專利名稱：用于提高伴侶動物食品組合物適口性的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明包括用于提高伴侶動物食品組合物適口性的方法，所述方法包括向伴侶動物食品組合物中加入有效量的硫辛酸或其鹽。
背景技術(shù)：
提高動物食品的適口性為食品制造商持續(xù)的努力。向食品中添加美味料 (palatants)期望作為提高動物可接受性的手段，導(dǎo)致例如，整體改善動物的健康、保持體重以及提高的重量增加。本發(fā)明包括用于伴侶動物的寵物食品組合物，其具有比目前銷售的伴侶動物食品提高的適口性。發(fā)明概述本發(fā)明人開發(fā)了具有提高的適口性的食品組合物以及提高動物的寵物食品組合物適口性的方法。在一個實施方案中，本發(fā)明包括用于提高伴侶動物組合物的適口性的方法，所述方法包括，例如，向伴侶動物食品組合物中加入一定量的硫辛酸或其鹽。發(fā)明詳述一般描述本發(fā)明包括包含有效量的硫辛酸或其鹽的食品組合物，以提高伴侶動物的適口性。一個實施方案包括用于提高寵物食品組合物適口性的方法，所述寵物食品組合物例如用于伴侶動物，其包含有效提高適口性的量的硫辛酸或其鹽。在某些實施方案中，所述有效量為至少約25ppm。在某些實施方案中，所述有效量為至少約50ppm。在某些實施方案中，所述有效量為至少約lOOppm。在某些實施方案中，所述有效量為約IOOppm至約600ppm。在某些實施方案中，所述伴侶動物為狗。在某些實施方案中，所述伴侶動物為貓。在某些實施方案中，所述組合物還包含蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、纖維及其組合。在某些實施方案中，所述組合物為狗食品。在某些實施方案中，所述組合物為貓食品。在某些實施方案中，所述組合物為食品、營養(yǎng)飲食、補充劑、動物訓(xùn)練用食物 (treat)或玩具。在某些實施方案中，所述組合物為潮濕食品形式。在某些實施方案中，所述組合物為干燥食品形式。另一個實施方案包括用于伴侶動物的寵物食品組合物，所述組合物包含有效提高適口性的量的硫辛酸或其鹽。在某些實施方案中，所述硫辛酸的有效量為至少約25ppm。
在某些實施方案中，所述有效量為至少約50ppm。在某些實施方案中，所述有效量為至少約lOOppm。在某些實施方案中，所述有效量為約IOOppm至約600ppm。在某些實施方案中，所述有效量為約IOOppm至約200ppm。在某些實施方案中，所述組合物還包含蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、纖維及其組合。在某些實施方案中，所述組合物為狗食品。在某些實施方案中，所述組合物為貓食品。在某些實施方案中，所述組合物為食品、營養(yǎng)飲食、補充劑、動物訓(xùn)練用食物或玩具。在某些實施方案中，所述組合物為潮濕食品形式。在某些實施方案中，所述組合物為干燥食品形式。本發(fā)明使用的術(shù)語“伴侶動物”包括適于被人類養(yǎng)為寵物的任何非人類動物，包括狗、貓和嚙齒動物。在某些實施方案中，本發(fā)明的組合物用于治療貓和/或狗。術(shù)語“狗”包括為伴侶動物的那些狗，例如家犬、工作狗等。術(shù)語狗與術(shù)語犬科動物同義。術(shù)語“貓”包括稱為家用貓或戶內(nèi)貓的伴侶動物的那些貓。術(shù)語“嚙齒動物”包括但不限于倉鼠、小鼠、大鼠、豚鼠、沙鼠、兔子、柵欄豬、雪貂、
南美栗鼠等。除非另外明確說明，否則本文表示的所有百分比為基于干物質(zhì)計的組合物的重量百分比。本發(fā)明的組合物本發(fā)明的一個實施方案包括用于伴侶動物的組合物，所述組合物包含有效量的硫辛酸或其鹽。本文使用的術(shù)語“硫辛酸或其鹽”包括但不限于例如，α -硫辛酸、硫辛酸的外消旋混合物、硫辛酸鹽、酯、酰胺或其衍生物，例如在美國專利號5，621，117中所述的。在各種實施方案中，硫辛酸可在組合物中給予，所述組合物包括濕或干燥食品組合物，其可為潮濕食品、干燥食品、補充劑或訓(xùn)練用食物形式。