用于雜草控制的方法和組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供用于增強(qiáng)雜草控制的新穎組合物。具體地說，本發(fā)明提供了調(diào)節(jié)雜草種類中的4-羥苯基-丙酮酸雙加氧酶的方法和組合物。本發(fā)明還提供了增強(qiáng)雜草控制的組合物與方法的組合。
【專利說明】用于雜草控制的方法和組合物
[0001]本申請(qǐng)依據(jù)35USC§ 119(e)要求2011年9月13日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)序列號(hào)61/534,066的權(quán)益，該案以引用的方式整體并入本文中。文件中所含的名為“40_21(58636)B seq listing, txt”的序列表為 400，732 個(gè)字節(jié)(在操作系統(tǒng) MS-Windows中測(cè)量)并且于2012年9月7日創(chuàng)建，與本案一起提交并以引用的方式并入本文中。
[0002]領(lǐng)域
[0003]本發(fā)明大體上涉及雜草管理領(lǐng)域。更具體地說，本發(fā)明涉及似雜草植物中的4-羥苯基-丙酮酸雙加氧酶基因以及含有供調(diào)節(jié)其表達(dá)的多核苷酸分子的組合物。本發(fā)明還提供了可用于雜草控制的方法和組合物。
[0004]背景
[0005]雜草是在農(nóng)藝環(huán)境中與耕種的植物競(jìng)爭(zhēng)的植物，并且農(nóng)場(chǎng)主每年在作物損失和控制雜草嘗試方面要花費(fèi)上億美元。雜草還充當(dāng)作物疾病和蟲害的宿主。在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)環(huán)境中由雜草引起的損失包括作物產(chǎn)量降低、作物質(zhì)量下降、灌溉成本增加、收割成本增加、土地價(jià)值降低、損傷牲畜以及由雜草攜帶的昆蟲和病害所引起的作物損害。雜草造成這些影響的主要手段有:1)與作物競(jìng)爭(zhēng)水、養(yǎng)分、陽(yáng)光以及供生長(zhǎng)和發(fā)育的其它必需要素；2)產(chǎn)生有毒或刺激性化學(xué)物質(zhì)，這些化學(xué)物質(zhì)引起了人類或動(dòng)物健康問題；3)產(chǎn)生極大量的種子或營(yíng)養(yǎng)繁殖部分或兩 者，從而污染了農(nóng)業(yè)產(chǎn)品并且使這些物種在農(nóng)業(yè)用地中長(zhǎng)期存在；以及4)在農(nóng)業(yè)和非農(nóng)業(yè)用地上產(chǎn)生大量必須除掉的植被。耐除草劑的雜草是幾乎所有正在使用的除草劑所面臨的一個(gè)問題，需要有效地管理這些雜草。目前有超過365種雜草生物型被除草劑抗性行動(dòng)委員會(huì)(Herbicide Resistance Action Committee,HRAC)、北美除草劑抗性行動(dòng)委員會(huì)(North American Herbicide Resistance Action Committee,NAHRAC)和美國(guó)治草科學(xué)學(xué)會(huì)(Weed Science Society of America, WSSA)鑒別為對(duì)一種或多種除草劑具有除草劑抗性。
[0006]4-羥苯基-丙酮酸雙加氧酶(HPPD)是一種含F(xiàn)e的酶，它催化酪氨酸分解代謝中的第二個(gè)反應(yīng)，即，將4-羥苯基丙酮酸轉(zhuǎn)化成高龍膽酸。這種酶是包括三酮類、異噁唑類及吡唑類化學(xué)品家族的成員在內(nèi)的許多除草劑的靶。
[0007]發(fā)明概述
[0008]在一個(gè)方面中，本發(fā)明提供一種似雜草植物的控制方法，該方法包括向似雜草植物外部施用一種包含多核苷酸和轉(zhuǎn)移劑的組合物，其中該多核苷酸與HPF1D基因序列或其片段，或與所述HPH)基因序列或其片段的RNA轉(zhuǎn)錄物基本上同一或基本上互補(bǔ)，其中所述HPPD基因序列選自SEQ ID NO:1_32或其多核苷酸片段，由此相對(duì)于未用所述組合物處理的似雜草植物，該似雜草植物生長(zhǎng)或發(fā)育或繁殖能力有所降低，或該似雜草植物對(duì)HPro抑制劑除草劑更敏感。以此方式，可以使已經(jīng)對(duì)施用含草甘膦(glyphosate)的除草劑產(chǎn)生抗性的植物更易于受含草甘膦的除草劑的除草作用影響，由此加強(qiáng)該除草劑的作用。該多核苷酸片段為至少18個(gè)連續(xù)核苷酸、至少19個(gè)連續(xù)核苷酸、至少20個(gè)連續(xù)核苷酸或至少21個(gè)連續(xù)核苷酸長(zhǎng)度并且與選自SEQ ID NO:1-32的HPH)基因序列至少85%同一，并且該轉(zhuǎn)移劑是一種有機(jī)硅酮組合物或化合物。該多核苷酸片段還可以是有義或反義ssDNA或ssRNA、dsRNA或dsDNA，或dsDNA/RNA雜交體。該組合物可以包括超過一個(gè)多核苷酸片段，并且該組合物可以包括HPH)抑制劑除草劑和/或增強(qiáng)該組合物的雜草控制活性的其它除草劑。
[0009]在本發(fā)明的另一個(gè)方面中，提供了用于調(diào)節(jié)似雜草植物物種中HPro基因表達(dá)的多核苷酸分子和方法。該方法降低、阻遏或以其它方式延遲植物中HPro基因的表達(dá)，包括向似雜草植物外部施用一種包含多核苷酸和轉(zhuǎn)移劑的組合物，其中該多核苷酸與HPro基因序列或其片段，或與該HPro基因序列或其片段的RNA轉(zhuǎn)錄物基本上同一或基本上互補(bǔ)，其中該HPro基因序列選自SEQ ID NO:1-32或其多核苷酸片段。該多核苷酸片段為至少18個(gè)連續(xù)核苷酸、至少19個(gè)連續(xù)核苷酸、至少20個(gè)連續(xù)核苷酸或至少21個(gè)連續(xù)核苷酸長(zhǎng)度并且與選自SEQ ID NO:1-32的HPH)基因序列至少85%同一，并且該轉(zhuǎn)移劑是一種有機(jī)硅酮化合物。該多核苷酸片段還可以是有義或反義ssDNA或ssRNA、dsRNA或dsDNA，或dsDNA/RNA雜交體。
[0010]在本發(fā)明的又一方面中，本發(fā)明的包含多核苷酸分子的組合物可以與其它除草用化合物(共除草劑)組合以提供對(duì)于耕種植物的田地中不想要的植物的額外控制。
[0011]在又一方面中，該多核苷酸分子組合物可以與任一種或多種其它的農(nóng)用化學(xué)品組合，以形成多組分殺蟲劑，從而得到甚至更廣譜的農(nóng)業(yè)保護(hù)，這些農(nóng)用化學(xué)品諸如為殺昆蟲劑、殺真菌劑、殺線蟲劑、殺細(xì)菌劑、殺螨劑、生長(zhǎng)調(diào)控劑、化學(xué)絕育劑、化學(xué)信息素、驅(qū)避劑、引誘劑、信息素、取食刺激劑、生物殺蟲劑、微生物殺蟲劑或其它生物活性化合物。
[0012]附圖簡(jiǎn)述
[0013]以下附圖形成了本說明書的一部分并且被包括用來進(jìn)一步說明本發(fā)明的某些方面。通過參照一個(gè)或多個(gè)附圖并結(jié)合本文所呈現(xiàn)的具體實(shí)施方案的詳細(xì)說明，可以更好地理解本發(fā)明。由以下【專利附圖】

【附圖說明】，可以更完整地理解本發(fā)明:
[0014]圖1.用ssDNA觸發(fā)多核苷酸(trigger polynucleotide)和HPF1D抑制劑除草劑硝橫草酮(Mesotrione)處理長(zhǎng)芒覓(Amaranthuspalmeri)植物。
[0015]發(fā)明詳述
[0016]本發(fā)明提供了調(diào)控、阻遏或延遲HPro (4-羥苯基-丙酮酸雙加氧酶)基因表達(dá)并且增強(qiáng)對(duì)似雜草植物物種和重要的是HPro抑制劑除草劑抗性雜草生物型的控制的方法和含多核苷酸的組合物。該方法的各個(gè)方面可以用于管理農(nóng)藝和其它耕種環(huán)境中的各種似雜草植物。
[0017]提供以下定義和方法以更好地定義本發(fā)明并且指導(dǎo)本領(lǐng)域技術(shù)人員實(shí)踐本發(fā)明。除非另作注釋，否則各術(shù)語應(yīng)根據(jù)相關(guān)領(lǐng)域技術(shù)人員的常規(guī)用法來理解。在一個(gè)術(shù)語以單數(shù)形式提供的情況下，本發(fā)明人也預(yù)期由該術(shù)語的復(fù)數(shù)形式所描述的本發(fā)明的各個(gè)方面。
[0018]“不可轉(zhuǎn)錄的”多核苷酸意思指，這些多核苷酸不包含完整的聚合酶II轉(zhuǎn)錄單元。
[0019]如本文所使用，“溶液”是指均勻混合物和不均勻混合物，諸如懸浮液、膠體、膠束及乳液。
