一種荷爾蒙失衡型肥胖基因體質(zhì)評估的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種荷爾蒙失衡型肥胖基因體質(zhì)評估的方法，其特征在于，通過同時(shí)檢測分析個(gè)體的COMT基因、ESR2基因、SHBG基因SNPs位點(diǎn)基因攜帶型為所有的受檢者提供荷爾蒙失衡型肥胖體質(zhì)評估，可以讓受檢者在考慮以飲食和運(yùn)動(dòng)方式進(jìn)行瘦身之前，先了解自身基因體質(zhì)情況，了解個(gè)人的肥胖潛能成因，選擇最適合的個(gè)體化營養(yǎng)及運(yùn)動(dòng)瘦身方式，將各種肥胖基因表現(xiàn)的型態(tài)一一擊破，達(dá)到最有效健康的減重效果。
【專利說明】一種荷爾蒙失衡型肥胖基因體質(zhì)評估的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種荷爾蒙失衡型肥胖基因體質(zhì)評估方法，可用于評估荷爾蒙失衡型肥胖基因體質(zhì)情況，針對性的提示受檢者根據(jù)遺傳體質(zhì)選擇不同的減肥策略，屬于分子生物學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]肥胖癥是一種熱量代謝障礙，攝入熱量超過消耗的熱量，引起體內(nèi)脂肪積聚過多所致。一般認(rèn)為超過按身高所測標(biāo)準(zhǔn)體重20%即可成為肥胖。肥胖癥是一種與遺傳因素及生活方式密切相關(guān)的慢性疾病，它會(huì)引發(fā)血脂升高，容易造成脂肪肝、動(dòng)脈血管病變、心臟病、糖尿病，肥胖的兒童還會(huì)引發(fā)性功能發(fā)育不良并導(dǎo)致成人期各種疾病發(fā)病率和死亡率上升。因此，若通過有效的方法來預(yù)防，就能避免過早地出現(xiàn)高血壓、冠心病、糖尿病、腦血管病等疾患，從而提聞人們的生存質(zhì)量。
[0003]由于至少有40%軀體脂肪量的差異是由遺傳因素引起的，所以很容易明確遺傳對肥胖有很大影響。遺傳體質(zhì)不同的人在患肥胖癥時(shí)應(yīng)采取不同的減肥策略，利用現(xiàn)代科學(xué)研究成果，開發(fā)一項(xiàng)基于分子遺傳基礎(chǔ)的體重管理分子檢測產(chǎn)品會(huì)對減肥者的減肥計(jì)劃提供基因減肥概念的個(gè)性化體重管理建議，具有較強(qiáng)的社會(huì)意義和市場前景。目前肥胖癥的臨床治療方法主要是飲食和運(yùn)動(dòng)療法，但存在著碳水化合物、脂肪以及蛋白質(zhì)攝入量控制“一刀切”和盲目采用減肥藥物的非個(gè)體化治療方式。原因主要在于無法明確地將患者區(qū)分成為不同的減重體質(zhì)，從而對不同患者是否需要嚴(yán)格控制碳水化合物的攝入，是否需要控制脂肪的攝入，是否需要使用減肥藥物，以及應(yīng)該使用哪類減肥藥物的治療措施選擇上沒有明確指導(dǎo)。
[0004]荷爾蒙就是平常所說的“激素”，是人體內(nèi)分泌系統(tǒng)分泌的能調(diào)節(jié)生理平衡的激素的總稱。在所有的荷爾蒙當(dāng)中，對于女性影響最大的就是女性荷爾蒙。卵巢分泌的雌性激素及黃體素統(tǒng)稱女性荷爾蒙(尤其是黃體素最為重要)，它是孕育新生命及維持母體健康不可缺少的一種荷爾蒙。每個(gè)月中，所有女人都會(huì)經(jīng)歷荷爾蒙的波動(dòng)，但對于荷爾蒙型的女性來說，這種波動(dòng)可能會(huì)抑制胃口，提升情緒的基因。這就可能導(dǎo)致你情緒化，浮腫，饑餓，甚至于每天可能攝入超過600卡路里的熱量。
[0005]研究發(fā)現(xiàn)，荷爾蒙失衡型肥胖相關(guān)基因變異導(dǎo)致女性出現(xiàn)皮膚暗淡、月經(jīng)不調(diào)、閉經(jīng)甚至生育障礙、更年期癥狀、骨質(zhì)疏松、功能性子宮出血、乳腺增生等。當(dāng)雌激素和黃體酮水平趨于慢性失調(diào)，那么控制胃口的荷爾蒙，例如復(fù)合胺的功能也會(huì)受到影響，伴隨而來的就是體重的增加。
[0006]研究發(fā)現(xiàn)COMT，ESR2，SHBG基因與荷爾蒙失衡型肥胖體質(zhì)有關(guān)。
