專利名稱：一種用于檢測沙門氏菌的分子馬達生物傳感器試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于食品微生物快速檢測技術(shù)的一種。
背景技術(shù)：
傳統(tǒng)的病原菌檢測方法要求對每個檢驗項目進行非選擇性增菌、選擇性增菌、分離、篩選和鑒定等步驟，一般需要5天才能出具檢測報告，嚴重影響貨物的品質(zhì)和貨架壽命。一些新的技術(shù)如PCR技術(shù)、免疫學檢測技術(shù)、生物芯片技術(shù)等檢測方法仍依賴于傳統(tǒng)的檢測步驟，即需要進行增菌，耗時耗力，完成一次檢測通常需要幾天的時間。這樣不僅增加了實驗室的工作量，而且也不利于食品工業(yè)中生產(chǎn)流程的監(jiān)測、終產(chǎn)品的質(zhì)量控制以及政府部門對食品安全的管理和控制。由于進出口食品的大量增加，因此急需可靠有效的快速檢測方法，縮短檢測時間，促進我國食品的進出口貿(mào)易。

發(fā)明內(nèi)容
以受控分子馬達技術(shù)為核心，集成核酸探針識別、熒光探針標記與檢測等技術(shù)，建立了一個全新概念的快速檢測技術(shù)體系。利用ATP酶作為載體對目標物進行檢測具有靈敏度高、特異性強、快速的特點。分子馬達連接上特異的核酸探針，可以實現(xiàn)對特定食品微生物的快速、特異性、高通量的檢測。本發(fā)明可將檢測時間縮短至2天，且檢測靈敏度能達到102CFU/ml，滿足現(xiàn)有的食品微生物檢測范圍。


附圖1為分子馬達生物傳感器模式圖(其中a、b、C、α、β、δ、Υ、ε均為ATP合酶亞基)，I為ε亞基抗體,2為鏈霉親和素(Strptavidin), 3為N_biotin, 4為invA探針，5為沙門氏菌單鏈DNA。附圖2為chix) invA對不同種菌株的檢測結(jié)果，縱坐標表示熒光值，橫坐標表示檢測的樣本，其中I為水，2為沙門氏菌，3為副溶血性弧菌，4為霍亂弧菌，5為單增李斯特氏菌，6為大腸桿菌。附圖3為chro invA對30株沙門氏菌樣本的檢測結(jié)果，縱坐標表不突光值，橫坐標表示檢測的樣本，1 30為食品檢測樣本編號。
具體實施例方式根據(jù)沙門氏菌invA基因設計特異性核酸探針5’ gtgaaattatcgccacgttcgggcaa,其中探針的5’用生物素進行標記。將該探針通過生物素抗體連接在分子馬達上面，利用分子馬達生物傳感器即可對待測樣本的DNA進行檢測，當樣品為沙門氏菌DNA時，檢測體系的熒光值會發(fā)生明顯的變化，通過這一變化即可判斷樣本為陽性。為此，我們設計了一個試劑盒，可以方便、快速對食品中的沙門氏菌進行檢測。試劑盒組成
權(quán)利要求
1.本發(fā)明要求保護的內(nèi)容有特異性核酸探針與FtlF1-ATP合酶連接的方式在FtlF1-ATP合酶的亞基上依次連接ε亞基抗體、生物素、鏈霉親和素、生物素標記的invA探針。
2.試劑盒檢測體系的反應條件37°C恒溫搖床中溫育30min。
3.合成buffer、啟動buffer、PBS的配方。合成buffer:甘油20%,氯化鎂5mM, Tricine50mM,憐酸氫二鉀 5mM ;啟動 buffer :ADP (1. 6mM):上述合成 buffer =1: 3 (v/v) ；PBS 137mM氯化鈉，2. 7mM氯化鉀，10mM磷酸氫二鈉，2mM磷酸二氫鉀。
全文摘要
一種用于檢測沙門氏菌的分子馬達生物傳感器試劑盒屬于食品微生物快速檢測領(lǐng)域，主要解決傳統(tǒng)檢測方法時間過長(5～6天)。本發(fā)明的核心技術(shù)是利用載色體Chromatophore上的F0F1-ATPase分子馬達生物傳感器，F(xiàn)0F1-ATP合酶由于能快速地旋轉(zhuǎn)，通過旋轉(zhuǎn)它建立了催化位點與質(zhì)子轉(zhuǎn)運之間的偶聯(lián)。首先在ATP合酶的ε亞基上連接invA探針，將待測樣品和陰性對照分別與生物傳感器結(jié)合后，比較其催化ATP合成30分鐘后的ATP產(chǎn)生量，ATP合成的多寡可以通過環(huán)境中H+的量進行測量，而H+的多寡通過H-DHPE所體現(xiàn)的熒光強度大小來獲得。本試劑盒可對待測樣本中的沙門氏菌進行快速、靈敏、高通量的檢測。
文檔編號C12Q1/04GK103045718SQ20111030750
公開日2013年4月17日 申請日期2011年10月12日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月12日
發(fā)明者張捷, 顧德周, 張惠媛, 王佩榮, 樂加昌, 陳廣全 申請人:中華人民共和國北京出入境檢驗檢疫局, 中國科學院生物物理研究所