[0020]似雜草植物是與耕種的植物競(jìng)爭(zhēng)的植物，特別重要的那些包括但不限于，作物生產(chǎn)中的重要入侵性和有害的雜草及除草劑抗性生物型，諸如莧屬物種(Amaranthu sspecies)-白覓(A.albus)、北美覓(A.blitoides)、綠穗覓(A.hybridus)、長(zhǎng)芒覓(A.palmeri)、鮑威氏覓(A.powellii)、反枝覓(A.retroflexus)、刺覓(A.spinosus)、糙果覓(A.tuberculatus)及皺果覓(A.viridis);豚草屬物種(Ambrosia species)-三裂葉豚草(A.trifida)、美洲豚草(A.artemisifolia);黑麥草屬物種(Lolium species)-多花黑麥草(L.multiflorum)、硬直黑麥草(L.rigidium)、多年生黑麥草(L.perenne);馬唐屬物種(Digitaria species)-兩耳草(D.1nsularis);大戟屬物種(Euphorbia species)-白荀猩猩草(E.heterophylla);地膚屬物種(Kochia species)-掃帚草(K.scoparia);高梁屬(Sorghum species)-約翰遜草(S.halepense);白酒草屬(Conyza species)-香絲草(C.bonariensis)、小蓬草(C.canadensis)、蘇門白酒草(C.sumatrensis)；虎尾草屬物種(Chloris species)-截頭虎尾草(C.truncate);稗草屬物種(Echinocholaspecies)-光頭稗(E.colona)、大骨草(E.crus-galli);穆屬物種(Eleusine species)-牛筋草(E.1ndica);早熟禾屬物種(Poa species)-—年生早熟禾(P.annua);車前屬物種(Plantago species)-長(zhǎng)葉車前草(P.1anceolata);燕麥屬物種(Avena species)-野燕麥(A.fatua);藜草屬物種(Chenopodium species)-灰蓼頭草(C.album);狗尾草屬物種(Setaria species)-灰藜(S.viridis)、苘麻(Abutilon theophrasti)、番薯屬物種(Ipomoea species)、田菁屬物種(Sesbania species)、決明屬物種(Cassia species)、黃花穩(wěn)屬物種(Sida species)、臂形草屬物種(Brachiaria species)及煎屬物種(Solanumspecies)。
[0021] 耕種區(qū)中所見的其它似雜草植物物種包括大穗看麥娘(Alopecurusmyosuroides)、不實(shí)燕麥(Avena sterilis)、長(zhǎng)穎燕麥(Avena sterilis Iudoviciana)、車前臂形草(Brachiaria plantaginea)、雙雄雀麥(Bromus diandrus)、硬雀麥(Bromusrigidus)、洋狗尾草(Cynosurus echinatus)、升馬唐(Digitaria ciliaris)、止血馬唐(Digitaria ischaemum)、馬唐(Digitaria sanguinalis)、稻稗(Echinochloaoryzicola)、水稗 (Echinochloa phyllopogon)、路易斯安納野黍(Eriochloa punctata)、大麥草(Hordeum glaucum)、墻大麥(Hordeum Ieporinum)、田間鴨嘴草(Ischaemumrugosum)、千金子(Leptochloa chinensis)、歐黑麥草(Lolium persicum)、小藹草(Phalaris minor)、變形藹草(Phalaris paradoxa)、筒軸茅(Rottboellia exalta)、大狗尾草(Setaria faberi)、巨狗尾草(Setaria viridis va r robusta-alba schreiber)、狗尾草變種(Setaria viridis var robusta-purpurea)、Snowdenia polystachea、蘇丹高梁(Sorghum sudanese)、澤 ?寫(Alisma plantago-aquatica)、凹頭覓(Amaranthuslividus)、青覓(Amaranthus quitensis)、耳基水覓(Ammania auriculata)、紅花水覓(Ammania coccinea)、臭春黃菊(Anthemis cotula)、阿披拉草(Apera spica-venti)、圓葉虎耳(Bacopa rotundifolia)、三葉鬼針草(Bidens pilosa)、Bidens subaltemans、非洲芥末(Brassica toumefortii)、旱雀麥(Bromus tectorum)、小果亞麻莽(Camelinamicrocarpa)、茼蒿(Chrysanthemum coronarium)、田野寬絲子(Cuscuta campestris)、異型莎草(Cyperus difformis)、Damasonium minus、播娘嵩(Descurainia sophia)、細(xì)葉二行芥(Diplotaxis tenuifolia)、車前葉藍(lán)薊(Echium plantagineum)、三蕊溝繁縷(Elatine triandra var pedicellata)、白荀猩猩草、卷莖蓼(Fallopia convolvulus)、水風(fēng)草(Fimbristylis miliacea)、鼠由辧花(Galeopsis tetrahit)、鋸鋸藤(Galiumspurium)、向日葵(Helianthus annuus)、假蒼耳(Iva xanthifolia)、單剛毛狗尾草(Ixophorus unisetus)、變色牽牛(Ipomoea indica)、圓葉牽牛(Ipomoea purpurea)、毛莖墓(Ipomoea sepiaria)、雍菜(Ipomoea aquatic)、三裂葉墓(Ipomoea triloba)、毒萬苣(Lactuca serriola)、黃花域葉草(Limnocharis flava)、直立石龍尾(Limnophilaerecta)、無柄花石龍尾(Limnophila sessilif1ra)、美洲母草(Lindemia dubia)、美洲母草主變種(Lindernia dubia var major)、狹葉母草(Lindemia micrantha)、陌上草(Lindemia procumbens)、冰葉曰中花(Mesembryanthemum crystalIinum)、雨久花(Monochoria korsakowii)、甲鳥舌草(Monochoria vaginalis)、球果芥(Nesliapaniculata)、虞美人(Papaver rhoeas)、銀膠菊(Parthenium hysterophorus)、Pentziasuffruticosa、小子藹草(Phalaris minor)、野蘿卜(Raphanus raphanistrum)、秋冬蘿卜(Raphanus sativus)、皺果莽(Rapistrum rugosum)、印度節(jié)節(jié)菜原變種(Rotalaindica var uliginosa)、冠果草(Sagittaria guyanensis)、蒙特登慈姑(Sagittariamontevidensis)、矮慈姑(Sagittaria pygmaea)、俄國(guó)大薊(Salsola iberica)、螢藺歐萬斯變種(Scirpus juncoides var ohwianus)、北水毛花(Scirpus mucronatus)、金色狗尾草(Setaria Iutescens)、剌金午時(shí)花(Sida spinosa)、野芥(Sinapis arvensis)、戟葉柿娘蒿(Sisymbrium orientale)、大蒜芥(Sisymbrium thellungii)、東方龍葵(Solanum ptycanthum)、花葉潰苦菜(Sonchus asper)、苦苣菜(Sonchus oleraceus)、甜高梁(Sorghum bicolor)、繁縷(Stellaria media)、薪蓂(Thlaspi arvense)、蒼耳(Xanthiumstrumarium)、南非金蓋草(Arctotheca calendula)、蘇門白酒草、革命菜(Crassocephalumcrepidiodes)、萼距花(Cuphea carthagenenis)、 Epilobium adenocaulon、費(fèi)城飛蓮(Erigeron philadelphicus)、紫萍(Landoltia punctata)、北美獨(dú)行菜(Lepidiumvirginicum)、雨久花(Monochoria korsakowii)、少花龍葵(Solanum americanum)、龍葵(Solanum nigrum)、歐洲?？怂固栄蛎?Vulpia bromoides)、黃鶴菜(Youngiajaponica)、下輪葉黑藻(Hydrilla vert ici I lata)、垂花飛廉(Carduus nutans)、意大利薊(Carduus pycnocephalus)、黃星薊(Centaurea solstitialis)、絲路薊(Cirsiumarvense)、節(jié)節(jié)草(Commelina diffusa)、田方定花(Convolvulus arvensi S)、野古月蘿卜(Daucus carota)、止血馬唐、孔雀稗(Echinochloa crus-pavonis)、水風(fēng)草、鼠由辧花、鋸鋸藤、直立石龍尾、淡甘菊(Matricaria perforate)、虞美人、烏頭葉毛茛(Ranunculusacris)、翅果假吐 金菊(Soliva sessilis)、尖辧花(Sphenoclea zeylanica)、繁縷、三叉針茅(Nassella trichotoma)、智利針草(Stipa neesiana)、匍匍翦股穎(Agrostisstolonifera)、扁蓄蓼(Polygonum aviculare)、日本看麥娘(Alopecurus japonicus)、茼草(Beckmannia syzigachne)、旱雀麥、孟仁草(Chloris inflate) Λ Echinochloa erecta、馬齒覓(Portulaca oleracea)及歐洲千里光(Senecio vulgaris)。據(jù)信，所有植物在其基因組中都含有八氫番茄紅素脫氫酶基因，其序列可以被分離出來，并且根據(jù)本發(fā)明的方法制造出可用于調(diào)控、抑制或延遲這些植物中靶HPH)基因的表達(dá)以及經(jīng)過處理的植物的生長(zhǎng)或發(fā)育的多核苷酸。
