一種具有抗氧化活性蛋白黑素的制備方法
【專(zhuān)利摘要】一種具有抗氧化活性蛋白黑素的制備方法屬于功能性食品加工技術(shù)，該方法將脫脂后的大豆醬渣餅進(jìn)行超聲輔助乙醇提取，然后離心得上清液，將上清液濃縮后分成兩部分，分別進(jìn)行超濾和大孔吸附樹(shù)脂處理，得到三個(gè)分子量段（小于5000Da、5000-10000Da、大于10000Da）的蛋白黑素提取液，經(jīng)比較，大孔吸附樹(shù)脂純化得到蛋白黑素的抗氧化活性優(yōu)于超濾純化得到的蛋白黑素，且分子量5000-10000Da的蛋白黑素抗氧化活性最強(qiáng)，將5000-10000Da的蛋白黑素提取液濃縮、干燥后即得具有抗氧化活性的蛋白黑素；該蛋白黑素的OH自由基和DPPH自由基清除能力相當(dāng)于Vc，可用于開(kāi)發(fā)具有強(qiáng)抗氧化活性的功能性食品。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種具有抗氧化活性蛋白黑素的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于功能性食品加工【技術(shù)領(lǐng)域】，主要涉及一種具有抗氧化活性蛋白黑素的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]食品體系脂質(zhì)氧化劣變的抑制和人體異常生理氧化協(xié)迫的干預(yù)一直是食品界和醫(yī)藥界的2個(gè)研究熱點(diǎn)。但是，近年來(lái)隨著外源合成抗氧化劑食用安全性的質(zhì)凝和人體毒副作用的揭示，篩選鑒定天然藥食資源中安全有效的抗氧化活性物質(zhì)已日益引起了國(guó)內(nèi)外學(xué)者的極大關(guān)注。
[0003]蛋白黑素作為食品加工和貯藏過(guò)程中美拉德反應(yīng)所形成的重要終產(chǎn)物，不但特有的外觀褐色決定了消費(fèi)者對(duì)產(chǎn)品的可接受度，而且較強(qiáng)的生理活性和保健功也引起了世界各國(guó)的高度重視，“食品體系蛋白黑素抗氧化特性”已被列入歐盟COST Action 919行動(dòng)中的五大協(xié)作研究專(zhuān)題。蛋白黑素是一類(lèi)聚合度不等的高分子聚合體，存在形式是蛋白復(fù)合物和短肽，親水性極強(qiáng)，具有類(lèi)似食物纖維的功能，使ACE的活性和胰蛋白酶的活性受到抑制，可降低人體的血糖濃度，使亞硝胺的合成受到阻斷，可有效結(jié)合封閉金屬離子，抗雜環(huán)胺誘變，具有很強(qiáng)的自由基清除能力和抗氧化性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種具有抗氧化活性蛋白黑素的制備方法，所制備的蛋白黑素抗氧化活性高，無(wú)毒副作用，具有很強(qiáng)的自由基清除能力。
[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的:
一種具有抗氧化活性蛋白黑素的制備方法，該方法包括以下步驟:(I)將大豆醬渣餅粉碎后過(guò)篩，然后進(jìn)行脫脂處理；(2)向脫脂后的大豆醬渣餅中加入一定量的乙醇溶液并進(jìn)行超聲輔助乙醇提取得到提取液，所述的乙醇溶液濃度為15%，液料比為30mL/g，超聲溫度為50°C，超聲時(shí)間為5h，超聲功率為300W ;(3)將提取液進(jìn)行離心分離得上清液，將上清液真空濃縮后分成兩部分，分別進(jìn)行超濾處理和大孔吸附樹(shù)脂處理，得到分子量小于5000Da、分子量5000-10000Da和分子量大于IOOOODa三個(gè)分子量段的蛋白黑素提取液，所述的超濾處理?xiàng)l件為:超濾壓力40-70kPa，超濾溫度20-50°C，所述的大孔吸附樹(shù)脂處理?xiàng)l件為:上樣濃度20-60mg/mL，流速1-2.5mL/min,洗脫劑乙醇濃度40_60%，經(jīng)比較，大孔吸附樹(shù)脂純化得到蛋白黑素的抗氧化活性優(yōu)于超濾純化得到的蛋白黑素的抗氧化活性；(4)將經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂處理得到的分子量為5000-10000Da的蛋白黑素提取液進(jìn)行真空濃縮、冷凍干燥后即得具有抗氧化活性的蛋白黑素。
