一種石斛蘭組培苗快速繁育的方法及真菌誘導(dǎo)子的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于石斛蘭組培苗快速繁育的方法及真菌誘導(dǎo)子，其通過保藏編號CGMCC?NO.8019的絲核菌制備而成。采用本發(fā)明的真菌誘導(dǎo)子處理石斛蘭組培苗，無須添加任何人工激素，其鮮重增長量即可達(dá)到對照的4倍左右，如果將其按適當(dāng)?shù)臐舛忍砑拥皆摻M培苗的生產(chǎn)中，將大大縮短其生產(chǎn)周期，節(jié)約大量的成本，應(yīng)用前景十分廣闊。
【專利說明】一種石斛蘭組培苗快速繁育的方法及真菌誘導(dǎo)子
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物和微生物領(lǐng)域，具體的涉及一種能夠用于石斛蘭組培苗快速繁育的方法及真菌誘導(dǎo)子。
【背景技術(shù)】
[0002]真菌誘導(dǎo)子(Fungal elicitor)是來源于真菌細(xì)胞提取物或分泌物的一種特定的化學(xué)信號，在植物與真菌的相互作用中，能快速、高度專一和選擇性的誘導(dǎo)植物特定基因的表達(dá)，進(jìn)而活化特定次生代謝途徑，積累特定目的的次生代謝產(chǎn)物。因其含有大量的幾丁質(zhì)、多糖、寡糖、多肽、脂肪酸、蛋白質(zhì)、糖蛋白和糖脂等物質(zhì)，可提高植物的生物量、次生代謝產(chǎn)物、多糖含量、酶活性等有效成分。目前，真菌誘導(dǎo)子成功應(yīng)用在多藥用植物次生代謝產(chǎn)物的誘導(dǎo)和生產(chǎn)中的實(shí)例已有很多，如利用尖孢鐮刀菌Fusarium oxysporum誘導(dǎo)紅豆杉中紫杉醇；在蘭科植物的應(yīng)用上，鐵皮石斛原球莖受到真菌誘導(dǎo)子MF24誘導(dǎo)后不僅化學(xué)背景沒有改變，還促進(jìn)了生物堿類成分的產(chǎn)生和特異性的積累。
[0003]石斛蘭在當(dāng)今花卉市場中扮演著重要的角色，每年石斛蘭種苗的生產(chǎn)和銷售十分樂觀。然而，目前生產(chǎn)上常利用添加激素來提高石斛蘭組培苗的生長速率，但同時容易出現(xiàn)變異和玻璃化等現(xiàn)象，因此，如何獲得一種能夠有效促進(jìn)石斛蘭組培苗生長的真菌誘導(dǎo)子是本領(lǐng)域的技術(shù)人員亟待解決的技術(shù)問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種絲核菌，其特征在于所述的絲核菌菌株保藏編號CGMCCN0.8019，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。
[0005]本發(fā)明另一方面還涉及一種用于石斛蘭組培苗促生的真菌誘導(dǎo)子，其特征在于所述的真菌誘導(dǎo)子由上述絲核菌制備而成，優(yōu)選的，所述的真菌誘導(dǎo)子制備方法包括如下步驟:所述絲核菌在PDA平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)7天后用打孔器打孔，并將菌餅接種到預(yù)先分裝、滅菌好的PDA液體培養(yǎng)基中，100-150rpm搖床震蕩培養(yǎng)7天，待菌絲體充分生長后收獲，用果汁機(jī)將菌絲體打碎后與菌液混合，滅菌后得。
[0006]本發(fā)明另一方面還涉及一種石斛蘭組培苗培養(yǎng)基，其特征在于所述的培養(yǎng)基中含有30-50ml/L上述真菌誘導(dǎo)子以及1/2MS培養(yǎng)基+2-4%蔗糖+0.4-0.8%瓊脂。
[0007]采用本發(fā)明的真菌誘導(dǎo)子處理石斛蘭組培苗，無須添加任何人工激素，其鮮重增長量即可達(dá)到對照的4倍左右，如果將其按適當(dāng)?shù)臐舛忍砑拥皆摻M培苗的生產(chǎn)中，將大大縮短其生產(chǎn)周期，節(jié)約大量的成本，應(yīng)用前景十分廣闊。
[0008]微生物信息
[0009]本發(fā)明所篩選的Y05絲核菌(Rhizoctonia sp.)真菌已經(jīng)保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號CGMCC N0.8019，保藏地址為:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，保藏日期為2013年08月12日?！揪唧w實(shí)施方式】
