專利名稱：一種細(xì)菌檢測(cè)方法及裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及樣本檢測(cè)，尤其是一種樣本中細(xì)菌的檢測(cè)方法及裝置。
背景技術(shù)：
地表水、地下水，甚至雨水中含有多種細(xì)菌。當(dāng)水體受到人畜糞便、生活污水或某 些工農(nóng)業(yè)廢水污染時(shí)，水體中的細(xì)菌大量增加。因此，對(duì)水的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)，特別是腸道細(xì)菌 的檢驗(yàn)，在衛(wèi)生學(xué)上具有重要的意義。通過檢驗(yàn)水體中特定種類的細(xì)菌數(shù)量，可以判斷水體 的衛(wèi)生學(xué)質(zhì)量。在現(xiàn)有的水體細(xì)菌檢測(cè)方法中，一般是將在現(xiàn)場(chǎng)采集的大體積水樣帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn) 行分析。該方式由于從采樣到檢測(cè)有一定的時(shí)間間隔，則若有效實(shí)現(xiàn)對(duì)水體細(xì)菌的檢測(cè)，需 要滿足以下條件常溫條件下，水樣從采樣到檢驗(yàn)不能超過2小時(shí)；若采用10攝氏度以下 冷藏保存也不得超過6小時(shí)。這就需要采樣以后及時(shí)將水樣送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)，但由于 水樣的采樣體積大，不方便運(yùn)輸及冷藏保存，這就給江河、湖庫(kù)、泳池、景觀場(chǎng)所的水體細(xì)菌 日常監(jiān)測(cè)帶來很大不便。在細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中，基于酶底物的培養(yǎng)檢測(cè)法易于觀察識(shí)別和實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，在 地表水、飲用水檢測(cè)中被廣泛采用。但被測(cè)水體中在含有目標(biāo)細(xì)菌的同時(shí)往往還含有大量 其他其他微生物，在對(duì)水體中的細(xì)菌進(jìn)行培養(yǎng)的過程中，目標(biāo)細(xì)菌和其他微生物將大量繁 殖，使培養(yǎng)液的濁度發(fā)生顯著變化。菌濁的增加將嚴(yán)重干擾光電檢測(cè)儀器對(duì)酶底物的檢測(cè)， 從而影響水樣細(xì)菌濃度檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。此外，被測(cè)水樣中可能還會(huì)含有其他諸如抗生 素、氧化劑等其他化學(xué)物質(zhì)。在現(xiàn)有的方法中，不對(duì)水樣進(jìn)行分離處理，而直接進(jìn)行培養(yǎng)檢 測(cè)，前述化學(xué)物質(zhì)將抑制細(xì)菌的增殖，從而延長(zhǎng)了細(xì)菌培養(yǎng)生長(zhǎng)時(shí)間，最終影響水樣細(xì)菌濃 度檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

發(fā)明內(nèi)容
為解決現(xiàn)有技術(shù)中的上述不足，本發(fā)明提供了一種能夠消除共存微生物干擾功能 的細(xì)菌檢測(cè)方法及裝置。為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案一種細(xì)菌檢測(cè)方法，包括以下步驟a、采樣步驟待測(cè)樣本通過過濾器，樣本中的細(xì)菌在過濾器內(nèi)積累；計(jì)量通過過濾器的樣本總體積；b、培養(yǎng)及檢測(cè)步驟將積累有細(xì)菌的過濾器放入培養(yǎng)液中，細(xì)菌被限制在過濾器內(nèi)生長(zhǎng)繁殖并產(chǎn)生代 謝物，目標(biāo)細(xì)菌產(chǎn)生的代謝物與培養(yǎng)液中的底物發(fā)生特異性反應(yīng)；檢測(cè)培養(yǎng)液的信息，得到被測(cè)樣本中目標(biāo)細(xì)菌的信息。進(jìn)一步，所述樣本為水樣。
