一種花藥培養(yǎng)液的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種花藥培養(yǎng)液的制備方法，包括如下步驟：配置各種營養(yǎng)物質(zhì)的母液，根據(jù)所需花藥培養(yǎng)液的劑量，將各種營養(yǎng)物質(zhì)的母液加入蒸餾水中，攪拌均勻，采用稀硫酸或稀鹽酸和稀氫氧化鈉來調(diào)節(jié)溶液的pH值，并定容，將配置好的培養(yǎng)液進(jìn)行滅菌后保存。本發(fā)明花藥培養(yǎng)液的制備方法工藝簡單、操作便捷，得到的花藥培養(yǎng)液含有大量的營養(yǎng)元素和微量元素，尤其是還添加了生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和酵母提取物，能滿足花藥培養(yǎng)過程中各個階段的營養(yǎng)需要，有效加快了花藥分裂成細(xì)胞團(tuán)，進(jìn)而分化成胚狀體，形成愈傷組織，由愈傷組織再分化成植株，由本發(fā)明方法得到的花藥培養(yǎng)液中無機(jī)養(yǎng)分的數(shù)量和比例合適，足以滿足植物細(xì)胞在各個階段營養(yǎng)上和生理上的需要。
【專利說明】一種花藥培養(yǎng)液的制備方法
[0001]
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明涉及一種花藥培養(yǎng)液的制備方法,屬于植物離體培養(yǎng)技術(shù)。
【背景技術(shù)】
[0003]培養(yǎng)液好比土壤，是組織培養(yǎng)中離體材料賴以生存和發(fā)展的基地。現(xiàn)有花藥培養(yǎng)液不能滿足花藥培養(yǎng)過程中各個階段的營養(yǎng)需要，尤其是其中的無機(jī)養(yǎng)分的數(shù)量和比例不合適，難以滿足植物細(xì)胞在各個階段營養(yǎng)上和生理上的需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]發(fā)明目的:本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種花藥離體培養(yǎng)培養(yǎng)液的制備方法，該方法工藝簡單、操作便捷、成本低。
[0005]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為:
一種花藥培養(yǎng)液的制備方法，包括如下步驟:
步驟1，配置100L花藥培養(yǎng)液，稱取75?100g KNO3溶于5L蒸餾水中得到母液a ;稱取25?5 Og NH4 NO3溶于5L蒸餾水中得到母液b ;稱取175?250g KH2PO4溶于5L蒸餾水中得到母液c ;稱取50?75g K2SO4溶于5L蒸餾水中得到母液d ;稱取250?325g CaCl2溶于5L蒸餾水中得到母液e ;稱取25?40g NaCl溶于5L蒸餾水中得到母液f ;分別稱取0.25、.5gZnCl2、0.025?0.04g CuSO4.H2O,0.4?0.75gMnS04.H2O 溶于 5L 蒸餾水中得到母液 g ;稱取FeSO4.7H205-7.5g和乙二胺四乙酸二鈉7.45g溶于5L蒸餾水中得到母液h ；
步驟2，按要求濃度稱好蔗糖、氨基酸、維生素B1、維生素B6、維生素H、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)以及酵母提取物，分別置于各自的燒杯中，再往各個燒杯中加入I?2ml0.1N (當(dāng)量濃度)氫氧化鈉溶解，再加蒸餾水稀釋至所需濃度；
步驟3，向培養(yǎng)液器皿中倒入50L蒸餾水，將母液a、母液b、母液C、母液d、母液e、母液f、母液g、母液h依次倒入，攪拌均勻后，將步驟2中配置好的各物質(zhì)加入培養(yǎng)液器皿中，攪拌均勻，繼續(xù)加入蒸餾水；
步驟4，調(diào)節(jié)溶液的PH值為5.8-6.0后定容，得到所需的培養(yǎng)液；
步驟5，將配置好的培養(yǎng)液進(jìn)行滅菌后保存。
[0006]其中，步驟2中，分別稱取蔗糖100-200g、氨基酸1.3?2.2g、維生素B10.3?0.6g、維生素B60.7?0.8g、維生素H0.5?0.7g、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)0.06?0.07g以及酵母提取物2?3g。
[0007]其中，所述氨基酸由0.2-0.5gL_天冬酰胺、0.5-0.8gL_胱氨酸和0.6-0.9gL_丙氨酸組成。
[0008]其中，所述生長調(diào)節(jié)物質(zhì)由0.01-0.02玉米素和0.05g 6_芐基腺嘌呤組成。
[0009]其中，步驟4中，采用稀硫酸或稀鹽酸和稀氫氧化鈉來調(diào)節(jié)溶液的PH值。
[0010]其中，步驟5中，所述培養(yǎng)液的滅菌為在高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，汽相150°C下，滅菌1h0
[0011]其中，步驟5中，將滅菌后的培養(yǎng)液置于0-3°C保存。