[0022]耕種的植物當(dāng)出現(xiàn)在不想要的環(huán)境中時(shí)也可以被視為似雜草植物。舉例來說，生長(zhǎng)在大豆田中的玉米植物。具有一種或多種除草劑耐藥性的轉(zhuǎn)基因作物將需要專門的管理方法來控制雜草和自生作物。本發(fā)明能夠靶向針對(duì)除草劑耐藥性的轉(zhuǎn)基因，從而使經(jīng)過處理的植物變得對(duì)該除草劑敏感。舉例來說，在包括FG72的轉(zhuǎn)基因事件中的轉(zhuǎn)基因HPH) DNA序列。[0023]“觸發(fā)因子”或“觸發(fā)多核苷酸”是與靶基因多核苷酸同源或互補(bǔ)的多核苷酸分子。這些觸發(fā)多核苷酸分子當(dāng)與轉(zhuǎn)移劑一起局部施用到植物表面時(shí)，將調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)，由此相對(duì)于未用含觸發(fā)因子分子的組合物處理的植物，用所述組合物處理的植物的生長(zhǎng)或發(fā)育或繁殖能力得到調(diào)控、抑制或延遲，或所述植物因所述含多核苷酸的組合物而對(duì)EPSPS抑制劑除草劑更敏感。本文中所披露的觸發(fā)多核苷酸一般是結(jié)合靶基因序列進(jìn)行描述，并且取決于所靶向的基因的各種區(qū)域，這些多核苷酸可以作為單鏈分子按有義(同源)或反義(互補(bǔ))取向使用，或包含兩條鏈作為雙鏈分子或其核苷酸變體及修飾的核苷酸。
[0024]預(yù)期本發(fā)明的組合物將含有多種多核苷酸和除草劑，包括但不限于，HPro基因觸發(fā)多核苷酸和HPro抑制劑除草劑以及任一種或多種其它除草劑靶基因觸發(fā)多核苷酸和相關(guān)除草劑，及任一種或多種其它必需基因觸發(fā)多核苷酸。必需基因是植物中提供有機(jī)體或細(xì)胞生長(zhǎng)或存活必需的或者植物正常生長(zhǎng)和發(fā)育所涉及的關(guān)鍵酶或其它蛋白質(zhì)的基因，例如生物合成酶、代謝酶、受體、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白、結(jié)構(gòu)基因產(chǎn)物、轉(zhuǎn)錄因子或轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白；或調(diào)控性 RNA，諸如微 RNA 的基因(Meinke 等，Trends Plant Sc1.2008 年 9 月；13(9):483-91)。抑制必需基因使除草劑影響不同于受抑制的必需基因的基因產(chǎn)物的功能的作用增強(qiáng)。本發(fā)明的組合物可以包括各種調(diào)節(jié)除HPPD外的必需基因的表達(dá)的觸發(fā)多核苷酸。
[0025]針對(duì)植物耐藥性的轉(zhuǎn)基因已經(jīng)得到證實(shí)并且可以應(yīng)用該方法的除草劑包括但不限于:類生長(zhǎng)素除草劑、草甘膦、草銨膦(glufosinate)、磺酰脲類、咪唑啉酮類、溴苯腈(bromoxynil)、茅草枯(delapon)、麥草畏(dicamba)、環(huán)己二酮(cyclohezanedione)、原口卜啉原氧化酶抑制劑類(protoporphyrionogen oxidase inhibitors)、4_輕苯基-丙酮酸雙加氧酶抑制劑類除草劑。舉例來說，編碼除草劑耐藥性中所涉及的蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)基因及其多核苷酸分子是本領(lǐng)域已知的，并且包括但不限于，5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)，例如，更完整地描述于美國(guó)專利號(hào)7，807，791 (SEQ ID NO:5)、6，248，876B1、5，627，061,5, 804，4 25,5, 633，435,5, 145，783,4, 971，908,5, 312，910,5, 188，642、4，940，835,5, 866，775,6, 225，114BU6, 130，366,5, 310，667,4, 535，060,4, 769，061、5，633，448,5, 510，471 ;美國(guó)專利號(hào) Re.36，449 ;美國(guó)專利號(hào) RE37, 287E 及 5，491，288中；對(duì)磺酰脲和/或咪唑啉酮的耐藥性，例如，更完整地描述于美國(guó)專利號(hào)5，6 O 5，011、5，013，659,5, 141，870,5, 767，361,5, 731，180,5, 304，732,4, 761，373,5, 331，107、5，928，937及5，378, 824 ;及國(guó)際公布W096/33270中；植物中對(duì)于羥苯基丙酮酸雙加氧酶抑制性除草劑的耐藥性描述于美國(guó)專利號(hào)6，245，968BU6, 268，549及6，069，115 -M國(guó)專利公布 20110191897 及 US7, 312，379SEQ ID NO:3 ；US7, 935, 869 ；US7, 304, 209, SEQID N0:l、3、5及15中；芳氧基鏈烷酸酯雙加氧酶多核苷酸，其賦予對(duì)2，4_D和其它苯氧基生長(zhǎng)素除草劑，以及對(duì)芳氧基苯氧基丙酸酯除草劑的耐藥性，如例如W02005/107437 ；US7, 838，733SEQ ID NO:5中所描述的；及耐麥草畏的多核苷酸，如例如Herman等(2005)J.Biol.Chem.280 =24759-24767中所描述的。耐除草劑性狀的其它實(shí)例包括由編碼外源膦絲菌素乙酰轉(zhuǎn)移酶的多核苷酸所賦予的那些，如美國(guó)專利號(hào)5，969，213,5, 489，520、5，550，318,5, 874，265,5, 919，675,5, 561，236,5, 648，477,5, 646，024,6, 177，616 及5，879，903中所描述。含有外源膦絲菌素乙酰轉(zhuǎn)移酶的植物可以對(duì)抑制谷氨酰胺合成酶的草銨膦除草劑展現(xiàn)出改善的耐藥性。此外，耐除草劑多核苷酸包括由賦予改變的原卟啉原氧化酶(protox)活性的多核苷酸所賦予的那些，如美國(guó)專利號(hào)6，288，306BU6, 282，837B1及5，767，373 ;以及W001/12825中所描述。含有這些多核苷酸的植物對(duì)于靶向protox酶的多種除草劑(又稱為protox抑制劑)中的任一種可以展現(xiàn)出改善的耐藥性。編碼草甘膦氧化還原酶和草甘膦-N-乙酰轉(zhuǎn)移酶的多核苷酸(GOX描述于美國(guó)專利5，463，175中并且GAT描述于美國(guó)專利公布20030083480中；麥草畏單加氧酶，美國(guó)專利公布20030135879，全部以引用的方式并入本文中)；編碼溴苯腈腈水解酶的多核苷酸分子(Bxn描述于美國(guó)專利號(hào)4，810，648，以引用的方式并入本文中；針對(duì)溴苯腈耐藥性)；編碼八氫番茄紅素脫氫酶的多核苷酸分子(crrl)(描述于Misawa等(1993)Plant J.4:833-840和Misawa等(1994)Plant J.6:481-489中；針對(duì)達(dá)草滅(norfIurazon)耐藥性)；編碼乙酰乳酸合成酶的多核苷酸分子(AHAS,也稱為 ALS)(描述于 Sathasiivan 等(1990) Nucl.Acids Res.18:318-2193中；針對(duì)磺酰脲除草劑耐藥性)；&bar基因(描述于DeBlock等(1987)EMBOJ.6 =2513-2519中；針對(duì)草銨膦和雙丙氨磷(bialaphos)耐藥性)。耐除草劑基因的轉(zhuǎn)基因編碼區(qū)和調(diào)控元件是可包括在本發(fā)明組合物中的多核苷酸觸發(fā)因子和除草劑的靶。
