì)細(xì)菌的噬菌體和iv)存在所述抗生素和噬菌體的混合物，然 后比較分析這四等分培養(yǎng)物的細(xì)胞內(nèi)腺苷酸激酶的含量，從而揭示已知 存在于混合培養(yǎng)物中的特定細(xì)菌對(duì)抗生素的抗性或敏感性。例如，當(dāng)與 僅用噬菌體培養(yǎng)的樣品相比，用抗生素和噬菌體培養(yǎng)的樣品中的細(xì)胞內(nèi) 腺苷酸激酶減少時(shí)，基于這種情況可以推斷該細(xì)菌對(duì)溶解細(xì)胞的抗生素 敏感。
盡管可假設(shè)WO 99/37799中公開(kāi)的方法可簡(jiǎn)明地顯示混合培養(yǎng)物中 存在對(duì)特定抗生素具有抗性的細(xì)菌，但在實(shí)踐中尤其是當(dāng)抗性細(xì)菌的濃 度低時(shí)，還是不能明確并且可靠地獲得這種結(jié)果。
甚至，即使能達(dá)到上述目的，顯而易見(jiàn)這種測(cè)定細(xì)菌存在的方法仍 需要進(jìn)行許多重復(fù)步驟，包括培養(yǎng)、處理和分析來(lái)自混合培養(yǎng)物的不同 的至少四份等分樣品。這樣的重復(fù)步驟是笨拙的而且增加了出錯(cuò)的可能 性。另外，由于用噬菌體處理混合培養(yǎng)物的等分樣品時(shí)需要時(shí)間來(lái)確保 細(xì)菌已證實(shí)處于其對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，因此所述方法還存在著固有延遲。
因此，始終需要簡(jiǎn)單而快速地測(cè)定樣品中是否存在耐抗生素的細(xì)菌 的方法。具體地，始終需要簡(jiǎn)單而快速地測(cè)定臨床樣品中是否存在耐抗 生素的細(xì)菌的方法。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明提供了測(cè)定耐抗生素的細(xì)菌是否存在于樣品中尤其是 臨床樣品中的方法，該臨床樣品是通過(guò)例如擦拭感染患者來(lái)采集的，該 方法簡(jiǎn)單、快速并且包括的必需步驟最少。
本發(fā)明起源于如下認(rèn)識(shí)各種細(xì)菌通常對(duì)溶解細(xì)胞的抗生素敏感， 因此，首先可有利地丟棄混合培養(yǎng)物中敏感細(xì)菌的細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)。
因此，本發(fā)明提供了測(cè)定樣品中是否存在對(duì)溶解細(xì)胞的抗生素具有 抗性的靶細(xì)胞的方法，該方法包括以下依次進(jìn)行的步驟
i) 在含有溶解細(xì)胞的抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)樣品，
ii) 在含有捕獲劑的固體載體上捕獲未溶解的靶細(xì)菌細(xì)胞，
iii) 使未溶解的靶細(xì)菌細(xì)胞與能引起其細(xì)胞溶解的試劑接觸，
iv) 測(cè)定是否存在來(lái)自所述溶解的靶細(xì)菌細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)。 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，本方法還包括在步驟iii)之前，進(jìn)行
洗滌步驟和/或過(guò)濾步驟，以除去從對(duì)溶解細(xì)胞的抗生素敏感的細(xì)胞獲得 的細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)。
