一種緩解壓力及調(diào)節(jié)腸胃的功能食品及其二步發(fā)酵制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種緩解壓力及調(diào)節(jié)腸胃的功能食品及其二步發(fā)酵制備方法，該方法包括：以含調(diào)節(jié)腸胃的天然組分為藥性培養(yǎng)基質(zhì)，接種猴頭菇液體菌種進(jìn)行雙向固體發(fā)酵制備具有調(diào)節(jié)腸胃功能的藥性菌質(zhì)；以藥性菌質(zhì)為原料，粉碎后添加酵母粉、谷氨酸鈉、水制成發(fā)酵培養(yǎng)基，接種乳酸菌進(jìn)行液體深層發(fā)酵生產(chǎn)緩解壓力的γ-氨基丁酸，制備同時具有緩解壓力和調(diào)節(jié)腸胃功能的發(fā)酵液；采用發(fā)酵液，制備成不同劑型的緩解壓力及調(diào)節(jié)腸胃的功能食品。本發(fā)明方法制備的緩解壓力及調(diào)節(jié)腸胃的功能食品以猴頭菇菌質(zhì)和γ-氨基丁酸配伍同時具有緩解壓力及調(diào)節(jié)腸胃功能，市場前景廣闊，此外該制備方法穩(wěn)定，適合大規(guī)模生產(chǎn)。
【專利說明】—種緩解壓力及調(diào)節(jié)腸胃的功能食品及其二步發(fā)酵制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及功能食品及其制備領(lǐng)域，具體涉及一種緩解壓力及調(diào)節(jié)腸胃的功能食品及采用猴頭菇、乳酸菌固液二步發(fā)酵制備該功能食品的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著現(xiàn)代物質(zhì)生活的豐富和工作節(jié)奏的加快，飲食不規(guī)律，暴飲暴食成為現(xiàn)代人的通病，導(dǎo)致越來越多人出現(xiàn)腸胃功能紊亂，此外競爭加劇，人們學(xué)習(xí)和工作壓力越來越大，精神高度緊張和情緒極易波動也是損傷脾胃，導(dǎo)致腸胃功能障礙的重要原因，壓力大和腸胃功能障礙嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量。目前尚無同時緩解壓力和調(diào)節(jié)腸胃的功能食品，因此研發(fā)一種能緩解壓力和調(diào)節(jié)腸胃的功能食品，通過日常保健來減輕壓力和調(diào)節(jié)腸胃符合“治未病”的現(xiàn)代養(yǎng)生理念，具有廣闊的市場前景。
[0003]猴頭菇性平、味甘、助消化，具有益氣、健脾、和胃功能，對胃黏膜有修復(fù)和保護(hù)作用，是藥食同源的珍貴食用菌。研究還發(fā)現(xiàn)猴頭菇多糖等活性物質(zhì)對小鼠腸道菌群有明顯調(diào)節(jié)作用。目前已商業(yè)化生產(chǎn)的猴頭菇制品有:猴頭菇餅干、猴頭菇口服液、猴頭菇飲料，目前大多猴頭菇制品以猴頭菇子實體為原料生產(chǎn)，存在原料成本高、產(chǎn)品中活性成分含量低等問題，以猴頭菇菌絲體為原料則可解決這些問題，如專利201110098445.4《一種具有免疫調(diào)節(jié)及改善腸胃道功能的保健食品》中猴頭菇以小刺猴頭菌液體發(fā)酵制備，改善胃腸道功能更強。但是猴頭菇菌絲體都是以玉米粉、豆餅、麥麩等為基質(zhì)，以傳統(tǒng)固體或液體發(fā)酵工藝制備，并無利用猴頭菇和具有一定功效的藥性基質(zhì)通過雙向發(fā)酵制備的報道。