硫辛酸可摻入其中或摻入到任何食品組合物的表面上，例如，通過在其上噴涂或沉淀或者可通過零食、補充劑、訓(xùn)練用食物加入到食物中，或者在食物的液體部分(例如水或另一種流體)中。硫辛酸可作為粉末、固體或液體(包括凝膠)給予。一個重要的方面是為動物提供有效量的硫辛酸，以提供積極效果。通常，存在于組合物中的硫辛酸來源的量最多為保持對動物無毒性的量。α -硫辛酸的量可從至少約25ppm，約50ppm，約lOOppm，約200ppm，約300ppm，約 500ppm,約 700ppm，約 900ppm，約 1 lOOppm，約 1200ppm，約 1400ppm，約 1600ppm，約 1800ppm， 約 2000ppm，約 2200ppm，約 MOOppm，約 LOOppm，約 LOOppm，約 3000ppm 或約;3500ppm變化。 在各種實施方案中，可給予狗的硫辛酸的范圍為約150ppm至約4500ppm。在各種實施方案中，可給予貓的硫辛酸的范圍為約65ppm至約LOOppm。在某些示例性實施方案中，該量可從約IOOppm至保持對寵物無毒性的量之間變化。在其他實施方案中，該范圍從約IOOppm 至約 200ppm。在各種實施方案中，包含硫辛酸的食品組合物為預(yù)期的接受動物提供基本上營養(yǎng)完全的飲食?！盃I養(yǎng)完全的飲食”為包括足夠營養(yǎng)以在飲食上保持健康動物正常健康的飲硫辛酸或其鹽以不會有害于預(yù)期的動物健康的濃度存在。因此，例如，硫辛酸或其鹽以不會弓I起不期望的或毒性效果的濃度存在。所述組合物可為液體或固體食品。當(dāng)所述組合物為液體時，硫辛酸或其鹽可與其他組分混合。當(dāng)所述組合物為固體時，可將硫辛酸涂布于組合物上，摻入到組合物中，或二
者ο在各種實施方案中，可將硫辛酸或其鹽加入到動物食品中。在各種實施方案中，可通過配料員或制造商在一定場所或通過動物照料者在喂養(yǎng)動物之前將硫辛酸或其鹽加入到動物食品中。在各種實施方案中，可在動物食品的加工過程中加入硫辛酸或其鹽，例如， 在組合物的其他組分混合期間和/或之后，隨后包裝并使消費者可以得到。這種加工可包括擠出、罐裝、烘焙等或本領(lǐng)域已知的用于生產(chǎn)寵物食品的任何其他方法或過程。在各種實施方案中，硫辛酸或其鹽可由天然來源如動物或植物組分提供，或者硫辛酸或其鹽可由合成衍生的來源提供，或者硫辛酸或其鹽可由天然和合成來源的混合物提供。除了硫辛酸或其鹽以外，所述組合物還包含至少一種適用于伴侶動物消耗的組分，包括但不限于脂肪、碳水化合物、蛋白質(zhì)、纖維、營養(yǎng)平衡劑例如維生素、礦物質(zhì)和微量元素及其混合物。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可基于動物的飲食需要選擇典型食品的食品成分的量和類型，例如，基于動物種類、年齡、大小、重量、健康和功能。食品組合物的食品成分部分可包含最多約100%的任何具體的食品成分或者可包含各種比例的食品成分的混合物。在某些實施方案中，所述食品組合物包含食品成分的組合，以量為約0 %重量至約50 %重量脂肪、約0 %重量至約75 %重量碳水化合物、約0 %重量至約95%重量蛋白質(zhì)、約0%重量至約40%重量膳食纖維以及約0%重量至約15%重量的一種或多種營養(yǎng)平衡劑。在某些實施方案中，脂肪和碳水化合物食品成分由多種來源得到，例如動物脂肪、 魚油、植物油、肉、肉副產(chǎn)品、谷物、其他動物或植物來源及其混合物。谷物包括小麥、玉米、 大麥和大米。在某些實施方案中，蛋白質(zhì)食品成分由多種來源得到，例如植物、動物或二者。動物蛋白質(zhì)包括肉、肉副產(chǎn)品、乳品和蛋類。肉包括來自家禽、魚和動物例如牛、豬、綿羊、山羊等的肉，肉副產(chǎn)品包括肺、腎、腦、肝臟、胃和腸。蛋白質(zhì)食品成分還可為游離氨基酸和/或肽。在某些實施方案中，蛋白質(zhì)食品成分包括肉、肉副產(chǎn)品、乳品或蛋類。在某些實施方案中，纖維食品成分由多種來源得到，例如植物纖維來源，例如，纖維素、甜菜漿、花生殼和大豆纖維。