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      一種離體萌發(fā)法測(cè)定石蒜屬植物花粉活力的方法

      文檔序號(hào):413495閱讀:736來(lái)源:國(guó)知局
      專利名稱:一種離體萌發(fā)法測(cè)定石蒜屬植物花粉活力的方法
      技術(shù)領(lǐng)域
      本發(fā)明涉及植物花粉活力測(cè)定領(lǐng)域,尤其涉及一種離體萌發(fā)法測(cè)定石蒜屬植物花粉活力的方法。
      背景技術(shù)
      石蒜屬植物是一類極具觀賞價(jià)值的植物,花朵碩大,色彩鮮艷,因其耐陰性強(qiáng),在園林綠化中,多被種植于林下、林緣、草地邊緣等。我國(guó)的石蒜屬植物資源非常豐富,但絕大多數(shù)還處于野生狀態(tài),人工種植品種仍然十分單一,因此選育石蒜的新品種,有助于推廣石蒜屬植物在園林綠化中的應(yīng)用。
      在植物的常規(guī)育種中,為了進(jìn)行人工輔助授粉或雜交授粉,需要早期采集和貯存花粉,尤其在雜交育種工作中,研究花粉的活力是必不可少的基礎(chǔ)性工作,通常在使用采集和貯存的花粉之前,需要做花粉活力的測(cè)定。測(cè)定花粉活力是傳統(tǒng)雜交育種的基礎(chǔ)和關(guān)鍵環(huán)節(jié)。目前對(duì)于花粉活力的測(cè)定主要有三類方法,第一類為花粉染色法,第二類方法為田間授粉法,第三類為花粉離體萌發(fā)法。花粉染色法是通過(guò)使用化學(xué)試劑對(duì)花粉進(jìn)行染色,根據(jù)染色后的花粉顏色的深淺判斷花粉的活力狀況,染色法主要有碘-碘化鉀染色法、醋酸洋紅染色法、TTC染色法等。這類方法快速、簡(jiǎn)便,但由于不同植物花粉壁厚度、淀粉含量、有關(guān)酶含量不同,染色法在不同植物應(yīng)用的效果差異也較大。田間授粉法是通過(guò)人工采集花粉并對(duì)花絲授粉,果實(shí)成熟后計(jì)算授粉結(jié)實(shí)率,這是一種直接、可靠的方法,但是費(fèi)時(shí)、費(fèi)力,受季節(jié)、天氣影響較大?;ǚ鄣碾x體萌發(fā)法是將采集的花粉進(jìn)行體外的萌發(fā)實(shí)驗(yàn),統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率,此種方法快速、簡(jiǎn)單,準(zhǔn)確度也較高,但是由于不同種類植物的花粉體外萌發(fā)的條件會(huì)有區(qū)別,例如培養(yǎng)基,培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)溫度等,需要對(duì)植物花粉的離體培養(yǎng)條件有比較好的把握。石蒜屬植物的花粉形態(tài)為兩側(cè)對(duì)稱,赤道面觀呈舟形或腎形,極面觀為橢圓形或長(zhǎng)橢圓形。目前,國(guó)內(nèi)外對(duì)于石蒜屬花粉的研究大多集中在石蒜屬系統(tǒng)關(guān)系和種間分類方面,并未發(fā)現(xiàn)有效的鑒定石蒜屬花粉活力的方法。

      發(fā)明內(nèi)容
      本發(fā)明提供了一種離體萌發(fā)法測(cè)定石蒜屬植物花粉活力的方法,該方法可以快速、有效地測(cè)定石蒜屬植物的花粉活力。一種離體萌發(fā)法測(cè)定石蒜屬植物花粉活力的方法,包括收集花粉,將所述花粉置于培養(yǎng)液中進(jìn)行離體培養(yǎng),所述培養(yǎng)液的配方為鹿糖30 80g/L,硼酸15 25mg/L ;所述離體培養(yǎng)的溫度為25 35°C,時(shí)間為60 90min,相對(duì)濕度70 90%?;ǚ鄣碾x體萌發(fā)法是測(cè)定花粉活力的有效方法,結(jié)果可重復(fù)性高,一般包括如下步驟收集花粉,將花粉置于培養(yǎng)液中進(jìn)行離體培養(yǎng),顯微鏡下觀察花粉萌發(fā)情況,統(tǒng)計(jì)花粉萌發(fā)率?;ǚ鄣拿劝l(fā)能力是反映花粉活力的指標(biāo)之一,因花粉只有萌發(fā)并長(zhǎng)出花粉管,才能穿過(guò)花柱,進(jìn)入子房,完成受精作用?;ǚ鄣拿劝l(fā)能力通常以花粉萌發(fā)率來(lái)表示,通過(guò)統(tǒng)計(jì)花粉的萌發(fā)率可以測(cè)定花粉的活力。