專利名稱：連翹酯苷a在制備防治心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及連翹酯苷A，具體是連翹酯苷A在制備防治心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：
連翹酯苷A(Forsythoside A)，可由木犀科連翹屬植物連翹(Forsythia Suspensa(Thunb.)Vahl.)植物中提取制得。結(jié)構(gòu)式為
分子式C29H36O15，分子量為624，淡黃色粉末狀化合物，易溶于水，乙醇，甲醇等。
據(jù)報道，連翹酯苷A具有抗病毒、抑菌、解熱鎮(zhèn)痛保肝、抗氧化及抗炎抗內(nèi)毒素活性，但是，從未有關(guān)用于制備防治心腦血管疾病藥物的報導(dǎo)。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于擴(kuò)展連翹酯苷A的用途，將其用于制備防治心腦血管疾病的藥物。
心腦血管病主要是在血管內(nèi)形成血栓，從而對人類健康造成嚴(yán)重威脅。研究表明血栓形成的因素有三(1)血管內(nèi)皮損傷；(2)血小板粘附、聚集和釋放反應(yīng)；(3)凝血活性增高，血液粘度增加，血流緩慢。防止血液凝固或抑制血小板功能可以預(yù)防血栓形成。因此，具有溶栓、抗凝、降低血粘度、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞、抑制血小板聚集等作用的物質(zhì)可以防治心肌梗塞和腦梗塞等心腦血管疾病。
本發(fā)明研究表明連翹酯苷A具有抑制血小板聚集的功能，同時也具有明顯的抗凝血的作用。因此，連翹酯苷A可用于制備防治心腦血管疾病藥物。
連翹酯苷A可按常規(guī)方法從連翹殼或連翹葉中提取，利用柱層析分離精制。上述得到的連翹酯苷A可進(jìn)一步與載體混合或包埋，制成含有治療有效量的連翹酯苷A的藥物組合物，其形式可為片劑、注射劑、懸浮液或溶液。所說的載體可以為乳糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、聚乙二醇、明膠、環(huán)糊精。組合物中還可加入潤滑劑、濕潤劑、矯味劑、懸浮劑、防腐劑。組合物中連翹酯苷A含量應(yīng)大于50％，最好是90％以上。這些組合物可作為藥物用于防治心腦血管疾病。
連翹酯苷A也可作為食品添加劑用于制備預(yù)防心腦血管疾病的功能性食品。
本發(fā)明對已知化合物連翹酯苷A發(fā)掘了新的醫(yī)療用途，開拓了新的應(yīng)用領(lǐng)域。連翹酯苷A藥理作用較強(qiáng)，可用于制備預(yù)防和治療心腦血管疾病的藥物和功能性食品。

具體實施例方式 下面通過藥理試驗說明連翹酯苷A(純度大于98％)具有抑制血小板聚集和抗凝血的作用。
實施例1連翹酯苷A對ADP誘導(dǎo)大鼠體外血小板聚集的影響 大鼠(Wistar，清潔II級)腹主動脈取血，3.8％枸櫞酸鈉1∶9抗凝，500r·min-1離心5min取上清，得到富血小板血漿(PRP)。余下部分2500r·min-1離心10min后取上清，得到貧血小板血漿(PPP)。用PPP稀釋PRP使血小板數(shù)目至3×1011/L。
取265μL PRP置比濁管中，加入連翹酯苷(含量大于95％)溶液(終濃度為2.1、2.6、3.1、3.6、4.1、6.2、8.2mmol·L-1)20μL，空白對照管加入等體積生理鹽水，37℃預(yù)溫3min，啟動血小板聚集凝血因子分析儀，迅速加入2mmol·L-1 ADP15μL，記錄血小板聚集曲線，以下式計算藥物血小板聚集抑制率。

結(jié)果表明連翹酯苷A對ADP誘導(dǎo)大鼠體外血小板聚集具有抑制作用，并具明顯的量效關(guān)系(表1)。當(dāng)連翹酯苷終濃度為13.4mmol·L-1時，血小板聚集抑制率為72.4％，其抑制大鼠血小板聚集的IC50值為8.1mmol·L-1，表明連翹酯苷可通過抑制血小板的聚集緩解血栓的形成，且作用較強(qiáng)。
表1.Forsythiaside A對ADP誘導(dǎo)大鼠體外血小板聚集的作用(

n＝6)

**P＜0.01 vs NS，***P＜0.001 vs NS 實施例2連翹酯苷A對大鼠血漿凝血酶原時間(PT)的影響 大鼠腹主動脈取血，3.8％枸櫞酸鈉1∶9抗凝，2500r·min-1離心10min后取上清得PPP。將PT試劑置37℃的試劑預(yù)溫孔中預(yù)溫10min以上，用前搖勻。取50μL PPP置比濁管中，加入連翹酯苷A溶液(終濃度為8.3、12.5、16.6mmol·L-1)30μL，對照管加入等體積生理鹽水，37℃準(zhǔn)確預(yù)溫180s后加入100μL37℃的PT試劑，立即啟動儀器進(jìn)行自動測試，記錄結(jié)果。
結(jié)果表明連翹酯苷能明顯延長大鼠離體血漿PT，且隨著劑量的增加延長作用更加明顯(表2)。終濃度為16.6mmol·L-1的連翹酯苷延長PT的作用已大于400s，表明連翹酯苷A的抗凝作用較強(qiáng)。
表2.Forsythiaside A對大鼠離體血漿PT的影響(

