一種周期短產(chǎn)率高的l-賴氨酸發(fā)酵方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種周期短產(chǎn)率高的L-賴氨酸發(fā)酵方法，采用分流方式將連續(xù)發(fā)酵工藝中排出的發(fā)酵液接入新的發(fā)酵培養(yǎng)基中，在流加碳源、氮源的條件下進一步發(fā)酵培養(yǎng)。經(jīng)本發(fā)明所述發(fā)酵方法發(fā)酵L-賴氨酸，周期為32h，產(chǎn)酸18.5%，轉(zhuǎn)化率72%，效果顯著。
【專利說明】一種周期短產(chǎn)率高的L-賴氨酸發(fā)酵方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種周期短產(chǎn)率高的L-賴氨酸發(fā)酵方法，屬于生物發(fā)酵【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]人們知道，蛋白質(zhì)是構(gòu)成人體細胞的主要成份，食物中的蛋白質(zhì)進入人體后經(jīng)過消化先分解成氨基酸，然后人體又利用這些氨基酸再合成新的人體蛋白質(zhì)，如免疫抗體、消化酶、血漿蛋白、生長激素等都是合成后的人體蛋白質(zhì)。在合成蛋白質(zhì)的各種氨基酸中，L-賴氨酸是最重要的一種，少了它，其它氨基酸就受到限制或得不到利用，科學家稱它為人體第一必需氨基酸?？茖W家還發(fā)現(xiàn)，L-賴氨酸是控制人體生長的重要物質(zhì)抑長素(Somatotation, ss)中最重要的也是最必需的成份，對人的中樞神經(jīng)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)都起著重要作用。人體不能自身合成L-賴氨酸，必須從食物中吸取賴氨酸是幫助其它營養(yǎng)物質(zhì)被人體充分吸收和利用的關(guān)鍵物質(zhì)，人體只有補充了足夠的L-賴氨酸才能提高食物蛋白質(zhì)的吸收和利用，達到均衡營養(yǎng)，促進生長發(fā)育。
[0003]賴氨酸是人體必需氨基酸之一，能促進人體發(fā)育、增強免疫功能，并有提高中樞神經(jīng)組織功能的作用。賴氨酸為堿性必需氨基酸。由于谷物食品中的賴氨酸含量甚低，且在加工過程中易被破壞而缺乏，故稱為第一限制性氨基酸。
[0004]現(xiàn)有L-賴氨酸大多是采用連續(xù)發(fā)酵工藝制備。將產(chǎn)L-賴氨酸的菌株通過多級種子罐培養(yǎng)后，接種至發(fā)酵 罐，待發(fā)酵液體積為發(fā)酵罐體積的80%時，開始連續(xù)排料，并以一定的速度向發(fā)酵罐內(nèi)添加新鮮培養(yǎng)基，同時以相同速度流出發(fā)酵液，所得發(fā)酵液進一步提取得到L-賴氨酸。但發(fā)酵周期也較長，前期菌體的生長、繁殖占用了一部分發(fā)酵周期，此時產(chǎn)酸極低，單罐產(chǎn)酸和轉(zhuǎn)化率也較低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為了克服在賴氨酸發(fā)酵生產(chǎn)過程中存在的上述技術(shù)問題，本發(fā)明旨在提供一種新的L-賴氨酸發(fā)酵方法，有效縮短發(fā)酵周期、提高產(chǎn)酸量，減少種子罐的染菌風險。
[0006]為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
[0007]—種周期短產(chǎn)率高的L-賴氨酸發(fā)酵方法，采用分流方式將連續(xù)發(fā)酵工藝中排出的發(fā)酵液接入新的發(fā)酵培養(yǎng)基中，在流加碳源、氮源的條件下進一步發(fā)酵培養(yǎng)。
[0008]所述L-賴氨酸發(fā)酵方法，具體包括如下步驟:
[0009]I)在連續(xù)發(fā)酵過程中，待第一發(fā)酵裝置的發(fā)酵液OD值為35-60%時，將其發(fā)酵液連續(xù)排出并流加至裝有新發(fā)酵培養(yǎng)基的第二發(fā)酵裝置內(nèi)，同時始終保持第一發(fā)酵裝置中發(fā)酵液體積恒定；