離體培養(yǎng)的培養(yǎng)液、溫度、時(shí)間是影響測(cè)定準(zhǔn)確率的主要因素,本發(fā)明對(duì)培養(yǎng)溫度、時(shí)間、培養(yǎng)液配方進(jìn)行了優(yōu)化,能夠快速測(cè)定所述花粉的活力。本發(fā)明所述石蒜屬植物是指忽地笑、換錦花或中國(guó)石蒜。所述收集花粉的方法為采集即將開(kāi)裂的花藥,置于干燥的器皿中干燥3 6天,直至花粉完全開(kāi)裂,然后收集花粉。為了便于收集花粉,可在器皿中放入一層硫酸紙。當(dāng)然, 也可以直接在開(kāi)裂的花藥上采集。離體培養(yǎng)時(shí),可將花粉均勻散布在凹形載玻片上,滴加2 3滴培養(yǎng)液,輕輕混勻,靜置培養(yǎng),過(guò)多培養(yǎng)液容易溢出載玻片。不同植物花粉離體萌發(fā)需要不同的培養(yǎng)液,培養(yǎng)液的各組分影響花粉的萌發(fā),本發(fā)明的離體培養(yǎng)的培養(yǎng)液由蔗糖、硼酸和水組成。蔗糖不僅是花粉萌發(fā)和花粉管伸長(zhǎng)主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)來(lái)源,還維持著外界環(huán)境的滲透壓,蔗糖濃度過(guò)低,會(huì)導(dǎo)致外界蔗糖濃度低于花粉內(nèi)部的滲透壓,花粉壁破裂,內(nèi)容物析出,花粉失去生活力,而蔗糖濃度過(guò)高時(shí),又會(huì)造成花粉的質(zhì)壁分離從而抑制萌發(fā),本發(fā)明蔗糖濃度優(yōu)選為40 60g/L。硼酸能夠增加花粉對(duì)蔗糖的吸收、運(yùn)轉(zhuǎn)和代謝,形成糖硼酸復(fù)合體,增加氧的吸收,并促進(jìn)構(gòu)成花粉管的成分-果膠物的合成,從而促進(jìn)花粉萌發(fā)和花粉管生長(zhǎng),所述硼酸的濃度優(yōu)選為20 25mg/L。花粉的萌發(fā)是花粉細(xì)胞內(nèi)一系列生理生化反應(yīng)的結(jié)果,而生理生化反應(yīng)的有序進(jìn)行必然需要適宜的溫度,離體培養(yǎng)一定時(shí)間后,花粉的萌發(fā)率和花粉管生長(zhǎng)處于穩(wěn)定狀態(tài),優(yōu)選的,所述離體培養(yǎng)的溫度為27 30°C。此外,在花粉的離體培養(yǎng)過(guò)程中,為了防止所述培養(yǎng)液的蒸發(fā),離體培養(yǎng)時(shí),保持環(huán)境的相對(duì)濕度為70% 90%?;ǚ垭x體培養(yǎng)一段時(shí)間后,將負(fù)載花粉的載玻片置于顯微鏡下觀察,以花粉管長(zhǎng)度達(dá)到花粉粒本身長(zhǎng)度的I倍及以上的花粉視為萌發(fā),統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率。本發(fā)明對(duì)石蒜屬植物花粉的離體培養(yǎng)條件進(jìn)行了探索,為石蒜屬植物花粉活力的測(cè)定提供了一種簡(jiǎn)單、快速、可行的方法,為石蒜屬植物的雜交育種提供基礎(chǔ)。


      圖I為換錦花花粉離體培養(yǎng)60min的圖像;圖2為換錦花花粉離體培養(yǎng)80min的圖像;圖3為忽地笑花粉離體培養(yǎng)40min的圖像;圖4為忽地笑花粉離體培養(yǎng)60min的圖像;圖5為中國(guó)石蒜花粉離體培養(yǎng)60min的圖像;圖6為中國(guó)石蒜花粉離體培養(yǎng)90min的圖像。
      具體實(shí)施例方式實(shí)施例I(I)將未開(kāi)裂的換錦花花藥放入裝有硫酸紙的干燥培養(yǎng)皿中,將培養(yǎng)皿置于盛有變色硅膠的室內(nèi)干燥器中4天,至花粉散出。(2)用解剖針取適量花粉入凹形載玻片中,輕輕滴加含有蔗糖50g/L,硼酸20mg/L的培養(yǎng)液2 3滴,輕輕混勻。(3)將載玻片輕輕放入相對(duì)濕度80%的保濕盒中,置于27°C的環(huán)境中培養(yǎng)60min。(4)輕輕取出載玻片,防止劇烈震動(dòng),以防花粉管斷裂,置于60倍顯微鏡下觀察花粉萌發(fā)情況,視野內(nèi)觀察到具有活力的花粉萌發(fā)出花粉管,長(zhǎng)約花粉粒本身長(zhǎng)度I 4倍,此時(shí)便于統(tǒng)計(jì)換錦花的花粉萌發(fā)率。
