一種增菌液中細(xì)菌dna的提取裝置制造方法
【專(zhuān)利摘要】本實(shí)用新型提供一種增菌液中細(xì)菌DNA的提取裝置，包括過(guò)濾內(nèi)管、第一套管和第二套管，過(guò)濾內(nèi)管的管體可置入第一套管和第二套管內(nèi)，過(guò)濾內(nèi)管的頂端膨大部則留在第一套管和第二套管的管口外，過(guò)濾內(nèi)管的頂端具有內(nèi)管蓋，過(guò)濾內(nèi)管的底端縮窄為內(nèi)管開(kāi)口，在內(nèi)管開(kāi)口上方設(shè)有過(guò)濾膜，過(guò)濾膜上方設(shè)有用于壓緊過(guò)濾膜的壓膜圈，所述過(guò)濾膜為兩層以上玻璃纖維制成的復(fù)合濾膜，所述過(guò)濾膜的孔徑為0.2-20um。本實(shí)用新型所述的裝置，采用膜過(guò)濾直接裂解法，規(guī)避了純化法和直接裂解法的缺點(diǎn)，能對(duì)多份增菌液中的細(xì)菌富集合并后，一次抽提DNA，而且抽提方法不僅適用于革蘭氏陰性菌，也適用于革蘭氏陽(yáng)性菌；并且還能有效去除樣品基質(zhì)的干擾。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種增菌液中細(xì)菌DNA的提取裝置
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及從一種或多種增菌液中提取PCR檢測(cè)所用的細(xì)菌DNA的裝置，所述增菌液經(jīng)過(guò)膜過(guò)濾后，直接裂解細(xì)菌提取DNA。
【背景技術(shù)】
[0002]增菌液中細(xì)菌DNA的提取方法，按原理可簡(jiǎn)單分為兩類(lèi)，純化法和直接裂解法。純化法的方法有多種，但都遵循以下流程:細(xì)菌裂解一富集DNA—清洗DNA—重新溶解DNA。該方法的優(yōu)點(diǎn)是得到的DNA純度高，PCR抑制因子含量很低；其缺點(diǎn)是在提取過(guò)程中DNA丟失較多，導(dǎo)致最終DNA的得率低。另外操作步驟較多，也容易產(chǎn)生交叉污染。直接裂解法操作步驟少，不采用富集、清洗等純化處理，直接將細(xì)菌裂解后提取DNA，故DNA的損失較小，但殘留的PCR抑制因子可影響后續(xù)的PCR反應(yīng)，樣品基質(zhì)也會(huì)對(duì)PCR檢測(cè)產(chǎn)生不利影響。
[0003]理想的增菌液中細(xì)菌DNA的提取方法，應(yīng)具備以下特點(diǎn):DNA純度高、DNA的得率高、PCR抑制因子含量低、操作簡(jiǎn)便、不使用有毒的有機(jī)溶劑等。對(duì)于PCR檢測(cè)而言，提取方法最好能對(duì)多份增菌液中的細(xì)菌富集合并后，一次抽提DNA;而且抽提方法不僅適用于革蘭氏陰性菌，也適用于細(xì)胞壁堅(jiān)固難以裂解的革蘭氏陽(yáng)性菌；并且還能有效去除樣品基質(zhì)的干擾。
實(shí)用新型內(nèi)容
[0004]本實(shí)用新型即是針對(duì)上述的問(wèn)題，提供從一份或多份增菌液中提取PCR檢測(cè)所用的細(xì)菌DNA的裝置。
[0005]具體來(lái)說(shuō)，本實(shí)用新型所述的增菌液中細(xì)菌DNA的提取裝置，包括過(guò)濾內(nèi)管、第一套管和第二套管，過(guò)濾內(nèi)管的管體可置入第一套管和第二套管內(nèi)，過(guò)濾內(nèi)管的頂端膨大部則留在第一套管和第二套管的管口外，過(guò)濾內(nèi)管的頂端具有內(nèi)管蓋，過(guò)濾內(nèi)管的底端縮窄為內(nèi)管開(kāi)口，在內(nèi)管開(kāi)口上方設(shè)有過(guò)濾膜，過(guò)濾膜上方設(shè)有用于壓緊過(guò)濾膜的壓膜圈。
[0006]進(jìn)一步的，所述過(guò)濾膜為兩層以上玻璃纖維制成的復(fù)合濾膜。
[0007]進(jìn)一步的，所述過(guò)濾膜的孔徑為0.2_20um。
[0008]進(jìn)一步的,所述第二套管具有或無(wú)管蓋。