[0004]莊毅等首次提出雙向發(fā)酵的概念，指出食藥用真菌與含有活性成分的中藥材進(jìn)行發(fā)酵具有雙向性，能產(chǎn)生1+1>2的生理效果，如專利201110271923.7《一種具有降血糖功效的真菌藥性菌質(zhì)及其制備方法》選用具有降血糖功效的藥性基質(zhì)和真菌菌種作為雙向發(fā)酵獲得具有明顯的降低血糖又不增加胰島素濃度的作用的藥性菌質(zhì)，專利200910058889.8《含有靈芝的發(fā)酵菌質(zhì)混合物、制備方法及其應(yīng)用》以靈芝和含有丹參的藥性基質(zhì)進(jìn)行雙向發(fā)酵，得到兼具丹參藥材和靈芝真菌功效的菌質(zhì)發(fā)酵終產(chǎn)物。因此，選用猴頭菇和具有腸胃調(diào)節(jié)功能的藥性基質(zhì)和進(jìn)行固體發(fā)酵，通過藥性基質(zhì)對猴頭菇菌絲體生長代謝過程的影響和猴頭菇真菌酶系對藥性基質(zhì)改造在內(nèi)的雙向性固體發(fā)酵后，得到兼具藥性基質(zhì)和猴頭菇調(diào)節(jié)腸胃功能的藥性菌質(zhì)，可作為保健食品原料，對腸胃障礙者能夠產(chǎn)生1+1>2的效果。
[0005]Y -氨基丁酸是一種重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明Y -氨基丁酸具有鎮(zhèn)靜神經(jīng)、緩解壓力的功效，衛(wèi)生部2009年第12號公告批準(zhǔn)乳酸菌發(fā)酵法制備的Y-氨基丁酸為新資源食品。從傳統(tǒng)發(fā)酵食品中篩選的乳酸菌安全性高，可用于Y-氨基丁酸的生產(chǎn)，如專利200780006225.6《能夠生產(chǎn)Y -氨基丁酸的乳酸菌》從未精制的醬油中分離到能夠生產(chǎn)Y-氨基丁酸(GABA)的凝乳酶乳酸桿菌，專利200910183478.1《一株高效轉(zhuǎn)化L-谷氨酸為Y-氨基丁酸乳酸菌的選育》從自制酸菜中篩選出一株能利用L-谷氨酸生產(chǎn)Y-氨基丁酸的植物乳桿菌。但是乳酸菌只能利用單糖、二糖等小分子碳源，不能直接利用含淀粉以及纖維質(zhì)的天然基質(zhì)，而真菌具有降解淀粉和纖維質(zhì)的酶系，可將淀粉質(zhì)、纖維質(zhì)分解為可供乳酸菌利用的小分子碳源，將真菌發(fā)酵與乳酸菌發(fā)酵相耦合進(jìn)行分步發(fā)酵可解決這一問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]針對目前并無同時緩解壓力及調(diào)節(jié)腸胃的功能食品，本發(fā)明提供一種同時緩解壓力及調(diào)節(jié)腸胃的功能食品，同時提供了該功能食品利用猴頭菇、乳酸菌二步發(fā)酵制備方法。
[0007]—種緩解壓力及調(diào)節(jié)腸胃的功能食品的二步發(fā)酵制備方法，包括如下步驟:
[0008](I)猴頭菇固體發(fā)酵:以含有調(diào)節(jié)腸胃的天然組分為藥性培養(yǎng)基質(zhì)，接種猴頭菇液體菌種進(jìn)行雙向固體發(fā)酵制備具有調(diào)節(jié)腸胃功能的藥性菌質(zhì)；
[0009](2)乳酸菌液體深層發(fā)酵:以步驟(I)的藥性菌質(zhì)為原料，粉碎后添加酵母粉、谷氨酸鈉、水制成發(fā)酵培養(yǎng)基，接種乳酸菌進(jìn)行液體深層發(fā)酵生產(chǎn)緩解壓力的Y-氨基丁酸，制備同時具有緩解壓力和調(diào)節(jié)腸胃功能的發(fā)酵液；
[0010](3)采用步驟(2)的發(fā)酵液，制備成不同劑型的緩解壓力及調(diào)節(jié)腸胃的功能食品。
[0011]本發(fā)明中，步驟(I)以含有調(diào)節(jié)腸胃功能的天然組分作為藥性培養(yǎng)基質(zhì)，接種猴頭菇進(jìn)行雙向固體發(fā)酵，通過藥性培養(yǎng)基質(zhì)對猴頭菇菌絲體生長代謝過程的影響和猴頭菇真菌酶系對藥性培養(yǎng)基質(zhì)改造在內(nèi)的雙向性固體發(fā)酵后，得到兼具藥性基質(zhì)和猴頭菇調(diào)節(jié)腸胃功能的藥性菌質(zhì)；步驟(2)以猴頭菇降解后含有小分子碳源等營養(yǎng)物質(zhì)的藥性菌質(zhì)為原料，添加酵母粉以及谷氨酸鈉制作液體培養(yǎng)基，接種可產(chǎn)生Y -氨基丁酸的乳酸菌進(jìn)行發(fā)酵，制備具有緩解壓力和調(diào)節(jié)腸胃功能的發(fā)酵液；最后，發(fā)酵液經(jīng)過過濾、濃縮、噴霧干燥、造粒、壓片等工藝制備成功能食品。
