專利名稱：利用復(fù)合酶提取動(dòng)物小分子多肽及氨基酸的方法和工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于蛋白質(zhì)工程技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種利用復(fù)合酶提取動(dòng)物小分子多肽及氨基酸的方法和工藝。
背景技術(shù)：
與植物相比，動(dòng)物體內(nèi)的各種蛋白質(zhì)的成分和比例與人更為接近，因而動(dòng)物體內(nèi)的蛋白質(zhì)成分對(duì)人具有更高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，尤其是動(dòng)物體內(nèi)一些具有特定生理功能的小分子多肽及氨基酸(生物活性物質(zhì))，對(duì)人體新陳代謝具有重要的調(diào)節(jié)作用。傳統(tǒng)的動(dòng)物類產(chǎn)品主要采用物理方法(如破碎、高溫等)進(jìn)行加工，不但提取效率低，還會(huì)造成大量有效成分破壞，喪失生物活性。盡管現(xiàn)在個(gè)別加工過(guò)程采用了生物酶解技術(shù)，但嚴(yán)重忽視了一個(gè)問(wèn)題(酶的選取應(yīng)與動(dòng)物組織結(jié)構(gòu)相匹配)，使酶的降解效果不夠理想。酶是由生物活體細(xì)胞產(chǎn)生的，受多種因素調(diào)節(jié)控制的具有催化能力的生物催化劑。與一般催化劑相比有其共同性，但又有顯著的特點(diǎn)(如:酶的催化效率高，具有高度專一性等)。酶的種類很多，用于動(dòng)物酶解的主要是蛋白酶。蛋白酶又分為內(nèi)肽酶和外肽酶兩類，要想充分利用動(dòng)物體內(nèi)的有效成分，就需要內(nèi)肽酶和外肽酶結(jié)合，以充分降解蛋白質(zhì)大分子為便于人體吸收利用的小分子多肽和氨基酸，這就需要發(fā)明一種復(fù)合酶解技術(shù)用于動(dòng)物體內(nèi)的蛋白質(zhì)降解。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種利用復(fù)合酶提取動(dòng)物小分子多肽及氨基酸的方法和工藝，操作簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低，提高了動(dòng)物蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)成分的利用率。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:復(fù)合酶用于提取動(dòng)物小分子多肽及氨基酸的方法和具體生產(chǎn)工藝為:`
(I)將動(dòng)物組織粉碎，使其能通過(guò)80目 200目篩子，加水配成濃度為8% 30%的混懸液；(2)提高溫度為35°C 40°C，用碳酸鈉調(diào)節(jié)pH值為8.0 9.0，再加入動(dòng)物組織
0.5% 2.0 %的復(fù)合酶I，然后將其放在超聲裝置中，14 16kHz超聲酶解Ih 2h，使細(xì)胞間的蛋白充分酶解，再用碳酸鈉調(diào)節(jié)pH值為6.5 7.5，加入相當(dāng)于動(dòng)物組織0.5%
3.0 %的復(fù)合酶II，充分?jǐn)噭?，控制水浴的溫度?7°C 45°C，15 17kHz超聲酶解Ih 6h，在酶解的同時(shí)需適當(dāng)?shù)臄噭?dòng)水浴，這樣有利于酶的水解效果，縮短酶解時(shí)間；(3)酶解完成后，提高酶解液溫度至90°C 100°C，滅活酶20 30min ；(4)將酶解后的溶液經(jīng)0.22 μ m微孔濾膜過(guò)濾；(5)取濾液濃縮至相對(duì)密度為1: 1.0 1: 1.2，制得濃縮液。復(fù)合酶包括復(fù)合酶I和復(fù)合酶11。