[0009]進(jìn)一步的，所述過(guò)濾內(nèi)管的材質(zhì)為聚丙烯。
[0010]進(jìn)一步的，所述第一套管和第二套管的材質(zhì)為聚丙烯。
[0011]本實(shí)用新型所述的增菌液中細(xì)菌DNA的提取裝置的使用方法如下所述:
[0012]1、濃縮細(xì)菌:在過(guò)濾內(nèi)管中加入增菌液，以IOOOxg離心力離心I分鐘(或在IOmmHg-15mmHg壓力下過(guò)濾I分鐘)，再以6000xg離心力離心I分鐘(或在20mmHg-30mmHg壓力下過(guò)濾I分鐘)；
[0013]2、去除脂質(zhì):在過(guò)濾內(nèi)管中加入75%乙醇浸泡I分鐘，以6000xg離心力離心I分鐘(或在20mmHg-30mmHg壓力下過(guò)濾I分鐘)；[0014]3、裂解細(xì)菌:更換新的外套管，將過(guò)濾內(nèi)管置入第二套管內(nèi)。在過(guò)濾內(nèi)管中加入EB裂解液(含蛋白酶K)，55°C孵育30分鐘(革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌延長(zhǎng)至60分鐘)；
[0015]4、加熱滅活:95°C孵育10分鐘滅活蛋白酶K ;以12000xg離心力離心3分鐘(或在20mmHg-30mmHg壓力下過(guò)濾I分鐘)，第二套管中的溶液即為用于PCR檢測(cè)的細(xì)菌DNA溶液。
[0016]本實(shí)用新型所述的裝置，采用膜過(guò)濾直接裂解法，規(guī)避了純化法和直接裂解法的缺點(diǎn)，能對(duì)多份增菌液中的細(xì)菌進(jìn)行合并，僅需一次DNA抽提流程，而且抽提方法不僅適用于革蘭氏陰性菌，也適用于革蘭氏陽(yáng)性菌；并且還能有效去除樣品基質(zhì)的干擾。具有如下特
占-
^ \\\.[0017]1、以膜過(guò)濾替代了高速離心濃縮細(xì)菌，省略了高速離心后從離心管中吸棄上清液的步驟，操作更簡(jiǎn)便，并可有效避免交叉污染及生物安全風(fēng)險(xiǎn)，并且能對(duì)多個(gè)增菌液中的細(xì)菌富集后一并進(jìn)行DNA抽提；
[0018]2、增加了增菌液去脂的步驟，能有效去除樣品及培養(yǎng)基的脂溶性成分殘留中的PCR抑制劑，消除基質(zhì)干擾；
[0019]3、特殊裂解液配方和低溫裂解方式，不僅適用于革蘭氏陰性菌DNA的提取，而且適用于更難裂解的革蘭氏陽(yáng)性菌DNA的提取，在提高裂解效率的同時(shí)，減少了 DNA的斷裂和降解。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0020]圖1是本實(shí)用新型實(shí)施例中過(guò)濾內(nèi)管置入第一套管的示意圖；
[0021]圖2是本實(shí)用新型實(shí)施例`中過(guò)濾內(nèi)管置入第二套管的示意圖；
[0022]其中，I為第一套管、2為過(guò)濾內(nèi)管、20為內(nèi)管蓋、21為內(nèi)管開(kāi)口、3為壓膜圈、4為
過(guò)濾膜、5為第二套管、50為第二套管管蓋。
【具體實(shí)施方式】
[0023]以下結(jié)合附圖和【具體實(shí)施方式】，對(duì)本實(shí)用新型所述的增菌液中細(xì)菌DNA的提取裝置進(jìn)行非限制性地描述，目的是公眾更好地理解所述技術(shù)方案。
[0024]如圖1-2所示，本實(shí)用新型所述的增菌液中細(xì)菌DNA的提取裝置，包括過(guò)濾內(nèi)管2、第一套管I和第二套管5,過(guò)濾內(nèi)管2的管體可置入第一套管I和第二套管5內(nèi)，過(guò)濾內(nèi)管2的頂端膨大部則留在第一套管I和第二套管5的管口外，過(guò)濾內(nèi)管2的頂端具有內(nèi)管蓋20，過(guò)濾內(nèi)管2的底端縮窄為內(nèi)管開(kāi)口 21，在內(nèi)管開(kāi)口 21上方設(shè)有過(guò)濾膜4，過(guò)濾膜4上方設(shè)有用于壓緊過(guò)濾膜4的壓膜圈3，所述過(guò)濾膜4為兩層以上玻璃纖維制成的復(fù)合濾膜，孔徑為0.2-20um,第二套管5具有或無(wú)第二套管蓋50,所述過(guò)濾內(nèi)管、第一套管和第二套管的材質(zhì)為聚丙烯。