[0006]所述的超濾處理優(yōu)選參數(shù)為:超濾壓力60kPa，超濾溫度40°C。
[0007]所述的大孔吸附樹(shù)脂處理優(yōu)選參數(shù)為:上樣濃度30mg/mL，流速1.5mL/min,洗脫劑乙醇濃度60%。[0008]本發(fā)明采用超聲輔助乙醇法從大豆醬渣餅中提取蛋白黑素，再通過(guò)超濾和大孔吸附樹(shù)脂分別對(duì)提取液進(jìn)行分離純化，得到具有抗氧化活性的蛋白黑素。經(jīng)比較，大孔吸附樹(shù)脂純化得到蛋白黑素的抗氧化活性優(yōu)于超濾純化得到的蛋白黑素，且經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂純化得到的分子量為5000-10000Da的蛋白黑素抗氧化活性最強(qiáng)；本發(fā)明制備的蛋白黑素的OH自由基和DPPH自由基清除能力強(qiáng)，相當(dāng)于Vc的抗氧化能力，而且具有一定的抗亞油酸氧化能力，為開(kāi)發(fā)具有強(qiáng)抗氧化活性的功能性食品提供理論基礎(chǔ)。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0009]圖1本發(fā)明方法的工藝路線圖 圖2超濾壓力對(duì)膜通量速度的影響 圖3超濾溫度對(duì)膜通量速度的影響 圖4乙醇濃度對(duì)解析性能的影響
圖5不同條件下蛋白黑素的OH自由基抑制率。
【具體實(shí)施方式】
[0010]下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明具體實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)描述:
一種具有抗氧化活性蛋白黑素的制備方法，該方法包括以下步驟:(I)將大豆醬渣餅粉碎后過(guò)篩，然后進(jìn)行脫脂處理；(2)向脫脂后的大豆醬渣餅中加入一定量的乙醇溶液并進(jìn)行超聲輔助乙醇提取得到提取液，所述的乙醇溶液濃度為15%，液料比為30mL/g，超聲溫度為50°C，超聲時(shí)間為5h，超聲功率為300W;(3)將提取液進(jìn)行離心分離得上清液，將上清液真空濃縮后分成兩部分，分別進(jìn)行超濾處理和大孔吸附樹(shù)脂處理，得到分子量小于5000Da、分子量5000-10000Da和分子量大于IOOOODa三個(gè)分子量段的蛋白黑素提取液，所述的超濾處理?xiàng)l件為:超濾壓力40-70kPa，超濾溫度20-50°C，所述的大孔吸附樹(shù)脂處理?xiàng)l件為:上樣濃度20-60mg/mL，流速1-2.5mL/min,洗脫劑乙醇濃度40_60%，經(jīng)比較，大孔吸附樹(shù)脂純化得到蛋白黑素的抗氧化活性優(yōu)于超濾純化得到的蛋白黑素的抗氧化活性；(4)將經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂處理得到的分子量為5000-10000Da的蛋白黑素提取液進(jìn)行真空濃縮、冷凍干燥后即得具有抗氧化活性的蛋白黑素。
[0011]所述的超濾處理優(yōu)選參數(shù)為:超濾壓力60kPa，超濾溫度40°C。
[0012]所述的大孔吸附樹(shù)脂處理優(yōu)選參數(shù)為:上樣濃度30mg/mL，流速1.5mL/min，洗脫劑乙醇濃度60%。
[0013]實(shí)施例1超濾和大孔吸附樹(shù)脂純化工藝參數(shù)的篩選試驗(yàn) 1.材料與方法
1.1材料、試劑
大豆醬渣餅哈爾濱正陽(yáng)河醬廠提供
1.2實(shí)驗(yàn)設(shè)備
PHS-25型酸度計(jì)上海偉業(yè)儀器廠 電子分析天平 梅勒特-托利多儀器(上海)有限公司 精密電動(dòng)攪拌機(jī) 江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司 電熱恒溫水浴鍋 余姚市東方電工儀器廠722S分光光度計(jì)上海精密科學(xué)儀器有限公司 超濾裝置上海榮泰生化工程有限公司
大孔吸附樹(shù)脂柱江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司