在某些實施方案中，營養(yǎng)平衡劑由技術(shù)人員已知的多種來源得到，例如，維生素和礦物質(zhì)補充劑和食品成分。維生素和礦物質(zhì)可以避免缺陷和保持健康所需的量包含在內(nèi)。 這些量在本領(lǐng)域容易獲得。國家研究委員會(NRC)提供了對于家畜的這些營養(yǎng)物質(zhì)的推薦量。例如，參見豬的營養(yǎng)需要(第10修訂版，Nat，1 Academy Press, Wash. D. C. ,1998), 禽的營養(yǎng)需要(第9修訂版，Nat，1 Academy Press，Wash. D. C.，1994)，馬的營養(yǎng)需要(第 5 修訂版，Nat，l Academy Press, Wash. D. C. , 1989) 美國食品控制局(AAFCO)提供了對于狗和貓這些營養(yǎng)物質(zhì)的推薦量。參見American Feed Control Officials, Inc. ,Officialpublication，第1四_137頁Q004)。通?？捎米魇称诽砑觿┑木S生素包括維生素A、維生素Bi、維生素B2、維生素B6、維生素B12、維生素D、生物素、維生素K、葉酸、肌醇、煙酸和泛酸?？捎米魇称诽砑觿┑牡V物質(zhì)和微量元素包括鈣、磷、鈉、鉀、鎂、銅、鋅、氯化物、鐵、硒、碘和鐵。在某些實施方案中，所述食品組合物可包含技術(shù)人員已知的另外的成分，例如維生素、礦物質(zhì)、填料、適口性增強劑、粘合劑、調(diào)味劑、穩(wěn)定劑、乳化劑、甜味劑、著色劑、緩沖齊U、鹽、涂料等。穩(wěn)定劑包括傾向于提高組合物的保存期限的物質(zhì)，例如防腐劑、協(xié)同劑和螯合劑、包裝氣體、穩(wěn)定劑、乳化劑、增稠劑、膠凝劑和濕潤劑。乳化劑和/或增稠劑的實例包括明膠、纖維素醚、淀粉、淀粉酯、淀粉醚和改性淀粉。對于每一種組合物組分、食品成分和其他成分的具體的量取決于多種因素，例如包含在組合物中的具體組分和成分；動物的種類；動物年齡、體重、一般健康、性別和飲食；動物消耗率；治療疾病或病癥的類型；等。因此，組分和成分的量可在寬范圍內(nèi)變化，并且可偏離本文所述的優(yōu)選的比例。在一個示例性實施方案中，除了硫辛酸或其鹽以外，例如，所述組合物可還包含至少一種以下物質(zhì)(a)約0 %至約75 %碳水化合物，(b)約2 %至約50 %脂肪，(c)約0%至約40%膳食纖維，以及(d)約0%至約15%的一種或多種營養(yǎng)平衡劑。喂食成年伴侶寵物(例如犬科動物和貓科動物)的食物是給該年齡動物喂食的標準正常食物。下表為年齡1-6歲犬科動物的典型飲食。表1 示例性伴侶動物寵物食品組合物
成分指標蛋白質(zhì)(干物質(zhì)的％)23脂肪(干物質(zhì)的％)15磷(干物質(zhì)的％)0. 6鈉(干物質(zhì)的％)0. 3所述組合物可包含將保持或改善動物健康的另外的成分，例如，補充劑、藥物、草藥、全身治療的藥物和組合物等。本發(fā)明的組合物可包含一種或多種另外的成分，以預(yù)防或治療一種或多種疾病或病癥。實現(xiàn)這一點的食物中的組分為抗氧化劑或其混合物?？寡趸瘎殁缱杂苫奈镔|(zhì)。這種物質(zhì)的實例包括食物，例如銀杏、柑橘果肉、葡萄皮渣、番茄渣、胡蘿卜和菠菜，均優(yōu)選經(jīng)干燥的，以及各種其他物質(zhì)例如β-胡蘿卜素、硒、輔酶QlO(泛醌)、葉黃素、生育三烯酚、大豆異黃酮、S-腺苷甲硫氨酸、谷胱甘肽、?；撬?、N-乙酰半胱氨酸、維生素Ε、維生素C、 α -硫辛酸、L-肉堿等。維生素E可作為生育酚或生育酚的混合物及其各種衍生物(例如酯如維生素E的乙酸酯、琥珀酸酯、棕櫚酸酯等)給予。優(yōu)選α型，但是可包括β、Y和δ 型。優(yōu)選D型，但是外消旋混合物也是可接受的。在被寵物攝入后，所述各型和衍生物將以維生素E樣活性起作用。維生素C可在這種食物中作為抗壞血酸及其各種衍生物給予，例如鈣磷酸鹽、膽留醇鹽、2-單磷酸鹽等，其被寵物攝入后，將以維生素C樣活性起作用。它們可為任何形式，例如液體、半固體、固體和熱穩(wěn)定的形式。α-硫辛酸可作為α-硫辛酸或硫辛酸酯衍生物(如在美國專利號5，621，117中所述)、其外消旋混合物、鹽、酯或酰胺加入到食物中。