一株提高丹參產(chǎn)量及總酚酸含量的枝孢屬真菌的制作方法
【專利摘要】一株提高丹參產(chǎn)量及酚酸類成分含量的真菌，它是保藏編號為CGMCC?No.6608的枝孢(Cladosporium?sp.)，菌株名稱：11673-58，簡稱58#。栽培丹參時在每株丹參幼苗根部分別施予固體培養(yǎng)的58#菌材0.5-1.5g，經(jīng)與丹參幼苗共生栽培4-6月，能提高收獲期時丹參的產(chǎn)量和丹參總酚酸及丹酚酸B的含量。該技術(shù)方法簡單易行，無污染，用于丹參的人工種植，能有效提高藥材的產(chǎn)量和質(zhì)量，具有良好的應(yīng)用前景。
【專利說明】一株提高丹參產(chǎn)量及總酚酸含量的枝孢屬真菌
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一株提高丹參產(chǎn)量和有效成分含量的真菌。
【背景技術(shù)】
[0002]藥用丹參為唇形科植物丹參(Salvia miltiorrhiza Bge.)的干燥根及根莖,始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，位居上品，具有活血、涼血、清心除煩的功效，臨床上廣泛用于冠心病的治療。丹參制劑也是我國心腦血管病的基本治療藥物，因療效確切，丹參已成為我國用量大，銷售額多的中藥。
[0003]丹酚酸類成分是丹參的水溶性成分，對心、腦、肝、腎、胃等多個器官具有保護作用。丹酚酸B是其中的主要成分和活性成分，在心臟保護、抗動脈粥樣硬化、抗肝纖維化、腦保護等方面都有顯著的藥理活性，被廣泛地用于臨床。
[0004]內(nèi)生真菌指那些在其生活史的全部或某一時期生活在植物組織內(nèi)，對植物組織沒有引起明顯病害癥狀的真菌。研究發(fā)現(xiàn)，幾乎所有健康植物的組織器官內(nèi)都有內(nèi)生真菌的存在。內(nèi)生真菌與植物共生不僅可以提高植物對高溫、干旱、鹽化、病原菌等逆境脅迫的適應(yīng)能力，還可以提高藥用植物有效成分的含量，從而提高藥材品質(zhì)。內(nèi)生真菌的這些作用對藥用植物資源的開發(fā)與保護，以及對藥用植物有效成分的積累等有著重要的意義。 [0005]本發(fā)明利用生物技術(shù)，從丹參中分離、篩選出能夠提高丹參總酚酸含量的內(nèi)生真菌；將菌株用于丹參的栽培中，實現(xiàn)提高收獲期丹參產(chǎn)量，提高丹參總酚酸和丹酚酸B含量的目的。該發(fā)明對丹參資源的開發(fā)與保護、丹參中酚酸類成分的應(yīng)用生產(chǎn)等都有著重要的意義。該技術(shù)方法操作簡單，綠色環(huán)保，具有廣泛的應(yīng)用前景，目前國內(nèi)外尚未見利用真菌與丹參共生栽培，提高丹參藥材產(chǎn)量和酚酸類成分含量的研究報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于，為丹參的人工栽培提供一株能提高丹參產(chǎn)量及酚酸類成分含量的菌株。菌株名稱為11673-58，以下簡稱58#，經(jīng)鑒定為枝孢(Cladosporium sp.)。該菌株2012年9月26日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏單位地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，保藏號CGMCC N0.6608。菌株58#是一株丹參的內(nèi)生真菌，經(jīng)與丹參幼苗共生栽培4-6月后，與相同栽培環(huán)境下未接菌的丹參相比，能提高丹參藥材產(chǎn)量和酚酸類成分含量。
[0007]為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取如下的技術(shù)解決:
[0008](1)58#的固體培養(yǎng):培養(yǎng)基組成按重量比計算為:麥麩:10% -17%,木屑:15% -17%, KH2PO4:0.2% -0.3%, MgSO4:0.1% -0.2%, CaSO4:0.07% -0.10%，葡萄糖:
1.40% -2.20%，玉米芯:2.00% -4.00%，玉米碎顆粒:3.00% -5.00%，其余成分為水。稱取各種組分，混勻后分裝，122°C滅菌140min，放涼備用。取在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)的58#菌片，放置在固體培養(yǎng)基的中部，25°C暗室培養(yǎng)至58#菌長至瓶中培養(yǎng)基的2/3處即可使用。
[0009](2)菌苗共生栽培:春季栽培丹參時,取出芽后20-30天的丹參苗,在每株丹參幼苗根部分別施予固體培養(yǎng)的58#菌材0.5-1.5g，用土覆蓋后栽于溫室內(nèi)或大田里，常規(guī)方法進行種植管理。
[0010](3)菌株58#經(jīng)與丹參幼苗共生栽培4-6月后,與相同栽培環(huán)境下未接菌的丹參相t匕，丹參干重，以及總酚酸和丹酚酸B的含量均有不同程度的提高。
