一種獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑及其制備方法，該制劑是將枯草芽孢桿菌活化，然后發(fā)酵培養(yǎng)，在發(fā)酵液中加入羧甲基纖維素，溶解制得混合液，再將混合液加入硫酸鋁溶液中，形成凝聚囊，過濾得到凝聚囊，水洗，干燥得到獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑。本發(fā)明的枯草芽孢桿菌制劑為微囊制劑，它是將菌體包裹后低溫干燥制成，具有耐強(qiáng)酸、耐受抗生素等優(yōu)點，能夠有效保護(hù)枯草芽孢桿菌穿過胃酸，進(jìn)入腸道起到其作為益生菌的作用。同時，本發(fā)明的枯草芽孢桿菌制劑對抗生素耐受性強(qiáng)，可與抗生素同時使用，以達(dá)到更好的抗病增產(chǎn)效果。
【專利說明】一種獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑，同時還涉及該制劑的制備方法，屬 于微生物制劑領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002] 隨著集約化養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，獸類的各種疾病不斷發(fā)生，而且日益嚴(yán)重。目前防治獸 類疾病的主要手段是使用抗生素，但抗生素的使用容易導(dǎo)致細(xì)菌耐藥的產(chǎn)生及獸類產(chǎn)品中 藥物的殘留。因此，預(yù)防獸類的疾病發(fā)生，解決其副產(chǎn)品中藥物的殘留是亟待解決的問題。
[0003] 枯草芽孢桿菌是一種常見的益生菌，菌體在生長過程中產(chǎn)生的枯草菌素、多粘菌 素、制霉菌素、短桿菌肽等活性物質(zhì)，對致病菌或內(nèi)源性感染的條件致病菌有明顯的抑制作 用；枯草芽孢桿菌能夠迅速消耗環(huán)境中的游離氧，造成腸道低氧，促進(jìn)有益厭氧菌生長，并 產(chǎn)生乳酸等有機(jī)酸類，降低腸道PH值，間接抑制其他致病菌生長；枯草芽孢桿菌能夠刺激 動物免疫器官的生長發(fā)育，激活T、B淋巴細(xì)胞，提高免疫球蛋白和抗體水平，增強(qiáng)細(xì)胞免疫 和體液免疫功能，提高群體免疫力；枯草芽孢桿菌菌體自身合成a-淀粉酶、蛋白酶、脂肪 酶、纖維素酶等酶類，在消化道中與動物體內(nèi)的消化酶類一同發(fā)揮作用；能合成維生素 B1、 B2、B6、煙酸等多種B族維生素，提高動物體內(nèi)干擾素和巨噬細(xì)胞的活性。因此枯草芽孢桿 菌可以對動物疾病的預(yù)防起到很好的效果，但是目前枯草芽孢桿菌制劑大多為菌粉，主要 是通過添加載體或不加載體的情況下直接加熱或噴霧干燥制備而成，存在不耐強(qiáng)酸和對抗 生素敏感的缺陷，限制了其應(yīng)用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑。
[0005] 本發(fā)明的目的還在于提供一種獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑的制備方法。
[0006] 為了實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是提供一種獸用枯草芽孢桿菌微囊 制劑，將枯草芽孢桿菌活化，然后發(fā)酵培養(yǎng)，在發(fā)酵液中加入羧甲基纖維素，溶解制得混合 液，再將混合液加入硫酸鋁溶液中，形成凝聚囊，過濾得到凝聚囊，水洗，干燥得到獸用枯草 牙抱桿囷微囊制劑。
[0007] 所述獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑中枯草芽孢桿菌活菌數(shù)不低于l〇9CFU/g。
[0008] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案還在于提供一種獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑的制備方 法，包括以下步驟：
[0009] (1)將枯草芽孢桿菌接種到營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，在37°C、200r/min條件下培養(yǎng) 12-14h ；
[0010] (2)將步驟（1)活化的枯草芽孢桿菌接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在37°C、200r/min條件 下發(fā)酵24-72h ;
[0011] (3)在發(fā)酵液中加入發(fā)酵液質(zhì)量0. 1-1%的羧甲基纖維素，溶解制得混合液，再將 混合液加入混合液體積1-2倍的質(zhì)量分?jǐn)?shù)3-5%的硫酸鋁溶液中，形成凝聚囊，過濾得到凝 聚囊，水洗，干燥得到獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑。
[0012] 所述營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基為：蛋白胨l〇g/L、牛肉膏3g/L、氯化鈉5g/L，PH7-7. 2。
[0013] 所述步驟（2)枯草芽孢桿菌接種量為2-5%。
[0014] 所述發(fā)酵培養(yǎng)基為：葡萄糖3g/L、淀粉lg/L、豆餅粉30g/L、磷酸氫二鉀5g/L、磷酸 二氫鈉 3g/L、酵母粉 0? 2g/L、硫酸錳 0? lg/L，pH7-7. 2。
[0015] 所述步驟（2)中枯草芽孢桿菌發(fā)酵時間為48h。