[0026]本發(fā)明的組合物包括作為HPro抑制劑除草劑的一種組分，該除草劑包括但不限于，三酮類，諸如硝磺草酮、特糠酯酮(tefuryltrione)、環(huán)磺酮(tembotrione)及磺草酮；異噁唑類，諸如異噁氯草酮、磺酰草吡唑及異噁唑草酮；吡唑類，諸如吡草酮、芐草唑、苯吡唑草酮及芐草唑。其它HPH)抑制劑包括苯并雙環(huán)酮及二環(huán)吡草酮。
[0027]許多具有類似或不同作用模式的可用除草劑(本文中稱為共除草劑)可以添加到該組合物中，例如包括但不限于以下的除草劑家族成員:酰胺除草劑類、芳香酸除草劑類、含砷除草劑類、苯并噻唑除草劑類、苯甲?；h(huán)己二酮除草劑類、烷基磺酸苯并呋喃基酯除草劑類、氨基甲酸酯除草劑類、環(huán)己烯肟除草劑類、環(huán)丙基異噁唑除草劑類、二甲酰亞胺除草劑類、二硝基苯胺除草劑類、二硝基苯酚除草劑類、二苯基醚除草劑類、二硫代氨基甲酸酯除草劑類、鹵代脂肪烴除草劑類、咪唑啉酮除草劑類、無機(jī)除草劑類、腈除草劑類、有機(jī)磷除草劑類、噁二唑酮除草劑類、噁唑除草劑類、苯氧基除草劑類、苯二胺除草劑類、吡唑除草劑類、噠嗪除草劑類、噠嗪酮除草劑類、吡啶除草劑類、嘧啶二胺除草劑類、嘧啶氧基苯甲胺除草劑類、季銨除草劑類、硫代氨基甲酸酯除草劑類、硫代碳酸酯除草劑類、硫脲除草劑類、三嗪除草劑類、三嗪酮除草劑類、三唑除草劑類、三唑酮除草劑類、三唑并嘧啶除草劑類、尿嘧啶除草劑類及脲除草劑類。具體地說，可以使本發(fā)明的包含多核苷酸的組合物中添加的除草劑的使用量降低。另外添加的除草劑的使用量可以降低10% -25%、26% -50%,51% -75%或更多，并且這些可增強(qiáng)多核苷酸與除草劑的組合物的活性的除草劑涵蓋在本文中。這些家族的代表性除草劑包括但不限于，乙草胺(acetochlor)、氟鎖草醚(acifiuorfen)、氟羧草醚鈉(acifluorfen-sodium)、苯草醚(aclonifen)、丙烯醒(acrolein)、草不綠(alachlor)、禾草滅(alloxydim)、烯丙醇、莠滅凈(ametryn)、氨唑草酮(amicarbazone)、氨基嘧橫隆(amidosulfuron)、氯氨吡唳酸(aminopyralid)、氨基三唑(amitrole)、橫胺酸銨(ammonium sulfamate)、莎稗憐(anilofos)、黃草靈(asulam)、阿特拉通(atraton)、阿特拉津(atrazine)、四唑嘧磺隆(azimsulfuron)、BCPC、氟丁酰草胺(beflubutamid)、草除靈(benazolin)、氟草胺(benfIuralin)、呋草黃(benluresate)、節(jié)11密橫隆(bensulfuron)、甲基節(jié)嘧橫隆(bensulfuron-methyl)、地散憐(bensulide)、噻草平(bentazone)、雙苯嘧草麗、苯并雙環(huán)麗(benzobicyclon)、吡草麗(benzofenap)、治草醚、雙丙氨憐(bilanafos)、雙草醚(bispyribac)、雙草醚鈉(bispyribac-sodium)、硼砂(borax)、除草定(bromacil)、溴丁酰草胺(bromobutide)、溴苯腈、去草胺(butachlor)、布芬草、抑草磷(butamifos)、地樂胺(butralin)、丁苯草酮(butroxydim)、丁草敵(butylate)、二甲胂酸(cacodylic acid)、氯酸?丐、唑草胺(cafenstrole)、長(zhǎng)殺草(carbetamide)、唑草酮(carfentrazone)、唑酮草酯、CDEA、CEPC、整形醇(chlorfIurenol)、整形素(chlorflurenol-methyl)、殺草敏(chloridazon)、氯啼橫隆(chlorimuron)、乙基氯啼橫隆(chlorimuron-ethyl)、氯醋酸(chloroacetic acid)、綠麥隆(chlorotoluron)、氯苯胺靈(chlorpropham)、綠黃隆(chlorsulfuron)、敵草索(chlorthal)、氯酞酸二甲酯(chlorthal-dimethyl)、吲哚酮草酯、環(huán)庚草醚(cinmethyl in)、西速隆(cinosulfuron)、落草胺(cisanilide)、烯草酮(clethodim)、炔草酸(clodinafop)、炔草酯(clodinafop-propargyI)、異草酮(clomazone)、稗草胺(clomeprop)、二氯吡卩定酸(clopyralid)、氯酯橫草胺(cloransulam)、氯甲酯橫草胺(cloransulam-methyl)、CM、4-CPB、CPMF、4_CPP、CPPCΛ 甲酯、節(jié)草隆(cumyluron)、氨腈(cyanamide)、氰乙酰肼(cyanazine)、草滅特(cycloate)、環(huán)丙啼橫隆(cyclosulfamuron)、噻草酮(cycloxydim)、氰氟草酸(cyhalofop)、氰氟草酯(cyhalofop-butyl)、2，4_D、3，4-DA、殺草隆(daimuro)、茅草枯(dalapon)、棉隆(dazomet)、2，4_DB、3，4_DB、2，4-DEB、甜菜安(desmedipham)、麥草畏、敵草臆(dichlobenil)、鄰二氯苯(ortho-dichlorobenzen)、對(duì)二氯苯(para-dichlorobenzene)、滴丙酸(dichlorprop)、滴丙酸-P (dichlorprop-P)、禾草靈(diclofop)、甲基禾草靈(diclofop-methyl)、雙氯磺草胺(diclosulam)、燕麥枯(difenzoquat)、野燕枯甲基硫酸酯(difenzoquat metilsulfate)、吡氟草胺(dif Iufenican)、二氟吡隆(dif Iufenzopyr)、惡唑隆(dimefuron)、哌草丹(dimepiperate)、二甲草胺(dimethachlor)、異戊乙凈( dimethametryn)、二甲吩草胺(dimethenamid)、二甲吩草胺-P(dimethenamid-P)、噻節(jié)因(dimethipin)、二甲基砷酸(dimethylarsinic acid)、敵樂安(dinitramine)、特樂酌.(dinoterb)、草乃敵(diphenamid)、殺草快(diquat)、二溴敵草快(diquat dibromide)、氟硫草定(dithiopyr)、敵草隆(diuron)、DN0C、3，4_DP、DSMA、EBEP、草多索(endothal)、EPTC、禾草畏(esprocarb)、丁氟消草(ethalfIuralin)、胺苯橫隆(ethametsulfuron)、甲基胺苯橫隆(ethametsulfuron-methyl)、乙呋草黃(ethofumesate)、氯氟草醚(ethoxyfen)、乙氧啼橫隆(ethoxysulfuron)、乙氧苯草胺(etobenzanid)、精惡唑禾草靈(fenoxaprop-P)、乙基精惡唑禾草靈(fenoxaprop-P-ethyl)、四唑草胺(fentrazamide)、硫酸亞鐵、麥草伏甲酯(f Iamprop-M)、卩定啼磺隆(f Iazasulfuron)、雙氟磺草胺(f 1rasulam)、吡氟禾草靈(fluazifop)、丁基吡氟禾草靈(fluazifop-butyl)、精吡氟禾草靈(fluazifop-P)、丁基精批氟禾草靈(fluazifop-P-butyl)、氟酮磺隆(fIucarbazone)、氟酮磺隆鈉(flucarbazone-sodium)、氟批橫隆(flucetosulfuron)、氯乙氟靈(fIuchloralin)、氟噻草胺(flufenacet)、氟_嗪草酮(flufenpyr)、氟_嗪草酯(f lufenpyr-ethyl)、唑啼磺草胺(flumetsulam)、氟烯草酸(f lumiclorac)、氟烯草酸戊酯、丙炔氟草胺、伏草隆(f Iuometuron)、乙羧氟草醚、乙羧氟草醚乙酯、氟丙酸(f Iupropanate)、吡羧啼磺隆(f Iupyrsulfuron)、氟唳啼磺隆鈉(f lupyrsulfuron-methyΙ-sodium)、抑草丁(fIurenol)、氟卩定酮(fIuridone)、氟咯草酮(fIuorochloridone)、氟草煙(fIuoroxypyr)、呋草酮(fIurtamone)、氟螨嗪(fluthiacet)、氟噻甲草酯、氟磺胺草醚(fomesafen)、甲酰胺磺隆(foramsulfuron)、調(diào)節(jié)膦(fosamine)、草銨膦(glufosinate)、草銨膦銨鹽(glufosinate-ammonium)、草甘膦、氯吡啼磺隆(halosulfuron)、甲基氯吡啼磺隆(halosulfuron-methyl)、氟批甲禾靈(haloxyfop)、氟批甲禾靈-P (haloxyfop-P)、HC-252、環(huán)嗪酮(hexazinone)、咪草酸(imazamethabenz)、咪草酸甲酯(imazamethabenz-methyl)、甲氧咪草煙(imazamox)、甲咪唑煙酸(imazapic)、滅草煙(imazapyr)、咪唑喹啉酸(imazaquin)、咪草煙(imazethapyr)、唑礎(chǔ)啼橫隆(imazosulfuron)、節(jié)草酮(indanofan)、碘甲焼、碘甲磺隆、碘甲磺隆鈉鹽(iodosulfuron-methyΙ-sodium)、碘苯臆(ioxynil)、異丙隆(isoproturon)、異惡隆(isouron)、異惡酰草胺(isoxaben)、異噁氯草酮(isoxachlortole)、異噁唑草酮(isoxafIutole)、特胺靈(karbutilate)、乳氟禾草靈(Iactofen)、環(huán)草唳(Ienacil)^lJS隆(Iinuron)、MAA、MAMA、MCPAΛ MCPA-硫代乙酯、MCPB、氯苯氧丙酸(mecoprop)、氯苯氧丙酸-P (mecoprop-P)、苯噻酰草胺(mefenacet)、氟草磺(mef Iuidide)、甲磺胺磺隆(mesosulfuron)、甲基甲橫胺橫隆(mesosulfuron-methyl)、硝橫草酮(mesotrione)、威百畝(metam)、惡唑酸草胺(metamifop)、苯嗪草酮(metamitron)、吡唑草胺(metazachlor)、甲基苯噻隆(methabenzthiazuron)、甲基砷酸、甲基殺草隆(methyldymron)、異硫氰酸甲酯、甲氧苯草隆(metobenzuron)、異丙甲草胺(metolachlor)、精異丙甲草胺(S-metolachlor)、橫草唑胺(metosulam)、甲氧隆(metoxuron)、嗪草酮(metribuzin)、甲橫隆(metsulfuron)、甲基甲橫隆(metsulfuron-methyl)、MK_66、草達(dá)滅(molinate)、綠谷隆(monoIinuron) Λ MSMAΛ 萘丙胺(naproanilide)、敵草胺(napropamide)、抑草生(naptalam)、草不隆(neburon)、煙啼磺隆(nicosulfuron)、壬酸、達(dá)草滅、油酸(脂肪酸)、坪草丹(orbencarb)、甲啼卩定橫隆(orthosulfamuron)、黃草消(oryzalin)、丙塊惡草酮、惡草靈、環(huán)氧啼磺隆(oxasulfuron)、惡嗪草酮(oxaziclomefone)、乙氧氟草醚、百草枯(paraquat)、百草枯二氯化物(paraquat dichloride)、克草猛(pebulate)、二甲戊樂靈(pendimethalin)、五氟磺草胺(penoxsulam)、五氯酷(pentachlorophenol)、甲氯酰草胺(pentanochlor)、環(huán)戊惡草酮、烯草胺(pethoxamid)、石油油料(petrolium oils)、苯敵草(phenmedipham)、乙基甜菜寧(phenmedipham-ethyl)、毒養(yǎng)定(picloram)、氣吡酸草胺(picolinafen)、唑啉草酯(pinoxaden)、派草磷(piperophos)、亞砷酸鉀、疊氮化鉀、丙草胺(pretilachl or)、氟啼橫隆(primisulfuron)、甲基氟啼橫隆(primisulfuron-methyl)、氨基丙樂靈(prodiamine)、氟唑草胺、環(huán)苯草酮(profoxydim)、撲滅通(prometon)、撲草凈(prometryn)、毒草安(propachlor)、敵草索(propanil)、喔草酯(propaquizafop)、撲滅津(propazine)、苯胺靈(propham)、異丙草胺(propisochlor)、丙苯磺隆(propoxycarbazone)、丙苯橫隆鈉(propoxycarbazone-sodium)、塊苯酸草胺(propyzamide)、節(jié)草丹(prosulfocarb)、氟橫隆(prosulfuron)、雙唑草臆(pyraclonil)、哌芬草(pyraflufen)、吡草醚(pyraflufen-ethyl)、吡唑特(pyrazolynate)、吡啼橫隆(pyrazosulfuron)、乙基批啼橫隆(pyrazosulfuron-ethyl)、節(jié)草唑(pyrazoxyfen)、啼唳月虧草醚(pyribenzoxim)、稗草丹(pyributicarb)、草醇(pyridafol)、草特(pyridate)、環(huán)酯草醚(pyriftalid)、啼草醚(pyriminobac)、甲基啼草醚(pyriminobac-methyl)、批啼沙泛(pyrimisulfan)、啼硫苯甲酸(pyrithiobac)、啼硫苯甲酸鈉(pyrithiobac-sodium)、二氯喹啉酸(quinclorac)、氯甲喹啉酸(quinmerac)、滅藻醌(quinoclamine)、喹禾靈(quizalofop)、喹禾靈-P(quizalofop-P)、諷嘧橫隆(rimsulfuron)、稀禾定(sethoxydim)、環(huán)草隆(siduron)、西瑪津(simazine)、西草凈(simetryn)、SMA、亞砷酸鈉、疊氮化鈉、氯酸鈉、石黃草酮(sulcotrione)、甲磺草胺(sulfentrazone)、甲嘧橫隆(suIfometuron)、甲基甲嘧橫隆(sulfometuron-methyl)、草硫膦(sulfosate)、磺?；锹?sulfosulfuron)、硫酸、煤焦油、2, 3,6-TBA、TCA、三氯醋酸鈉(TCA-sodium)、特丁隆(tebuthiuron)、吡喃草酮(tepraloxydim)、特草定(terbacil)、特丁通(terbumeton)、特丁津(terbuthyIazine)、特丁凈(terbutryn)、噻吩草胺(thenylchlor)、噻草唆(thiazopyr)、噻吩石黃隆(thifensulfuron)、甲基噻吩橫隆(thifensulfuron-methyl)、禾草丹(thiobencarb)、仲草丹(tiocarbazil)、苯批唑草酮(topramezone)、三甲苯草酮(tralkoxydim)、野麥畏(tr1-allate)、醚苯橫隆(triasulfuron)、三嗪氟草胺(triaziflam)、苯橫隆(tribenuron)、甲基苯橫隆(tribenuron-methyl)、殺草畏(tricamba)、綠草定(triclopyr)、草達(dá)津(trietazine)、三氟唳磺隆(trif 1xysulfuron)、三氟唳磺隆鈉(trif loxysulfuron-sodium)、氟樂靈(trifluralin)、氟胺橫隆(triflusulfuron)、甲基氟胺橫隆(triflusulfuron-methyl)、三輕嗪(trihydroxytriazine)、三氟甲磺隆(tritosulfuron) > [3-[2-氯-4-氟-5-(-甲基_6_ 二氣甲基-2,4- 二氧代-,2,3,4-四氧嘧唳-3-基)苯氧基]-2-吡唳氧基]乙酸乙酯(CAS 1^353292-3-6)、4-[(4，5-二氫-3-甲氧基-4-甲基-5-氧代)-!1-，2，4-三唑-基羰基-氨磺?；鵠-5-甲基噻吩-3-甲酸(BAY636)、BAY747 (CAS RN33504-84-2)、苯吡唑草酮(CAS RN2063-68-8)、4-羥基-3-[[2-[(2-甲氧基乙氧基)甲基]_6_ (三氟甲基)-3-吡啶基]羰基]-雙環(huán)[3.2.]辛-3-烯-2-酮(CAS RN35200-68-5)及 4-羥基-3- [ [2- (3-甲氧基丙基)_6_ ( 二氟甲基)-3_吡唳基]擬基]-雙環(huán)[3.2.]羊-3-烯-2-酮。此外,還包括未指定作用模式的除草化合物，如以下專利中所描述:CN101279950A、CN101279951A、DE10000600A1、DElOl16399A1、DE102004054666A1、DE102005014638A1、DE102005014906A1、DE102007012168A1、DE102010042866A1、DE10204951A1、DE10234875A1、DE10234876A1、DE10256353A1、DE10256354A1、DE10256367AU EP1157991A2、EP1238586A1、EP2147919A1、EP2160098A2、 JP03968012B2、 JP2001253874A、 JP2002080454A, JP2002138075A、JP2002145707A、 JP2002220389A、 JP2003064059A、 JP2003096059A、 JP2004051628A、JP2004107228A、 J P2005008583A, JP2005239675A、 JP2005314407A、 JP2006232824A、JP2006282552A、 JP2007153847A、 JP2007161701A、 JP2007182404A、 JP2008074840A、JP2008074841A、 JP2008133207A、 JP2008133218A、 JP2008169121A、 JP2009067739A、JP2009114128A、JP2009126792A、JP2009137851A、US20060111241A1、US2009003631IAUUS20090054240A1, US20090215628A1、US2010009956IAU