作為優(yōu)選，在現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行步驟a，再將積累有細(xì)菌的過濾器帶回實(shí)驗(yàn)室，再進(jìn)行步驟 b。進(jìn)一步，檢測(cè)培養(yǎng)液中對(duì)目標(biāo)細(xì)菌代謝物具有特異性的底物變化信息。作為優(yōu)選，在步驟b中，檢測(cè)培養(yǎng)液的吸光度或透光度或熒光強(qiáng)度。進(jìn)一步，在步驟b中，根據(jù)檢測(cè)得到的培養(yǎng)液的信息，判斷樣本中是否含有細(xì)菌；或根據(jù)連續(xù)檢測(cè)得到的培養(yǎng)液的信息隨時(shí)間變化的關(guān)系，得出細(xì)菌的濃度。本發(fā)明還提供了一種細(xì)菌檢測(cè)裝置，包括培養(yǎng)單元、檢測(cè)單元和分析單元，其特點(diǎn) 是所述檢測(cè)裝置還包括過濾器；所述過濾器用于截留樣本中的細(xì)菌；所述過濾器放置在 培養(yǎng)單元中時(shí)，所述培養(yǎng)單元中的培養(yǎng)液和細(xì)菌代謝物能夠透過所述過濾器。進(jìn)一步，所述樣本為水樣。進(jìn)一步，所述檢測(cè)裝置還包括驅(qū)動(dòng)泵，以驅(qū)動(dòng)樣本進(jìn)入過濾器。進(jìn)一步，所述檢測(cè)裝置還包括冷藏箱，對(duì)截留細(xì)菌后的過濾器冷藏。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)1、采樣方便在現(xiàn)場(chǎng)采用特殊設(shè)計(jì)的過濾器過濾水樣，將大體積水樣中的細(xì)菌富集在小體積的 過濾器內(nèi)，然后將積累有細(xì)菌的小體積過濾器在現(xiàn)場(chǎng)或帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行培養(yǎng)檢測(cè)，從而解 決了大體積水樣運(yùn)輸及存儲(chǔ)不便的問題；2、消除水體基體干擾通過特殊設(shè)計(jì)的過濾器過濾水樣，將細(xì)菌與基體未知的水樣分離，且截留后放入 已知組分的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，避免了原水樣未知基體對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)可能的干擾，從而提高了檢 測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性；3、消除細(xì)菌生長(zhǎng)形成的濁度干擾細(xì)菌及其共存微生物被限制在過濾器內(nèi)培養(yǎng)生長(zhǎng)，僅培養(yǎng)液及細(xì)菌代謝物能夠透 過過濾器，避免了細(xì)菌繁殖形成的菌濁對(duì)光學(xué)法檢測(cè)的干擾，從而提高了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確 性和可靠性；4、方法分析過程簡(jiǎn)便，便于實(shí)現(xiàn)儀器化和自動(dòng)化。