[0012]有益效果:本發(fā)明花藥培養(yǎng)液的制備方法工藝簡單、操作便捷，得到的花藥培養(yǎng)液含有大量的營養(yǎng)元素和微量元素，尤其是還添加了生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和酵母提取物，能滿足花藥培養(yǎng)過程中各個階段的營養(yǎng)需要，有效加快了花藥分裂成細(xì)胞團(tuán)，進(jìn)而分化成胚狀體，形成愈傷組織，由愈傷組織再分化成植株，由本發(fā)明方法得到的花藥培養(yǎng)液中無機(jī)養(yǎng)分的數(shù)量和比例合適，足以滿足植物細(xì)胞在各個階段營養(yǎng)上和生理上的需要。
【具體實(shí)施方式】
[0013]根據(jù)下述實(shí)施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實(shí)施例所描述的內(nèi)容僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會限制權(quán)利要求書中所詳細(xì)描述的本發(fā)明。
[0014]實(shí)施例1
一種花藥培養(yǎng)液，該培養(yǎng)液由無機(jī)營養(yǎng)物、碳源、維生素、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和有機(jī)附加物五類物質(zhì)組成，載體為水，
其中，無機(jī)營養(yǎng)物按以下配比制成=KNO3:150?200mg/L，NH4 NO3:50?100mg/L，KH2PO4:350-500mg/L，K2SO4:100-l50mg/L，CaCl2:500-650mg/L，NaCl:50-80mg/L，ZnCl2:0.5?1.0mg/L, CuSO4.H2O:0.05?0.08mg/L, MnSO4.H2O:0.8?1.5mg/L, FeSO4:1.(l.5mg/L ；其中，所述碳源為蔗糖或葡萄糖；
其中，所述維生素為維生素B1、維生素B6和維生素H ;
其中，所述生長調(diào)節(jié)物質(zhì)由以下配比制成:廣2 mg/L玉米素和疒3 mg/L 6-芐基腺嘌
吟；
其中，所述有機(jī)附加物為酵母提取物以及氨基酸。
[0015]其中，所述培養(yǎng)液的PH值為5.5?6.5。
[0016]其中，所述培養(yǎng)液的EC值為1.0-l.5ms/cm。
[0017]其中，所述蔗糖或葡萄糖在培養(yǎng)液中的摩爾濃度為0.1-0.2mol/L。
[0018]其中，所述氨基酸為L-天冬酰胺、L-胱氨酸以及L-丙氨酸，其中，L-天冬酰胺、L-胱氨酸和L-丙氨酸在培養(yǎng)液中的摩爾濃度均為5?7mmol/L。
[0019]其中，所述維生素BI在培養(yǎng)液中的摩爾濃度為f 2mmol/L，維生素B6在培養(yǎng)液中的摩爾濃度為1.5-2mmol/L和維生素H在培養(yǎng)液中的摩爾濃度為f 1.5mmol/L。
[0020]其中，所述酵母提取物在培養(yǎng)液中的摩爾濃度為2?3mmol/L。
[0021]上述花藥培養(yǎng)液的制備方法包括如下步驟:
步驟1，配置IOOL花藥培養(yǎng)液，稱取IOOg KNO3溶于5L蒸餾水中得到母液a;稱取5Og NH4 NO3溶于5L蒸餾水中得到母液b ;稱取250g KH2PO4溶于5L蒸餾水中得到母液c ；稱取75g K2SO4溶于5L蒸餾水中得到母液d;稱取325g CaCl2溶于5L蒸餾水中得到母液e ;稱取40g NaCl溶于5L蒸餾水中得到母液f ;分別稱取0.5g ZnCl2、0.04g CuSO4.H2O,0.75gMnS04.H2O溶于5L蒸餾水中得到母液g ;稱取FeSO4.7H207.5g和乙二胺四乙酸二鈉
7.45g溶于5L蒸餾水中得到母液h ；
步驟2,分別稱取200g鹿糖、0.5gL-天冬酰胺、0.8gL-胱氨酸、0.9gL_丙氨酸、0.6g維生素B1、0.8g維生素B6、0.7g維生素H、0.02玉米素、0.05g 6-芐基腺嘌呤以及2g酵母提取物，分別置于各自的燒杯中，再往各個燒杯中加入I?2ml0.1N (當(dāng)量濃度的)氫氧化鈉溶解，再加蒸餾水稀釋至所需濃度；
步驟3，向培養(yǎng)液器皿中倒入50L蒸餾水，將母液a、母液b、母液C、母液d、母液e、母液f、母液g、母液h依次倒入，攪拌均勻后，將步驟2中配置好的各物質(zhì)加入培養(yǎng)液器皿中，攪拌均勻，繼續(xù)加入蒸餾水；
步驟4，用稀硫酸和稀氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液的PH值為6.0后定容；
步驟5，將配置好的培養(yǎng)液置于高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，汽相150°C下，滅菌lh，將滅菌后的培養(yǎng)液置于(T3°C保存。
[0022]實(shí)施例2
上述花藥培養(yǎng)液的制備方法包括如下步驟:
步驟1，配置100L花藥培養(yǎng)液，稱取75g KNO3溶于5L蒸餾水中得到母液a ;稱取25 gNH4 NO3溶于5L蒸餾水中得到母液b ;稱取175g KH2PO4溶于5L蒸餾水中得到母液c ;稱取50g K2SO4溶于5L蒸餾水中得到母液d ;稱取250g CaCl2溶于5L蒸餾水中得到母液e ;稱取2 5g NaCl溶于5L蒸餾水中得到母液f;分別稱取0.2 5g ZnCl2、0.025g CuSO4.H2O、