應(yīng)理解本申請(qǐng)全文中的短語(yǔ)"溶解細(xì)胞的抗生素"描述的是一種在 細(xì)菌復(fù)制過(guò)程中破壞細(xì)菌的細(xì)胞壁合成的試劑。因此，任何P-內(nèi)酰胺抗 生素都適用于實(shí)施本發(fā)明的方法。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所 述的溶解細(xì)胞的抗生素為青霉素，例如氨芐青霉素或甲氧苯青霉素。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述的捕獲劑可以僅對(duì)特定種類的菌 種具有特異性。在另一實(shí)施方案中，所述的捕獲劑可以對(duì)特定株的細(xì)菌 具有特異性。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述的捕獲劑是可與金黃色葡萄 球菌結(jié)合的纖維蛋白原。作為選擇，所述的捕獲劑為金黃色葡萄球菌的 特異性抗體。
當(dāng)然，應(yīng)意識(shí)到本發(fā)明的方法可包括一個(gè)或一個(gè)以上額外的中間步 驟以能測(cè)定一種以上靶細(xì)胞的存在。典型地，這些步驟可包括在含有一 種或一種以上捕獲劑的固體載體上捕獲未溶解的靶細(xì)菌細(xì)胞。
有利的是，實(shí)施本發(fā)明的培養(yǎng)基包括液體培養(yǎng)基。在該實(shí)施方案中， 所述的固體載體可包括包被有合適的抗體或其他捕獲劑的磁珠。作為選擇，所述固體載體可包括至少部分地包被有合適的抗體或其他捕獲劑的 刮鏟、槳狀物或過(guò)濾器。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，所述能夠引起細(xì)胞溶解的試劑具有對(duì) 靶細(xì)菌的選擇性。優(yōu)選所述的試劑具有對(duì)金黃色葡萄球菌的選擇性。更 優(yōu)選所述能夠引起細(xì)胞溶解的試劑為溶葡萄球菌素。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，所述能夠引起細(xì)胞溶解的試劑為具有 對(duì)靶細(xì)菌的選擇性的噬菌體或獲自所述噬菌體的溶胞素。在又一實(shí)施方 案中，所述能夠引起細(xì)胞溶解的試劑為大腸桿菌素。
當(dāng)然，也應(yīng)意識(shí)到本發(fā)明的方法還可包括許多測(cè)定是否存在其他耙 細(xì)菌的類似步驟。
測(cè)定來(lái)自溶解的靶細(xì)菌細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的方法可包括本領(lǐng)域已知 的任何合適的分析方法。優(yōu)選地，所述分析方法包括生物發(fā)光分析。更 優(yōu)選所述的生物發(fā)光分析是基于腺苷酸激酶(AK)的分析，g卩，如申請(qǐng)
人同時(shí)待審的專利申請(qǐng)WO 94/17202和WO 96/02665中所述。然而，所 述分析可選擇性地包括基于細(xì)胞內(nèi)的酶標(biāo)記(例如磷酸酶或過(guò)氧化物酶) 的比色測(cè)定分析或熒光測(cè)定分析。
另一方面，本發(fā)明提供了一種用于實(shí)施本發(fā)明方法的檢測(cè)箱。優(yōu)選 所述檢測(cè)箱為一次性檢測(cè)箱。所述的檢測(cè)箱可包含合適的組分，以進(jìn)行 選定的分析。所述的檢測(cè)箱優(yōu)選包含合適的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有選定 的溶解細(xì)胞的抗生素。所述的檢測(cè)箱更優(yōu)選包含含有對(duì)耙細(xì)菌具有特 異性的捕獲劑的固體載體、洗滌溶液和能引起靶細(xì)菌細(xì)胞溶解的試劑。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述的檢測(cè)箱包含含有甲氧苯青霉素 的液體培養(yǎng)基。所述含有甲氧苯青霉素的液體培養(yǎng)基優(yōu)選以冷凍干燥形 式提供。
有利的是，所述的檢測(cè)箱可以采用多井式容器的形式提供，例如申 請(qǐng)人同時(shí)待審的專利申請(qǐng)GB 0110476.9中所述。