圖1為實(shí)施例1中采樣時(shí)對(duì)應(yīng)的裝置結(jié)構(gòu)示意圖；圖2為實(shí)施例1中對(duì)細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)對(duì)應(yīng)的裝置結(jié)構(gòu)示意圖；圖3為實(shí)施例1中對(duì)培養(yǎng)液進(jìn)行檢測(cè)時(shí)對(duì)應(yīng)的裝置結(jié)構(gòu)示意圖；圖4為實(shí)施例2中對(duì)細(xì)菌連續(xù)培養(yǎng)檢測(cè)時(shí)對(duì)應(yīng)的裝置結(jié)構(gòu)示意圖；圖5為實(shí)施例3中采樣時(shí)對(duì)應(yīng)的裝置結(jié)構(gòu)示意圖；圖6為實(shí)施例3中對(duì)細(xì)菌連續(xù)培養(yǎng)檢測(cè)時(shí)對(duì)應(yīng)的裝置結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 如圖1、2、3所示，一種細(xì)菌檢測(cè)裝置，包括過濾器11、培養(yǎng)單元2、檢測(cè)單元和分析 單元4 ；
所述過濾器11包括過濾膜111和連接器112，所述過濾膜111為等效過濾孔徑為 0. 2um的親水性聚砜濾膜；帶有壓力的樣本(0. 1 !Bbar)通過所述連接器112進(jìn)入過濾器11，在壓力的作用 下濾液從過濾膜111的濾孔排出，而樣本中的細(xì)菌被截留在過濾膜111的內(nèi)壁上；所述過濾 器11用于過濾積累被測(cè)樣本中的細(xì)菌，本實(shí)施例中樣本為水樣；所述培養(yǎng)單元2包括培養(yǎng)容器211和培養(yǎng)箱212，所述培養(yǎng)容器211用于容納含 有特異性反應(yīng)底物的培養(yǎng)液；由于本實(shí)施例是對(duì)水體中的大腸桿菌進(jìn)行檢測(cè)，只要培養(yǎng)容 器211對(duì)檢測(cè)細(xì)菌光度信息時(shí)的光度信號(hào)不會(huì)產(chǎn)生影響即可；本實(shí)施例是檢測(cè)培養(yǎng)液在 420nm波長(zhǎng)處的吸光度或者透光率，選用培養(yǎng)容器的材料為無(wú)色透明硼硅酸玻璃材料，該材 料的截止波長(zhǎng)為300nm左右，對(duì)420nm左右的光均是透明的；所述培養(yǎng)箱212為可容納所述培養(yǎng)容器211的用于調(diào)節(jié)和控制細(xì)菌培養(yǎng)條件的箱 體，用于細(xì)菌培養(yǎng)過程的環(huán)境條件控制；所述培養(yǎng)箱212也可以同時(shí)容納檢測(cè)單元，以使檢測(cè)單元在培養(yǎng)箱內(nèi)能夠檢測(cè)培 養(yǎng)容器211內(nèi)培養(yǎng)液的光度信息；所述檢測(cè)單元包括光發(fā)射模塊311和光接收模塊312 ；在測(cè)量時(shí)，光發(fā)射模塊311 和光接收模塊312分別設(shè)置在培養(yǎng)容器211相對(duì)的兩側(cè)；由于本實(shí)施例是檢測(cè)培養(yǎng)液在 420nm波長(zhǎng)處的吸光度或者透光率，則所述檢測(cè)單元能夠發(fā)射和檢測(cè)420nm左右的光即可；所述檢測(cè)單元設(shè)置在培養(yǎng)單元2的外部，所述光發(fā)射模塊311和光接收模塊312 處于光路相對(duì)的測(cè)量狀態(tài)；當(dāng)需要測(cè)量時(shí)，將培養(yǎng)容器211從培養(yǎng)箱212中拿出放入檢測(cè)單 元中光發(fā)射模塊311和光接收模塊312形成的測(cè)量光路中，對(duì)細(xì)菌培養(yǎng)過程中培養(yǎng)液的光 度信息進(jìn)行間斷檢測(cè)；或?qū)z測(cè)單元31及分析單元4放入培養(yǎng)箱212內(nèi)，使光發(fā)射模塊311和光接收模 塊312分別置于培養(yǎng)容器211相對(duì)的兩側(cè)，在細(xì)菌培養(yǎng)過程中，對(duì)培養(yǎng)液的光度信息進(jìn)行間 斷或連續(xù)檢測(cè)；本實(shí)施例中，檢測(cè)單元設(shè)置在培養(yǎng)單元2的外部；分析單元4與光接收模塊312相連，對(duì)光接收模塊312傳來的培養(yǎng)液的信號(hào)進(jìn)行 分析，并得出樣本中的細(xì)菌信息。