[0007]COMT (Catechol-O-methyltransferase)編碼兒茶酌.-氧位-甲基轉(zhuǎn)移酶，是重要的兒茶酚胺代謝的主要酶類。兒茶酚-ο-甲基轉(zhuǎn)移酶(C0MT)是兒茶酚胺的主要降解酶，C0MT是一種在人體內(nèi)廣泛存在的酶，在鎂離子存在的條件下催化兒茶酚胺第3位羥基甲基化，而兒茶酚胺被認(rèn)為在心境障礙的發(fā)病機(jī)制中有著重要作用。個(gè)體基因的突變和心理因素決定了其對精神分裂癥的易感程度。COMT能將兒茶酚胺轉(zhuǎn)化為其他物質(zhì)，當(dāng)代謝途徑受阻時(shí)就會(huì)聚集，因而影響個(gè)體對精神分裂癥的易感程度。分子生物學(xué)研究表明，C0MT158號(hào)氨基酸由Val轉(zhuǎn)化為Met，酶的活性將低了大約3~4倍，導(dǎo)致心智障礙相關(guān)疾病的發(fā)生。國內(nèi)外研究表明COMT Vall58Met等位基因與精神分裂癥相關(guān)，中國人群的關(guān)聯(lián)分析顯示，該位點(diǎn)的多態(tài)現(xiàn)象與心智障礙相關(guān)疾病的發(fā)生相關(guān)。兒茶酚胺類遞質(zhì)甲基化能力下降，造成雌激素代謝產(chǎn)物因分解受阻而累積，引起DNA損傷。
[0008]雌激素屬類固醇激素，通過細(xì)胞內(nèi)受體發(fā)揮作用。雌激素受體是一種核內(nèi)受體，與其它類固醇激素受體一樣，雌激素受體也有雌激素結(jié)合域和DNA結(jié)合域，雌激素與其受體結(jié)合后形成二倍體，經(jīng)過與包括熱休克蛋白等多種核內(nèi)蛋白質(zhì)的相互作用，與DNA分子上特定的部位-雌激素應(yīng)答元件(estrogen responsive element)結(jié)合，使近端基因在轉(zhuǎn)錄水平上活化產(chǎn)生基因產(chǎn)物。ESR2雌激素受體是一類有配體激活的核轉(zhuǎn)錄因子，介導(dǎo)大部分的雌激素反應(yīng)。雌激素受體發(fā)生變異，影響雌激素生物活性正常發(fā)揮，導(dǎo)致細(xì)胞增殖、分化異常。
[0009]性激素結(jié)合球蛋白(Sex hormone-bindingglobulin, SHBG)基因編碼區(qū)位于第17對染色體的短臂(P12-13)，由8個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子組成，長約3kb。性激素結(jié)合球蛋白相關(guān)的基因存在變異。性激素結(jié)合球蛋白調(diào)節(jié)循環(huán)中性激素的生物利用度并控制乳腺組織的信號(hào)系統(tǒng)，性激素結(jié)合球蛋白基因變異可升高血液性激素結(jié)合球蛋白水平異常。血清中的SHBG主要是接管類固醇的運(yùn)送和減少、調(diào)節(jié)雄性素的影響。SHBG血清濃度減少會(huì)伴隨著雄性素升高或是雄性素對其目標(biāo)器官影響過度的情形。
[0010]目前的基礎(chǔ)研究已能從理論上證明基因分型檢測可以用于判斷肥胖體質(zhì)的類型，而且檢測方法簡便、檢測成本在可接受程度中、檢測結(jié)果可信。因此，基因分型檢測用于評估肥胖體質(zhì)的可行性是明確的。根據(jù)基因檢測結(jié)果結(jié)合體重管理測評系統(tǒng)建立個(gè)性化體重健康評估報(bào)告，有針對的解決體重控制問題，提高人們生活質(zhì)量。因此利用現(xiàn)有科學(xué)、技術(shù)研究成果來開發(fā)這樣一個(gè)產(chǎn)品，時(shí)機(jī)是成熟的。