[0010]2)向第二發(fā)酵裝置中流加碳源；
[0011]3)向第二發(fā)酵裝置中流加氮源；
[0012]4)當?shù)诙l(fā)酵裝置中的發(fā)酵液體積達到80%，將第二發(fā)酵裝置中的發(fā)酵液進一步分流流加至第三發(fā)酵裝置中繼續(xù)發(fā)酵，以此類推，當其中任一發(fā)酵裝置中的發(fā)酵液體積為發(fā)酵裝置的80%時，將其發(fā)酵液分流流加至下一個發(fā)酵裝置中，保證每一個發(fā)酵裝置中發(fā)酵液體積恒定，從而實現(xiàn)分流同步發(fā)酵，以獲得更好的產(chǎn)酸效果，減少發(fā)酵周期。
[0013]5)當任一發(fā)酵裝置的產(chǎn)酸水平呈下降趨勢時，結(jié)束發(fā)酵過程，并將所有發(fā)酵液進一步提取，得到L-賴氨酸。
[0014]在上述發(fā)酵方法步驟4)中，當任一發(fā)酵裝置中發(fā)酵液的OD值至30%時，停止向其流加，并將前一發(fā)酵裝置中排出的發(fā)酵液直接流加至下一發(fā)酵裝置中，以此類推；
[0015]當任一發(fā)酵裝置中發(fā)酵液的OD值大于60%時，停止其向其它發(fā)酵罐中流加，并將其中發(fā)酵液進一步提取得到L-賴氨酸。
[0016]在連續(xù)發(fā)酵過程中，排出的發(fā)酵液OD值對后續(xù)發(fā)酵產(chǎn)酸的影響較為明顯。OD值過低時，菌體自身生長周期較長，導(dǎo)致總發(fā)酵周期較長；0D值過高時，菌體已進入衰老期，產(chǎn)酸能力減退，且此后的產(chǎn)酸已經(jīng)達到較高水平，繼續(xù)作為種子使用會增加產(chǎn)物抑制作用，降低產(chǎn)酸，不適合繼續(xù)發(fā)酵。同時為了兼顧排出發(fā)酵液的發(fā)酵時間與原連續(xù)發(fā)酵時間保持同步，本發(fā)明限定分流發(fā)酵培養(yǎng)的發(fā)酵液OD為35-60%，優(yōu)選40-50%。
[0017]在本發(fā)明發(fā)酵方法中，所述發(fā)酵培養(yǎng)條件為:溫度35-40°C ;壓力0.05-0.1MPa ；pH6.5-7.0 ;風量 0.3-0.8vvm。
[0018]在步驟2)中，所述流加碳源后發(fā)酵液中還原糖含量為0.1_1%，優(yōu)選0.5-0.7%;在步驟3)中，所述流加氮源后發(fā)酵液中銨含量為0.1-0.7%，優(yōu)選0.2-0.3%。所述碳源為葡萄糖；所述氮源為硫酸銨。
[0019]所述流加碳源過程中還加入微量元素，由于補料的不斷增加和發(fā)酵的排料，其中的微量元素會大量損失，不利于發(fā)酵的進行，所以我們在補碳源過程中加入微量元素。所述微量元素為本發(fā)明發(fā)酵菌株發(fā)酵所需的營養(yǎng)元素，如硫酸鎂、硫酸鐵，維生素H，維生素BI ；優(yōu)選為 FeSO4.7Η200.03g/L、MnSO4.H2O0.03g/L、VH300 μ g/L、VB12mg/L。
[0020]所述發(fā)酵培養(yǎng)基配方:葡萄糖140g/L、硫酸銨50g/L、KH2PO4.3Η204.5g/L、MgSO4.7Η200.5g/L、FeSO4.7Η200.015g/L、MnSO4.H2O0.015g/L、豆餅水解液 30g/L、VH (維生素H)150 μ g、VBl (維生素 Bl)lmg ；pH=7.2-7.5，121 °C溫度下滅菌 30min 并降溫至 37°C。
[0021]現(xiàn)有技術(shù)中連續(xù)發(fā)酵排出的發(fā)酵液直接進入提取工序，整個發(fā)酵周期長，產(chǎn)酸低，為了改善這一問題，本發(fā)明采用發(fā)酵液分流發(fā)酵的方式，將連續(xù)發(fā)酵中排出的發(fā)酵液流加至另一發(fā)酵培養(yǎng)基中再次發(fā)酵產(chǎn)酸，并可多次分流。