. 1.3試驗(yàn)方法 工藝流程見(jiàn)圖1
.2.結(jié)果與討論
. 2.1超濾工藝參數(shù)的確定
. 2.1.1超濾壓力的確定
本試驗(yàn)恒定流速，研究不同壓力下，膜通量速度Jv隨超濾時(shí)間的變化關(guān)系。由圖2可以看出，超濾溫度為25°C，當(dāng)超濾壓力P為40kPa、50kPa時(shí)，Jv值較小，Jv隨時(shí)間的延長(zhǎng)而衰減，但衰減較慢；當(dāng)超濾壓力為60kPa、70kPa時(shí)，Jv值較大，Jv隨時(shí)間的延長(zhǎng)而衰減，但衰減較快，試驗(yàn)結(jié)果表明，壓力越高，Jv衰減越快，而且壓力過(guò)高膜易被壓實(shí)。壓力低，雖然Jv衰減速度慢，但是Jv太低不能滿足實(shí)際生產(chǎn)需要。綜合考慮，超濾壓力選擇60kPa比較合適。
[0014]2.1.2超濾溫度的確定
由圖3可以看出，隨著超濾溫度的升高，膜通量速度Jv增加，且在20-40°C之間變化較明顯。這是由于隨著溫度的提高，加快了膜中聚合物鏈節(jié)的微觀布朗運(yùn)動(dòng)，使單位時(shí)間、單位體積形成小孔的可能性增加，從而使透過(guò)速度增大。當(dāng)溫度超過(guò)50°C以后，膜通量速度Jv的增加比較緩慢。綜合考慮，超濾溫度選擇40°C比較合適。
[0015]在最優(yōu)工藝參數(shù)下，超濾后得三種蛋白黑素產(chǎn)品，F(xiàn)l為分子量>10000Da，F(xiàn)2為分子量 <5000Da，F(xiàn)3 為 5000Da〈分子量〈lOOOODa。
[0016]2.2大孔吸附樹(shù)脂工藝參數(shù)的確定
【權(quán)利要求】
1.一種具有抗氧化活性蛋白黑素的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟:(1)將大豆醬渣餅粉碎后過(guò)篩，然后進(jìn)行脫脂處理；(2)向脫脂后的大豆醬渣餅中加入一定量的乙醇溶液并進(jìn)行超聲輔助乙醇提取得到提取液，所述的乙醇溶液濃度為15%，液料比為30mL/g，超聲溫度為50°C，超聲時(shí)間為5h，超聲功率為300W ；(3)將提取液進(jìn)行離心分離得上清液，將上清液真空濃縮后分成兩部分，分別進(jìn)行超濾處理和大孔吸附樹(shù)脂處理，得到分子量小于5000Da、分子量5000-10000Da和分子量大于IOOOODa三個(gè)分子量段的蛋白黑素提取液，所述的超濾處理?xiàng)l件為:超濾壓力40-70kPa，超濾溫度20-50°C，所述的大孔吸附樹(shù)脂處理?xiàng)l件為:上樣濃度20-60mg/mL，流速1-2.5mL/min，洗脫劑乙醇濃度40_60%，經(jīng)比較，大孔吸附樹(shù)脂純化得到蛋白黑素的抗氧化活性優(yōu)于超濾純化得到的蛋白黑素的抗氧化活性；(4)將經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂處理得到的分子量為5000-10000Da的蛋白黑素提取液進(jìn)行真空濃縮、冷凍干燥后即得具有抗氧化活性的蛋白黑素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有抗氧化活性蛋白黑素的制備方法，其特征在于所述的超濾處理優(yōu)選參數(shù)為:超濾壓力60kPa，超濾溫度40°C。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有抗氧化活性蛋白黑素的制備方法，其特征在于所述的大孔吸附樹(shù)脂處理優(yōu)選參數(shù)為:上樣濃度30mg/mL，流速1.5mL/min，洗脫劑乙醇濃度60%。
【文檔編號(hào)】A23L1/29GK103689459SQ201310680343
【公開(kāi)日】2014年4月2日 申請(qǐng)日期:2013年12月13日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月13日
【發(fā)明者】許晶, 張曉松, 江連洲, 趙青山, 金花, 李楊, 齊寶坤, 張永忠, 劉淑蘭 申請(qǐng)人:東北農(nóng)業(yè)大學(xué)