本發(fā)明的方法的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是提供了一種快速(約3個(gè)小時(shí))測(cè)定是 否存在對(duì)溶解細(xì)胞的抗生素具有抗性的細(xì)菌的方法，該方法包括對(duì)細(xì)胞 內(nèi)物質(zhì)的簡(jiǎn)單分析。另外，本方法不需要進(jìn)行多次重復(fù)的比較分析，進(jìn)一步的優(yōu)點(diǎn)是可采用明確、獨(dú)立的定性分析方式而不是比較或定量分析 方式來(lái)解讀結(jié)果。
將參考非限定性的實(shí)施方案和下列附圖描述本發(fā)明。


圖1概略地顯示了本發(fā)明方法的必要步驟；
圖2以圖表形式著重顯示了陰性試驗(yàn)和陽(yáng)性試驗(yàn)的差異；
圖3以圖表形式顯示了用50yg/ml氨芐青霉素或4ug/ml甲氧苯青 霉素培養(yǎng)三個(gè)半小時(shí)后，檢測(cè)耐甲氧苯青霉素的和對(duì)甲氧苯青霉素敏感 的金黃色葡萄球菌菌株的結(jié)果；和
圖4為本發(fā)明的檢測(cè)箱的剖視圖。
具體實(shí)施例方式
現(xiàn)在請(qǐng)參考圖1，例如用拭子從患者處采集樣品，該樣品包含一種細(xì) 菌混合物，其中含有普遍耐甲氧苯青霉素的細(xì)菌11和普遍對(duì)甲氧苯青霉 素敏感的細(xì)菌12。在約l ml體積含有約4Pg抗生素的液體培養(yǎng)基中于 37'C培養(yǎng)所述樣品。
耐甲氧苯青霉素的細(xì)菌11存活并可繁殖。但是對(duì)甲氧苯青霉素敏感 的細(xì)菌12在初始生長(zhǎng)期后產(chǎn)生了弱化的細(xì)胞壁13并且溶解，向液體培 養(yǎng)基釋放出其細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)14。
因此，在2至4小時(shí)后，所述的液體培養(yǎng)基中含有由未溶解的耐甲 氧苯青霉素的細(xì)菌和溶解的對(duì)甲氧苯青霉素敏感的細(xì)菌組成的混合物。
然后，通過(guò)向液體培養(yǎng)基中加入包被有纖維蛋白原的順磁珠15，測(cè) 定特定細(xì)菌如金黃色葡萄球菌是否存在。所述的纖維蛋白原是金黃色葡 萄球菌的特異性結(jié)合劑。在2至10分鐘后利用磁性從培養(yǎng)基中取出珠子 并在分析步驟前進(jìn)行洗滌。
然后利用能溶解細(xì)胞的去污劑在單獨(dú)的容器中處理磁珠15和所附著 的靶細(xì)菌11。利用熒光素一熒光酶生物發(fā)光方法，分析由此獲得的細(xì)胞 內(nèi)物質(zhì)中的腺苷酸激酶。信號(hào)16顯示了耐甲氧苯青霉素的金黃色葡萄球菌的存在。為了確定起見(jiàn)，可將信號(hào)16與合適的空白信號(hào)比較，以排除 由腺苷酸激酶的背景濃度引起的異常。
顯而易見(jiàn)，只有始終不受甲氧苯青霉素影響并固定在磁珠上的細(xì)胞 才能表現(xiàn)出作為對(duì)腺苷酸激酶分析的響應(yīng)的明顯信號(hào)。
當(dāng)然，通過(guò)替換或增加步驟也可檢測(cè)是否存在其他種類的耐甲氧苯 青霉素的靶細(xì)菌，所述替換或增加的步驟包括加入包含其它包被層的珠 子或加入在其包被層中包含一種或一種以上的捕獲劑的珠子。
替換地或額外地，在最終的細(xì)胞溶解步驟中，將特定的多種細(xì)菌作 為目標(biāo)，可在所述方法中引入特異性。例如，可使用對(duì)金黃色葡萄球菌 特異的噬菌體或去污劑組合物。
圖2顯示了獲得的生物發(fā)光檢測(cè)結(jié)果，以用于測(cè)定一系列臨床樣品
中是否存在金黃色葡萄球菌。如圖所示，可輕易將陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果(樣品
編號(hào)M421000M和M421148L)與陰性檢測(cè)結(jié)果(樣品編號(hào)M421117S 和M421131P)區(qū)分開(kāi)。
圖3顯示了在氨芐青霉素和甲氧苯青霉素存在下，培養(yǎng)金黃色葡萄 球菌的不同株系而獲得的生物發(fā)光檢測(cè)結(jié)果。在每種情況中，本方法將 存在的耐抗生素的株系與對(duì)抗生素敏感的株系區(qū)分開(kāi)。