本實(shí)施例還提供了一種細(xì)菌檢測(cè)方法，采用本實(shí)施例的細(xì)菌檢測(cè)裝置，包括以下 步驟a、采樣步驟在采樣現(xiàn)場(chǎng)，直接將過濾器11連接至樣本源上，本實(shí)施例樣本源為水龍頭；在水 龍頭自身壓力(0. 1 ;3bar)的驅(qū)動(dòng)下，水樣通過連接器112進(jìn)入過濾器11并從過濾膜111 的濾孔排出，水樣中的細(xì)菌被截留在過濾膜111的內(nèi)壁上并積累；計(jì)量通過過濾器11的樣本總體積；本實(shí)施例中，樣本總體積為IL ；b、培養(yǎng)及檢測(cè)步驟，具體如下bl、培養(yǎng)步驟在現(xiàn)場(chǎng)，將積累有細(xì)菌的過濾器11放入培養(yǎng)容器211中的培養(yǎng)液中，所述培養(yǎng)液 含有反應(yīng)底物ONPG(Orthonitrophenyl β -D galactopyranoside)，目標(biāo)細(xì)菌為總大腸菌 群；所述反應(yīng)底物ONPG對(duì)目標(biāo)細(xì)菌代謝物具有特異性；
將培養(yǎng)箱212的溫度調(diào)節(jié)至35. 5°C，將內(nèi)置過濾器11的培養(yǎng)容器211放入培養(yǎng)箱 212 內(nèi)；培養(yǎng)液通過過濾膜111的微孔進(jìn)入到所述過濾器11內(nèi)，將截流在過濾膜111內(nèi)壁 上的細(xì)菌浸潤(rùn)；細(xì)菌被限制在過濾器11內(nèi)，在培養(yǎng)液的浸潤(rùn)下生長(zhǎng)繁殖并產(chǎn)生代謝物，代 謝物中包括分泌的特定酶部分細(xì)菌分泌的特定酶在過濾器11內(nèi)特異性地將培養(yǎng)液中的反應(yīng)底物分解，釋 放出特征指示物，該特征指示物通過過濾膜111上的微孔擴(kuò)散至過濾器11外；部分細(xì)菌分泌的特定酶也通過過濾膜111上的微孔擴(kuò)散至過濾器11外，并將過濾 器11外培養(yǎng)液中的反應(yīng)底物分解，釋放出特征指示物；隨著細(xì)菌的生長(zhǎng)增殖，前述兩部分特征指示物在培養(yǎng)液中逐步累積；若被測(cè)水樣中存在目標(biāo)細(xì)菌即總大腸菌群，則在培養(yǎng)過程中該類細(xì)菌將分 泌β-D半乳糖苷酶(β-D galactosidase)，該酶將特異性地切斷ONPG分子并釋放出 ONP(Orhonitrophenyl)分子，導(dǎo)致ONP分子在培養(yǎng)液內(nèi)累積；若被測(cè)水樣中不存在總大腸 菌群，則在培養(yǎng)過程中不釋放出ONP分子；b2、檢測(cè)步驟對(duì)細(xì)菌培養(yǎng)12小時(shí)后，將培養(yǎng)容器211從培養(yǎng)箱212內(nèi)取出，放入檢測(cè)單元的光 發(fā)射模塊311和光接收模塊312形成的測(cè)量光路中，對(duì)細(xì)菌培養(yǎng)過程中培養(yǎng)液的光度信息 進(jìn)行間斷檢測(cè)；檢測(cè)培養(yǎng)液在420nm波長(zhǎng)處的吸光度或者透光率，分析單元4處理光接收模 塊312傳來的信號(hào)，得出特征指示物ONP的濃度信息若最終培養(yǎng)液吸光度達(dá)到0. 05Unit，表明被測(cè)水樣中目標(biāo)細(xì)菌即總大腸菌群的濃 度高于1個(gè)/lOOmL，則可認(rèn)為被測(cè)水樣中存在目標(biāo)細(xì)菌；若吸光度小于0. 05Unit，表明被測(cè) 水樣中目標(biāo)細(xì)菌即總大腸菌群的濃度低于1個(gè)/lOOmL，則可認(rèn)為被測(cè)水樣中不存在目標(biāo)細(xì)菌。