[0012]步驟(I)中，所述的猴頭菇可采用現(xiàn)有技術(shù)，猴頭菇液體菌種采用現(xiàn)有的常規(guī)工藝制得，如具體可選擇猴頭菇ACCC51804，即中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心(ACCC)保藏的菌種。
[0013]步驟(I)中，所述的猴頭菇液體菌種的接種量為2%_10%，即所述的猴頭菇液體菌種的加入的體積量(HiL)為藥性培養(yǎng)基質(zhì)的質(zhì)量(g)的2%-10% (mL/g),以IOOg藥性培養(yǎng)基質(zhì)為基準(zhǔn)，加入2-10mL的猴頭菇液體菌種。
[0014]步驟(I)中，所述的藥性培養(yǎng)基質(zhì)的制備:先稱取以下重量百分含量的原料:全粒大麥70%-80%、山藥10%-20%、鐵皮楓斗1%-2%、黨參1%_2%、茯苓1%_2%、陳皮1%_2%、佛手1%-2%、石膏粉0.5%-1.5%，將各組分混合、粉碎，然后加水至水分重量含量為60%-65%，1160C -126°C滅菌0.5h-l.5h。優(yōu)選的，所述的藥性培養(yǎng)基質(zhì)的制備:先稱取以下重量百分含量的原料:全粒大麥75%、山藥15%、鐵皮楓斗2%、黨參2%、茯苓2%、陳皮2%、佛手1%、石膏粉1%，將各組分混合、粉碎，然后加水至水分重量含量為60%-65%，121°C滅菌lh。。
[0015]步驟(I)中，所述的雙向固體發(fā)酵的條件為:發(fā)酵溫度在25°C _28°C，發(fā)酵時間在20-25天，以該猴頭菇固體發(fā)酵條件為宜。
[0016]步驟(2)中，所述的乳酸菌為植物乳酸菌，優(yōu)選的為從四川泡菜中篩選的植物乳桿菌LW106 (保藏編號為=CGMCC N0.5655)，即采用中國普通微生物菌種保藏管理中心CGMCC保藏的菌種，植物乳酸菌液體菌種采用MRS培養(yǎng)基28°C靜置培養(yǎng)48h獲得。
[0017]步驟(2)中，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基采用以下重量份的原料:水1000重量份、藥性菌質(zhì)40-50重量份、酵母粉5-10重量份、谷氨酸鈉15-20重量份，將藥性菌質(zhì)、酵母粉和谷氨酸鈉溶于水，添加醋酸和醋酸鈉配制成pH為5-6的緩沖液，1160C _126°C滅菌20min-40min。作為優(yōu)選，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基采用以下重量份的原料:水1000重量份、藥性菌質(zhì)50重量份、酵母粉7.5重量份、谷氨酸鈉20重量份，將藥性菌質(zhì)、酵母粉和谷氨酸鈉溶于水，添加醋酸和醋酸鈉配制成pH為5.5的緩沖液，121°C滅菌30min。
[0018]步驟(2)中，所述的乳酸菌的接種量為1%_5%，即所述的乳酸菌的加入的體積量為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的1%_5%。
[0019]步驟(2)中，所述的液體深層發(fā)酵的條件為:發(fā)酵溫度在28_32°C，發(fā)酵時間在48-72h，以該發(fā)酵條件為宜。
[0020]步驟(2)中，所述的發(fā)酵液中Y-氨基丁酸的含量為9_12g/L。
[0021]步驟(3)中，所述的發(fā)酵液通過過濾、濃縮、調(diào)配、冷凍干燥、滅菌等工藝制備成不同劑型的功能食品。
[0022]所述的緩解壓力及調(diào)節(jié)腸胃的功能食品的劑型為口服劑型，優(yōu)選為口服液、片劑或固體飲料，發(fā)酵液經(jīng)過濾、濃縮、調(diào)配、滅菌，灌裝為口服液，發(fā)酵液經(jīng)過濾、濃縮、噴霧干燥、制粒，包裝為固體飲料，發(fā)酵液經(jīng)過濾、濃縮、噴霧干燥、制粒，壓片為片劑。具體地，發(fā)酵液首先經(jīng)過過濾、濃縮、噴霧干燥成粉末，粉末經(jīng)沸騰造粒機造粒、篩分、包裝制成固體飲料，每包Ig ;粉末經(jīng)沸騰造粒機造粒后用顆粒整粒機以20目篩進(jìn)行整粒，整粒所得顆粒加入0.5%崩解劑羧甲淀粉鈉和0.1%潤滑劑硬脂酸鎂在多維運動混合機中充分混勻5分鐘壓成片劑，片劑0.5g/片。即加入相對于整粒所得顆粒重量的0.5%崩解劑羧甲淀粉鈉，加入相對于整粒所得顆粒重量的0.1%潤滑劑硬脂酸鎂。