L-肉堿可在食物中給予，并且可使用肉堿的各種衍生物，例如鹽如鹽酸鹽、富馬酸鹽和琥珀酸鹽，以及乙?；鈮A等。計算食物中所給予的活性物質(zhì)的量，所有量均以食物的(基于干物質(zhì))計， 所述活性物質(zhì)本身作為游離物質(zhì)來測定。所使用的最大量不應(yīng)產(chǎn)生毒性。可使用至少約 IOOppm或至少約150ppm的維生素E。在某些實施方案中，可使用約500至約1，OOOppm的范圍。雖然不必需，但是通常不超過約2，OOOppm或約l，500ppm的最大值。關(guān)于維生素C，使用至少約50ppm，理想是至少約75ppm，且更理想是至少約lOOppm?？墒褂脽o毒性的最大量。 α -硫辛酸的量可從至少約25ppm，至少約50ppm，或至少約IOOppm變化。在某些實施方案中，最大量可從約IOOppm至保持對寵物無毒性的量之間變化。優(yōu)選的范圍為約IOOppm至約200ppm。對于犬科動物來講，約50ppm，理想是約200ppm，更理想是約300ppm的L-肉堿是有用的最小量。對于貓科動物來講，可使用稍高的最小量的L-肉堿，如約100ppm、200ppm 和500ppm?？墒褂脽o毒性最大量，例如小于約5，OOOppm0對于犬科動物，可使用較低的量， 例如小于約5，OOOppm。對于犬科動物，優(yōu)選的范圍是約200ppm至約400ppm。對于貓科動物，優(yōu)選的范圍是約400ppm至約600ppm。可使用約l_15ppm的β-胡蘿卜素?？墒褂眉s 0. 1至最多約5ppm的硒?？墒褂弥辽偌s5ppm的葉黃素?？墒褂弥辽偌s25ppm的生育三烯酚?？墒褂弥辽偌s25ppm的輔酶QlO。可使用至少約50ppm的S-腺苷甲硫氨酸?？墒褂弥辽偌sIOOOppm的?；撬?。可使用至少約25ppm的大豆異黃酮?？墒褂弥辽偌s50ppm的N-乙酰半胱氨酸。可使用至少約50ppm的谷胱甘肽。可使用至少50ppm的銀杏提取物。以下為ORAC(氧自由基吸收能力)含量高的原料成分菠菜渣、番茄渣、柑橘果肉、 葡萄皮渣、胡蘿卜粒、莖椰菜、綠茶、銀杏和玉米面筋粉。當(dāng)以包含物(以總量5%替代低ORAC成分，如玉米)加入到食物中時，它們增加了全部食物的ORAC含量，并且增加了食用含有這些組分的食物的動物血漿ORAC含量。如果以和四種其它成分組合的(共計加入5%)向食物中加入，優(yōu)選可使用每克干物質(zhì)具有ORAC含量> 25μπι01的抗氧化當(dāng)量(Trolox equivalents)的任何成分。在某些實施方案中，所述組合物還包含有效量的至少一種選自以下的物質(zhì)葡糖胺、軟骨素、硫酸軟骨素、甲基磺?；淄?“MSM”)、肌酸、抗氧化劑、Perna canaliculate、ω-3脂肪酸、ω-6 脂肪酸及其混合物。在各種實施方案中，包括有效量的硫辛酸或其鹽的補充劑還包括有效量的至少一種物質(zhì)，包括阿司匹林、抗炎藥例如布洛芬、C0X-2抑制劑以及其他醫(yī)用和藥用組合物及其組合。補充劑包括但不限于與另一種飼料一起使用以改善總體的營養(yǎng)平衡或性能的飼料。補充劑包括作為補充劑未稀釋至其他飼料喂食的組合物，與單獨得到的動物口糧的其他部分提供自由選擇，或者用動物常規(guī)飼料稀釋并混合以產(chǎn)生完全的飼料。例如，AAFCO在 American Feed Control Officials, Inc. Official Publication,第 220 頁(2003)中提供了關(guān)于補充劑的討論。補充劑可為各種形式，包括，例如，粉末、液體、糖漿、丸劑和包封的組合物。在某些實施方案中，所述組合物可為訓(xùn)練用食物。訓(xùn)練用食物包括給予動物以誘使動物在非進餐時間食用的組合物，例如，用于犬科動物的狗骨頭。訓(xùn)練用食物可具有營養(yǎng)，其中所述組合物包含一種或多種營養(yǎng)，并且可具有食品樣組成。非營養(yǎng)訓(xùn)練用食物包括無毒性的任何其他訓(xùn)練用食物。將組合物或組分涂在訓(xùn)練用食物上，摻入到訓(xùn)練用食物中， 或二者。