請(qǐng)參考圖4，本發(fā)明的方法中使用的檢測(cè)箱包括注塑的固體聚丙烯外 殼(整體定為17)，該固體聚丙烯外殼內(nèi)包含許多小室，即18、 19、 20、 21和22，這些小室可用作各種合適的工具和試劑的貯存室和/或反應(yīng)室 (參見(jiàn)如下描述)。
小室18貯存含有溶解細(xì)胞的抗生素的液體培養(yǎng)基22，其適用于培養(yǎng) 獲自感染的患者的拭子樣品。小室18具有實(shí)心小棍23，該實(shí)心小棍23 帶有用于獲得所述樣品的拭子24。小棍23帶有與其垂直的橫向部分25， 該部分可用作小棍18的把柄，小棍23還方便地帶有蓋子26，該蓋子用 以封閉小室18中含有溶解細(xì)胞的抗生素的液體培養(yǎng)基22。
相鄰的小室19和20分別貯存含有磁珠的懸液27的水溶液和磷酸鹽 緩沖鹽水即洗滌溶液28。合適的磁珠為獲自Dynal公司的商標(biāo)名為 DynabeadsTM的磁珠。正如前所述，這些磁珠上包被有能捕獲靶細(xì)菌的試劑。
小室21用作該檢測(cè)箱的反應(yīng)室，其中具有適合進(jìn)行基于腺苷酸激酶
的生物發(fā)光分析的緩沖水溶液29。在緩沖水溶液29的上部，該小室還具 有用箔密封的小囊30和31，其中分別含有基于熒光素/熒光酶的生物發(fā)
光試劑和含有去污劑或能溶解靶細(xì)菌細(xì)胞的試劑的二磷酸腺苷水溶液。 在所述用箔密封的小囊之間的空間32具有鎂源，例如乙酸鎂，所述鎂源
用作生物發(fā)光分析的促進(jìn)劑。
小室22具有中空棒33，其帶有適用于刺穿箔封閉的小囊30和3的 尖銳的錐尖34。棒33具有與其垂直的橫向部分35，該部分35帶有接合 裝置(例如狹槽一未顯示)，該接合裝置用于接合適于沿垂直或水平方向 移動(dòng)棒33的機(jī)械裝置，所述移動(dòng)是在控制硬件或軟件(未顯示)的控制 下進(jìn)行的。與棒33垂直的橫向部分35還具有孔(未顯示)，以便使棒33 能容納可縮進(jìn)的圓柱狀磁鐵(未顯示)。
小室19、 20、 21和22具有金屬箔形式的層壓密封裝置。與小室18 具有的密封裝置不同，在所述的層壓密封裝置破裂后，便不打算再使用。
使用時(shí)，通過(guò)把柄25將具有拭子24的實(shí)心小棍23從小室18中手 動(dòng)取出，并將其用于從感染的患者處獲得樣品。立即將小棍23放回該室 中，以便將拭子24浸沒(méi)于液體培養(yǎng)基22中，并再次形成蓋子26與小室 18間的密封狀態(tài)。
將檢測(cè)箱保持在合適的條件下約3小時(shí)，以培養(yǎng)患者的樣品。在該 培養(yǎng)階段結(jié)束時(shí)，從小室18中取出小棍23，并將密封小室19、 20、 21 和22的金屬箔除去。
將中空棒33 (包含可縮進(jìn)的磁鐵)與移動(dòng)機(jī)械裝置接合。在硬件或 軟件的控制下，使棒33移動(dòng)至小室19;在小室19中，用棒33從懸液 27中收集磁珠，再?gòu)哪抢镛D(zhuǎn)移至小室18;在小室18中通過(guò)例如蝸桿傳 動(dòng)裝置縮回磁鐵，從而使珠子沉在培養(yǎng)基中。
在一段合適的時(shí)間后，并且如果進(jìn)行適當(dāng)?shù)臄嚢?，使磁鐵重新回到 棒33中以便用其收集所述珠子。然后將棒33轉(zhuǎn)移至小室20;在小室20 中，使所述的珠子沉在洗滌溶液28中，并再過(guò)一段合適的時(shí)間后，按照前面描述的方法取回珠子。
接著，將攜帶著洗過(guò)的珠子的棒33轉(zhuǎn)移至反應(yīng)室21中，從而用尖
銳的錐尖34使由箔密封的小囊30和31中的內(nèi)含物釋放到緩沖溶液29 中。然后，通過(guò)從棒33中收回磁鐵而將珠子釋放到溶液29中并將該棒 返回小室22。
用放置在聚丙烯外殼17的小室21下面的光電倍增管(未顯示)檢測(cè)隨 后由生物發(fā)光反應(yīng)發(fā)出的光。(反應(yīng)的詳述見(jiàn)申請(qǐng)人同時(shí)待審的專利申請(qǐng) WO 94/17202和WO 96/02665)。
權(quán)利要求