復(fù)合酶I主要由胰蛋白酶30% 70%、胰脂肪酶10% 40%和胰淀粉酶5% 30%組成，酶的活性單位為2萬(wàn)U/g 20萬(wàn)U/g，能夠分解細(xì)胞間的脂肪和部分的蛋白質(zhì)。復(fù)合酶II是由Alcalase (堿性蛋白酶)5% 30%、Flavourzyme (復(fù)合風(fēng)味蛋白酶)5% 30%、Protamex (復(fù)合蛋白酶)5% 30%、中性蛋白酶10% 50%、木瓜蛋白酶1% 30%組成，總質(zhì)量組成為100%，酶的活性單位為5萬(wàn)U/g 30萬(wàn)U/g。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn):利用酶反應(yīng)所具有高度專一性的特點(diǎn)，選擇內(nèi)肽酶與外肽酶按比例混合，將動(dòng)物體內(nèi)的大分子蛋白分解為有利于人體吸收的小分子多肽及氨基酸，通過(guò)對(duì)細(xì)胞膜的破壞使細(xì)胞內(nèi)的有效成分釋放出來(lái)，既能提高酶解效率，又能降低生產(chǎn)成本?？蓱?yīng)用于鮮海參、鮑魚、牡蠣、豬骨、牛肉、雞肝、魚骨、豬蹄、雞爪、豬皮、牛皮的加工。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例用于更好地理解本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明所保護(hù)的范圍。實(shí)施例1:利用復(fù)合酶對(duì)海參進(jìn)行酶解。(I)取鮮海參1kg，粉碎使其能過(guò)80目篩子。(2)加水制成10%的動(dòng)物組織懸浮液，100°C加熱30min，溫度降至35°C 40°C時(shí)，用堿調(diào)PH值為8.0，加入腸激酶，攪拌均勻后加入相當(dāng)于動(dòng)物組織1.0%的復(fù)合酶I，37°C恒溫孵育，15kHz超聲酶解Ih，調(diào)pH值為7.0，加入相當(dāng)于動(dòng)物組織1.5%的復(fù)合酶II，控制溫度45°C，16.5kHz超聲酶解2h。(3)提高溫度至100°C，快速滅活酶30min，然后自然冷卻降溫。(4)將酶解后的溶液經(jīng)0.22 μ m微孔濾膜過(guò)濾。(5)取濾液濃縮至相對(duì)密度為1: 1.0，制得棕褐色的濃縮液。

實(shí)施例2:利用復(fù)合酶對(duì)鮮牡蠣肉進(jìn)行酶解。(I)取牡蠣肉1kg，粉碎使其能過(guò)100目篩子。(2)加水制成25%的懸浮液，提高溫度為35°C 40°C，用碳酸鈉調(diào)pH值為8.5，攪拌均勻后加入相當(dāng)于動(dòng)物組織量0.8%的復(fù)合胰酶I，40°C恒溫孵育，14.5kHz超聲酶解1.5h，調(diào)pH值為7.5，加入相當(dāng)于動(dòng)物組織量1.0%的復(fù)合酶II，控制溫度40°C，15kHz超聲酶解4h。(3)提高溫度至100°C，快速滅活酶20min，然后自然冷卻降溫。(4)將酶解后的溶液經(jīng)0.22 μ m微孔濾膜過(guò)濾。(5)取濾液濃縮至相對(duì)密度為1: 1.0，制得濃縮液。實(shí)施例3:利用復(fù)合酶對(duì)鮑魚進(jìn)行酶解。(I)取鮑魚肉1kg，粉碎使其能過(guò)100目篩子。(2)加水制成20%的懸浮液，提高溫度為35°C 40°C時(shí)，用碳酸氫鈉調(diào)pH值為
8.5，攪拌均勻后加入相當(dāng)于動(dòng)物組織量1.1 %的復(fù)合酶I，35°C恒溫孵育，16kHz超聲酶解
