DWTl基因的應(yīng)用及恢復(fù)DWTl基因缺失導(dǎo)致水稻矮桿的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種生物工程【技術(shù)領(lǐng)域】中的DWTl基因的應(yīng)用及恢復(fù)DWTl基因缺失導(dǎo)致水稻矮桿的方法，所述的DWTl基因編碼如SEQ?ID?NO.3所示的氨基酸，所述的應(yīng)用是:通過(guò)基因變異或抑制表達(dá)使得水稻植株形態(tài)發(fā)生改變，獲得水稻矮桿株系并可以用來(lái)生產(chǎn)種子。本發(fā)明還涉及一種恢復(fù)DWTl基因缺失導(dǎo)致水稻矮桿的方法，通過(guò)引物擴(kuò)增DWTl基因，使用遺傳轉(zhuǎn)化手段轉(zhuǎn)化突變體植株，能夠使得突變體恢復(fù)到野生型表型。本發(fā)明獲得的水稻突變體進(jìn)入生殖生長(zhǎng)階段后分蘗發(fā)育遲緩，抽穗期分蘗莖節(jié)高度相比于主莖高度有不同程度下降，產(chǎn)量并無(wú)顯著下降，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上具有重要的應(yīng)用。
【專利說(shuō)明】DWTI基因的應(yīng)用及恢復(fù)DWTI基因缺失導(dǎo)致水稻矮桿的方法
[0001]本申請(qǐng)是申請(qǐng)?zhí)枮?01210086493.6，申請(qǐng)日為2012.3.28，發(fā)明名稱為《水稻矮桿株系創(chuàng)制的方法及其用途、恢復(fù)矮桿性狀的方法》的分案申請(qǐng)。
【技術(shù)領(lǐng)域】[0002]本發(fā)明涉及的是一種生物工程【技術(shù)領(lǐng)域】中的水稻株系創(chuàng)制的方法，具體是一種DffTl基因的應(yīng)用及恢復(fù)DWTl基因缺失導(dǎo)致水稻矮桿的方法。
【背景技術(shù)】
[0003]水稻是我國(guó)最主要的糧食作物之一，我國(guó)有60%以上人口以稻米為主食，是世界上最大的稻米生產(chǎn)國(guó)和消費(fèi)國(guó)。我國(guó)水稻年播種面積3000萬(wàn)公頃，占世界的20%;產(chǎn)量
1.85億噸，占世界的近1/3，單位面積產(chǎn)量6.35噸/公頃。比全球平均產(chǎn)量3.85噸/公頃高65%。水稻在我國(guó)谷物產(chǎn)量中始終保持在總量的40%左右，占據(jù)了近半壁江山。
[0004]株型建立是高等植物發(fā)育過(guò)程中的重要事件，對(duì)于植物更好地適應(yīng)外界環(huán)境、充分吸收光能具有重要意義。高等植物的株型建成主要取決于株高、分支數(shù)目和分支角度等幾個(gè)方面，涉及多種植物器官的發(fā)生和形態(tài)建成過(guò)程。在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，合理株型是作物豐產(chǎn)的基礎(chǔ)，其中矮生性狀是理想株型性狀的一個(gè)重要方面。矮桿作物品種耐肥，抗倒伏，適宜密植，能夠充分利用土地和光照資源。上世紀(jì)60年代，水稻、玉米、小麥等作物矮桿品種的選育和推廣，引發(fā)了全球作物育種史上著名的綠色革命。
[0005]自從1922年印度學(xué)者Parnell等首次報(bào)道了一個(gè)水稻自然矮桿突變株系后，迄今已篩選到70多個(gè)不等位的矮桿和半矮桿株系，但目前在生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用的主要是含sd-1血緣的半矮桿株系。根據(jù)對(duì)1980-1985年間南方稻區(qū)育成的313個(gè)秈稻品種的系譜分析結(jié)果，發(fā)現(xiàn)含sd-Ι血緣的品種占總品種數(shù)的75.6%。其他矮源難以應(yīng)用的原因在于所攜帶突變基因不僅對(duì)株高有作用，通常還對(duì)構(gòu)成水稻產(chǎn)量的穗數(shù)、粒數(shù)和粒重3個(gè)因素中的某I個(gè)或某幾個(gè)性狀產(chǎn)生不良的多效影響。矮源的單一化造成潛在的遺傳背景單一的風(fēng)險(xiǎn)，也限制了由此育成品種產(chǎn)量的進(jìn)一步提高。因此，研究選育新型水稻矮桿株系并對(duì)其調(diào)控機(jī)理進(jìn)行深入研究，是進(jìn)一步發(fā)掘水稻優(yōu)質(zhì)矮源的必要前提和基礎(chǔ)。