采用本實(shí)施例的方法采樣時(shí)，水體中的細(xì)菌共存微生物也被截留在過濾膜內(nèi)壁 上；則在進(jìn)行培養(yǎng)步驟時(shí)，所有細(xì)菌被限制在過濾器內(nèi)生長(zhǎng)，共存微生物不會(huì)對(duì)過濾器外的 培養(yǎng)液產(chǎn)生影響，而檢測(cè)單元僅對(duì)過濾器外的培養(yǎng)液進(jìn)行檢測(cè)，消除了共生細(xì)菌繁殖形成 的菌濁對(duì)光電檢測(cè)的干擾，從而提高了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。實(shí)施例2請(qǐng)參閱圖4，一種細(xì)菌檢測(cè)裝置，與實(shí)施例1所述檢測(cè)裝置不同的是本實(shí)施例檢 測(cè)裝置還包括密封袋及冷藏箱，對(duì)采樣后的過濾器12在運(yùn)輸過程中保存；過濾膜121為等效過濾孔徑為0. Ium的親水性特氟隆濾膜；檢測(cè)單元的光發(fā)射模塊321能發(fā)射波長(zhǎng)為365nm的光，光接收模塊322能檢測(cè)波 長(zhǎng)為450nm的光；培養(yǎng)容器221為無(wú)色透明聚碳酸酯材料，對(duì)檢測(cè)單元的發(fā)射光和接收光透 明；在測(cè)量時(shí)，將培養(yǎng)容器221從培養(yǎng)箱212中取出放入設(shè)置在培養(yǎng)單元外的檢測(cè)單 元的測(cè)量光路中，對(duì)細(xì)菌培養(yǎng)過程中的培養(yǎng)液進(jìn)行間斷檢測(cè)，或?qū)z測(cè)單元和分析單元4 放入培養(yǎng)箱212內(nèi)，在細(xì)菌培養(yǎng)的過程中，對(duì)培養(yǎng)液的光度信息進(jìn)行間斷或連續(xù)檢測(cè)；本實(shí) 施例中，檢測(cè)單元和分析單元4設(shè)置在培養(yǎng)箱212內(nèi)。本實(shí)施例還提供了一種細(xì)菌檢測(cè)方法，與實(shí)施例1所述檢測(cè)方法不同的是
采用本實(shí)施例的細(xì)菌檢測(cè)裝置；在步驟a中，在現(xiàn)場(chǎng)，樣本中的細(xì)菌被截留在過濾膜121的內(nèi)壁上并積累；計(jì)量通過過濾器12的樣本總體積；本實(shí)施例中，樣本總體積為1. 5L ；將截流細(xì)菌后的過濾器12裝入密封袋內(nèi)，并放入冷藏箱內(nèi)(溫度保持在4 10 攝氏度內(nèi))保存，然后帶回實(shí)驗(yàn)室；本實(shí)施例為水樣；在步驟b中，在實(shí)驗(yàn)室，將積累有細(xì)菌的過濾器12從冷藏箱內(nèi)取出，并去除密封 袋，放入培養(yǎng)容器221中的培養(yǎng)液中，本實(shí)施例中培養(yǎng)液含有反應(yīng)底物MUGG-甲基傘形 酮-β -D葡萄糖苷酸)，目標(biāo)細(xì)菌為大腸桿菌；將培養(yǎng)箱212的溫度調(diào)節(jié)至35. 5°C，將內(nèi)置過濾器12的培養(yǎng)容器221放入培養(yǎng)箱 212 內(nèi)；培養(yǎng)液通過過濾膜121的微孔進(jìn)入到所述過濾器12內(nèi)，將截流在過濾膜121內(nèi)壁 上的細(xì)菌浸潤(rùn)；細(xì)菌被限制在過濾器12內(nèi)，在培養(yǎng)液的浸潤(rùn)下生長(zhǎng)繁殖并產(chǎn)生代謝物，代 謝物中包括分泌的特定酶若被測(cè)樣本中存在目標(biāo)細(xì)菌即大腸桿菌，則在培養(yǎng)過程中該類細(xì)菌將分泌 β -D-葡糖醛酸糖苷酶，該酶將特異性地切斷MUG分子并釋放出MU (4-甲基傘形酮)分子， 導(dǎo)致MU分子在培養(yǎng)液內(nèi)累積；若被測(cè)水樣中不存在大腸桿菌，則在培養(yǎng)過程中不釋放出MU 分子；同時(shí)，檢測(cè)單元的光發(fā)射模塊321和光接收模塊322設(shè)置在培養(yǎng)箱212內(nèi)培養(yǎng)容 器221相對(duì)的兩側(cè)，實(shí)時(shí)檢測(cè)培養(yǎng)液的熒光信息(激發(fā)波長(zhǎng)為365nm，發(fā)射波長(zhǎng)為450nm)， 