本發(fā)明的訓(xùn)練用食物可通過與用于干食品的那些類似的擠出或烘焙方法來制備。 還可使用其他方法在現(xiàn)有的訓(xùn)練用食物形式的外部涂布組合物或者在現(xiàn)有的訓(xùn)練用食物形式中注射組合物。在某些實施方案中，所述組合物可為玩具。玩具包括可嚼的玩具，例如人造骨頭。 硫辛酸或其鹽可在玩具的表面或玩具的部件表面上形成涂層，在整個玩具中部分或完全摻入，或二者。在一個實施方案中，預(yù)期的使用者可口服利用硫辛酸或其鹽。存在寬范圍的目前銷售的合適的玩具，例如，美國專利號5，339，771，美國專利號5，419，283以及其中公開的參考文獻。本發(fā)明提供了可部分消耗的玩具(例如，包括塑料部件的玩具)和可完全消耗的玩具(例如，生牛皮和各種人造骨頭)。優(yōu)選本發(fā)明提供為狗或貓使用的玩具。本發(fā)明組合物的制備使用技術(shù)人員已知的常規(guī)食品制備方法，以罐裝或濕形式制備本發(fā)明的組合物。 通常，將已研磨的動物蛋白組織與足夠加工量的其他成分混合，所述其他成分例如魚油、谷類谷物、余量成分、專用目的添加劑(例如，維生素和礦物質(zhì)混合物、無機鹽、纖維素和甜菜漿、增量劑等)和水。將這些成分在適于在共混組分的同時加熱的容器中進行混合。使用任何適合的方式進行混合物的加熱，例如，直接蒸汽注射或使用配備換熱器的容器。在加入最后的成分之后，將混合物加熱至約50下至約212下的溫度。在該范圍以外的溫度也是可接受的，但是在不使用其他加工助劑的情況下在工業(yè)上不實用。當(dāng)加熱至適當(dāng)?shù)臏囟葧r，物質(zhì)通常為稠的液體形式。將該稠的液體填充至罐。加蓋，將容器氣密密封。隨后可將已密封的罐放置在設(shè)計將內(nèi)含物滅菌的常規(guī)設(shè)備中。通常通過加熱至大于約230下的溫度適當(dāng)?shù)臅r間(該時間取決于所用的溫度、組成和類似的因素)完成滅菌。可在制備之前、期間或之后，將本發(fā)明的組合物加入到食品組合物中?？墒褂眉夹g(shù)人員已知的常規(guī)方法制備干燥形式的食品組合物。通常，將干燥成分 (例如動物蛋白質(zhì)、植物蛋白質(zhì)、谷物等)一起研磨和混合。隨后加入潮濕的或液體成分(包括脂肪、油、動物蛋白質(zhì)、水等)并與干燥混合物進行混合。隨后將混合物加工成粗磨物或類似的干燥塊。粗磨物通常使用擠出法形成，其中將干燥成分和濕成分的混合物在高壓和高溫下進行機械加工，強制通過小的開口并通過旋轉(zhuǎn)刀切割成粗磨物。隨后將濕粗磨物干燥并任選涂有一個或多個頂部涂層，例如調(diào)味劑、脂肪、油、粉末等。粗磨物還可使用烘焙法 (而不是擠出法)由生面團制備，其中在干燥-加熱過程之前將生面團放置在模具中。使用與上述用于干燥食品或玩具的那些類似的擠出或烘焙法，食品組合物可為訓(xùn)練用食物形式，例如在美國專利號5，339，771和5，419，283中所公開的那些?？稍谥苽渲?、期間或之后，將本發(fā)明的組合物加入到食品組合物中。提高寵物食品組合物適口性的方法本發(fā)明還包括提高寵物食品組合物適口性的方法，所述方法在伴侶寵物食品組合物中包含一定量的硫辛酸或其鹽。向伴侶寵物食物中加入一定量的抗氧化劑或其混合物(例如硫辛酸)可提高適口性。在某些實施方案中，寵物食品組合物為成年寵物食品組合物。術(shù)語“成年” 一般是指至少1-6歲的犬科動物和至少1-6歲的貓科動物。老齡化的狗或貓為7歲及以上。本發(fā)明并不限于本文描述的具體的方法、方案和試劑，這是由于它們可以變化。另外，本文使用的術(shù)語僅用于描述具體實施方案的目的，而不是要限制本發(fā)明的范圍。除非上下文明確說明另外的情況，否則在本文和所附權(quán)利要求書中使用的單數(shù)形式“一”和“該”包括復(fù)數(shù)形式。類似地，詞語“包括”和“包括的”應(yīng)理解為是包含性的而不是排他性的。除非另外定義，否則本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語及任何縮寫具有本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的相同含義。