專利名稱：一種用于篩選血液中稀有細胞的生物芯片的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實用新型涉及一種血液檢測生物芯片，尤其是涉及一種用于篩選血液中稀有細胞的生物芯片。
背景技術(shù)：
血液檢測生物芯片是檢測與重大疾病相關(guān)的血液中稀有細胞的下一代診斷工具，稀有細胞包括流通在血液樣本中的循環(huán)腫瘤細胞(CTC)、惡性干細胞和病變的具有特定蛋白質(zhì)標(biāo)記的細胞等等。相關(guān)的研究證實，病人的血液樣本中出現(xiàn)的循環(huán)腫瘤細胞數(shù)量與病人早期診斷和存活率具有很強的相關(guān)性。因此，對病人的血液樣本的稀有細胞檢測和分析是提高腫瘤疾病早期發(fā)現(xiàn)率和個性化治療的關(guān)鍵。由于病人血液樣本的CTCs數(shù)量非常小，使CTC檢測具有很大的挑戰(zhàn)性。流式細胞儀檢測方法是最普遍使用的一種CTC檢測方法，CTC比一般胞體大，核漿比例高，胞漿內(nèi)顆粒物質(zhì)少，表達特異性抗原，流式細胞儀應(yīng)用其對光散射和免疫熒光識別的特性，將CTC從總的細胞中分離出來。目前最新流式細胞儀BD FACSAria是流式高速細胞分選的新突破，但其難以克服的缺陷是:瞬時的激光打擊仍將給細胞帶來損傷，分選活性差；由于光譜間存在的交叉，易混入假陽性的細胞；熒光信號所需的補償難以調(diào)配；往往會出現(xiàn)細胞粘連成團的現(xiàn)象，流出道的堵塞時有發(fā)生；分選中斷后需重新過濾細胞制備樣本，這增加了污染的機率，且細胞活性大大受損。單純以流式細胞術(shù)檢測腫瘤患者中的CTC的方法仍存爭議；另外形態(tài)分離方法，從白細胞中分離出的CTCs的數(shù)量和密度比較小，同時會留下大量的與CTC形態(tài)類似且不足以視為CTC的細胞，如與白細胞一樣小的非循環(huán)腫瘤細胞。還有免疫檢測方法，因CTCs具有高特分離效性，可利用特定的標(biāo)記物，對目標(biāo)CTC進行標(biāo)記，但需要額外增加一個免疫熒光染色篩選步驟。所以，有必要提供一種結(jié)構(gòu)簡單、操作方便的血液檢測生物芯片從病人血液樣本中分離稀有細胞和/或病變的特定蛋白質(zhì)細胞。
發(fā)明內(nèi)容本實用新型所要解決的技術(shù)問題是提供一種結(jié)構(gòu)簡單、操作方便的用于篩選血液中稀有細胞的生物芯片。本實用新型解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為:一種用于篩選血液中稀有細胞的生物芯片，包括具有凹槽的薄片和載玻片，薄片上的凹槽朝向載玻片并將薄片緊貼在所述的載玻片上，使薄片和載玻片之間形成一個密閉的微流體通道；所述的薄片上開設(shè)有連通所述的微流體通道的出液孔和進液孔。還包括由上外蓋和下外蓋合成的外殼,所述的薄片和載玻片位于所述的殼體內(nèi)，所述的上外蓋的內(nèi)側(cè)面緊壓在薄片的上表面，所述的下外蓋的內(nèi)側(cè)面緊壓在載玻片的下表面。外殼起到保護薄片和載玻片的作用，同時通過上外蓋和下外蓋的相互作用，將薄片和載玻片兩者緊密貼合且相互固定，形成密閉的微流體通道，將外殼拆卸后，可方便地將薄片與載玻片分離，載玻片用于后續(xù)分析處理。所述的下外蓋開設(shè)有可嵌入磁性體的避空窗，所述的避空窗位于微流體通道的正下方。用于形成梯度磁場的磁鐵放置在載玻片的下方，避空窗的開設(shè)可避免外殼阻擋磁場，使磁場更有效作用于流經(jīng)微流體通道的血液樣本。所述的薄片由透明材料制成，所述的上外蓋開設(shè)有可察看微流體通道內(nèi)液體流動的觀察窗。所述的出液孔上連接有第一導(dǎo)管連接件，所述的進液孔上連接有第二導(dǎo)管連接件，所述的第一導(dǎo)管連接件和第二導(dǎo)管連接件粘接在所述的薄片上。