以獲取特征指示物MU的濃度隨時(shí)間的變化信息；當(dāng)培養(yǎng)液的熒光強(qiáng)度增大并達(dá)到設(shè)定的閾值0. OlRF時(shí)培養(yǎng)結(jié)束，記錄從開始培 養(yǎng)至培養(yǎng)結(jié)束所消耗的時(shí)間，結(jié)合培養(yǎng)消耗時(shí)間與細(xì)菌濃度之間的關(guān)系式可推算出被測(cè)水 樣中目標(biāo)細(xì)菌即大腸桿菌的濃度；培養(yǎng)消耗時(shí)間與細(xì)菌濃度之間的關(guān)系式可通過對(duì)一系列 水樣按前述方法與平板計(jì)數(shù)法對(duì)比獲得。采用本實(shí)施例的方法對(duì)細(xì)菌進(jìn)行檢測(cè)，不僅能夠排除共生微生物對(duì)細(xì)菌檢測(cè)的影 響；且采用特殊設(shè)計(jì)的過濾器過濾樣本，采集樣本中的細(xì)菌，采集操作可以在檢測(cè)取樣點(diǎn)現(xiàn) 場(chǎng)進(jìn)行，并可將采集得到的樣本中的細(xì)菌帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行培養(yǎng)及檢測(cè)，從而解決了大體積 樣本運(yùn)輸和存儲(chǔ)不便的問題。實(shí)施例3請(qǐng)參閱圖5、圖6，一種細(xì)菌檢測(cè)裝置，與實(shí)施例1所述的檢測(cè)裝置不同的是所述 檢測(cè)裝置還包括驅(qū)動(dòng)泵5，所述驅(qū)動(dòng)泵5將驅(qū)動(dòng)樣本進(jìn)入過濾器11 ；檢測(cè)單元和分析單元4設(shè)置在培養(yǎng)箱內(nèi)；光發(fā)射模塊311和光接收模塊312設(shè)置 在培養(yǎng)箱212內(nèi)培養(yǎng)容器211相對(duì)的兩側(cè)，能夠發(fā)射和檢測(cè)405nm波長(zhǎng)的光。本實(shí)施例還提供了一種細(xì)菌檢測(cè)方法，與實(shí)施例1所述檢測(cè)方法不同的是采用本實(shí)施例所述的細(xì)菌檢測(cè)裝置；在步驟a中，從現(xiàn)場(chǎng)采集1. 5L樣本，并帶回實(shí)驗(yàn)室對(duì)樣本進(jìn)行細(xì)菌截留累積操 作采用驅(qū)動(dòng)泵5驅(qū)動(dòng)從現(xiàn)場(chǎng)采回的樣本，使其進(jìn)入過濾器11，樣本中的細(xì)菌被截留 在過濾膜111的內(nèi)壁上并積累；本實(shí)施例中樣本為水樣；
在步驟b中，將培養(yǎng)箱212的溫度調(diào)節(jié)至37°C，對(duì)細(xì)菌進(jìn)行培養(yǎng)；本實(shí)施例中培養(yǎng) 液含有反應(yīng)底物Boc-Ie和u-Gly-Arp-p，目標(biāo)細(xì)菌為凝固酶陽(yáng)性的金黃色葡萄球菌；若樣本中存在目標(biāo)細(xì)菌即凝固酶陽(yáng)性的金黃色葡萄球菌，則在培養(yǎng)過程中該類細(xì) 菌將分泌凝固酶，該酶將特異性地催化Boc-Ie和u-Gly-Arp-p反應(yīng)，產(chǎn)生有色的對(duì)硝基苯 胺(nitroa-niline，PNA)，導(dǎo)致PNA分子在培養(yǎng)液內(nèi)累積；若被測(cè)水樣中不存在凝固酶陽(yáng)性 的金黃色葡萄球菌，則在培養(yǎng)過程中不釋放出PNA分子；檢測(cè)單元的光發(fā)射模塊311和光接收模塊312設(shè)置在培養(yǎng)箱212內(nèi)培養(yǎng)容器211 相對(duì)的兩側(cè)，實(shí)時(shí)檢測(cè)培養(yǎng)液在405nm波長(zhǎng)處的吸光度或者透光率，分析單元4處理光接收 模塊傳來的信號(hào)，從而獲取特征指示物PNA分子的濃度信息；若最終培養(yǎng)液吸光度大于等 于0. lUnit，則表明被測(cè)水樣中存在目標(biāo)細(xì)菌即凝固酶陽(yáng)性的金黃色葡萄球菌；若吸光度 小于0. lUnit，則表明被測(cè)水樣中不存在凝固酶陽(yáng)性的金黃色葡萄球菌。