[0006]現(xiàn)有的轉(zhuǎn)基因工程技術(shù)是建立在對(duì)植物正常發(fā)育過(guò)程分子調(diào)控機(jī)制充分研究和認(rèn)識(shí)的基礎(chǔ)上加以應(yīng)用的，因此，深入研究水稻株型建立特別是水稻矮桿的機(jī)理及調(diào)控網(wǎng)絡(luò)并加以應(yīng)用是在生產(chǎn)上研發(fā)新型優(yōu)良株型的基礎(chǔ)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足，提供一種DWTl基因的應(yīng)用及恢復(fù)DWTl基因缺失導(dǎo)致水稻矮桿的方法；本發(fā)明利用DWTl基因及其蛋白參與調(diào)控水稻株型特別是控制水稻莖桿高度的特點(diǎn)，及其利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)控制水稻株型上的特性，通過(guò)突變?cè)摰鞍仔蛄谢蛞种圃摰鞍椎谋磉_(dá)產(chǎn)生新的水稻矮桿株系，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上具有十分重要的應(yīng)用。[0008]第一方面，本發(fā)明涉及一種DWTl基因的應(yīng)用，所述的DWTl基因編碼如SEQ IDN0.3所示的氨基酸，所述的應(yīng)用是:通過(guò)基因變異或抑制表達(dá)使得水稻植株形態(tài)發(fā)生改變，獲得水稻矮桿株系并可以用來(lái)生產(chǎn)種子。
[0009]第二方面，本發(fā)明還涉及一種恢復(fù)DWTl基因缺失導(dǎo)致水稻矮桿的方法，通過(guò)引物擴(kuò)增DWTl基因，使用遺傳轉(zhuǎn)化手段轉(zhuǎn)化突變體植株，能夠使得突變體恢復(fù)到野生型表型。
[0010]優(yōu)選地，所述的DWTl基因編碼如SEQ ID N0.3所示的氨基酸。
[0011]優(yōu)選地，所述引物為:
[0012]DffT-COM-F:5’-GCATGGGAATTCCGGTTTGACGCTTACTGTGGT-3’ ;
[0013]DffT-COM-R:5’-CCTTAAGGTCACCTGGCGTTAAGCAAAATGATCAG-3’ 。
[0014]優(yōu)選地，包括如下步驟:
[0015]將根癌農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtumefaciens) EHA105 (DffT-COM) CGMCC Νο.4819 轉(zhuǎn)入所述水稻矮桿株系，培育，即得；其中CGMCC N0.4819含有編碼如SEQ ID N0.3所示氨基酸的核苷酸；具體包括如下步驟:
[0016](a)提供攜帶表達(dá)載體的根癌農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105(DffT-COM)CGMCC N0.4819;
[0017](b)將水稻細(xì)胞或組織或器官與步驟(a)中的農(nóng)桿菌接觸，從而使編碼如SEQ IDN0.3所示氨基酸的核苷酸轉(zhuǎn)入水稻細(xì)胞，并且整合到水稻細(xì)胞的染色體上；
[0018](c)選擇轉(zhuǎn)入所述核苷酸的水稻細(xì)胞或組織，再生，獲得水稻植株。
[0019]本發(fā)明具有如下的有益效果:本發(fā)明通過(guò)控制水稻Homeobox結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄因子DffTl基因及其編碼蛋白獲得水稻莖節(jié)矮化和株型變化的變異株，實(shí)現(xiàn)控制水稻莖節(jié)高度和株型建成；本發(fā)明獲得的水稻突變體在營(yíng)養(yǎng)期與來(lái)源親本無(wú)明顯差異，進(jìn)入生殖生長(zhǎng)階段后分蘗發(fā)育遲緩，抽穗期分蘗莖節(jié)高度相比于主莖高度有不同程度下降，雖然分蘗穗粒數(shù)略低于來(lái)源親本，但主穗粒數(shù)和粒重都有大幅提高，因此產(chǎn)量并無(wú)顯著下降，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上具有十分重要的應(yīng)用。