[0011]本發(fā)明的目的是提供一種荷爾蒙失衡型肥胖基因體質(zhì)評估方法，可以讓受檢者在考慮以飲食和運(yùn)動(dòng)方式進(jìn)行瘦身之前，先了解自身基因體質(zhì)情況，了解個(gè)人的肥胖潛能成因，選擇最適合的個(gè)體化營養(yǎng)及運(yùn)動(dòng)瘦身方式，將各種肥胖基因表現(xiàn)的型態(tài)一一擊破，達(dá)到最有效健康的減重效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012]本發(fā)明的目的是提供一種荷爾蒙失衡型肥胖基因體質(zhì)評估方法，可以讓受檢者在考慮以飲食和運(yùn)動(dòng)方式進(jìn)行瘦 身之前，先了解自身基因體質(zhì)情況，了解個(gè)人的肥胖潛能成因，選擇最適合的個(gè)體化營養(yǎng)及運(yùn)動(dòng)瘦身方式，將各種肥胖基因表現(xiàn)的型態(tài)一一擊破，達(dá)到最有效健康的減重效果。
[0013]為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明提供一種荷爾蒙失衡型肥胖基因體質(zhì)評估方法。其具體步驟為:
步驟1:檢測的樣品類型與采樣方法
用采樣拭在口腔中分別左右兩腮至少需要各上下刮40次以上，以保證采集到足量的細(xì)胞樣本；步驟2:基因組DNA的抽提方法
采用硅膠吸附法抽提每一個(gè)口腔上皮細(xì)胞樣本的基因組DNA，時(shí)間為2小時(shí)一 2.5小時(shí)，經(jīng)電泳檢測后，用肉眼可見清晰白色條帶即可判斷獲得的DNA能進(jìn)入下一步檢測；
步驟3:熒光定量PCR反應(yīng)
將每一個(gè)被測者樣本分別放入3個(gè)反應(yīng)孔，同時(shí)檢測3個(gè)位點(diǎn)，即兒茶酚-氧位-甲基轉(zhuǎn)移酶(C0MT)rs4680，雌激素受體基因(ESR2) rsl256054，性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)rs6259,另外根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要增設(shè)不含DNA模版的NTC空白對照孔；
每一個(gè)反應(yīng)孔的基因分型可以根據(jù)下表的引物和探針設(shè)計(jì)，采用TaqMan?_MGB技術(shù)，進(jìn)行檢測試劑合成；
在每一個(gè)反應(yīng)孔中加入試劑為熒光定量PCR反應(yīng)體系，總體積為ΙΟμΙ,即濃度為20ng/μ? 的 DNA 模板 2μ1、?μ1 10Χ 熒光定量 PCR 反應(yīng)緩沖液 ABI Taqman ? MGB、0.?μ? 25mMd NTP合成DNA的四種脫氧核苷酸底物、0.5μ1 25mM MgCl2溶液、0.02μ1 (5unitsM) TaqDNA聚合酶、去離子水4.98μ1、3個(gè)位點(diǎn)分別采用不同的正向引物(20μΜ, 0.225μ1)、反向引物(20μΜ，0.22541)、￥1(:熒光探針(1(^]\1，0.25μ1)和 FAM 熒光探針(ΙΟμΜ，0.25μ1)工具進(jìn)行檢測(詳見下表)；
【權(quán)利要求】
1.一種荷爾蒙失衡型肥胖基因體質(zhì)評估方法，其特征在于，具體步驟為步驟1:檢測的樣品類型與采樣方法用采樣拭在口腔中分別左右兩腮至少需要各上下刮40次以上，以保證采集到足量的細(xì)胞樣本；步驟2:基因組DNA的抽提方法采用硅膠吸附法抽提每一個(gè)口腔上皮細(xì)胞樣本的基因組DNA，時(shí)間為2小時(shí)一 2.5小時(shí)，經(jīng)電泳檢測后，用肉眼可見清晰白色條帶即可判斷獲得的DNA能進(jìn)入下一步檢測；步驟3:熒光定量PCR反應(yīng)將每一個(gè)被測者樣本分別放入3個(gè)反應(yīng)孔，同時(shí)檢測3個(gè)位點(diǎn)，即兒茶酚-氧位-甲基轉(zhuǎn)移酶(C0MT)rs4680，雌激素受體基因(ESR2) rsl256054，性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)rs6259,另外根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要增設(shè)不含DNA模版的NTC空白對照孔； 每一個(gè)反應(yīng)孔的基因分型可以根據(jù)下表的引物和探針設(shè)計(jì)，采用TaqMan?_MGB技術(shù)，進(jìn)行檢測試劑合成；在每一個(gè)反應(yīng)孔中加入試劑為熒光定量PCR反應(yīng)體系，總體積為10μ1,即濃度為20ng/μ? 