實(shí)施例4一種細(xì)菌檢測(cè)裝置，與實(shí)施例2所述檢測(cè)裝置不同的是所述檢測(cè)裝置還包括驅(qū) 動(dòng)泵5，所述驅(qū)動(dòng)泵5將驅(qū)動(dòng)樣本進(jìn)入過濾器12。本實(shí)施例還提供了一種細(xì)菌檢測(cè)方法，與實(shí)施例2所述的檢測(cè)方法不同的是采用本實(shí)施例所述的細(xì)菌檢測(cè)裝置；在步驟a中，從現(xiàn)場(chǎng)采集2L樣本，并帶回實(shí)驗(yàn)室對(duì)樣本進(jìn)行細(xì)菌累積采用驅(qū)動(dòng)泵5驅(qū)動(dòng)從現(xiàn)場(chǎng)采回的樣本，使其進(jìn)入過濾器12，樣本中的細(xì)菌被截留 在過濾膜121的內(nèi)壁上并積累；在步驟b中，將培養(yǎng)箱212的溫度調(diào)節(jié)至45°C，對(duì)細(xì)菌進(jìn)行培養(yǎng)；本實(shí)施例中培養(yǎng) 液含有反應(yīng)底物MUGalG-甲基傘形酮-β-D半乳糖苷酸)，目標(biāo)細(xì)菌為糞大腸菌群；若樣本中存在目標(biāo)細(xì)菌即糞大腸菌群，則在培養(yǎng)過程中該類細(xì)菌將分泌β-D-半 乳糖苷酶，該酶將特異性地切斷MUGal分子并釋放出MU分子，導(dǎo)致MU分子在培養(yǎng)液內(nèi)累 積；若被測(cè)水樣中不存在糞大腸菌群，則在培養(yǎng)過程中不釋放出MU分子；同時(shí)，檢測(cè)單元的光發(fā)射模塊321和光接收模塊322設(shè)置在培養(yǎng)箱212內(nèi)培養(yǎng)容 器221相對(duì)的兩側(cè)，實(shí)時(shí)檢測(cè)培養(yǎng)液的熒光信息(激發(fā)波長(zhǎng)為365nm，發(fā)射波長(zhǎng)為450nm)， 以獲取特征指示物MU的濃度隨時(shí)間的變化信息；當(dāng)培養(yǎng)液的熒光強(qiáng)度增大并達(dá)到設(shè)定的閾值0. OlRF時(shí)培養(yǎng)結(jié)束，記錄從開始培 養(yǎng)至培養(yǎng)結(jié)束所消耗的時(shí)間，結(jié)合培養(yǎng)消耗時(shí)間與細(xì)菌濃度之間的關(guān)系式可推算出被測(cè)水 樣中目標(biāo)細(xì)菌即糞大腸桿菌的濃度；培養(yǎng)消耗時(shí)間與細(xì)菌濃度之間的關(guān)系式可通過對(duì)一系 列水樣按前述方法與平板計(jì)數(shù)法對(duì)比獲得。上述實(shí)施方式不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制。本發(fā)明的關(guān)鍵是在采樣過 程中將細(xì)菌截留在過濾器內(nèi)膜上，在對(duì)細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)，其共生微生物也被限制在過濾器內(nèi)，而 不會(huì)對(duì)培養(yǎng)液的信息產(chǎn)生影響，從而使檢測(cè)得到的培養(yǎng)液的信息能夠更準(zhǔn)確地反應(yīng)細(xì)菌存 在的狀況，使對(duì)細(xì)菌的檢測(cè)更準(zhǔn)確。在不脫離本發(fā)明精神的情況下，對(duì)本發(fā)明做出的任何形 式的改變均應(yīng)落入本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1. 一種細(xì)菌檢測(cè)方法，包括以下步驟a、采樣步驟待測(cè)樣本通過過濾器，樣本中的細(xì)菌在過濾器內(nèi)積累；計(jì)量通過過濾器的樣本總體積；b、培養(yǎng)及檢測(cè)步驟將積累有細(xì)菌的過濾器放入培養(yǎng)液中，細(xì)菌被限制在過濾器內(nèi)生長(zhǎng)繁殖并產(chǎn)生代謝 物，目標(biāo)細(xì)菌產(chǎn)生的代謝物與培養(yǎng)液中的底物發(fā)生特異性反應(yīng)；檢測(cè)培養(yǎng)液的信息，得到被測(cè)樣本中目標(biāo)細(xì)菌的信息。