n＝6)
***P＜0.001 vs NS 實施例3連翹酯苷A對大鼠血漿凝血酶時間(TT)的影響 PPP制法同上，將TT試劑從冰箱中取出室溫下靜置10min，溫度平衡至室溫。取80μL PPP置比濁管中，加入連翹酯苷溶液(終濃度為7.1、10.7、14.2mmol·L-1)30μL，對照管加入等體積生理鹽水，37℃準(zhǔn)確預(yù)溫180s后加入TT試劑100μL，立即啟動儀器進(jìn)行自動測試，記錄結(jié)果。
結(jié)果表明連翹酯苷A能明顯延長大鼠離體血漿TT，且呈明顯的量效關(guān)系(表3)。
表3連翹酯苷A對大鼠離體血漿TT的影響(

n＝6)
*P＜0.05 vs NS，***P＜0.001 vs NS 實施例4 90天喂養(yǎng)毒性試驗 選取健康Wistar大白鼠80只，體重(85±10)g，隨機(jī)分為4個組，每組20只，雌雄各半。采用灌胃給藥(連翹酯苷A含量大于60％)，每天1次，每次10ml/kg體重。劑量設(shè)置分別為1.8g/kg、0.6g/kg、0.18g/kg 3個劑量組和對照組。對照組給同體積的蒸餾水。給藥后每周稱一次體重，按體重調(diào)整給藥量。給藥期間觀察動物進(jìn)食、活動、糞便等一般表現(xiàn)及毒性反應(yīng)情況。末次藥后禁食過夜(16小時)，處死動物，取血檢測血液學(xué)和血液生化學(xué)指標(biāo)，用SYSMEX XT-1800i型全自動血細(xì)胞分析儀測血液學(xué)指標(biāo)；用玻片法測定凝血時間；用SELECTRA-E型全自動生化分析儀測定血液生化學(xué)指標(biāo)。并取各鼠的心、肝、脾、肺、腎、子宮、卵巢、睪丸稱重，計算每100g體重相應(yīng)臟器系數(shù)。同時取各動物的心、肝、脾、肺、腎、胃、小腸、腎上腺、胸腺、卵巢、睪丸作病理組織學(xué)檢查。各給藥組測定值與正常對照組比較，用t值法或校正t值法進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，依測定結(jié)果綜合評價其的安全性。
結(jié)果表明(1)在給藥期間，連翹酯苷A各給藥組與正常對照組大鼠的外觀體征、行為活動、進(jìn)食量及糞便等狀況正常，動物無一死亡。實驗期間，可見用藥組動物飲水量增加，其余無明顯異常。(2)連續(xù)用藥13周，大鼠體重增長正常，給藥組與正常對照組之間差異無顯著性意義。食物利用率給藥組與正常對照組之間比較差異亦無顯著性意義。(3)給大鼠連續(xù)用藥13周，測定給藥組與正常對照組的紅細(xì)胞計數(shù)(RBC)、血紅蛋白(HB)、血小板計數(shù)(PLT)、白細(xì)胞計數(shù)(WBC)及其分類淋巴細(xì)胞(LYM)、單核細(xì)胞(MOV)、粒細(xì)胞(Gran)、凝血時間(CT)。給藥組與正常對照組比較，各指標(biāo)無顯著性差異。(4)給大鼠連續(xù)用藥13周，測定給藥組與正常對照組的谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(cr)、甘油三脂(TG)、總膽固醇(CHOL)、堿性磷酸酶(ALP)、葡萄糖(GLU)。給藥組與正常對照組比較，均未發(fā)現(xiàn)有生物學(xué)意義的變化。但雄性動物用藥組的甘油三脂(TG)有明顯的降低，且有量-效關(guān)系；雌性動物也有類似的變化，但降低的幅度較小，同對照組比較，差異無顯著性意義。(5)給大鼠連續(xù)用藥13周后，給藥組與正常對照組大鼠的肝、脾、腎、睪丸、卵巢、腎上腺、胸腺等主要臟器的濕重及臟器系數(shù)比較，差異無顯著性意義。(6)大體解剖未見異常。表明在本實驗條件下，連翹酯苷給Wistar大鼠連續(xù)灌胃90天，與對照組比較，高劑量組未見與受試物有關(guān)的毒性病理學(xué)改變。
以上實驗結(jié)果說明連翹酯苷A具有良好的抗凝血作用，而且無毒性，使用安全。因此，連翹酯苷A可用于制備預(yù)防和治療心腦血管疾病的藥物。也可作為食品添加劑用于制備防治心腦血管疾病的功能性食品。
權(quán)利要求
1.連翹酯苷A在制備防治心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。
2.連翹酯苷A在制備抗凝血藥物中的應(yīng)用。
3.連翹酯苷A在制備預(yù)防心腦血管疾病的功能性食品中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明通過研究連翹酯苷A對ADP誘導(dǎo)大鼠體外血小板聚集的影響、對大鼠血漿凝血酶原時間(PT)的影響，以及對大鼠血漿凝血酶時間(TT)的影響，證明連翹酯苷A具有抑制血小板聚集的功能，同時也具有明顯的抗凝血的作用。連翹酯苷A可用于制備防治心腦血管疾病藥物。也可作為食品添加劑用于制備防治心腦血管疾病的功能性食品。
文檔編號A23L1/30GK101816667SQ201010174238
公開日2010年9月1日 申請日期2010年5月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月11日
發(fā)明者張立偉, 柴秋彥 申請人:山西大學(xué)