US20100 152443AKUS20110105329AUUS20110201501AUW02001055066A2,ff02001056975AUff02001056979AUW02001090071A2, W02001090080AU W02002002540AU W02002028182AU W02002040473AUW02002044173A2, W02003000679A2, W02003006422AU W02003013247AU W02003016308AUW02003020704AU W02003022051AU W02003022831AU W02003022843AU W02003029243A2、W02003037085AU W02003037878AU W02003045878A2, W02003050087A2, W02003051823AUW02003051824AU W02003051846A2、W02003076409AU W02003087067AU W02003090539AUW02003091217AU W02003093269A2, W02003104206A2, W02004002947AU W02004002981A2,W02004011429AU W02004029060AU W02004035545A2, W02004035563AU W02004035564AUW02004037787AU W02004067518AU W02004067527AU W02004077950AU W02005000824AUW02005007627AU W02005040152AU W02005047233AU W02005047281AU W02005061443A2、W02005061464AU W02005068434AU W02005070889AU W02005089551AU W02005095335AUW02006006569AU W02006024820AU W02006029828AU W02006029829AU W02006037945AUW02006050803AU W02006090792AU W02006123088A2, W02006125687AU W02006125688AUW02007003294AU W02007026834AU W02007071900AU W02007077201AU W02007077247AUW02007096576AU W02007119434AU W02007134984AU W02008009908AU W02008029084AUW02008059948AU W02008071918AU W02008074991AU W02008084073AU W02008100426A2、W02008102908AU W02008152072A2, W02008152073A2, W02009000757AU W02009005297A2,W02009035150A2, W02009063180AU W02009068170A2, W02009068171A2, W02009086041AUW02009090401A2, W02009090402A2, W02009115788AU W02009116558AU W02009152995AUW02009158258AU W02010012649AU W02010012649AU W02010026989AU W02010034153AUW02010049270AU W02010049369A1、W02010049405AU W02010049414AU W02010063422AUW02010069802AU W02010078906A2、W02010078912A1、W02010104217AU W02010108611AUW02010112826A3、W02010116122A3、W02010119906AU W02010130970A1、W02011003776A2、W02011035874A1、W02011065451A1，全部以引用的方式并入本文中。
[0028]觸發(fā)多核苷酸和寡核苷酸分子組合物呈組合物形式是有用的，所述組合物諸如包含在相同溶液中或在還提供轉(zhuǎn)移劑的單獨(dú)施用的液體中的單獨(dú)的或與其它組分(例如一種或多種除草劑分子)一起組合的低濃度的這些多核苷酸分子的液體。盡管可用于這些方法中的多核苷酸分子的濃度和劑量不存在上限，但對(duì)于功效來說，一般需要較低的有效濃度和劑量。這些濃度可以根據(jù)噴藥量或施用到植物葉子或其它植物部分表面(諸如花瓣、莖、塊莖、果實(shí)、花粉囊、花粉或種子)的處理進(jìn)行調(diào)整。在一個(gè)實(shí)施方案中，使用25聚體寡核苷酸分子對(duì)草本植物進(jìn)行的有用處理是每株植物約I納摩爾(nmol)寡核苷酸分子，例如每株植物約0.05到Inmol。有關(guān)草本植物的其它實(shí)施方案包括每株植物約0.05到約IOOnmol,或約0.1到約20nmol,或約Inmol到約IOnmol多核苷酸的有用范圍。極大的植物、樹或藤本植物可能相應(yīng)地需要較大量的多核苷酸。當(dāng)使用能加工成多個(gè)寡核苷酸的長(zhǎng)dsRNA分子時(shí)，可以使用較低的濃度。為了說明實(shí)施方案，當(dāng)應(yīng)用于寡核苷酸分子時(shí)，任意地使用因子IX來表不每株植物0.8nmol多核苷酸分子的處理；10X表不每株植物8nmol多核苷酸分子；并且IOOX表不每株植物80nmol多核苷酸分子。
[0029]多核苷酸組合物呈組合物形式是有用的，所述組合物諸如包含在相同液體中或在提供轉(zhuǎn)移劑的單獨(dú)施用的液體中的單獨(dú)的或與其它組分一起組合的多核苷酸分子的液體。如本文所使用，轉(zhuǎn)移劑是當(dāng)與多核苷酸組合于局部施用于靶植物表面的組合物中時(shí)使該多核苷酸能夠進(jìn)入植物細(xì)胞的一種試劑。在某些實(shí)施方案中，轉(zhuǎn)移劑是調(diào)節(jié)植物組織的表面(例如葉、莖、根、花或果實(shí))以使多核苷酸分子能滲透入植物細(xì)胞中的一種試劑。通過向植物組織預(yù)先或同時(shí)施用多核苷酸-轉(zhuǎn)移劑可以有助于將多核苷酸轉(zhuǎn)移到植物細(xì)胞中。在一些實(shí)施方案中，該轉(zhuǎn)移劑是在施用了多核苷酸組合物之后施用。多核苷酸轉(zhuǎn)移劑為多核苷酸穿過角質(zhì)層蠟質(zhì)屏障、氣孔和/或細(xì)胞壁或膜屏障進(jìn)入植物細(xì)胞中提供了一條途徑。有助于多核苷酸轉(zhuǎn)移到植物細(xì)胞中的適合轉(zhuǎn)移劑包括增加植物外部的滲透性或增加植物細(xì)胞對(duì)寡核苷酸或多核苷酸的滲透性的試劑。這些有助于組合物轉(zhuǎn)移到植物細(xì)胞中的試劑包括化學(xué)試劑，或物理試劑，或其組合。用于調(diào)節(jié)或轉(zhuǎn)移的化學(xué)試劑包括(a)表面活性劑、(b)有機(jī)溶劑或含水溶液或有機(jī)溶劑的含水混合物、(C)氧化劑、(d)酸、(e)堿、(f)油、(g)酶，或其組合。該方法的實(shí)施方案可以任選地包括溫育步驟、中和步驟(例如，中和酸、堿或氧化劑，或者使酶失活)、沖洗步驟或其組合。用于調(diào)節(jié)植物對(duì)多核苷酸的滲透的試劑或處理的實(shí)施方案包括乳液、反相乳液、脂質(zhì)體及其它類膠束組合物。用于調(diào)節(jié)植物對(duì)多核苷酸的滲透的試劑或處理的實(shí)施方案包括平衡離子或已知與核酸分子結(jié)合的其它分子，例如無機(jī)銨離子、烷基銨離子、鋰離子、多胺(諸如精胺、亞精胺或腐胺)及其它陽(yáng)離子?？捎糜谡{(diào)節(jié)植物對(duì)多核苷酸的滲透的有機(jī)溶劑包括DMSO、DMF、吡啶、N-吡咯烷、六甲基磷酰胺、乙腈、二噁烷、聚丙二醇，與水可混溶或?qū)⒘姿岷塑账崛芙庥诜撬到y(tǒng)(諸如用于合成反應(yīng)中)中的其它溶劑?？梢允褂煤虿缓砻婊钚詣┗蛉榛瘎┑奶烊粊碓椿蚝铣傻挠停缈梢允褂弥参飦碓吹挠?、作物油(諸如第9版《除草劑佐劑綱要》(9th Compendium of HerbicideAdjuvants)中所列的那些，在國(guó)際互聯(lián)網(wǎng)(網(wǎng)絡(luò))的herbicide, adjuvants, com上公開可用)，例如石蠟油、多元醇脂肪酸酯，或具有用酰胺或多胺(諸如聚乙烯亞胺或N-吡咯烷)修飾的短鏈分子的油。轉(zhuǎn)移劑包括但不限于，有機(jī)硅酮制劑。
[0030]通過將該組合物直接施用(諸如通過噴霧)到正在生長(zhǎng)的植物的表面，來對(duì)需要植物控制的農(nóng)田進(jìn)行處理。舉例來說，應(yīng)用該方法，通過向具有作物的田地噴灑該組合物來控制該田地中的雜草。該組合物可以作為桶混合劑、連續(xù)的組分處理(一般為含有多核苷酸的組合物隨后除草劑)或來自單獨(dú)容器的該組合物的一種或多種組分的同時(shí)處理或混合來提供。田地的處理可以根據(jù)需要進(jìn)行以提供雜草控制，并且該組合物各組分可以被調(diào)整成通過利用能夠選擇性靶向有待控制的特定物種或植物科的特定多核苷酸或多核苷酸組合物來靶向特定雜草種類或雜草科。該組合物可以根據(jù)施用到田地的時(shí)間，例如在種植前、種植時(shí)、種植后、收獲后，以有效使用量施用。HPro抑制劑除草劑可以向田地按I到2000g ai/ha(每公頃的活 性成分量)或更高量施用。取決于田地中的雜草范圍所需觸發(fā)分子的數(shù)量，該組合物的多核苷酸可以按每英畝I到30克的比率施用。
