專利名稱：上皮型鈣黏蛋白表達(dá)基因cdh1突變檢測(cè)試劑盒及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種CDHl基因突變檢測(cè)試劑盒，特別涉及其在東亞胃癌高發(fā)人群的 基因診斷與后果評(píng)估。
背景技術(shù)：
⑶Hl基因位于人類染色體16q22. 1，包含16個(gè)外顯子，全長(zhǎng)約lOOkb，其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 為4. 5kb信使RNA，通過(guò)翻譯合成120kD的上皮型鈣黏蛋白(E-cadherin，E-cad)。E_cad 是鈣黏蛋白家族成員之一，鈣黏蛋白家族分子均為跨膜糖蛋白，介導(dǎo)鈣依賴的細(xì)胞間黏附。 E-cad在上皮細(xì)胞分化和維持細(xì)胞極性中起關(guān)鍵作用，由于CDHl基因突變?cè)斐傻腅-cad表 達(dá)異常，在胃癌等多種腫瘤形成中具有重要作用。因此⑶Hl基因是胃癌的一個(gè)重要的易感 基因。但是以前由于檢測(cè)方法的局限，關(guān)于CDHl基因的突變的系統(tǒng)報(bào)道很少，主要局限于 遺傳性彌漫型胃癌中幾個(gè)特定突變點(diǎn)。在中國(guó)胃癌患者中，關(guān)于該基因突變的系統(tǒng)篩查與 病例對(duì)照分析還未見(jiàn)報(bào)道。對(duì)于檢出的錯(cuò)義突變與啟動(dòng)子區(qū)突變的的功能后果也未見(jiàn)報(bào) 道。因此有必要開(kāi)發(fā)一種方便快捷的突變檢測(cè)以及突變后果的評(píng)估方法，以用于胃癌的遺 傳診斷。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種CDHl基因突變體檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用。本檢測(cè)試劑盒主要包括以下成分(1)⑶Hl基因啟動(dòng)子區(qū)及第1到第16外顯子區(qū)PCR擴(kuò)增與測(cè)序引物19對(duì)，各對(duì)引 物序列見(jiàn)表1 ；(2)常規(guī)PCR擴(kuò)增試劑，如dNTP、Taq DNA聚合酶等。表IOTHl基因第1-16外顯子以及啟動(dòng)子區(qū)的PCR擴(kuò)增與測(cè)序引物序列
權(quán)利要求
一種CDH1基因突變檢測(cè)試劑盒，其特征在于包括以下成分(1)CDH1基因PCR擴(kuò)增與測(cè)序引物19對(duì)；(2)PCR擴(kuò)增用試劑；所說(shuō)的19對(duì)引物序列如下第1對(duì)F: 5' cgaacccagtggaatcagaac 3’ R: 5' gaagggaagcggtgacgac 3’第2對(duì)F: 5' acccggttccatctaccttt 3’ R: 5' tgtgggagtgcaatttctcg 3’第3對(duì)F: 5' ctttaatctgtccaatttccta 3’ R: 5' ccactgtattcagcgtgac 3’第4對(duì)F: 5' gggactccacctacagaa 3’R: 5' cagggatgcttgctaaac 3’第5對(duì)F: 5' cgctgtctggctaggttg 3’ R: 5' ctctgccaaatccctccc 3’第6對(duì)F: 5' ggaaaagacccagtgttg 3’R: 5' atcctgggtggatgttac 3’第7對(duì)F:5' ccttctcccatgttttcttcc 3’R: 5' gtattcagattctcattagtgg 3’第8對(duì)F: 5' cagcttgtctaaaccttcatc 3’ R: 5' cctccacaccctctggatc 3’第9對(duì)F: 5' tcctggtcctgacttggt 3’ R: 5' cctttctttggaaaccct 3’第10對(duì)F: 5' tagcagtcttggtactttg 3’ R: 5' tgtgaggatgccagtttc 3’第11對(duì)F:5' tattaccaaaagcaacagt 3’ R: 5' tcaggaggcacaaagatg 3’第12對(duì)F:5' tctcaccacctccacagc 3’R: 5' cacagataaagggaataaaaaa 3’第13對(duì)F: 5' ccagagcttgtccccgttc 3’ R: 5' gtcgaggcagcaaaggctc 3’第14對(duì)F: 5' gggattcattactgttgcc 3’R: 5' attgggaggaaggtctgc 3’第15對(duì)F: 5' agcctcaggtcataaacat 3’ R: 5' aagggacaaggaagcaag 3’第16對(duì)F: 5' ttcctcccctggtctcatc 3’R: 5' tcaaaggctgagtcacttgc 3’第17對(duì)F: 5' ttgctctgtctcccccacc 3’ R: 5' tccgaataaagagatcaccac 3’第18對(duì)F: 5' agtgaaggcatcatccaa 3’R: 5' ctcctcctgagcttagag 3’第19對(duì)F: 5' tgcttttgtcccttcttc 3’ R: 5' cgtgatttctgcatttcc 3’。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，還包括限制性內(nèi)切酶iVaeI。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，還有瓊脂糖凝膠。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，還包括LCGreen Plus+熒光染料。
5.權(quán)利要求1所說(shuō)的試劑盒用于檢測(cè)CDHl基因突變體。
全文摘要
本發(fā)明涉及CDH1基因突變檢測(cè)試劑盒及其用途。試劑盒的主要成分包括(1)CDH1基因PCR擴(kuò)增與測(cè)序引物19對(duì)；(2)PCR擴(kuò)增用試劑。通過(guò)本試劑盒得到的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，可通過(guò)高分辨率溶解曲線法篩查基因微小突變，或者是進(jìn)行限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析。本試劑盒具有高效的突變檢出與功能評(píng)估作用。用于CDH1基因突變檢測(cè)。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK101974643SQ201010550700
公開(kāi)日2011年2月16日 申請(qǐng)日期2010年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月18日
發(fā)明者周函, 王亞平, 范怡梅, 鄧偉, 郭文文, 陳琴花 申請(qǐng)人:南京大學(xué)