專利名稱：一種用于pma/ema與細(xì)菌死細(xì)胞dna分子共價(jià)交聯(lián)裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及ー種用于PMA/EMA與細(xì)菌死細(xì)胞DNA分子共價(jià)交聯(lián)裝置。
背景技術(shù)：
實(shí)時(shí)PCR技術(shù)被應(yīng)用多年，用于檢測(cè)食品、飼料或環(huán)境中的病原微生物。然而，目前的PCR檢測(cè)方法容易出現(xiàn)假陽(yáng)性的結(jié)果，這造成了巨大的浪費(fèi)和不必要的召回事件的發(fā)生。出現(xiàn)這種結(jié)果的原因是PCR技術(shù)跟其它的DNA法一祥，均不能將活的跟死的細(xì)菌分開(kāi)，導(dǎo)致了 PCR技術(shù)提供了錯(cuò)誤的結(jié)果。為了克服以上PCR技術(shù)的弱點(diǎn)，避免假陽(yáng)性結(jié)果的出現(xiàn)，將單疊氮溴化こ錠染料結(jié)合PCR技術(shù)對(duì)試樣進(jìn)行處理。單疊氮溴化こ錠進(jìn)入死的細(xì)菌體內(nèi)后與DNA分子進(jìn)行結(jié)合， 單疊氮溴化こ錠染料使得細(xì)菌在染色后不能被溶解，相反的是，染料不能穿透活細(xì)胞，這使得檢測(cè)人員可以利用這種改進(jìn)的PCR技術(shù)很容易的區(qū)分活的及死的細(xì)菌，從而避免假陽(yáng)性結(jié)果的出現(xiàn)。

實(shí)用新型內(nèi)容由鑒于此，本實(shí)用新型的目的是提供一種用于PMA/EMA與細(xì)菌死細(xì)胞DNA分子共價(jià)交聯(lián)裝置，克服了現(xiàn)有技術(shù)的不足，操作方便、光照均勻并可進(jìn)行紫外殺菌。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本實(shí)用新型采用以下技術(shù)方案一種用于PMA/EMA與細(xì)菌死細(xì)胞DNA分子共價(jià)交聯(lián)裝置，包括箱體，其中，所述箱體上設(shè)有活動(dòng)門、鹵素?zé)糸_(kāi)關(guān)、紫外燈管開(kāi)關(guān)和總電源開(kāi)關(guān)，所述箱體內(nèi)頂部設(shè)有鹵素?zé)?，箱體兩側(cè)內(nèi)壁上分別設(shè)置有至少ー個(gè)紫外燈管。進(jìn)ー步，所述的紫外燈管為兩個(gè)。進(jìn)ー步，所述箱體上還設(shè)有可視窗ロ。進(jìn)ー步，所述鹵素?zé)魹?00瓦。本實(shí)用新型的有益效果為本實(shí)用新型可用于永久性修飾細(xì)菌死細(xì)胞的DNA分子，阻斷DNA分子的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，從而有效區(qū)分樣品中細(xì)菌的死活狀態(tài)，降低PCR檢測(cè)樣品中致病菌的假陽(yáng)性率。本實(shí)用新型可提供約200001UX的強(qiáng)光，進(jìn)而使PMA與菌懸液混合均勻后在本裝置內(nèi)進(jìn)行光照交聯(lián)，PMA所帯的光敏性疊氮基團(tuán)轉(zhuǎn)化為高活性的氮賓自由基，并與結(jié)合位點(diǎn)附近的任意碳?xì)浠衔锓磻?yīng)形成穩(wěn)定的共價(jià)氮碳基，致使死細(xì)胞DNA分子的永久修飾，最后阻斷死細(xì)胞DNA分子的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增。本實(shí)用新型的其他優(yōu)點(diǎn)、目標(biāo)和特征在某種程度上將在隨后的說(shuō)明書中進(jìn)行闡述，并且在某種程度上，基于對(duì)下文的考察研究對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言將是顯而易見(jiàn)的，或者可以從本實(shí)用新型的實(shí)踐中得到教導(dǎo)。本實(shí)用新型的目標(biāo)和其他優(yōu)點(diǎn)可以通過(guò)下面的說(shuō)明書或者附圖中所特別指出的結(jié)構(gòu)來(lái)實(shí)現(xiàn)和獲得。
圖I為本實(shí)用新型的結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實(shí)施方式