[0031]需要雜草控制的作物包括但不限于，i)玉米、大豆、棉花、油菜、甜菜、苜蓿、甘蔗、稻米及小麥；ii)蔬菜類植物，包括但不限于，馬鈴薯、甜椒、辣椒、瓜、西瓜、黃瓜、茄子、花椰菜、椰菜、萵苣、菠菜、洋蔥、豌豆、胡蘿卜、甜玉米、大白菜、韭蔥、茴香、南瓜、倭瓜或葫蘆、蘿卜、球芽甘藍(lán)、粘果酸漿、青刀豆、干豆或秋葵；iii)烹飪用植物，包括但不限于，羅勒、歐芹、咖啡樹或茶樹；或iv)水果類植物，包括但不限于，蘋果樹、梨樹、櫻桃樹、桃樹、李樹、杏樹、香蕉、車前草、鮮食葡萄、釀酒葡萄、柑橘、鱷梨樹、芒果或漿果；v)生長(zhǎng)用于觀賞或商業(yè)用途的樹，包括但不限于，果樹或堅(jiān)果樹；或vi)觀賞性植物(例如觀賞性開花植物或灌木或草坪草)。本文提供的方法和組合物還可以施用于通過插條、克隆或嫁接方法產(chǎn)生的植物(即，不是由種子生長(zhǎng)的植物)，包括果樹和植物，包括但不限于，柑橘、蘋果樹、鱷梨樹、番茄、茄子、黃瓜、瓜類、西瓜和葡萄，以及各種觀賞性植物。
[0032]殺蟲混合物
[0033]這些多核苷酸組合物還可以作為與各種農(nóng)業(yè)化學(xué)品和/或殺昆蟲劑、殺螨劑以及殺真菌劑、殺蟲劑和生物殺蟲劑的混合物來使用。實(shí)例包括但不限于，甲基谷硫磷(azinphos-methyl)、高滅磷(acephate)、異噁唑磷(isoxathion)、異丙胺磷(isofenphos)、乙硫磷（ethion)、乙卩密硫磷（etrimfos)、砜吸磷（oxydemeton-methyl)、 異亞砜磷(oxydeprofos)、唾硫磷(quinalphos)、毒死蜱(chlorpyrifos)、甲基毒死 蜱(chlorpyrifos-methyl)> 毒蟲畏（chlorfenvinphos)、殺螟腈（cyanophos)、蔬 果磷（dioxabenzofos)、二 氯松（dichlorvos)、二 硫松（disulfoton)、甲基毒蟲畏 (dimethylvinphos)、樂果(dimethoate)、硫丙磷(sulprofos)、二 嗪磷(diazinon)、甲 基乙拌磷（thiometon)、殺蟲烕（tetrachlorvinphos)、雙硫磷（temephos)、丁基啼卩定磷 (tebupirimfos)、特丁硫憐（terbufos)、二溴磷（naled)、姆滅多（vamidothion)、卩比唑硫磷 (pyraclofos)、Bi嗪硫磷（pyridafenthion)、甲基啼卩定磷（pirimiphos-methyl)、殺螟硫磷 (fenitrothion)、倍硫磷(fenthion)、稻豐散(phenthoate)、卩比氟硫磷（fIupyrazophos)、 丙硫磷（prothiofos)、丙蟲磷（propaphos)、丙溴磷（profenofos)、辛硫磷（phoxime)、伏 殺硫磷（phosalone)、亞胺硫磷（phosmet)、安果（formothion)、甲拌磷（phorate)、馬拉硫 磷（malathion)、滅蟲牙磷（mecarbam)、線蟲靈（mesulfenfos)、甲胺磷（methamidophos)、 殺撲磷（methidathion)、對(duì)硫磷（parathion)、甲基對(duì)硫磷（methyl parathion)、久 效磷(monocrotophos)、敵百蟲(trichlorphon)、EPN、異唑磷(isazophos)、衣胺磷 (isamidofos)、硫線磷（cadusafos)、苯基胺磷（diamidaphos)、除線磷（dichlofenthion)、 蟲線磷（thionazin)、克線磷（fenamiphos)、噻唑硫磷（fosthiazate)、丁 硫環(huán)磷 (fosthietan)、磷蟲烕(phosphocarb)、DSP、滅線磷（ethoprophos)、棉鈴?fù)╝lanycarb)、 涕滅威（aldicarb)、異丙烕（isoprocarb)、乙硫苯威（ethiofencarb)、西維因（carbaryl)、 丁呋喃（carbosulfan)、滅殺烕（xylylcarb)、硫雙威（thiodicarb)、抗蟲牙威（pirimicarb)、 仲丁威（fenobucarb)、咲線烕（furathiocarb)、殘殺威（propoxur)、惡蟲威（bendiocarb)、 丙硫克百威（benfuracarb)、滅多威（methomyl)、速滅威（metolcarb)、XMC>克百威 (carbofuran)、涕滅砜威（aldoxycarb)、殺線威（oxamyl)、氟丙菊酯（acrinathrin)、丙 稀菊酯（allethrin)、氰戊菊酯（esfenvalerate)、烯炔菊酯（empenthrin)、擬除蟲菊酯 (cycloprothrin)、三氟氯氰菊酯（cyhalothrin)、Y -氯氟氰菊酯（gamma-cyhalothrin)、 入-氯氟氰菊酯（lambda-cyhalothrin)、氟氯氰菊酯（cyf luthrin)、P -氟氯氰菊酯 (beta—cyfIuthrin)、氣氧菊酉旨（cypermethrin)、Q — 氣氧菊酉旨（alpha—cypermethrin)、 氯氰菊酯（zeta-cypermethrin)、氟娃菊酷（silafluofen)、胺菊酯（tetramethrin)、 七氟菊酯(tefluthrin)、溴氰菊酯(deltamethrin)、四溴菊酯(tralomethrin)、聯(lián) 苯菊酯（bifenthrin)、苯醚菊（酯phenothrin)、氰戊菊酯（fenvalerate)、甲氰菊 酯（fenpropathrin)、炔呋菊酯（furamethrin)、炔丙菊酯（pralIethrin)、氟氰戊菊 酯（flucythrinate)、氟胺氰菊酯（fluvalinate)、溴氟菊酯（flubrocythrinate)、 氯菊酉旨(permethrin)、節(jié)呋菊酯（resmethrin)、醚菊酯（ethofe叩rox)、殺螺丹 (cartap)、蟲噻焼(thiocyclam)、殺蟲石黃(bensultap)、P比蟲清（acetamiprid)、P比蟲琳 (imidacloprid)、噻蟲胺（clothianidin)、呋蟲胺(dinotefuran)、噻蟲琳(thiacloprid)、 噻蟲嗉（thiamethoxam)、烯唆蟲胺（nitenpyram)、氟唆脲(chlorfIuazuron)> 除 蟲脲（diflubenzuron)、氟苯脲(tefIubenzuron) > 殺鈴脲(trifIumuron) > 雙苯氟 脲（novaluron)、多氟脲（novifIumuron)、雙三氟蟲脲（bistrifIuoron)、唆蜱脲 (fluazuron)、氟環(huán)脲（flucycloxuron)、氟蟲脲（fIufenoxuron)、氟鈴脲（hexafIumuron)、 氟丙氧脲（Iufenuron)、環(huán)蟲酰胼（chromafenozide)、抑蟲胼(tebufenozide)、氯蟲酰
【權(quán)利要求】
1.一種植物控制方法，包括:用包含多核苷酸和轉(zhuǎn)移劑的組合物處理植物，其中所述多核苷酸與HPro基因序列或其片段，或與所述HPro基因序列或其片段的RNA轉(zhuǎn)錄物基本上同一或基本上互補(bǔ)，其中所述HPro基因序列選自SEQ ID NO:1-32或其多核苷酸片段，由此相對(duì)于未用所述組合物處理的植物，所述植物生長(zhǎng)或發(fā)育或繁殖能力有所降低，或所述植物對(duì)HPro抑制劑除草劑更敏感。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述轉(zhuǎn)移劑是有機(jī)硅酮表面活性劑組合物或其中所含的化合物。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述多核苷酸片段為18個(gè)連續(xù)核苷酸、19個(gè)連續(xù)核苷酸、20個(gè)連續(xù)核苷酸或至少21個(gè)連續(xù)核苷酸長(zhǎng)度并且與選自SEQ ID ΝΟ:1_32的HPTO基因序列至少85%同一。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中所述多核苷酸片段選自有義或反義ssDNA或ssRNA、dsRNA 或 dsDNA，或 dsDNA/RNA 雜交體。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述植物選自:長(zhǎng)芒莧、西部莧、薩恩博格氏莧、匍匐莧、綠穗莧、皺果莧、三裂葉豚草、掃帚草、苘麻、小蓬草、馬唐、白苞猩猩草、多花黑麥草及蒼耳。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物另外包含所述HPro抑制劑除草劑并且向植物外部施用所述組合物。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述組合物另外包含一種或多種不同于所述HPro抑制劑除草劑的除草劑。