[0025]本實(shí)用新型所述裝置的使用方法如下:
[0026]1、濃縮細(xì)菌:在過(guò)濾內(nèi)管中加入200ul-400ul增菌液，以1000xg離心力離心I分鐘(或在10mmHg-15mmHg壓力下過(guò)濾I分鐘)，再以6000xg離心力離心I分鐘(或在20mmHg-30mmHg壓力下過(guò)濾I分鐘)。
[0027]2、去除脂質(zhì):在過(guò)濾內(nèi)管中加入200ul75%乙醇浸泡I分鐘，以6000xg離心力離心I分鐘(或在20mmHg-30mmHg壓力下過(guò)濾I分鐘)。[0028]3、裂解細(xì)菌:更換新的外套管，將過(guò)濾內(nèi)管置入第二套管內(nèi)。在過(guò)濾內(nèi)管中加入200ul EB裂解液(含蛋白酶K)，55°C孵育30分鐘(革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌延長(zhǎng)至60分鐘)。
[0029]4、加熱滅活:95°C孵育10分鐘滅活蛋白酶K ;以12000xg離心力離心3分鐘(或在20mmHg-30mmHg壓力下過(guò)濾I分鐘)，外套管中的溶液即為用于PCR檢測(cè)的細(xì)菌DNA溶液。
[0030]其中，EB裂解液配方為:去離子水、苯乙烯-二乙烯苯聚合物5-20%、蛋白酶K0.05-lmg/ml (使用前加入)；裂解孵育溫度:55°C。
[0031]應(yīng)用本實(shí)用新型所述裝置的方法，規(guī)避了純化法和直接裂解法的缺點(diǎn)，能對(duì)多份增菌液中的細(xì)菌富集合并后，一次抽提DNA，并且還能有效去除樣品基質(zhì)的干擾。
【權(quán)利要求】
1.一種增菌液中細(xì)菌DNA的提取裝置，其特征在于:包括過(guò)濾內(nèi)管、第一套管和第二套管，過(guò)濾內(nèi)管的管體可置入第一套管和第二套管內(nèi)，過(guò)濾內(nèi)管的頂端膨大部則留在第一套管和第二套管的管口外，過(guò)濾內(nèi)管的頂端具有內(nèi)管蓋，過(guò)濾內(nèi)管的底端縮窄為內(nèi)管開(kāi)口，在內(nèi)管開(kāi)口上方設(shè)有過(guò)濾膜，過(guò)濾膜上方設(shè)有用于壓緊過(guò)濾膜的壓膜圈。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的增菌液中細(xì)菌DNA的提取裝置，其特征在于:所述過(guò)濾膜為兩層以上玻璃纖維制成的復(fù)合濾膜。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的增菌液中細(xì)菌DNA的提取裝置，其特征在于:所述過(guò)濾膜的孔徑為0.2-20um。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的增菌液中細(xì)菌DNA的提取裝置，其特征在于:所述第二套管具有或無(wú)管蓋。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的增菌液中細(xì)菌DNA的提取裝置，其特征在于:所述過(guò)濾內(nèi)管的材質(zhì)為聚丙烯。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的增菌液中細(xì)菌DNA的提取裝置，其特征在于:所述第一套管和第二套管的材質(zhì)為聚丙烯。
【文檔編號(hào)】C12N15/10GK203513676SQ201320604940
【公開(kāi)日】2014年4月2日 申請(qǐng)日期:2013年9月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月27日
【發(fā)明者】呂敬章, 徐樣明 申請(qǐng)人:呂敬章, 徐樣明