[0023]通過上述二步發(fā)酵制備方法制備的緩解壓力及調(diào)節(jié)腸胃的功能食品，具有同時緩解壓力及調(diào)節(jié)腸胃的保健功能。
[0024]猴頭菇與調(diào)節(jié)腸胃的藥性培養(yǎng)基質(zhì)雙向發(fā)酵可制備調(diào)節(jié)腸胃功能顯著的藥性菌質(zhì)，而藥性培養(yǎng)基質(zhì)通過猴頭菇的降解作用，可為乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)Y-氨基丁酸提供營養(yǎng)和碳源，同時通過乳酸菌的降解轉(zhuǎn)化，藥性菌質(zhì)更易吸收和利用，因此采用猴頭菇和乳酸菌二步發(fā)酵可制備可同時緩解壓力和調(diào)節(jié)腸胃的功能食品。
[0025]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果:
[0026]( I)本發(fā)明根據(jù)猴頭菇具有調(diào)節(jié)腸胃功能，Y -氨基丁酸具有緩解壓力功效，二者配伍具有緩解壓力和調(diào)節(jié)腸胃的功能，提供了一種以功能強化的猴頭菇藥性菌質(zhì)和Y-氨基丁酸配伍的可同時緩解壓力和調(diào)節(jié)腸胃的功能食品制備方法，該方法采用二步發(fā)酵法將食用菌發(fā)酵與乳酸菌發(fā)酵有機結(jié)合，其中第一步利用猴頭菇和具備調(diào)節(jié)腸胃功能藥性培養(yǎng)基質(zhì)的雙向固體發(fā)酵制備兼具猴頭菇和藥性基質(zhì)調(diào)節(jié)腸胃功能的藥性菌質(zhì)，該過程不僅能產(chǎn)生1+1 > 2的生理功效，還可將藥性培養(yǎng)基質(zhì)中的大分子碳源降解為乳酸菌易于利用的小分子碳源，為第二步乳酸菌液體深層發(fā)酵產(chǎn)生具備緩解壓力作用的Y-氨基丁酸提供必要的營養(yǎng)和碳源，同時通過乳酸菌的降解和轉(zhuǎn)化藥性菌質(zhì)也更易吸收、利用。
[0027](2)本發(fā)明制備的緩解壓力及調(diào)節(jié)腸胃的功能食品經(jīng)實驗證明具有緩解壓力和調(diào)節(jié)腸胃功能。
[0028](3)本發(fā)明采用的生產(chǎn)方法，不僅原料成本低，整個生產(chǎn)過程都采用低溫發(fā)酵，條件溫和，沒有毒害物質(zhì)的攝入，產(chǎn)品安全性、附加值高，可實現(xiàn)規(guī)模化生產(chǎn)，市場前景廣闊。[0029](4)本發(fā)明制備的功能食品采用片劑、固體飲料等劑型，方便攜帶及服用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0030]圖1為本發(fā)明緩解壓力及調(diào)節(jié)腸胃的功能食品的二步發(fā)酵制備流程圖；
[0031]圖2為試驗例2中受試者唾液皮質(zhì)醇的變化率(起始點100%)。
【具體實施方式】
[0032]以下按照圖1工藝流程對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此。以下沒有特別說明的情況下，百分?jǐn)?shù)均是指重量百分?jǐn)?shù)。實施例1
[0033]1、猴頭菇固體發(fā)酵:
[0034]①藥性培養(yǎng)基質(zhì)的制作
[0035]配方:全粒大麥80%、山藥14.5%、鐵皮楓斗1%、黨參1%、茯苓1%、陳皮1%、佛手1%、石骨粉0.5% ；