8.如權(quán)利要求3所述的方法，其中所述組合物包含所述多核苷酸片段中兩個(gè)或更多個(gè)的任何組合并且向植物外部施用所述組合物。
9.一種包含多核苷酸和轉(zhuǎn)移劑的組合物，其中所述多核苷酸與HPro基因序列或其片段，或與所述HPro基因序列或其片段的RNA轉(zhuǎn)錄物基本上同一或基本上互補(bǔ)，其中所述HPro基因序列選自SEQ ID NO:1-32或其多核苷酸片段，并且由此相對(duì)于未用所述組合物處理的植物，用所述組合物處理的植物的生長(zhǎng)或發(fā)育或繁殖能力得到調(diào)控、抑制或延遲，或所述植物因所述含多核苷酸的組合物而對(duì)HPro抑制劑除草劑更敏感。
10.如權(quán)利要求9所述的組合物，其中所述轉(zhuǎn)移劑是有機(jī)硅酮組合物。
11.如權(quán)利要求9所述的組合物，其中所述多核苷酸片段為18個(gè)連續(xù)核苷酸、19個(gè)連續(xù)核苷酸、20個(gè)連續(xù)核苷酸或至少21個(gè)連續(xù)核苷酸長(zhǎng)度并且與選自SEQ ID NO:1_32的HPTO基因序列至少85%同一。
12.如權(quán)利要求9所述的組合物，其中所述多核苷酸選自SEQID NO:33-596。
13.如權(quán)利要求9所述的組合物，其中所述多核苷酸選自SEQID N0:597-1082。
14.如權(quán)利要求9所述的組合物，另外包含HPH)抑制劑除草劑。
15.如權(quán)利要求14所述的組合物，其中所述HPro抑制劑分子選自:硝磺草酮、特糠酯酮、環(huán)磺酮、磺草酮、異噁氯草酮、磺酰草吡唑、異噁唑草酮、吡草酮、吡唑特、苯吡唑草酮及芐草唑。
16.如權(quán)利要求14所述的組合物，另外包含共除草劑。
17.一種減少植物中HPro基因的表達(dá)的方法，包括:向植物外部施用包含多核苷酸和轉(zhuǎn)移劑的組合物，其中所述多核苷酸與HPro基因序列或其片段，或與所述HPro基因序列或其片段的RNA轉(zhuǎn)錄物基本上同一或基本上互補(bǔ)，其中所述ΗΡΗ)基因序列選自SEQ ID NO:1-32或其多核苷酸片段，由此所述HPH)基因的所述表達(dá)相對(duì)于未施用所述組合物的植物有所減少。
18.如權(quán)利要求17所述的方法，其中所述轉(zhuǎn)移劑是有機(jī)硅酮化合物。
19.如權(quán)利要求17所述的方法，其中所述多核苷酸片段為19個(gè)連續(xù)核苷酸、20個(gè)連續(xù)核苷酸或至少21個(gè)連續(xù)核苷酸長(zhǎng)度并且與選自SEQ ID NO:1_32的HPTO基因序列至少85% 同一。
20.如權(quán)利要求17所述的方法，其中所述多核苷酸分子選自有義或反義ssDNA或ssRNA、dsRNA 或 dsDNA，或 dsDNA/RNA 雜交體。
21.—種微生物表達(dá)盒，包含長(zhǎng)度為18個(gè)連續(xù)核苷酸、19個(gè)連續(xù)核苷酸、20個(gè)連續(xù)核苷酸或至少21個(gè)連續(xù)核苷酸并且與選自SEQ ID NO:1_32的HPTO基因序列至少85%同一的多核苷酸片段。
22.—種制備多核苷酸的方法，包括a)將如權(quán)利要求21所述的微生物表達(dá)盒轉(zhuǎn)化到微生物中；b)使所述微生物生長(zhǎng)；c)從所述微生物收獲多核苷酸,其中所述多核苷酸為18個(gè)連續(xù)核苷酸、19個(gè)連續(xù)核苷酸、20個(gè)連續(xù)核苷酸或至少21個(gè)連續(xù)核苷酸長(zhǎng)度并且與選自SEQ ID NO:1-32的HPPD基因序列至少85%同一。
23.一種鑒別當(dāng)外部處理植物時(shí)可用于調(diào)節(jié)HPH)基因表達(dá)的多核苷酸的方法，包括:a)提供多種多核苷酸，所述多核苷酸包含與長(zhǎng)度為18個(gè)連續(xù)核苷酸、19個(gè)連續(xù)核苷酸、20個(gè)連續(xù)核苷酸或至少21個(gè)連續(xù)核苷酸并且與選自SEQ ID NO:1_32的HPTO基因序列至少85%同一的多核苷酸片段基本上同一或基本上互補(bǔ)的區(qū)域；b)用所述多核苷酸中的一種或多種和轉(zhuǎn)移劑外部處理所述植物；c)針對(duì)ΗΡΗ)基因表達(dá)的調(diào)節(jié)對(duì)所述植物或提取物進(jìn)行分析，并且由此相對(duì)于未用所述組合物處理的植物，用所述組合物處理的植物的生長(zhǎng)或發(fā)育或繁殖能力得到調(diào)控、抑制或延遲，或所述植物因所述含多核苷酸的組合物而對(duì)HPH)抑制劑除草劑更敏感。
24.如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述植物選自:長(zhǎng)芒莧、西部莧、薩恩博格氏莧、匍匐莧、綠穗莧、皺果莧、三裂葉豚草、掃帚草、苘麻、小蓬草、馬唐、白苞猩猩草、多花黑麥草及蒼耳。
25.如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述HPH)基因表達(dá)相對(duì)于未用所述多核苷酸片段和轉(zhuǎn)移劑處理的植物有所減少。
26.如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述轉(zhuǎn)移劑是有機(jī)硅酮化合物。
27.—種包含多核苷酸與HPH)抑制劑和共除草劑的混合物的農(nóng)用化學(xué)組合物，其中所述多核苷酸與一部分HPro基因序列，或與所述HPro基因序列的一部分RNA轉(zhuǎn)錄物基本上同一或基本上互補(bǔ)，其中所述HPro基因序列選自SEQ ID NO:1-32或其多核苷酸片段，并且由此相對(duì)于未用所述組合物處理的植物，用所述組合物處理的植物的生長(zhǎng)或發(fā)育或繁殖能力得到調(diào)控、抑制或延遲，或所述植物因所述含多核苷酸的組合物而對(duì)HPro抑制劑除草劑更敏感。
28.如權(quán)利要求27所述的農(nóng)用化學(xué)組合物，其中所述共除草劑選自:酰胺除草劑類、含砷除草劑類、苯并噻唑除草劑類、苯甲酰基環(huán)己二酮除草劑類、烷基磺酸苯并呋喃基酯除草劑類、環(huán)己烯肟除草劑類、環(huán)丙基異噁唑除草劑類、二甲酰亞胺除草劑類、二硝基苯胺除草劑類、二硝基苯酚除草劑類、二苯基醚除草劑類、二硫代氨基甲酸酯除草劑類、甘氨酸除草劑類、鹵代脂肪烴除草劑類、咪唑啉酮除草劑類、無機(jī)除草劑類、腈除草劑類、有機(jī)磷除草劑類、噁二唑酮除草劑類、噁唑除草劑類、苯氧基除草劑類、苯二胺除草劑類、吡唑除草劑類、噠嗪除草劑類、噠嗪酮除草劑類、吡啶除草劑類、嘧啶二胺除草劑類、嘧啶氧基苯甲胺除草劑類、季銨除草劑類、硫代氨基甲酸酯除草劑類、硫代碳酸酯除草劑類、硫脲除草劑類、三嗪除草劑類、三嗪酮除草劑類、三唑除草劑類、三唑酮除草劑類、三唑并嘧啶除草劑類、尿嘧啶除草劑類及脲除草劑類。
29.—種包含多核苷酸與HPro抑制劑除草劑和殺蟲劑的混合物的農(nóng)用化學(xué)組合物，其中所述多核苷酸與一部分HPro基因序列，或與所述HPro基因序列的一部分RNA轉(zhuǎn)錄物基本上同一或基本上互補(bǔ)，其中所述HPro基因序列選自SEQ ID NO:1-32或其多核苷酸片段，由此具有需要雜草和蟲害控制的作物的田地用所述組合物進(jìn)行處理，并且由此相對(duì)于未用所述組合物處理的植物，用所述組合物處理的植物的生長(zhǎng)或發(fā)育或繁殖能力得到調(diào)控、抑制或延遲，或所述植物因所述含多核苷酸的組合物而對(duì)HPro抑制劑除草劑更敏感。
30.如權(quán)利要求29所述的農(nóng)用化學(xué)組合物，其中所述殺蟲劑選自:殺昆蟲劑、殺真菌劑、殺線蟲劑、殺細(xì)菌劑、殺螨劑、生長(zhǎng)調(diào)控劑、化學(xué)絕育劑、化學(xué)信息素、驅(qū)避劑、引誘劑、信息素、取食刺激劑及生物殺蟲劑。
31.一種除草劑組合物，包含HPro抑制劑除草劑以及多核苷酸和轉(zhuǎn)移劑，其中所述多核苷酸選自SEQ ID NO:1083-1092或者其補(bǔ)體或多核苷酸片段，并且由此相對(duì)于未用所述組合物處理的植物，用所述組合物處理的植物的生長(zhǎng)或發(fā)育或繁殖能力得到調(diào)控、抑制或延遲，或所述植物因 所述含多核苷酸的組合物而對(duì)HPH)抑制劑除草劑更敏感。
【文檔編號(hào)】C12N15/82GK103930549SQ201280054819
【公開日】2014年7月16日 申請(qǐng)日期:2012年9月12日 優(yōu)先權(quán)日:2011年9月13日
【發(fā)明者】D·阿德, J·J·芬內(nèi)斯, M·卡普爾, 李兆隆, J·D·馬蘇西, R·H·沙, N·陶, J·C·泰勒, 王大伏, 楊和平 申請(qǐng)人:孟山都技術(shù)公司