1.0h，調(diào)pH值為6.5，加入相當(dāng)于動(dòng)物組織量1.2%的復(fù)合酶II，溫度控制在37°C，17kHz超聲酶解2h。(3)提高溫度至95 °C，快速滅活酶30min，然后自然冷卻降溫。(4)將酶解后的溶液經(jīng)0.22 μ m微孔濾膜過(guò)濾。(5)取濾液濃縮至相對(duì)密度為1: 1.0，制得濃縮液。實(shí)施例4:利用復(fù)合酶對(duì)豬骨進(jìn)行酶解。(I)取豬骨2kg，粉碎使其能過(guò)100目篩子。(2)加水制成15%的懸浮液，提高溫度為35°C 40°C時(shí)，用碳酸鈉調(diào)pH值為8.5，攪拌均勻后加入相當(dāng)于動(dòng)物組織量1.5%的復(fù)合酶I，36°C恒溫孵育，16kHz超聲酶解2.0h,調(diào)PH值為6.5，加入相當(dāng)于動(dòng)物組織量2.0%的復(fù)合酶II，42°C恒溫孵育，17kHz超聲酶解3h。(3)提高溫度至90°C，快速滅活酶30min，然后自然冷卻降溫。(4)將酶解后的溶液經(jīng)0.22 μ m微孔濾膜過(guò)濾。(5)取濾液濃縮至相對(duì)密度為1: 1.2，制得濃縮液。實(shí)施例5:利用復(fù)合酶對(duì)雞肝進(jìn)行酶解。(I)取雞肝1kg，粉碎使其能過(guò)90目篩子。(2)加水制成8%的懸浮液，80°C加熱30min，降低溫度到35°C 40°C時(shí)，用碳酸鈉調(diào)PH值為8.0，攪拌均勻后加入相當(dāng)于動(dòng)物組織量1.2%的復(fù)合酶I，38°C恒溫孵育，15kHz超聲酶解2.0h，調(diào)pH值為7.2，加入相當(dāng)于動(dòng)物組織量2.5%的復(fù)合酶II，39°C恒溫孵育，16kHz超聲酶解2h。(3)提高溫度至90°C，快速滅活酶30min，然后自然冷卻降溫。(4)將酶解后的溶液經(jīng)0.22 μ m微孔濾膜過(guò)濾。(5)取濾液濃縮至相對(duì)密度為1: 1.0，制得濃縮液。實(shí)施例6:利用復(fù)合酶對(duì)魚骨進(jìn)行酶解。(I)取魚骨Ikg,粉 碎使其能過(guò)100目篩。(2)加水制成30%的懸浮液，升高溫度到35°C 40°C時(shí)，用堿調(diào)pH值為8.5，攪拌均勻后加入相當(dāng)于動(dòng)物組織量1.0%的復(fù)合酶I，37°C恒溫孵育，15kHz超聲酶解2.0h，調(diào)pH值為6.5，加入相當(dāng)于動(dòng)物組織量0.5%的復(fù)合酶II，55°C恒溫孵育，17kHz超聲酶解5h。(3)提高溫度至100°C，快速滅活酶25min，然后自然冷卻降溫。(4)將酶解后的溶液經(jīng)0.22 μ m微孔濾膜過(guò)濾。(5)取濾液濃縮至相對(duì)密度為1: 1.1，制得濃縮液。實(shí)施例7:利用復(fù)合酶對(duì)牛肉進(jìn)行酶解。(I)取牛肉1kg，粉碎使其能過(guò)80目篩。(2)加水制成20%的懸浮液，提高溫度到35°C 40°C時(shí)，用碳酸鈉調(diào)pH值為9.0，攪拌均勻后加入相當(dāng)于動(dòng)物組織量0.5%的復(fù)合酶I，35°C恒溫孵育，14kHz超聲酶解1.5h，調(diào)PH值為7.0，加入相當(dāng)于動(dòng)物組織量3.0%的復(fù)合酶II，45°C恒溫孵育，15kHz超聲酶解3h。(3)提高溫度至100°C，快速滅活酶20min，然后自然冷卻降溫。(4)將酶解后的溶液經(jīng)0.22 μ m微孔濾膜過(guò)濾。(5)取濾液濃縮至相對(duì)密度為1: 1.05，制得濃縮液。
權(quán)利要求
1.利用復(fù)合酶提取動(dòng)物小分子多肽及氨基酸的方法和工藝，其特征在于復(fù)合酶用于提取動(dòng)物小分子多肽及氨基酸的方法和具體生產(chǎn)工藝為(I)將動(dòng)物組織粉碎，使其能通過(guò)80目 200目篩子，加水配成濃度為8% 30%的混懸液；(2)提高溫度為35°C 40°C，用碳酸鈉調(diào)節(jié)PH值為8. O 9. O,再加入動(dòng)物組織O. 5% 2. O %的復(fù)合酶I，然后將其放在超聲裝置中，14 16kHz超聲酶解Ih 2h，使細(xì)胞間的蛋白充分酶解，再用碳酸鈉調(diào)節(jié)pH值為6. 5 7. 