[0010]實(shí)施例1
[0011]I材料與方法
[0012]1.1 材料
[0013]選取具有I~2條根、4~5片葉、生長狀況一致的石斛蘭Dendrobium組培苗。
[0014]1.2 方法
[0015]1.2.1真菌誘導(dǎo)子的配制
[0016]將從野生蘭分離得到6個菌根真菌Yl~Y6在PDA平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)7天后用直徑為0.5cm的打孔器打孔，并將菌餅接種到預(yù)先分裝、滅菌好的PDA液體培養(yǎng)基中，250ml每瓶，每瓶接種I個菌餅，120r/pm搖床震蕩培養(yǎng)7天，待菌絲體充分生長后收獲。用果汁機(jī)將菌絲體打碎后與菌液混合，121°C滅菌20min后備用。
[0017]1.2.2誘導(dǎo)子培養(yǎng)基的配制
[0018]以1/2MS培養(yǎng)基+3%蔗糖+0.6%瓊脂為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，分別將Y1-6號真菌誘導(dǎo)子按40ml/L、60ml/L、80ml/L三個梯度分別添加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，不加真菌誘導(dǎo)子的基礎(chǔ)培養(yǎng)基作為對照。
[0019]1.2.3測定項(xiàng)目和方法
[0020]接種前，在超凈工作臺上稱取組培苗的質(zhì)量(精確至0.0OOlg)，然后接種到含有誘導(dǎo)子的培養(yǎng)基中，置于3000LUX、12h/d的條件下培養(yǎng)，25°C、相對濕度70%~75%，每個處理接種30株，每瓶5株，共6瓶。90天后收獲組培物，清水洗凈根部的培養(yǎng)基后自然風(fēng)干，然后用電子天平稱取組培苗的鮮重(精確至0.0001)。
[0021]2結(jié)果:真菌誘導(dǎo)子對石斛蘭組培苗鮮重的影響
[0022]重量是植物體生長的最直接指標(biāo)之一。培養(yǎng)90天后，處理13表現(xiàn)出了旺盛的生長勢，假鱗莖粗壯，葉寬而翠綠，鮮重增長與對照和其余處理之間均達(dá)極顯著差異，增長
1.0824g ;其余處理的鮮重增長量與CK之間的差異不顯著(表1)，其中處理11、處理15等8個處理的鮮重增長量反而低于CK?？梢姰?dāng)在培養(yǎng)基中添加真菌誘導(dǎo)子Y05，添加量為40ml/L時，石斛蘭組培苗的長勢最好，此濃度的Y05真菌誘導(dǎo)子培養(yǎng)基最適合石斛蘭組培苗的生長，鮮重增長量最大。
[0023]表1真菌誘導(dǎo)子對石斛蘭組培苗鮮重增量影響的顯著性分析
【權(quán)利要求】
1.一種絲核菌，其特征在于所述的絲核菌菌株保藏編號CGMCC N0.8019，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。
2.一種用于石斛蘭組培苗促生的真菌誘導(dǎo)子，其特征在于所述的真菌誘導(dǎo)子由權(quán)利要求I所述絲核菌制備而成，優(yōu)選的，所述的真菌誘導(dǎo)子制備方法包括如下步驟:所述絲核菌在PDA平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)7天后用打孔器打孔，并將菌餅接種到預(yù)先分裝、滅菌好的PDA液體培養(yǎng)基中，100-150rpm搖床震蕩培養(yǎng)7天，待菌絲體充分生長后收獲，用果汁機(jī)將菌絲體打碎后與菌液混合，滅菌后獲得。
3.一種石斛蘭組培苗培養(yǎng)基，其特征在于所述的培養(yǎng)基中含有30-50ml/L權(quán)利要求2所述的真菌誘導(dǎo)子以 及1/2MS培養(yǎng)基+2-4%蔗糖+0.4-0.8%瓊脂。
【文檔編號】C12R1/645GK103589648SQ201310531772
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年10月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月30日
【發(fā)明者】陳金花, 楊光穗, 尹俊梅, 黃少華 申請人:中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所