的 DNA 模板 2μ1、?μ1 10Χ 熒光定量 PCR 反應(yīng)緩沖液 ABI Taqman ? MGB、0.?μ? 25mMd NTP合成DNA的四種脫氧核苷酸底物、0.5μ1 25mM MgCl2溶液、0.02μ1 (5unitsM) TaqDNA聚合酶、去離子水4.98μ1、3個(gè)位點(diǎn)分別采用不同的正向引物(20μΜ, 0.225μ1)、反向引物(20μΜ，0.22541)、￥1(:熒光探針(1(^]\1，0.25μ1)和 FAM 熒光探針(ΙΟμΜ，0.25μ1)工具進(jìn)行檢測(詳見下表)；J L茶酚-氧位-甲基轉(zhuǎn)移酶(COMT ) rs4680帶VIC熒光A型探針 GGCaTGAAGGAC帶FAM熒光G型探針 GGCgTGAAGGAC正向引物 GGGCCTACTGTGGCTACTCA反向引物 GGGITTTCAGTGAACGTGGT雌激素受體基因(ESR2) rsl256054帶VIC熒光C型探針 ACTcCAACACAA帶FAM熒光G型探針 ACTgCAACACAA正向引物 GATGAGGGGAAATGCGTAGA反向引物 CAGCATCTCTCCCCGATAAA性激素結(jié)合球蛋白(SHBG) rs6259帶VIC熒光A型探針 GAAaACTCTTCC帶FAM熒光G型探針 GAAgACTCTTCC正向引物 AATGCCACCTTTGCACTACC反向引物 AGCTTTAATGGGAAGCGTCA將反應(yīng)孔和空白對照在PCR擴(kuò)增儀上進(jìn)行反應(yīng)，先進(jìn)行預(yù)熱:50°C、2分鐘，95°C、10分鐘，然后再進(jìn)行60個(gè)循環(huán)的95°C、30秒,60°C、1分鐘、反應(yīng)結(jié)束后取出后再放入熒光定量PCR儀上讀取樣品熒光量，得到兒茶酚-氧位-甲基轉(zhuǎn)移酶(C0MT)rs4680，雌激素受體基因(ESR2) rsl256054，性激素結(jié)合球蛋白(SHBG) rs6259三張圖；步驟4:SNP基因型分析將熒光定量PCR儀上顯示的最終樣本熒光信號(hào)的3個(gè)圖和一個(gè)NTC空白對照進(jìn)行比較，每個(gè)位點(diǎn)理論上存在三種不同的信號(hào)，純VIC熒光信號(hào)、VIC和FAM雜合熒光信號(hào)以及純FAM熒光信號(hào)，分別代表該位點(diǎn)三種不同的基因型；(1)J L茶酚-氧位-甲基轉(zhuǎn)移酶(COMT ) rs4680在檢測結(jié)果圖中，坐標(biāo)軸左下區(qū)域?yàn)榭瞻讓φ?、坐?biāo)軸左上區(qū)域?yàn)镚G基因型、坐標(biāo)軸右上區(qū)域?yàn)锳G基因型、坐標(biāo)軸右下區(qū)域?yàn)锳A基因型，(2)、雌激素受體基因(ESR2)rsl256054在檢測結(jié)果圖中，坐標(biāo)軸左下區(qū)域?yàn)榭瞻讓φ?、坐?biāo)軸左上區(qū)域?yàn)镃C基因型、坐標(biāo)軸右上區(qū)域?yàn)镚C基因型、坐標(biāo)軸右下區(qū)域?yàn)镚G基因型，(3)、性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)rs6259 在檢測結(jié)果圖中，坐標(biāo)軸左下區(qū)域?yàn)榭瞻讓φ?、坐?biāo)軸左上區(qū)域?yàn)锳A基因型、坐標(biāo)軸中間區(qū)域?yàn)锳G基因型、坐標(biāo)軸右下區(qū)域?yàn)镚G基因型。
2.權(quán)利要求書1中的所述的三個(gè)基因的組合模式。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK103667456SQ201310586949
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年11月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月20日
【發(fā)明者】王校 申請人:上海中優(yōu)醫(yī)藥高科技有限公司