0.4gMnS04.Η20溶于5L蒸餾水中得到母液g ;稱取FeSO4 WH2OSg和乙二胺四乙酸二鈉7.45g溶于5L蒸餾水中得到母液h;
步驟2,分別稱取IOOg鹿糖、0.2gL-天冬酰胺、0.5gL-胱氨酸、0.6gL_丙氨酸、0.3g維生素B1、0.7g維生素B6、0.5g.維生素H、0.01玉米素、0.05g 6-芐基腺嘌呤以及3g酵母提取物；
步驟3，向培養(yǎng)液器皿中倒入50L蒸餾水，將母液a、母液b、母液C、母液d、母液e、母液f、母液g、母液h依次倒入，攪拌均勻后，將步驟2中配置好的各物質(zhì)加入培養(yǎng)液器皿中，攪拌均勻，繼續(xù)加入蒸餾水；
步驟4，用稀硫酸和稀氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液的PH值為5.8后定容；
步驟5，將配置好的培養(yǎng)液置于高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，汽相150°C下，滅菌lh，將滅菌后的培養(yǎng)液置于(T3°C保存。
【權(quán)利要求】
1.一種花藥培養(yǎng)液的制備方法，其特征在于:包括如下步驟: 步驟1，配置IOOL花藥培養(yǎng)液，稱取75?100g KNO3溶于5L蒸餾水中得到母液a ;稱取25?5 Og NH4 NO3溶于5L蒸餾水中得到母液b ;稱取175?250g KH2PO4溶于5L蒸餾水中得到母液c ;稱取50?75g K2SO4溶于5L蒸餾水中得到母液d ;稱取250?325g CaCl2溶于5L蒸餾水中得到母液e ;稱取25?40g NaCl溶于5L蒸餾水中得到母液f ;分別稱取0.25、.5gZnCl2、0.025?0.04g CuSO4.H2O,0.4?0.75gMnS04.H2O 溶于 5L 蒸餾水中得到母液 g ;稱取FeSO4.7H205-0.5g和乙二胺四乙酸二鈉7.45g溶于5L蒸餾水中得到母液h ； 步驟2，按要求濃度稱好蔗糖、氨基酸、維生素B1、維生素B6、維生素H、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)以及酵母提取物，分別置于各自的燒杯中，再往各個燒杯中加入I?2ml0.1N氫氧化鈉溶解，再加蒸餾水稀釋至所需濃度； 步驟3，向培養(yǎng)液器皿中倒入50L蒸餾水，將母液a、母液b、母液C、母液d、母液e、母液f、母液g、母液h依次倒入，攪拌均勻后，將步驟2中配置好的各物質(zhì)加入培養(yǎng)液器皿中，攪拌均勻，繼續(xù)加入蒸餾水； 步驟4，調(diào)節(jié)溶液的PH值為5.0-6.0后定容，得到所需的培養(yǎng)液； 步驟5，將配置好的培養(yǎng)液進(jìn)行滅菌后保存。
2.(克當(dāng)量濃度) 根據(jù)權(quán)利要求1所述花藥培養(yǎng)液的制備方法，其特征在于:步驟2中，分別稱取蔗糖10(T200g、氨基酸1.3?2.2g、維生素B10.3?0.6g、維生素B60.7?0.8g、維生素H0.5?0.7g、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)0.06、.07g以及酵母提取物2?3g。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述花藥培養(yǎng)液的制備方法，其特征在于:所述氨基酸由0.2-0.5gL-天冬酰胺、0.5-0.8gL-胱氨酸和0.6-0.9gL_丙氨酸組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述花藥培養(yǎng)液的制備方法，其特征在于:所述生長調(diào)節(jié)物質(zhì)由0.0 0.02玉米素和0.05g 6-芐基腺嘌呤組成。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述花藥培養(yǎng)液的制備方法，其特征在于:步驟4中，采用稀硫酸或稀鹽酸和稀氫氧化鈉來調(diào)節(jié)溶液的PH值。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述花藥培養(yǎng)液的制備方法，其特征在于:步驟5中，所述培養(yǎng)液的滅菌為在高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，汽相150°C下，滅菌lh。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述花藥培養(yǎng)液的制備方法，其特征在于:步驟5中，將滅菌后的培養(yǎng)液置于(T3°C保存。
【文檔編號】C12N5/04GK103436482SQ201310330909
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年8月1日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月1日
【發(fā)明者】譚美蘭 申請人:南京年吉冷凍食品有限公司