血液存儲器通過連接管與第一導(dǎo)管連接件連通，第二導(dǎo)管連接件通過連接管與液體泵連通，在液體泵的抽吸下，存儲器內(nèi)的血液樣本經(jīng)第一導(dǎo)管連接件流入微流體通道內(nèi)，微流體通道內(nèi)的血液樣本經(jīng)第二導(dǎo)管連接件流向液體泵，血液樣本以某一合適的速度徑流微流體通道。所述的薄片由聚二甲基硅氧烷(PDMS)或三元乙丙橡膠材料(EPDM)制成。微流體通道的橫截面為六邊形。六邊形的橫截面可以在保證捕獲率的前提下，使捕獲到的稀有細胞分布廣。上外蓋與下外蓋之間通過卡扣或合頁連接。方便外殼的拆卸和組裝，外殼拆卸后，方便載玻片的取出。所述的外殼采用PE或PP材料制成。所述的薄片的厚度為8-12mm,所述的凹槽的深度為0.4mm-0.6mm,所述的進液孔和出液孔的內(nèi)孔直徑為1.5mm-1.7mm。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實用新型的優(yōu)點是先在血液樣本內(nèi)放入磁性納米粒子，磁性納米粒子表面帶有抗體，通過免疫反應(yīng)吸附在目標(biāo)細胞上，然后將稀有細胞已被標(biāo)記的血液樣本流經(jīng)微流體通道，血液樣本中的附著有磁性納米粒子的稀有細胞被放置于生物芯片下方的磁性體發(fā)出的梯度磁場引導(dǎo)，進而被采集在載玻片上，由于薄片與載玻片之間為可拆卸連接，等采集工作完成后，用戶可方便地將載玻片與薄片分離，取出載玻片，對載玻片上的稀有細胞進行后續(xù)分析。本實用新型結(jié)構(gòu)比較簡單，操作起來非常方便。

圖1為本實用新型的立體結(jié)構(gòu)圖；圖2為本實用新型的分解圖(一)；圖3為本實用新型的分解圖(二)；圖4為本實用新型的薄片的立體圖；圖5為本實用新型的薄片的正面圖。
具體實施方式
以下結(jié)合附圖實施例對本實用新型作進一步詳細描述?！N用于篩選血液中稀有細胞的生物芯片，包括具有凹槽11的薄片I和載玻片2，薄片I上的凹槽11朝向載玻片2并將薄片I緊貼在載玻片2上，使薄片I和載玻片2之間形成一個密閉的微流體通道；薄片I上開設(shè)有連通微流體通道的出液孔12和進液孔13。微流體通道的橫截面為六邊形。薄片I由聚二甲基硅氧烷(PDMS)或三元乙丙橡膠(EPDM)材料制成。EPDM材料和EPDM材料具有良好的熱塑性和彈性。薄片也可以采用40 DUROTRANSLUCENT SILICONE RUBBER材料。上述材料呈透明、不溶于丙酮，且具有彈性、在中等壓力下具有良好的密封性能，保證血液樣本不會從微流體通道內(nèi)滲出。載波片可以采用病理級載玻片。上外蓋31和下外蓋32合成的外殼3,薄片I和載玻片2位于殼體3內(nèi)，上外蓋31的內(nèi)側(cè)面緊壓在薄片I的上表面，下外蓋32的內(nèi)側(cè)面緊壓在載玻片2的下表面。上外蓋31與下外蓋32之間通過卡扣或合頁連接，外殼采用PE或PP材料制成。下外蓋32開設(shè)有可嵌入磁性體的避空窗321，避空窗321位于微流體通道的正下方。薄片I由透明材料制成，上外蓋31開設(shè)有可察看微流體通道內(nèi)液體流動的觀察窗311。出液孔12上連接有第一導(dǎo)管連接件14，進液孔13上連接有第二導(dǎo)管連接件15，第一導(dǎo)管連接件14和第二導(dǎo)管連接件15粘接在薄片上I。導(dǎo)管連接件與薄片采用粘合劑，要求是不可對血液樣本產(chǎn)生任何影響，同時保證系統(tǒng)的密閉性，防止血液樣本泄露。薄片I的厚度為8mm或IOmm或12mm，凹槽11的深度為0.4mm或0.5mm或0.6mm,進液孔13和出液孔12的內(nèi)孔直徑為1.5mm或1.58mm或1.7mmη