1、對(duì)樣品中的對(duì)溶解細(xì)胞的抗生素具有抗性的靶細(xì)菌的存在進(jìn)行快速測(cè)定以及將所述靶細(xì)菌與對(duì)溶解細(xì)胞的抗生素敏感的細(xì)菌相區(qū)分的方法，該方法包括以下依次進(jìn)行的步驟i)在含有溶解細(xì)胞的抗生素的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)樣品，從而使得對(duì)溶解細(xì)胞的抗生素敏感的細(xì)菌的細(xì)胞溶解，ii)在固體載體上捕獲未溶解的靶細(xì)菌細(xì)胞，iii)進(jìn)行洗滌和/或過(guò)濾以除去從對(duì)溶解細(xì)胞的抗生素敏感的細(xì)胞獲得的細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)，iv)將未溶解的靶細(xì)菌細(xì)胞利用能引起所述細(xì)胞溶解的試劑進(jìn)行溶解，v)測(cè)定來(lái)自所述溶解的靶細(xì)菌細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的存在；其中，所述固體載體包括對(duì)靶細(xì)菌具有特異性的捕獲劑，并且/或者所述能引起細(xì)胞溶解的試劑對(duì)所述靶細(xì)菌具有選擇性。
2、 如權(quán)利要求l所述的方法，其中，在大約3個(gè)小時(shí)的期間內(nèi)確定 對(duì)溶解細(xì)胞的抗生素具有抗性的耙細(xì)菌的存在。
3、 如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述能引起細(xì)胞溶解的試劑 為噬菌體。
4、 如權(quán)利要求1 3任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述耙細(xì)菌為金黃 色葡萄球菌。
5、 如權(quán)利要求1 4任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述固體載體包含 磁珠。
6、 如權(quán)利要求1 5任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述溶解細(xì)胞的抗 生素為3-內(nèi)酰胺抗生素。
7、 一種對(duì)樣品中的對(duì)溶解細(xì)胞的抗生素具有抗性的耙細(xì)菌的存在進(jìn) 行快速測(cè)定以及將所述靶細(xì)菌與對(duì)溶解細(xì)胞的抗生素敏感的細(xì)菌相區(qū)分 的檢測(cè)箱，其為用于實(shí)施權(quán)利要求1 6任一項(xiàng)所述的方法的檢測(cè)箱，該 檢測(cè)箱內(nèi)包括.*包含許多小室的外殼、含有溶解細(xì)胞的抗生素的培養(yǎng)基、含有捕獲劑的固體載體、能引起細(xì)胞溶解的試劑、用于測(cè)定來(lái)自溶解的 靶細(xì)菌細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的存在的試劑，其中，所述固體載體包括對(duì)靶細(xì)菌具有特異性的捕獲劑，并且/或者 所述能弓I起細(xì)胞溶解的試劑對(duì)所述靶細(xì)菌具有選擇性。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種基于靶細(xì)菌對(duì)溶解細(xì)胞的抗生素的抗性來(lái)測(cè)定是否存在所述靶細(xì)菌的方法。將所述的抗生素用于溶解樣品中非靶細(xì)菌的細(xì)胞，因此在采用已知的方法進(jìn)行檢測(cè)前，有利于靶細(xì)菌的分離。
文檔編號(hào)C12Q1/04GK101580868SQ20091015040
公開(kāi)日2009年11月18日 申請(qǐng)日期2002年9月2日 優(yōu)先權(quán)日2001年9月21日
發(fā)明者凱文·J·鮑恩, 大衛(wèi)·詹姆斯·斯奎勒爾, 雷切爾·路易絲·萊斯莉 申請(qǐng)人:英國(guó)國(guó)防部