5，加入相當(dāng)于動(dòng)物組織O. 5% 3. O %的復(fù)合酶II，充分?jǐn)噭?，控制水浴的溫度?7°C 45°C，15 17kHz超聲酶解Ih 6h，在酶解的同時(shí)需適當(dāng)?shù)臄噭?dòng)水浴，這樣有利于酶的水解效果，縮短酶解時(shí)間；(3)酶解完成后，提高酶解液溫度至90°C 100°C，滅活酶20 30min ； (4)將酶解后的溶液經(jīng)O. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾；(5)取濾液濃縮至相對(duì)密度為I : 1.0 I : I. 2，制得濃縮液。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的利用復(fù)合酶提取動(dòng)物小分子多肽及氨基酸的方法和工藝，其特征在于復(fù)合酶I主要由胰蛋白酶30 % 60 %、胰脂肪酶10 % 30 %和胰淀粉酶5 % 20%組成，酶的活性單位為2萬(wàn)U/g 20萬(wàn)U/g，能夠分解細(xì)胞間的脂肪和部分的蛋白質(zhì)。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的利用復(fù)合酶提取動(dòng)物小分子多肽及氨基酸的方法和工藝，其特征在于復(fù)合酶II是由堿性蛋白酶5% 30%、復(fù)合風(fēng)味蛋白酶5% 30%、復(fù)合蛋白酶5% 30%、中性蛋白酶10% 50%、木瓜蛋白酶1% 30%組成，總質(zhì)量組成為100%，酶的活性單位為5萬(wàn)U/g 30萬(wàn)U/g。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的利用復(fù)合酶提取動(dòng)物小分子多肽及氨基酸的方法和工藝，其特征在于可應(yīng)用于鮮海參、鮑魚、牡蠣、豬骨、牛肉、雞肝、魚骨、豬蹄、雞爪、豬皮、牛皮的加工。
全文摘要
利用復(fù)合酶提取動(dòng)物小分子多肽及氨基酸的方法和工藝(1)將動(dòng)物組織粉碎，使其能通過(guò)80目～200目篩子，加水配成濃度為8％～30％的混懸液；(2)提高溫度為35℃～40℃，用碳酸鈉調(diào)節(jié)pH值為8.0～9.0，再加入動(dòng)物組織0.5％～2.0％的復(fù)合酶I，14～16kHz超聲酶解1h～2h，使細(xì)胞間的蛋白充分酶解，再調(diào)節(jié)pH值為6.5～7.5，加入相當(dāng)于動(dòng)物組織0.5％～3.0％的復(fù)合酶II，充分?jǐn)噭?，控制水浴的溫度?7℃～45℃，15～17kHz超聲酶解1h～6h；(3)酶解完成后，提高酶解液溫度至90℃～100℃，滅活酶20～30min；(4)將酶解后的溶液經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾；(5)取濾液濃縮至相對(duì)密度為1∶1.0～1∶1.2，制得濃縮液。復(fù)合酶I主要由胰蛋白酶、胰脂肪酶和胰淀粉酶組成，能夠分解細(xì)胞間的脂肪和部分的蛋白質(zhì)。復(fù)合酶II是由Alcalase(水解蛋白酶)、Flavourzyme(復(fù)合風(fēng)味蛋白酶)、Protamex(復(fù)合蛋白酶)、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶組成。本發(fā)明既能提高酶解效率，又能降低生產(chǎn)成本。
文檔編號(hào)C12P13/00GK103255190SQ20131020658
公開日2013年8月21日 申請(qǐng)日期2013年5月30日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月30日
發(fā)明者于國(guó)友, 王佃亮, 于麗萍, 王思遠(yuǎn) 申請(qǐng)人:威?？挡柹锼帢I(yè)有限公司, 中國(guó)人民解放軍第二炮兵總醫(yī)院