[0016] 所述羧甲基纖維素的用量為發(fā)酵液質(zhì)量0. 5%。
[0017] 所述干燥溫度為60_80°C。
[0018] 本發(fā)明活化、發(fā)酵生產(chǎn)枯草芽孢桿菌的方法，可以最大程度上增加枯草芽孢桿菌 活菌數(shù)和微生物代謝產(chǎn)物，從而提高枯草芽孢桿菌的生物利用價值。本發(fā)明的枯草芽孢桿 菌制劑為微囊制劑，它是將菌體包裹后低溫干燥制成，具有耐強(qiáng)酸、耐受抗生素等優(yōu)點，能 夠有效保護(hù)枯草芽孢桿菌穿過胃酸，進(jìn)入腸道起到其作為益生菌的作用。同時，本發(fā)明的枯 草芽孢桿菌制劑對抗生素耐受性強(qiáng)，可與抗生素同時使用，以達(dá)到更好的抗病增產(chǎn)效果。

【具體實施方式】
[0019] 培養(yǎng)基的配制
[0020] 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基：蛋白胨10g/L、牛肉膏3g/L、氯化鈉5g/L，余量為水，pH7_7. 2。
[0021] 發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖3g/L、淀粉lg/L、豆餅粉30g/L、磷酸氫二鉀5g/L、磷酸二氫鈉 3g/L、酵母粉0. 2g/L、硫酸錳0. lg/L，余量為水，pH7-7. 2。
[0022] 上述培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌30min，冷卻。
[0023] 實施例1
[0024] 本實施例的獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑，將枯草芽孢桿菌活化，然后發(fā)酵培養(yǎng)，在 發(fā)酵液中加入羧甲基纖維素，溶解制得混合液，再將混合液加入硫酸鋁溶液中，形成凝聚 囊，過濾得到凝聚囊，水洗，干燥得到獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑；獸用枯草芽孢桿菌微囊 制劑中枯草芽孢桿菌活菌數(shù)不低于l〇 9CFU/g。
[0025] 本實施例的獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑的制備方法，包括以下步驟：
[0026] (1)將枯草芽孢桿菌接種到營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，在37°C、200r/min條件下培養(yǎng) 12h ；
[0027] (2)將步驟（1)活化的枯草芽孢桿菌以2%接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在37°C、 200r/min條件下發(fā)酵48h ;
[0028] (3)在發(fā)酵液中加入發(fā)酵液質(zhì)量0. 5%的羧甲基纖維素，溶解制得混合液，再將混 合液加入混合液體積2倍的質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%的硫酸鋁溶液中，形成凝聚囊，過濾得到凝聚囊，水 洗，70°C干燥得到獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑。
[0029] 實施例2
[0030] 本實施例的獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑，將枯草芽孢桿菌活化，然后發(fā)酵培養(yǎng)，在 發(fā)酵液中加入羧甲基纖維素，溶解制得混合液，再將混合液加入硫酸鋁溶液中，形成凝聚 囊，過濾得到凝聚囊，水洗，干燥得到獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑；獸用枯草芽孢桿菌微囊 制劑中枯草芽孢桿菌活菌數(shù)不低于l〇 9CFU/g。
[0031] 本實施例的獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑的制備方法，包括以下步驟：
[0032] (I)將枯草芽孢桿菌接種到營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，在37 °C、200r/min條件下培養(yǎng) 13h ；
[0033] (2)將步驟（1)活化的枯草芽孢桿菌以5%接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在37°C、 200r/min條件下發(fā)酵24h ;
[0034] (3)在發(fā)酵液中加入發(fā)酵液質(zhì)量1%的羧甲基纖維素，溶解制得混合液，再將混合 液加入混合液體積1. 5倍的質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%的硫酸鋁溶液中，形成凝聚囊，過濾得到凝聚囊，水 洗，60°C干燥得到獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑。
[0035] 實施例3
[0036] 本實施例的獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑，將枯草芽孢桿菌活化，然后發(fā)酵培養(yǎng)，在 發(fā)酵液中加入羧甲基纖維素，溶解制得混合液，再將混合液加入硫酸鋁溶液中，形成凝聚 囊，過濾得到凝聚囊，水洗，干燥得到獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑；獸用枯草芽孢桿菌微囊 制劑中枯草芽孢桿菌活菌數(shù)不低于l〇 9CFU/g。