雖然，與本文所述的那些類似或等同的任何組合物、方法、制造的制品或其他方式或物質(zhì)可用于本發(fā)明的實踐，但是本文描述了優(yōu)選的組合物、方法、制造的制品或其他方式或物質(zhì)。本文引用或參考的所有專利、專利申請、出版物以及其他參考文獻在法律允許的程度通過引用結(jié)合到本文中。那些參考文獻的討論僅用于概述其中的主張。并不是承認任何這些專利、專利申請、出版物或參考文獻或其任何部分與本發(fā)明的現(xiàn)有技術(shù)相關(guān)，并且明確保留對這些專利、專利申請、出版物以及其他參考文獻的精確性和相關(guān)性提出質(zhì)疑的權(quán)利。
實施例通過以下優(yōu)選實施方案的實施例來進一步舉例說明本發(fā)明，但是，應(yīng)理解的是，除非另外明確說明，否則這些實施例僅用于舉例說明的目的，而不是要限制本發(fā)明的范圍。實施例1三十只(30)成年隨機來源的狗用于本項研究。狗的年齡至少10個月，在開始試驗之前未懷孕、未授乳并且具有適當(dāng)?shù)捏w重。將動物隨機分成5組進行飲食處理，每組中3 只雄性，3只雌性。在2周預(yù)喂食階段(表2)對所有的狗喂食對照食品(加入Oppm dl-α-硫辛酸)， 該對照食品滿足或超過American Association of Feed Control Officials (AAFC0 2000) 提出的營養(yǎng)物質(zhì)的所有推薦量。在預(yù)喂食階段之后，將狗隨機分成5個處理組，喂食以下之一 dl-α 硫辛酸指標包含物(基于干物質(zhì))0ppm，150ppm，1500ppm，3000ppm，4500ppm。在所有飲食中，加入對照物和α硫辛酸、維生素E，并且以600-1000國際單位的含量存在，以 100-200ppm的含量加入維生素C。測試食品為除水以外營養(yǎng)的唯一來源。任意提供淡水。在選擇狗并稱量初始體重之后，基于食品的預(yù)期ME，計算對于每只狗的食品劑量。初始食品劑量計算基于狗維持能量要求(MER)，考慮正常活動，用系數(shù)修正，由下式進行計算MER (kcal/ 天)=1. 6 X RER (靜止能量要求)其中RER(kcal/天)=70X 體重(kg)0. 75將狗每周稱重，食品劑量按需調(diào)節(jié)，以便喂食足夠的食品以保持其最佳體重。在 5點等級上確定最佳體重為3。如果在調(diào)節(jié)食品劑量之后，狗的體重不能保持在初始體重的-10%以內(nèi)，則將其從研究中除去。記錄體重和食品攝取的所有測定值。將樣品研磨，將0. 100+/-0. OOlg樣品在5. OmL磷酸鹽緩沖液(IOmM Na2HPO4, 2mM 乙二胺四乙酸(EDTA)，0.9% NaCl，pH 7.4)中提取兩次。將250 μ L提取物放置在具有特氟龍襯里蓋的5mL玻璃離心管中。加入15 μ L EDTA溶液(IOOmM EDTA，用約IM NaOH調(diào)節(jié)至ρΗ 7. 8)和50 μ L新制備的5mM 二硫赤蘚醇(DTE)。將溶液渦旋并在室溫下溫育5分鐘。 隨后加入10 μ L IM H3PO4和2. OmL乙醚。將管加蓋，渦旋，并在室溫下以1500 Xg離心3分鐘。將醚層轉(zhuǎn)移至單獨的5mL玻璃離心管，而水層用1. 5mL乙醚再提取兩次。將得自同一樣品的所有提取物合并。隨后在室溫下，在水浴中，在氮氣蒸發(fā)器中干燥提取物。在該點， 將樣品加蓋并冷凍過夜。隨后將已干燥的提取物解凍，并用70 μ L SDS/EDTA溶液(0. 11 %十二烷基硫酸鈉 (SDS)，15mM EDTA，0. 9% NaCl)和5 μ L新制備的ImM DTE重新組成。隨后將50 μ L新制備的NaBHjH入到每個管中。將管渦旋并在室溫下溫育10分鐘。10分鐘后，將樣品在_70°C下冷凍。在溶液解凍之前，加入20 μ L 2Μ HCl。在溶液解凍之后，加入800 μ L IOOmM NH4HCO30 將溶液渦旋，并加入5μ L IOOmM —溴二胺(monobromodiamane)乙腈溶液(mBBr)。