[0022]采用上述技術(shù)方案發(fā)酵生產(chǎn)賴氨酸，既提高了產(chǎn)酸的效率，又保證了原始接種用發(fā)酵罐的若干子代發(fā)酵罐可以繼續(xù)向下連續(xù)接種使用，從而實現(xiàn)縮短發(fā)酵周期、增加產(chǎn)酸量、提高轉(zhuǎn)化率、減少種子罐的染菌風險的目的。經(jīng)本發(fā)明所述發(fā)酵方法發(fā)酵L-賴氨酸，周期為32h，產(chǎn)酸18.5%，轉(zhuǎn)化率72%，效果顯著。
【具體實施方式】
[0023]以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
[0024]實施例1
[0025](1)將常規(guī)培養(yǎng)的種子罐種子按10%的比例接入用葡萄糖140g/L、硫酸銨50g/L、KH2PO4.3Η204.5g/L、MgSO4.7Η200.5g/L、FeSO4.7Η200.015g/L、MnSO4.H2O0.015g/L、豆餅水解液 30g/L、VH150 μ g、VBlImg、Ph7.2 ~7.5，121°C、30min 滅菌并降溫至 37°C 的培養(yǎng)基中，壓力:0.1MPa ；Ph:6.5-7.0 ;風量:0.3-0.8vvm ;D030_60%條件下培養(yǎng)。流加糖中加入121°C>30min 滅菌 FeSO4.7H200.03g/L、MnS04.H2O0.03g/L、VH300 μ g/L、VB12mg/L 后搖勻，流加糖后控制發(fā)酵液中還原糖含量為0.5%，流加銨后發(fā)酵液中銨含量為0.3%，直至發(fā)酵結(jié)束。
[0026]⑵在⑴的發(fā)酵液體積為發(fā)酵罐體積的80%時開始連續(xù)排料，并維持發(fā)酵液體積為發(fā)酵罐體積的80%，將排出的發(fā)酵液在無菌條件下接入另一用葡萄糖140g/L、硫酸銨50g/L、KH2PO4.3Η204.5g/L、MgSO4.7Η200.5g/L、FeSO4.7Η200.015g/L、MnSO4.H2O0.015g/L、豆餅水解液 30g/L、VH150 μ g、VBlImg、Ph7.2 ~7.5，121°C、30min 滅菌并降溫至 37°C 的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，壓力:0.1MPa ；Ph:6.5~7.0 ;風量:0.3~0.8vvm ;D030%~60%條件下培養(yǎng)，直至⑵的OD值為30時停止流加⑴的發(fā)酵液。未接種時發(fā)酵培養(yǎng)基的體積沒過電極即可。流加糖中加入 121°C>30min 滅菌 FeSO4.7H200.03g/L、MnSO4.H2O0.03g/L、VH300 μ g、VB12mg后搖勻，流加糖后控制發(fā)酵液中還原糖含量為0.5%，流加銨后發(fā)酵液中銨含量為0.3%，直至發(fā)酵結(jié)束。此時周期為36h，產(chǎn)酸19%，轉(zhuǎn)化率71%。
[0027]實施例2
[0028]⑴將常規(guī)培養(yǎng)的種子罐種子按10%的比例接入用葡萄糖140g/L、硫酸銨50g/L、KH2PO4.3Η204.5g/L、MgS04.7Η200.5g/L、FeS04.7Η200.015g/L、MnS04.H2O0.015g/L、豆餅水解液 30g/L、VH150y g、VBllmg、Ph7.2 ~7.5，121°C、30min 滅菌并降溫至 37°C 的培養(yǎng)基中，壓力:0.1MPa ；Ph:6.5~7.0 ;風量:0.3~0.8vvm ；D030%~60%條件下培養(yǎng)。流加糖中加入 121°C>30min 滅菌 FeSO4.7H200.03g/L、MnSO4.H2O0.03g/L、VH300 μ g、VB12mg 后搖勻，流加糖后控制發(fā)酵液中還原糖含量為0.5%，流加銨后發(fā)酵液中銨含量為0.3%，直至發(fā)酵結(jié)束。