      (5)若將載玻片繼續(xù)放入保濕盒培養(yǎng),20min后于顯微鏡下觀察,可觀察到花粉管萌發(fā)更長(zhǎng),相互纏繞在一起。花粉萌發(fā)的標(biāo)準(zhǔn)是花粉管長(zhǎng)度為花粉粒本身長(zhǎng)度的I倍及以上。萌發(fā)率=萌發(fā)的花粉數(shù)/總花粉粒數(shù)挑選10個(gè)視野,每個(gè)視野中花粉粒數(shù)大于50粒,計(jì)算10個(gè)視野的萌發(fā)率平均值即為花粉的萌發(fā)率。表I換錦花花粉萌發(fā)率
      權(quán)利要求
      1.一種離體萌發(fā)法測(cè)定石蒜屬植物花粉活力的方法,包括收集花粉,將所述花粉置于培養(yǎng)液中進(jìn)行離體培養(yǎng),其特征在于, 所述培養(yǎng)液的配方為鹿糖30 80g/L,硼酸15 25mg/L ; 所述離體培養(yǎng)的溫度為25 35°C,時(shí)間為60 90min,相對(duì)濕度70% 90%。
      2.如權(quán)利要求I所述的方法,其特征在于,所述石蒜屬植物為忽地笑、換錦花或中國(guó)石蒜。
      3.如權(quán)利要求I所述的方法,其特征在于,所述蔗糖的濃度為40 60g/L,硼酸的濃度為 20 25mg/L。
      4.如權(quán)利要求I所述的方法,其特征在于,所述離體培養(yǎng)的溫度為27 30°C。
      5.如權(quán)利要求I所述的方法,其特征在于,所述收集花粉的方法為采集即將開(kāi)裂的花藥,置于干燥的器皿中干燥3 6天,直至花粉完全開(kāi)裂,收集花粉。
      6.如權(quán)利要求I所述的方法,其特征在于,所述石蒜屬植物為忽地笑;所述培養(yǎng)液配方為蔗糖40g/L,硼酸20mg/L ;所述離體培養(yǎng)的溫度為30°C,時(shí)間為60min,相對(duì)濕度80%。
      7.如權(quán)利要求I所述的方法,其特征在于,所述石蒜屬植物為換錦花;所述培養(yǎng)液配方為鹿糖50g/L,硼酸20mg/L ;所述離體培養(yǎng)的溫度為27°C,時(shí)間為60min,相對(duì)濕度80%。
      8.如權(quán)利要求I所述的方法,其特征在于,所述石蒜屬植物為中國(guó)石蒜;所述培養(yǎng)液配方為蔗糖60g/L,硼酸25mg/L ;所述離體培養(yǎng)的溫度為27°C,時(shí)間為90min,相對(duì)濕度75%。
      全文摘要
      本發(fā)明公開(kāi)了一種離體萌發(fā)法測(cè)定石蒜屬植物花粉活力的方法,包括收集花粉,將所述花粉置于培養(yǎng)液中進(jìn)行離體培養(yǎng),所述培養(yǎng)液的配方為蔗糖30~80g/L,硼酸15~25mg/L;所述離體培養(yǎng)的溫度為25~35℃,時(shí)間為60~90min,相對(duì)濕度70%~90%。本發(fā)明對(duì)石蒜屬植物花粉的離體培養(yǎng)條件進(jìn)行了探索,為石蒜屬植物花粉活力的測(cè)定提供了一種簡(jiǎn)單、快速、可行的方法,為石蒜屬植物的雜交育種提供基礎(chǔ)。
      文檔編號(hào)C12Q1/06GK102876768SQ20121035231
      公開(kāi)日2013年1月16日 申請(qǐng)日期2012年9月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月20日
      發(fā)明者肖郁綿, 夏宜平, 常樂(lè), 佘琳芳 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)
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