隨后在室溫下，將溶液在暗處溫育90分鐘。通過用1. 5mL 二氯甲烷提取進行溫育之后，將過量的mBBr和DTE衍生物從樣品中除去。將水層放置在HPLC上。使用用約2M NH4OH將ρΗ調(diào)節(jié)至3. 95的由30%乙腈、乙酸組成的流動相分離硫辛酸，并以1. OmL/min的流速泵送，每次注射等度洗脫15分鐘。這種制備假定擠出的食品的密度等于lg/mL。在開始前兩周以及在研究的第0、觀、56、84、112、140和168天，無菌收集血液，用于全血計數(shù)和血液生物化學(xué)分析。此外，在飲食干預(yù)第0J8和84天，收集15ml全血，用于分離淋巴細胞。將肝素化的全血在50ml Accuspin圓錐形離心管(Sigma Chemical)上分層，加入等體積的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)。將樣品在700g下離心30分鐘，不振搖。收獲單核細胞層，將其轉(zhuǎn)移至15ml圓錐形離心管，在Uml PB中再次懸浮，如前所述進行離心(第一次洗滌)。如第一次洗滌那樣進行第二次洗滌。最后，收獲細胞，并在高氯酸(10%W/V)中懸浮，于-70 V下冷凍，直至分析使用。將樣品由-70°C冰箱轉(zhuǎn)移至其中含有干冰的冷卻器。在冷凍離心機中，將瓶在 12，OOOrpm下離心5分鐘。將用于谷胱甘肽(GSH)分析的上清液等份試樣轉(zhuǎn)移至圓錐形試管。通過Jones (Jones等人)改進的Reed及同事(Fariss等人)的方法進行酸溶性提取物的衍生化。簡要地，將150 μ L提取物或外標加入到1. 5ml微量離心管中，接著加入 20 μ y -Glu-Glu內(nèi)標并加入50 μ L IAA,接著混合。使用KOH-KHCO3工作溶液將溶液ρΗ調(diào)節(jié)至約10(紫色)。將溶液在室溫下在暗處溫育1小時。加入與總體積相同體積的Sanger 試劑，并在室溫下將溶液在暗處溫育過夜(20小時)。溫育后，將溶液以12000rpm離心5分鐘，將上清液轉(zhuǎn)移到另一個1. 5ml微量離心管中。將200 μ L上清液加入到琥珀色自動瓶中，該瓶具有300 μ L入口，并且用卷邊機固定上部用于HPLC分析。
(Fariss, Jones)描述了溶劑和分離條件。相對于可靠的標準品，定量測定GSH和 GSSG的含量。γ -谷氨?；?谷氨酸鹽用作內(nèi)標來評價衍生化效率。通過成對t-檢驗，在SAS上分析臨床化學(xué)、血液學(xué)和體重與基線值的比較，其中窗口顯著性設(shè)定在P <0.05。通過單向方差分析(ANOVA)分離在每個測定時間點的平均值， 其中顯著性設(shè)定在P <0.05。通過SAS分析各組之間在第84天與基線之間GSH GSSG的差異，采用單向方差分析(ANOVA)，窗口顯著性設(shè)定在P <0. 05。結(jié)論經(jīng)過7個連續(xù)的測定(第0、觀、56、84、112、140、168天)確定的食品中硫辛酸的濃度(PPm)在預(yù)期的測定靈敏度以及我們的設(shè)備通常遇到的生產(chǎn)參數(shù)(表幻的范圍內(nèi)。食品攝取數(shù)據(jù)不顯著。平均，在所有組中大多數(shù)動物在6個月時攝取比開始研究時更多的食品。體重數(shù)據(jù)不顯著，不同之處在于，一些重量減輕開始發(fā)生在4500ppm包含物組中，但是經(jīng)過6個月的時間變化看起來出現(xiàn)逆轉(zhuǎn)。身體狀況分數(shù)看起來不受其輕微重量減輕的影響。常規(guī)身體檢查未顯示與營養(yǎng)相關(guān)的異?；騞l-α-硫辛酸毒性的任何跡象。在整個研究過程中，在研究群體中所有動物保持正常。在研究過程中，在幾個動物中觀察到偶爾嘔吐；但是，未觀察到能得出嘔吐可能是由硫辛酸引起的結(jié)論的趨勢。最高包含物組的一個動物在研究第21天由于重量減輕和白血球增多而被淘汰。該動物的白血球增多在研究結(jié)束時也沒有解決，懷疑是由于某些其他疾病過程所致。當(dāng)將第觀、56、84、112、140和168天的血清生物化學(xué)值與同一組狗的初始值比較