[0029]⑵在⑴的發(fā)酵液體積為發(fā)酵罐體積的80%時開始連續(xù)排料，并維持發(fā)酵液體積為發(fā)酵罐體積的80%，將排出的發(fā)酵液在無菌條件下接入另一用葡萄糖140g/L、硫酸銨50g/L、KH2PO4.3Η204.5g/L、MgSO4.7Η200.5g/L、FeSO4.7Η200.015g/L、MnSO4.H2O0.015g/L、豆餅水解液 30g/L、VH150 μ g、VBlImg、Ph7.2 ~7.5，121°C、30min 滅菌并降溫至 37°C 的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，壓力:0.1MPa ；Ph:6.5~7.0 ;風量:0.3~0.8vvm ;D030%~60%條件下培養(yǎng)，直至⑵的OD值為30時停止流加⑴的發(fā)酵液。未接種時發(fā)酵培養(yǎng)基的體積沒過電極即可。流加糖中加入 121°C>30min 滅菌 FeSO4.7H200.03g/L、MnSO4.H2O0.03g/L、VH300 μ g、VB12mg后搖勻，流加糖后控制發(fā)酵液中還原糖含量為0.5%，流加銨后發(fā)酵液中銨含量為0.3%，直至發(fā)酵結(jié)束。此時周期為36h，產(chǎn)酸19%，轉(zhuǎn)化率71%。
[0030]⑶在⑵的發(fā)酵液體積為發(fā)酵罐體積的80%時開始連續(xù)排料，并維持發(fā)酵液體積為發(fā)酵罐體積的80%，將排出的發(fā)酵液在無菌條件下接入另一用葡萄糖140g/L、硫酸銨50g/L、KH2PO4.3Η204.5g/L、MgSO4.7Η200.5g/L、FeSO4.7Η200.015g/L、MnSO4.H2O0.015g/L、豆餅水解液 30g/L、VH150 μ g、VBlImg、Ph7.2 ~7.5，121°C、30min 滅菌并降溫至 37°C 的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，壓力:0.1MPa ；Ph:6.5~7.0 ;風量:0.3~0.8vvm ;D030%~60%條件下培養(yǎng)，直至⑶的OD值為30時停止流加⑵的發(fā)酵液。未接種時發(fā)酵培養(yǎng)基的體積沒過電極即可。流加糖中加入 121°C>30min 滅菌 FeSO4.7H200.03g/L、MnSO4.H2O0.03g/L、VH300 μ g、VB12mg后搖勻，流加糖后控制發(fā)酵液中還原糖含量為0.5%，流加銨后發(fā)酵液中銨含量為0.3%，直至發(fā)酵結(jié)束。此時周期為 37h，產(chǎn)酸19.5%，轉(zhuǎn)化率69%。[0031]實施例3
[0032]⑴將常規(guī)培養(yǎng)的種子罐種子按10%的比例接入用葡萄糖140g/L、硫酸銨50g/L、KH2PO4.3Η204.5g/L、MgS04.7Η200.5g/L、FeS04.7Η200.015g/L、MnS04.H2O0.015g/L、豆餅水解液 30g/L、VH150y g、VBllmg、Ph7.2 ~7.5，121°C、30min 滅菌并降溫至 37°C 的培養(yǎng)基中，壓力:0.1MPa ；Ph:6.5~7.0 ;風量:0.3~0.8vvm ；D030%~60%條件下培養(yǎng)。流加糖中加入 121°C>30min 滅菌 FeSO4.7H200.03g/L、MnSO4.H2O0.03g/L、VH300 μ g、VB12mg 后搖勻，流加糖后控制發(fā)酵液中還原糖含量為0.5%，流加銨后發(fā)酵液中銨含量為0.3%，直至發(fā)酵結(jié)束。
[0033]⑵在⑴的發(fā)酵液體積為發(fā)酵罐體積的80%時開始連續(xù)排料，并維持發(fā)酵液體積為發(fā)酵罐體積的80%，將排出的發(fā)酵液在無菌條件下接入另一用葡萄糖140g/L、硫酸銨50g/L、KH2PO4.3Η204.5g/L、MgSO4.7Η200.5g/L、FeSO4.7Η200.015g/L、MnSO4.H2O0.015g/L、豆餅水解液 30g/L、VH150 μ g、VBlImg、Ph7.2 ~7.5，121°C、30min 滅菌并降溫至 37°C 的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，壓力:0.1MPa ；Ph:6.5~7.0 ;風量:0.3~0.8vvm ;D030%~60%條件下培養(yǎng)，直至⑵的OD值為30時停止流加⑴的發(fā)酵液。