[0020]本發(fā)明涉及的根癌土壤桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)EHA105 (DWT-COM)S經(jīng)于2011年4月29日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)，地址北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編:100101，保藏號(hào)CGMCC N0.4819。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0021]圖1為pHB載體及DWTl RNAi構(gòu)建示意圖。
[0022]圖2為dwtl突變體植株的形態(tài)學(xué)觀察示意圖。
[0023]圖3為dwtl突變體分蘗矮化類型統(tǒng)計(jì)圖。
[0024]圖4為DWTl基因表達(dá)模式圖。
[0025]圖5為互補(bǔ)突變體得到野生型表型示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0026]下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，例如Sambrook 等分子克隆:實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)(New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。
[0027]所述DWTl基因?yàn)榫幋a如SEQ ID N0.3所示氨基酸序列的核苷酸序列。
[0028]實(shí)施例1、水稻矮桿株系創(chuàng)制的方法
[0029]1.1通過(guò)基因工程或其他手段創(chuàng)制dwtl水稻矮桿株系
[0030]本實(shí)施例中DWTl基因的編碼區(qū)序列如SEQ ID N0.3所示。本實(shí)施例的dwtl突變材料是由常規(guī)粳稻品種武育粳7號(hào)(又名9522)經(jīng)過(guò)對(duì)DWTl基因的RNA干擾或者序列變
異獲得。
[0031]1.2水稻分蘗株高控制蛋白基因的克隆
[0032]利用發(fā)明人構(gòu)建的包含分蘗株高控制蛋白基因DWTl及其突變基因dwtl組成的、本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員清楚的水稻基因定位克隆(map-based cloning或position cloning)群體，按分子標(biāo)記定位于I個(gè)小的基因組片段內(nèi)，例如50Kb內(nèi)。在此基礎(chǔ)上，用常規(guī)方法分離包含該片段的基因組DNA克隆。經(jīng)酶切和進(jìn)一步的雜交鑒定確定其中一個(gè)含完整水稻的莖桿伸長(zhǎng)蛋白DWTl。
[0033]經(jīng)全核苷酸序列分析結(jié)果表明水稻莖桿伸長(zhǎng)基因全長(zhǎng)為6766bp (SEQ ID N0.1,包含調(diào)控區(qū)和內(nèi)含子)。經(jīng)軟件分析和cDNA克隆，其ORF如SEQ ID N0.2所示，編碼全長(zhǎng)為533個(gè)氨基酸的水稻分蘗株高控制蛋白，其序列如SEQ ID N0.3所示。
[0034]1.3水稻分蘗株高控制蛋白基因的點(diǎn)突變
[0035]本實(shí)施例的dwtl突變材料是由常規(guī)粳稻品種武育粳7號(hào)(又名9522)經(jīng)過(guò)對(duì)DWTl基因的序列變異獲得，經(jīng)過(guò)對(duì)DWTl突變基因dwtl的序列比較，分蘗株高控制蛋白的移碼和提前終止可以消除野生分蘗株高控制蛋白的功能；本實(shí)施例DWTl突變基因是在編碼區(qū)的I個(gè)堿基對(duì)缺失(其序列如SEQ ID N0.4所示)引起水稻分蘗株高控制蛋白功能喪失。
[0036]1.4通過(guò)RNAi手段降低水稻品種中的DWTl的表達(dá)水平