時，注意到一些統(tǒng)計學(xué)上的差異，但是，由于這些值在實驗室參考范圍內(nèi)或非常接近實驗室參考范圍，并且經(jīng)過數(shù)月注意到一致的趨勢，因此這些統(tǒng)計學(xué)上的差異不應(yīng)看作是生物學(xué)上顯著的。在每個時間段對照組和其他處理組之間的比較還顯示一些統(tǒng)計學(xué)上的差異，但是，由于這些值在臨床實驗室參考范圍內(nèi)或非常接近臨床實驗室參考范圍并且不存在趨勢，因此這些統(tǒng)計學(xué)上的差異不應(yīng)看作是生物學(xué)上顯著的。當(dāng)將第觀、56、84、112、140和168天的血液學(xué)值與同一組狗的初始值比較時，注意到一些統(tǒng)計學(xué)上的差異，但是，由于這些值在實驗室參考范圍內(nèi)或非常接近實驗室參考范圍并且不存在趨勢，因此這些統(tǒng)計學(xué)上的差異不應(yīng)看作是生物學(xué)上顯著的。在每個時間段對照組和其他處理組之間的比較顯示一些統(tǒng)計學(xué)上的差異，但是，由于這些值在臨床實驗室參考范圍內(nèi)或非常接近臨床實驗室參考范圍并且不存在趨勢，因此這些統(tǒng)計學(xué)上的差異不應(yīng)看作是生物學(xué)上顯著的。GSH GSSG 比率經(jīng)過84天喂食，GSH GSSG比率的變化顯示顯著的整體飲食效果(P = 0. 024)， 其中所有補充劑組比率提高(表幻。與基礎(chǔ)食品比較，對于最低和最高包含物，ANOVA顯示顯著差異，但是，在最低包含物水平時數(shù)值提高最大。也就是說，對于最低和最高包含物， GSH GSSG比率的變化顯著不同于經(jīng)過相同的時間段在基礎(chǔ)食品中所觀察到的變化。由于在任何這些樣品(1個對照組，3個處理組)中未檢測到GSSG，在第84天不能確定4點的比率。因此，如果在第84天測定靈敏度足夠檢測低含量的GSSG，則補充劑組的值可顯示甚至更高比率的GSH GSSG0表權(quán)利要求
1.一種用于提高寵物組合物適口性的方法，所述方法包括以有效提高寵物食品組合物適口性的量，加入一定量的硫辛酸或其鹽。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述有效量為至少約25ppm。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述有效量為至少約50ppm。
4.權(quán)利要求1的方法，其中所述有效量為至少約lOOppm。
5.權(quán)利要求1的方法，其中所述有效量為約IOOppm至約600ppm。
6.權(quán)利要求1的方法，其中所述寵物組合物為狗食品。
7.權(quán)利要求1的方法，其中所述寵物組合物為貓食品。
8.一種具有提高的適口性的伴侶動物寵物食品組合物，所述組合物包含有效提高適口性的量的硫辛酸或其鹽。
9.權(quán)利要求8的組合物，其中所述有效量為至少約25ppm。
10.權(quán)利要求8的組合物，其中所述有效量為至少約50ppm。
11.權(quán)利要求8的組合物，其中所述有效量為至少約lOOppm。
12.權(quán)利要求8的組合物，其中所述有效量為約IOOppm至約600ppm。
13.權(quán)利要求8的組合物，其中所述寵物組合物為狗食品。
14.權(quán)利要求8的組合物，其中所述寵物組合物為貓食品。
全文摘要
本發(fā)明包括用于提高伴侶動物食品組合物適口性的方法，所述方法包括向伴侶動物食品組合物中加入有效量的硫辛酸或其鹽。
文檔編號A23L1/22GK102292000SQ200980153778
公開日2011年12月21日 申請日期2009年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月30日
發(fā)明者N·Z·弗蘭茨 申請人:希爾氏寵物營養(yǎng)品公司