【具體實施方式】
[0011]實施例1
[0012]58# 的固體培養(yǎng):麥麩:100g，木屑:150g, KH2PO4:2g, MgSO4:lg, CaSO4:0.7g，葡萄糖:14g,玉米芯:20g,玉米碎顆粒:30g,加水混合均勻，分裝于瓶內(nèi)，122°C滅菌140min,放涼備用。取在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)的58#菌片，放置在固體培養(yǎng)基的中部，25°C暗室培養(yǎng)至58#菌長至瓶中培養(yǎng)基的2/3處即可使用。
[0013]菌苗共生栽培:用溫室盆栽的方法，在春季栽培丹參時，取出芽后20-30天的丹參苗，在每株丹參幼苗根部分別施予固體培養(yǎng)的58#菌材0.5g，每盆I株，用土覆蓋后盆栽于溫室里，常規(guī)方法進行種植管理，6個月后收獲。
[0014]稱量干重，測總酹酸和丹酹酸B的含量。與58#菌共生栽培的丹參,每株根干重平均為20g,根部總酹酸含量平均為7.2%,丹酹酸B含量平均為2.9%。未接菌的丹參，每株根干重平均為10g，根部總酚酸含量平均為3.6%，丹酚酸B含量平均為2.5%。
[0015]實施例2 [0016]58# 的固體培養(yǎng):麥麩:170g，木屑:170g, KH2PO4:3g,MgSO4:2g, CaSO4:lg，葡萄糖:22g,玉米芯:40g,玉米碎顆粒:50g,加水混合均勻，分裝于瓶內(nèi)，122°C滅菌140min,放涼備用。取在PDA培養(yǎng)基上純化后的菌片58#，放置在固體培養(yǎng)基的中部，25°C暗室培養(yǎng)至58#菌長至瓶中培養(yǎng)基的2/3處即可使用。
[0017]菌苗共生栽培:用田間栽培的方法，春季栽培丹參時，取出芽后20-30天的丹參苗，在在每株丹參幼苗根部分別施予固體培養(yǎng)的58#菌材1.0g，用土覆蓋后栽于田內(nèi)，常規(guī)方法進行田間種植管理，4個月后收獲。
[0018]測總酚酸和丹酚酸B的含量。與58#菌共生栽培的丹參，根部總酚酸含量平均為
11.4%,丹酚酸B含量平均為2.8%。未接菌的丹參，根部總酚酸含量平均為10.5%，丹酚酸B含量平均為2.7%。
[0019]實施例3
[0020]58# 的固體培養(yǎng):麥麩:135g,木屑:160g, KH2PO4:2.5g，MgSO4:1.5g，CaSO4:
0.85g，葡萄糖:18g，玉米芯:30g，玉米碎顆粒:40g，加水混合均勻，分裝于瓶內(nèi)，122°C滅菌140min，放涼備用。取在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)的58#菌片，放置在固體培養(yǎng)基的中部，25°C暗室培養(yǎng)至58#菌長至瓶中培養(yǎng)基的2/3處即可使用。
[0021]菌苗共生栽培:用田間栽培的方法，春季栽培丹參時，取出芽后20-30天的丹參種子苗，在每株丹參幼苗根部分別施予固體培養(yǎng)的58#菌材1.5g，用土覆蓋后栽于田內(nèi)，常規(guī)方法進行田間種植管理，6個月后收獲。
[0022]稱量干重，測總酹酸和丹酹酸B的含量。與58#菌共生栽培的丹參,每株根干重平均為26g,根部總酹酸含量平均為6.3%,丹酹酸B含量平均為2.3%。未接菌的丹參，每株根干重平均為15g，根部總酚酸含量平均為4.3%，丹酚酸B含量平均為2.4%。
【權(quán)利要求】
1.提高丹參產(chǎn)量及酚酸類成分含量的一株真菌，它是保藏編號為CGMCCN0.6608的枝孢(Cladosporium sp.)，菌株名稱:11673-58，簡稱58# ;該菌株可在栽培丹參時使用。
2.如權(quán)利要求1所述的真菌，其固體培養(yǎng)的培養(yǎng)基組分按重量計為:麥麩:.10 % -17 %，木屑:15 % -17 %，KH2PO4:0.2 % -0.3 %, MgSO4:0.1 % -0.2 %, CaSO4:.0.07 % -0.10 %，葡萄糖:L40 % -2.20 %，玉米芯:2.00 % -4.00 %，玉米碎顆粒:.3.00% -5.00%，其余成分為水。
3.如權(quán)利要求1所述的真菌，其使用方法為:栽培丹參時，取出芽后20-30天的丹參苗，在每株丹參幼苗根部分別施予固體培養(yǎng)的58#菌材0.5-1.5g，用土覆蓋，栽于溫室內(nèi)或大田里，定期施水，常 規(guī)方法進行種植管理，4-6個月后收獲。
【文檔編號】C12R1/645GK103992952SQ201310050802
【公開日】2014年8月20日 申請日期:2013年2月16日 優(yōu)先權(quán)日:2013年2月16日
【發(fā)明者】郭順星, 唐坤, 李標(biāo), 陳曉梅, 王春蘭, 陳娟 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所