[0037]為了對(duì)DWTl蛋白進(jìn)行應(yīng)用，構(gòu)建了 DWTl基因RNAi的載體，并轉(zhuǎn)化野生型9522植株，以朋降低DWTl的表達(dá)，從而達(dá)到改變水稻植株形態(tài)的目的。
[0038]從水稻cDNA克隆(DWT1_EST clone)中用引物
[0039]DWT-R1-F:5，GGCAAGCTTTCTAGACACCAGCAGATGCTCTATCA3，和
[0040]DffT-R1-R:5’ GGCGAATTCGGATCCGCTCCAGGCGCAGCTCTTGT3’
[0041]擴(kuò)增出DWTl基因編碼區(qū)序列的第688位至第975位共288bp的特異性片段；將這個(gè)片段分別通過(guò)BamHI/Xbal和HindIII/EcoRI正反向插入連入加入含有水稻Intron序列的pBluescript SK載體；測(cè)序驗(yàn)證正確,再用HindIII和SacI酶切切下含有DWTl正反向特異性片段和Intron和片段，連入經(jīng)同樣酶切的pHB載體中(圖1)。再次測(cè)序檢驗(yàn)核苷酸序列是否正確，成功構(gòu)建pHB-DWTl-RNAi質(zhì)粒。
[0042]將含有DWTl基因RNA干擾構(gòu)建的農(nóng)桿菌在含有Kan (50 μ g/μ I)的YEB平板上劃線，獲的單菌落。挑單菌落接種到3ml含抗生素的YEB液體培養(yǎng)基中于28°C振蕩培養(yǎng)過(guò)夜，第2天按1%接種量轉(zhuǎn)接入50ml含抗生素的AB液體培養(yǎng)基中，200rpm繼續(xù)振蕩培養(yǎng)至0D_為0.6至0.8左右時(shí)，將新鮮的農(nóng)桿菌菌液于5000rpm、4離心5分鐘，收集并重懸于1/3體積的AAM液體培養(yǎng)基中，此時(shí)即可用于轉(zhuǎn)化水稻各種受體材料。
[0043]本實(shí)施例采用常規(guī)的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化方法轉(zhuǎn)化`水稻9522的幼胚愈傷。取授粉后12_15天的9522未成熟種子經(jīng)70%乙醇浸泡I分鐘后，于NaClO溶液中(與水1:3混合，加2_3滴吐溫20)消毒90分鐘以上，用無(wú)菌水沖洗4-5次，然后用解剖刀和鑷子挑出幼胚并接種月N6D2培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織，在26土1°C、避光條件下培育，4天后可用于轉(zhuǎn)化。將幼胚愈傷浸泡入新鮮的AAM農(nóng)桿菌菌液中并不時(shí)搖動(dòng)，20分鐘后將水稻材料移出，在無(wú)菌濾紙上吸去過(guò)多的菌液，隨即轉(zhuǎn)移到N6D2C培養(yǎng)基上，于26°C共培養(yǎng)3天。共培養(yǎng)時(shí)，在共培養(yǎng)培養(yǎng)基中加入乙酰丁香酮，使用濃度為100 μ M。3天后，從共培養(yǎng)培養(yǎng)基上取出愈傷組織，切去胚芽并轉(zhuǎn)入含有25mg/L Hyg的選擇培養(yǎng)基上進(jìn)行選擇培養(yǎng)。7_12天后將抗性愈傷組織轉(zhuǎn)到含有50mg/L Hyg的選擇培養(yǎng)基上繼續(xù)篩選。10-12天后生長(zhǎng)旺盛的抗性愈傷組織轉(zhuǎn)移到預(yù)分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)一周左右，再移至分化培養(yǎng)基上分化(12小時(shí)光照/天)。再生的小苗在Iz^MStlH培養(yǎng)基上生根壯苗，隨后移入人工氣候室盆土栽培。
[0044]獲得的再生植株移栽成活后以除草劑再次篩選轉(zhuǎn)化植株；陽(yáng)性植株提取葉片總DNA，經(jīng)PCR進(jìn)一步鑒定轉(zhuǎn)化植株。RT-PCR分析陽(yáng)性植株中DWTl基因的表達(dá)水平，表達(dá)水平降低到野生型50%以下為有效RNA干擾植株。
[0045]1.5DWT1蛋白活性喪失或表達(dá)水平降低水稻分蘗株高