[0037] 本實施例的獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑的制備方法，包括以下步驟：
[0038] (1)將枯草芽孢桿菌接種到營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，在37°C、200r/min條件下培養(yǎng) 14h ；
[0039] (2)將步驟（1)活化的枯草芽孢桿菌以3%接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在37°C、 200r/min條件下發(fā)酵72h ;
[0040] (3)在發(fā)酵液中加入發(fā)酵液質(zhì)量0. 1%的羧甲基纖維素，再將混合液加入混合液體 積1倍的質(zhì)量分?jǐn)?shù)3%的硫酸鋁溶液中，形成凝聚囊，過濾得到凝聚囊，水洗，80°C干燥得到 獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑。
[0041] 對比例
[0042] 本對比例的獸用枯草芽孢桿菌制劑(菌粉)，按實施例1的方法制備枯草芽孢桿菌 發(fā)酵液，在其中加入載體(玉米淀粉)，噴霧干燥，即得；獸用枯草芽孢桿菌制劑中枯草芽孢 桿菌活菌數(shù)不低于l〇 9CFU/g。
[0043] 實驗例1
[0044] 本發(fā)明獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑耐酸分析
[0045] 實驗方法：將實施例1-3和對比例的枯草芽孢桿菌制劑配制成I. OX IO9CFUAiL的 菌懸液，并與各PH值的緩沖液按體積比1:10混合，置于37°C搖床溫育4h，梯度稀釋，平板 涂布計數(shù)，并計算起存活率，結(jié)果見表1。
[0046] 存活率=各處理組的活菌數(shù)/I. 0 X 109CFU/mL
[0047] 表1枯草芽孢桿菌微囊制劑的耐酸研究

【權(quán)利要求】
1. 一種獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑，其特征在于，將枯草芽孢桿菌活化，然后發(fā)酵培 養(yǎng)，在發(fā)酵液中加入羧甲基纖維素，溶解制得混合液，再將混合液加入硫酸鋁溶液中，形成 凝聚囊，過濾得到凝聚囊，水洗，干燥得到獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑，其特征在于，所述獸用枯草芽 孢桿菌微囊制劑中枯草芽孢桿菌活菌數(shù)不低于l〇 9CFU/g。
3. -種如權(quán)利要求1所述的獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑的制備方法，其特征在于，包 括以下步驟： (1) 將枯草芽孢桿菌接種到營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，在37°C、200r/min條件下培養(yǎng)12-14h ; (2) 將步驟（1)活化的枯草芽孢桿菌接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在37°C、200r/min條件下發(fā) 酵 24-72h ; (3) 在發(fā)酵液中加入發(fā)酵液質(zhì)量0. 1-1%的羧甲基纖維素，溶解制得混合液，再將混合 液加入混合液體積1-2倍的質(zhì)量分?jǐn)?shù)3-5%的硫酸鋁溶液中，形成凝聚囊，過濾得到凝聚囊， 水洗，干燥得到獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑的制備方法，其特征在于，所述 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基為：蛋白胨l〇g/L、牛肉膏3g/L、氯化鈉5g/L，pH7-7. 2。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑的制備方法，其特征在于，所述 步驟（2)枯草芽孢桿菌接種量為2-5%。
6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑的制備方法，其特征在于，所述 發(fā)酵培養(yǎng)基為：葡萄糖3g/L、淀粉lg/L、豆餅粉30g/L、磷酸氫二鉀5g/L、磷酸二氫鈉3g/L、 酵母粉 0. 2g/L、硫酸錳 0. lg/L，pH7-7. 2。
7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑的制備方法，其特征在于，所述 步驟（2)中枯草芽孢桿菌發(fā)酵時間為48h。
8. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑的制備方法，其特征在于，所述 羧甲基纖維素的用量為發(fā)酵液質(zhì)量〇. 5%。
9. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的獸用枯草芽孢桿菌微囊制劑的制備方法，其特征在于，所述 干燥溫度為60-80 °C。
【文檔編號】C12N1/20GK104206702SQ201310405575
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2013年9月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月6日
【發(fā)明者】陳建暉, 朱麗平, 李建正 申請人:鄭州后羿制藥有限公司