未接種時發(fā)酵培養(yǎng)基的體積沒過電極即可。流加糖中加入 121°C>30min 滅菌 FeSO4.7H200.03g/L、MnSO4.H2O0.03g/L、VH300 μ g、VB12mg后搖勻，流加糖后控制發(fā)酵液中還原糖含量為0.5%，流加銨后發(fā)酵液中銨含量為0.3%，直至發(fā)酵結(jié)束。此時周期為36h，產(chǎn)酸19%，轉(zhuǎn)化率71%。
[0034]⑶在⑵的OD值為30時，⑴停止向⑵流加發(fā)酵液，此時⑴可以將排出的發(fā)酵液在無菌條件下繼續(xù)接入另一用葡萄糖140g/L、硫酸銨50g/L、KH2PO4.3H204.5g/L、MgSO4.7Η200.5g/L、FeSO4.7Η200.015g/L、MnSO4.H2O0.015g/L、豆餅水解液 30g/L、VH150y g、VBlImg, Ph7.2~7.5，12rC、30min滅菌并降溫至37°C的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，壓力:
0.1MPa ；Ph:6.5~7.0 ;風量:0.3~0.8vvm ;D030%~60%條件下培養(yǎng)，直至⑶的OD值為30時停止流加⑴的發(fā)酵液。未接種時發(fā)酵培養(yǎng)基的體積沒過電極即可。流加糖中加入121°C、30min 滅菌 FeSO4.7Η200.03g/L、MnSO4.H2O0.03g/L、VH300 μ g、VB12mg 后搖勻，流加糖后控制發(fā)酵液中還原糖含量為0.5%，流加銨后發(fā)酵液中銨含量為0.3%，直至發(fā)酵結(jié)束。此時周期為32h，產(chǎn)酸18.5%，轉(zhuǎn)化率72%。
[0035]對照例I現(xiàn)有連續(xù)發(fā)酵產(chǎn)酸方法
[0036]將常規(guī)培養(yǎng)的種子罐種子按10%的比例接入用葡萄糖140g/L、硫酸銨50g/L、KH2PO4.3Η204.5g/L、MgS04.7Η200.5g/L、FeS04.7Η200.015g/L、MnS04.H2O0.015g/L、豆餅水解液 30g/L、VH150y g、VBllmg、Ph7.2 ~7.5，121°C、30min 滅菌并降溫至 37°C 的培養(yǎng)基中，壓力:0.1MPa ；Ph:6.5~7.0 ;風量:0.3~0.8vvm ；D030%~60%條件下培養(yǎng)。流加糖中加入 121°C>30min 滅菌 FeSO4.7H200.03g/L、MnSO4.H2O0.03g/L、VH300 μ g、VB12mg 后搖勻，流加糖后控制發(fā)酵液中還原糖含量為0.5%，流加銨后發(fā)酵液中銨含量為0.3%，直至發(fā)酵結(jié)束。此時周期為48h，產(chǎn)酸16%，轉(zhuǎn)化率62%。
[0037]對照例2種子罐染菌對比
[0038]在常規(guī)賴氨酸發(fā)酵中，使用本實驗室的相同設(shè)備，從一級種子罐到發(fā)酵罐因染菌而無法繼續(xù)進行發(fā)酵的批次占總試驗批次的12%，而采用新工藝后，從一級種子罐到發(fā)酵罐因染菌而無法繼續(xù)進行發(fā)酵的批次占總試驗批次的1%。由此可見，采用本發(fā)明發(fā)酵方法能夠有效降低種子罐的染菌風險。[0039]雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā) 明 精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進，均屬于本發(fā)明要求保護的范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種周期短產(chǎn)率高的L-賴氨酸發(fā)酵方法，其特征在于，采用分流方式將連續(xù)發(fā)酵工藝中排出的發(fā)酵液接入新的發(fā)酵培養(yǎng)基中，在流加碳源、氮源的條件下進一步發(fā)酵培養(yǎng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述L-賴氨酸發(fā)酵方法，具體包括如下步驟: 