如圖I所示，本實(shí)用新型的箱體I上設(shè)有可視窗ロ 3、活動(dòng)門5、鹵素?zé)糸_(kāi)關(guān)6、紫外燈管開(kāi)關(guān)7和總電源開(kāi)關(guān)8，活動(dòng)門5與箱體I鉸接，箱體I頂部的內(nèi)壁上設(shè)有500W的鹵素?zé)?，箱體I兩側(cè)的內(nèi)壁上分別安裝有兩個(gè)紫外燈管2，兩個(gè)平行的紫外燈管2分別左右對(duì)稱設(shè)置于箱體I的內(nèi)側(cè)面。鹵素?zé)?提供強(qiáng)光，紫外燈管2用于殺菌，為了提高殺菌效果，在箱體I兩側(cè)的內(nèi)壁上分別安裝兩個(gè)紫外燈管2。通過(guò)可視窗ロ 3觀察內(nèi)部的光照交聯(lián)效果O本實(shí)用新型可用于永久性修飾細(xì)菌死細(xì)胞的DNA分子，阻斷DNA分子的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，從而有效區(qū)分樣品中細(xì)菌的死活狀態(tài)，降低PCR檢測(cè)樣品中致病菌的假陽(yáng)性率。本實(shí)用新型可提供約200001UX的強(qiáng)光，進(jìn)而使PMA與菌懸液混合均勻后在本裝置內(nèi)進(jìn)行光照·交聯(lián)，PMA所帯的光敏性疊氮基團(tuán)轉(zhuǎn)化為高活性的氮賓自由基，并與結(jié)合位點(diǎn)附近的任意碳?xì)浠衔锓磻?yīng)形成穩(wěn)定的共價(jià)氮碳基，致使死細(xì)胞DNA分子的永久修飾，最后阻斷死細(xì)胞DNA分子的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增。使用本實(shí)用新型快速檢測(cè)飼料中沙門氏菌活細(xì)胞，采用如下步驟I)將飼料樣品用BPW肉湯增菌，吸取500ul菌懸液于I. 5mL離心管中，加入4ul
O.5mg/mL的疊氮溴化已啶溶液，將離心管置于冰盒上，在共價(jià)交聯(lián)裝置內(nèi)曝光3min ；2)提取細(xì)菌DNA;3)PCR擴(kuò)增沙門氏菌invA基因取試劑盒中預(yù)混酶及引物混合物，50ul體系吸取40ul，加入提取的細(xì)菌DNAlO ul進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增條件為94°C預(yù)變性5min，94°C變性30sec，56°C退火 30 sec，72°C延伸 45sec，33 個(gè)循環(huán)，最后 72°C終延伸 10 min ；4)電泳分析將PCR產(chǎn)物于1%瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳，電泳結(jié)束后，凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行成像分析。最后說(shuō)明的是，以上實(shí)施例僅用以說(shuō)明本實(shí)用新型的技術(shù)方案而非限制，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員對(duì)本實(shí)用新型的技術(shù)方案所做的其他修改或者等同替換，只要不脫離本實(shí)用新型技術(shù)方案的精神和范圍，均應(yīng)涵蓋在本實(shí)用新型的權(quán)利要求范圍中。
權(quán)利要求1.一種用于PMA/EMA與細(xì)菌死細(xì)胞DNA分子共價(jià)交聯(lián)裝置，包括箱體，其特征在于所述箱體上設(shè)有活動(dòng)門、鹵素?zé)糸_(kāi)關(guān)、紫外燈管開(kāi)關(guān)和總電源開(kāi)關(guān)，所述箱體內(nèi)頂部設(shè)有鹵素?zé)?，箱體兩側(cè)內(nèi)壁上分別設(shè)置有至少一個(gè)紫外燈管。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種用于PMA/EMA與細(xì)菌死細(xì)胞DNA分子共價(jià)交聯(lián)裝置，其特征在于所述的紫外燈管為兩個(gè)。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的一種用于PMA/EMA與細(xì)菌死細(xì)胞DNA分子共價(jià)交聯(lián)裝置，其特征在于所述箱體上還設(shè)有可視窗口。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種用于PMA/EMA與細(xì)菌死細(xì)胞DNA分子共價(jià)交聯(lián)裝置，其特征在于所述鹵素?zé)魹?00瓦。
專利摘要本實(shí)用新型公開(kāi)了一種用于PMA/EMA與細(xì)菌死細(xì)胞DNA分子共價(jià)交聯(lián)裝置，包括箱體，其中，所述箱體上設(shè)有活動(dòng)門、鹵素?zé)糸_(kāi)關(guān)、紫外燈管開(kāi)關(guān)和總電源開(kāi)關(guān)，所述箱體內(nèi)頂部設(shè)有鹵素?zé)?，箱體兩側(cè)內(nèi)壁上分別設(shè)置有至少一個(gè)紫外燈管。本實(shí)用新型克服了現(xiàn)有技術(shù)的不足，操作方便、光照均勻并可進(jìn)行紫外殺菌。
文檔編號(hào)C12M1/00GK202626164SQ20122022810
公開(kāi)日2012年12月26日 申請(qǐng)日期2012年5月21日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月21日
發(fā)明者班付國(guó), 高延玲, 張發(fā)旺, 周紅霞, 劉宏偉, 趙全成, 梁軍, 張影, 曲登峰, 王世山, 朱松波, 高小玲, 雷東風(fēng), 彭峰, 陳陽(yáng), 黃京燕, 馬俊, 焦玉萍, 李金磊, 董鵬, 常守海, 姚德新 申請(qǐng)人:河南省獸藥監(jiān)察所