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于所述樣本為水樣。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于在現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行步驟a，再將積累有細(xì)菌 的過濾器帶回實(shí)驗(yàn)室，再進(jìn)行步驟b。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于檢測(cè)培養(yǎng)液中對(duì)目標(biāo)細(xì)菌代謝物具 有特異性的底物變化信息。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的檢測(cè)方法，其特征在于在步驟b中，檢測(cè)培養(yǎng)液的吸光 度或透光率或熒光強(qiáng)度。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于在步驟b中，根據(jù)檢測(cè)得到的培養(yǎng)液的信息，判斷樣本中是否含有細(xì)菌；或根據(jù)連續(xù)檢測(cè)得到的培養(yǎng)液的信息隨時(shí)間變化的關(guān)系，得出細(xì)菌的濃度。
7. —種細(xì)菌檢測(cè)裝置，包括培養(yǎng)單元、檢測(cè)單元和分析單元，其特征在于所述檢測(cè)裝 置還包括過濾器；所述過濾器用于截留樣本中的細(xì)菌；所述過濾器放置在培養(yǎng)單元中時(shí)， 所述培養(yǎng)單元中的培養(yǎng)液和細(xì)菌代謝物能夠透過所述過濾器。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測(cè)裝置，其特征在于所述樣本為水樣。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測(cè)裝置，其特征在于所述檢測(cè)裝置還包括驅(qū)動(dòng)泵，以驅(qū)動(dòng) 樣本進(jìn)入過濾器。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測(cè)裝置，其特征在于所述檢測(cè)裝置還包括冷藏箱，對(duì)截 留細(xì)菌后的過濾器冷藏。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種細(xì)菌檢測(cè)方法，包括以下步驟a、采樣步驟待測(cè)樣本通過過濾器，樣本中的細(xì)菌在過濾器內(nèi)積累；計(jì)量通過過濾器的樣本總體積；b、培養(yǎng)及檢測(cè)步驟將積累有細(xì)菌的過濾器放入培養(yǎng)液中，細(xì)菌被限制在過濾器內(nèi)生長(zhǎng)繁殖并產(chǎn)生代謝物，目標(biāo)細(xì)菌產(chǎn)生的代謝物與培養(yǎng)液中的底物發(fā)生特異性反應(yīng)；檢測(cè)培養(yǎng)液的信息，得到被測(cè)樣本中目標(biāo)細(xì)菌的信息。本發(fā)明還提供了一種細(xì)菌檢測(cè)裝置。本發(fā)明具有采樣方便、消除共存物干擾、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)C12Q1/02GK102094062SQ20101056598
公開日2011年6月15日 申請(qǐng)日期2010年11月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月19日
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