[0046]對(duì)dwtl突變體植株的形態(tài)學(xué)觀察。如圖2，野生型和突變型dwtl的表型對(duì)比顯示野生型主莖及分蘗高度一致(左)(A，B，C)，而dwtl突變型分蘗比主莖矮化，莖節(jié)節(jié)間縮短(右)(A，B, C);突變體中縮短的莖節(jié)處著生的葉鞘被拉伸撕裂(D);突變體中莖節(jié)有不同程度的縮短(E);野生型莖節(jié)處的細(xì)胞伸長(zhǎng)正常(F)，而突變體的莖節(jié)的細(xì)胞扁平無(wú)法正?？v向伸長(zhǎng)(G)。
[0047]dwtl突變體中主莖高度為73.2cm，與野生型的主莖(76.16)無(wú)明顯高度差異，而突變體的分蘗平均為45.86cm遠(yuǎn)低于正常野生型分蘗的74.16cm。突變體中節(jié)間由正常發(fā)育的10cm-20cm縮短至0.5cm左右。在dwtl突變體中主莖和分蘗都存在不同程度的莖節(jié)縮短，主要分為以下三種縮短模式:類型一，第二節(jié)間特異縮短；類型二，第二三節(jié)間特異縮短；類型三，第二三四節(jié)間特異縮短(圖3)。在主莖中莖節(jié)縮短的比例較低只有約25.93%的第二莖節(jié)特異縮短，其他幾乎全部發(fā)育正常。絕大部分的分蘗(98.60%)出現(xiàn)了不同程度的莖節(jié)縮短現(xiàn)象，其中15.38%為類型一，35.66%為類型二，37.06為類型三，這三種縮短模式占全部縮短模式的88%以上。
[0048]1.6DWT1 表達(dá)特征
[0049]利用dwtl突變株的來(lái)源親本9522各個(gè)器官組織，提取RNA，進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄得到cDNA第一鏈，利用熒光定量PCR的方法確定DWTl基因的表達(dá)模式(如圖4)，發(fā)現(xiàn)DWTl基因在水稻胚芽鞘，根尖，幼穗，幼胚和愈傷中有顯著表達(dá)。
[0050]1.7DWT1基因在創(chuàng)制其他水稻品系矮桿株系中的應(yīng)用
[0051]將dwtl突變體與秈稻品種龍?zhí)仄諦或者9311水稻品系雜交，在F2代中具有秈型特征的植株中均出現(xiàn)了分蘗矮桿株系，符合3:1分離規(guī)律，進(jìn)而證明DWTl基因在其他水稻品種中發(fā)生核苷酸序列變化時(shí)，同樣可以產(chǎn)生矮桿植株；選擇其中為分蘗特異矮化的植株為定位群體。
[0052]實(shí)施例2、dwtl突變體在水稻制種中的用途
[0053]將dwtl突變體作為父本與三系或兩系雜交組合中的不育親本雜交，得到Fl代。在F2代中篩選同時(shí)具有矮桿及不`育特征的植株，將該植株與原不育未本對(duì)應(yīng)的保持系雜交。再次在F2代中篩選同時(shí)具有矮桿及不育特征的植株與保持系雜交，經(jīng)多代雜交篩選后獲得新的矮桿不育系，適宜作為雜交組合中的母本。在水稻雜交育種實(shí)踐中，在授粉季節(jié)前需對(duì)父本噴施赤霉素，促使父本穗高于母本穗，這樣可以提高花粉傳送和雜交的效率。dwtl突變體分蘗矮桿特性，使母本大部分穗比父本矮，可以省略父本噴施赤霉素步驟。
[0054]實(shí)施例3、恢復(fù)dwtl突變體矮桿性狀的方法
[0055]將編碼DWTl基因的基因組核苷酸序列轉(zhuǎn)入突變體dwtl植株，能夠使突變體恢復(fù)到野生型表型。
[0056]從水稻日本晴BAC克隆(0sJNBb0063g05)中用引物:
[0057]DWT-COM-F:5’GCATGGGAATTCCGGTTTGACGCTTACTGTGGT3’ 和
[0058]DffT-COM-R:5’ CCTTAAGGTCACCTGGCGTTAAGCAAAATGATCAG3’
[0059]擴(kuò)增出DWTl基因如SEQ ID N0.3所示的6766bp的基因組序列片段。