權(quán)利要求1.一種用于篩選血液中稀有細胞的生物芯片，其特征在于包括具有凹槽的薄片和載玻片，薄片上的凹槽朝向載玻片并將薄片緊貼在所述的載玻片上，使薄片和載玻片之間形成一個密閉的微流體通道；所述的薄片上開設(shè)有連通所述的微流體通道的出液孔和進液孔。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于篩選血液中稀有細胞的生物芯片，其特征在于還包括由上外蓋和下外蓋合成的外殼，所述的薄片和載玻片位于所述的殼體內(nèi)，所述的上外蓋的內(nèi)側(cè)面緊壓在薄片的上表面，所述的下外蓋的內(nèi)側(cè)面緊壓在載玻片的下表面。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種用于篩選血液中稀有細胞的生物芯片，其特征在于所述的下外蓋開設(shè)有可嵌入磁性體的避空窗，所述的避空窗位于微流體通道的正下方。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種用于篩選血液中稀有細胞的生物芯片，其特征在于所述的薄片由透明材料制成，所述的上外蓋開設(shè)有可察看微流體通道內(nèi)液體流動的觀察窗。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于篩選血液中稀有細胞的生物芯片，其特征在于所述的出液孔上連接有第一導(dǎo)管連接件，所述的進液孔上連接有第二導(dǎo)管連接件，所述的第一導(dǎo)管連接件和第二導(dǎo)管連接件粘接在所述的薄片上。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于篩選血液中稀有細胞的生物芯片，其特征在于所述的薄片由聚二甲基硅氧烷或三元乙丙橡膠材料制成。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于篩選血液中稀有細胞的生物芯片，其特征在于微流體通道的橫截面為六邊形。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種用于篩選血液中稀有細胞的生物芯片，其特征在于上外蓋與下外蓋之間通過卡扣或合頁連接。
9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種用于篩選血液中稀有細胞的生物芯片，其特征在于所述的外殼采用PE或PP材料制成。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于篩選血液中稀有細胞的生物芯片，其特征在于所述的薄片的厚度為8-12mm,所述的凹槽的深度為0.4mm-0.6mm,所述的進液孔和出液孔的內(nèi)孔直徑為1.5mm-1.7mm。
專利摘要本實用新型公開了一種用于篩選血液中稀有細胞的生物芯片，包括具有凹槽的薄片和載玻片，薄片上的凹槽朝向載玻片并將薄片緊貼在載玻片上，使薄片和載玻片之間形成一個密閉的微流體通道；薄片上開設(shè)有連通微流體通道的出液孔和進液孔，其優(yōu)點是在血液樣本內(nèi)放入磁性納米粒子，磁性納米粒子表面帶有抗體，通過免疫反應(yīng)吸附在目標(biāo)細胞上，然后將稀有細胞已被標(biāo)記的血液樣本流經(jīng)微流體通道，血液樣本中的附著有磁性納米粒子的稀有細胞被放置于生物芯片下方的磁性體發(fā)出的梯度磁場引導(dǎo)，進而被采集在載玻片上，由于薄片與載玻片之間為可拆卸連接，等采集工作完成后，將載玻片與薄片分離，對載玻片上的稀有細胞進行后續(xù)分析。本實用新型結(jié)構(gòu)簡單，操作非常的方便。
文檔編號C12M1/00GK202912946SQ20122062210
公開日2013年5月1日 申請日期2012年11月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月20日
發(fā)明者張曉晶, 沈挺 申請人:寧波美晶醫(yī)療技術(shù)有限公司