1)在連續(xù)發(fā)酵過程中，待第一發(fā)酵裝置的發(fā)酵液OD值為35-60%時，將第一發(fā)酵裝置的發(fā)酵液連續(xù)排出并流加至裝有新發(fā)酵培養(yǎng)基的第二發(fā)酵裝置內(nèi)，同時始終保持第一發(fā)酵裝置中發(fā)酵液體積恒定； 2)向第二發(fā)酵裝置中流加碳源； 3)向第二發(fā)酵裝置中流加氮源； 4)當?shù)诙l(fā)酵裝置中的發(fā)酵液體積達到80%，將第二發(fā)酵裝置中的發(fā)酵液進一步分流流加至第三發(fā)酵裝置中繼續(xù)發(fā)酵，以此類推，當其中任一發(fā)酵裝置中的發(fā)酵液體積為發(fā)酵裝置的80%時，將其發(fā)酵液分流流加至下一個發(fā)酵裝置中，保證每一個發(fā)酵裝置中發(fā)酵液體積恒定； 5)當任一發(fā)酵裝置的產(chǎn)酸水平呈下降趨勢時，結(jié)束發(fā)酵過程，并將所有發(fā)酵液進一步提取，得到L-賴氨酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟4)中，當任一發(fā)酵裝置中發(fā)酵液的OD值至30%時，停止向其流加，并將前一發(fā)酵裝置中排出的發(fā)酵液直接流加至下一發(fā)酵裝置中，以此類推；當任一發(fā)酵裝置中發(fā)酵液的OD值大于60%時，停止向其它發(fā)酵罐中流加，并將其中發(fā)酵液進一步提取得 到L-賴氨酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，在步驟I)中，所述發(fā)酵液OD值為35-60%，優(yōu)選 40-50%。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)條件為:溫度35-40°C;壓力0.05-0.1MPa ；pH6.5-7.0 ;風量 0.3-0.8vvm。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，在步驟2)中，所述流加碳源后發(fā)酵液中還原糖含量為0.1-1%，優(yōu)選0.5-0.7%。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，在步驟3)中，所述流加氮源后發(fā)酵液中銨含量為 0.1-0.7%，優(yōu)選 0.2-0.3%o
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述流加碳源過程中還加入微量元素。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述微量元素為硫酸鎂、硫酸鐵，維生素H，維生素BI。
10.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)基配方:葡萄糖140g/L、硫酸銨 50g/L、KH2PO4.3Η204.5g/L、MgSO4.7Η200.5g/L、FeSO4.7Η200.015g/L、MnSO4.H2O0.015g/L、豆餅水解液 30g/L、VH150 μ g、VBllmg ；ρΗ=7.2-7.5，121 °C溫度下滅菌30min并降溫至37 °C。
【文檔編號】C12P13/08GK103820509SQ201410036915
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2014年1月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月24日
【發(fā)明者】李榮杰, 尚海濤, 楊為華, 鄧遠德, 徐斌, 戴嘉, 張雪鋒, 秦晴, 唐浩, 張家泉, 常珠俠, 紀傳俠, 韓小芬 申請人:安徽豐原發(fā)酵技術(shù)工程研究有限公司