[0060]將該片段通過(guò)EcoRI和BstEII插入到用于轉(zhuǎn)化水稻的雙元載體pCAMBIA1301載體中；測(cè)序驗(yàn)證正確，該載體通過(guò)電擊導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌EHA105，得到根癌土壤桿菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105 (DffT-COM) CGMCC N0.4819，已經(jīng)于 2011 年 4 月 29 日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)，地址北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編:100101，保藏號(hào)CGMCCN0.4819。使用遺傳轉(zhuǎn)化手段轉(zhuǎn)化突變體dwtl和野生型9522成熟胚愈傷，以觀察是否會(huì)使突變體恢復(fù)到野生型表型。TO代獲得互補(bǔ)植株，圖4顯示TO代互補(bǔ)植株表現(xiàn)出的野生型表型。
[0061]綜上所述，本發(fā)明通過(guò)控制水稻Homeobox結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄因子DWTl基因及其編碼蛋白獲得水稻莖節(jié)矮化和株型變化的變異株，實(shí)現(xiàn)控制水稻莖節(jié)高度和株型建成；本發(fā)明獲得的水稻突變體在營(yíng)養(yǎng)期與來(lái)源親本無(wú)明顯差異，進(jìn)入生殖生長(zhǎng)階段后分蘗發(fā)育遲緩，抽穗期分蘗莖節(jié)高度相比于 主莖高度有不同程度下降，雖然分蘗穗粒數(shù)略低于來(lái)源親本，但主穗粒數(shù)和粒重都有大幅提高，因此產(chǎn)量并無(wú)顯著下降，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上具有十分重要的應(yīng)用。
【權(quán)利要求】
1.一種DWTl基因的應(yīng)用，其特征在于，所述的DWTl基因編碼如SEQ ID N0.3所示的氨基酸，所述的應(yīng)用是:通過(guò)基因變異或抑制表達(dá)使得水稻植株形態(tài)發(fā)生改變，獲得水稻矮桿株系并可以用來(lái)生產(chǎn)種子。
2.一種恢復(fù)DWTl基因缺失導(dǎo)致水稻矮桿的方法，其特征在于，通過(guò)引物擴(kuò)增DWTl基因，使用遺傳轉(zhuǎn)化手段轉(zhuǎn)化突變體植株，能夠使得突變體恢復(fù)到野生型表型。
3.如權(quán)利要求2所述的恢復(fù)DWTl基因缺失導(dǎo)致水稻矮桿的方法，其特征在于，所述的DffTl基因編碼如SEQ ID N0.3所示的氨基酸。
4.如權(quán)利要求2所述的恢復(fù)DWTl基因缺失導(dǎo)致水稻矮桿的方法，其特征在于，所述引物為:
DWT-COM-F:5’-GCATGGGAATTCCGGTTTGACGCTTACTGTGGT-3’ ;
DWT-COM-R:5，-CCTTAAGGTCACCTGGCGTTAAGCAAAATGATCAG-3，。
5.如權(quán)利要求2所述的恢復(fù)DWTl基因缺失導(dǎo)致水稻矮桿的方法，其特征在于，包括如下步驟:
將根癌農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens) EHA105 (DffT-COM) CGMCC N0.4819轉(zhuǎn)入所述水稻矮桿株系，培育， 即得；其中CGMCC N0.4819含有編碼如SEQ ID N0.3所示氨基酸的核苷酸；具體包括如下步驟: (a)提供攜帶表達(dá)載體的根癌農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtumefaciens) EHA105 (DffT-COM)CGMCC N0.4819; (b)將水稻細(xì)胞或組織或器官與步驟(a)中的農(nóng)桿菌接觸，從而使編碼如SEOID N0.3所示氨基酸的核苷酸轉(zhuǎn)入水稻細(xì)胞，并且整合到水稻細(xì)胞的染色體上； (c)選擇轉(zhuǎn)入所述核苷酸的水稻細(xì)胞或組織，再生，獲得水稻植株。
【文檔編號(hào)】C12N15/29GK103667312SQ201310382925
【公開(kāi)日】2014年3月26日 申請(qǐng)日期:2012年3月28日 優(yōu)先權(quán)日:2012年3月28日
【發(fā)明者】梁婉琪, 張大兵, 王文斐, 羅治靖, 陳明姣, 袁政 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)