[0036]配制方法:按配方比例將各組分混合、粉碎，加水至水分重量含量為65%，12TC滅菌lh，得到藥性培養(yǎng)基質(zhì)；
[0037]②接種發(fā)酵
[0038]將猴頭菇ACCC51804的液體菌種(常規(guī)工藝制備)按3%體積質(zhì)量比接種到①中藥性培養(yǎng)基質(zhì)，即猴頭菇ACCC51804液體菌種的加入的體積量(mL)為藥性培養(yǎng)基質(zhì)的質(zhì)量(g)的3% (mL/g)，25°C培養(yǎng)25天制備具有調(diào)節(jié)腸胃功能的藥性菌質(zhì)；
[0039]2、乳酸菌液體深層發(fā)酵:
[0040]①發(fā)酵培養(yǎng)基制作
[0041]配方:藥性菌質(zhì)40g、酵母粉5g,谷氨酸鈉15g,自來水IL (IOOOg)；
[0042]配制方法:按配方比例將藥性菌質(zhì)、酵母粉、谷氨酸鈉溶于水，添加醋酸和醋酸鈉配制成PH為5.5的緩沖液，121°C滅菌30min，得到發(fā)酵培養(yǎng)基；
[0043]②接種發(fā)酵
[0044]將從四川泡菜中篩選的植物乳桿菌LW106 (保藏編號為:CGMCCN0.5655)液體菌種(MRS培養(yǎng)基28°C靜置培養(yǎng)48h)按1%比例接種到①中發(fā)酵培養(yǎng)基，即植物乳桿菌的加入的體積量為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的1%，28°C靜置培養(yǎng)72h制備具有緩解壓力和調(diào)節(jié)腸胃功能的發(fā)酵液；
[0045]3、第2步制備的發(fā)酵液首先經(jīng)過過濾、濃縮、噴霧干燥成粉末，粉末經(jīng)沸騰造粒機造粒、篩分、包裝制成固體飲料,每包lg。
[0046]實施例2
[0047]1、猴頭菇固體發(fā)酵:
[0048]①藥性培養(yǎng)基質(zhì)的制作
[0049]配方:全粒大麥80%、山藥14.5%、鐵皮楓斗1%、黨參1%、茯苓1%、陳皮1%、佛手1%、石骨粉0.5% ；
[0050]配制方法:按配方比例將各組分混合、粉碎，加水至水分重量含量為60%，12TC滅菌lh，得到藥性培養(yǎng)基質(zhì)；
[0051]②接種發(fā)酵[0052]將猴頭菇ACCC51804的液體菌種(常規(guī)工藝制備)按3%體積質(zhì)量比接種到①中藥性培養(yǎng)基質(zhì)，即猴頭菇ACCC51804液體菌種的加入的體積量(mL)為藥性培養(yǎng)基質(zhì)的質(zhì)量(g)的3% (mL/g)，25°C培養(yǎng)25天制備具有調(diào)節(jié)腸胃功能的藥性菌質(zhì)；
[0053]2、乳酸菌液體深層發(fā)酵:
[0054]①發(fā)酵培養(yǎng)基制作
[0055]配方:藥性菌質(zhì)40g、酵母粉5g,谷氨酸鈉15g,自來水IL ；
[0056]配制方法:按配方比例將藥性菌質(zhì)、酵母粉、谷氨酸鈉溶于水，添加醋酸和醋酸鈉配制成PH為5.5的緩沖液，121°C滅菌30min，得到發(fā)酵培養(yǎng)基；
[0057]②接種發(fā)酵
[0058]將從四川泡菜中篩選的植物乳桿菌LW106 (保藏編號為=CGMCC N0.5655)液體菌種(MRS培養(yǎng)基28°C靜置培養(yǎng)48h)按1%比例接種到①中發(fā)酵培養(yǎng)基，即植物乳桿菌的加入的體積量為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的1%，28°C靜置培養(yǎng)72h制備具有緩解壓力和調(diào)節(jié)腸胃功能的發(fā)酵液；
[0059]3、第2步制備的發(fā)酵液首先經(jīng)過過濾、濃縮、噴霧干燥成粉末，粉末經(jīng)沸騰造粒機造粒后用顆粒整粒機以20目篩進(jìn)行整粒，整粒所得顆粒加入相對于整粒所得顆粒重量的
0.5%崩解劑羧甲淀粉鈉和相對于整粒所得顆粒重量的0.1%潤滑劑硬脂酸鎂在多維運動混合機中充分混勻5分鐘壓成片劑，片劑0.5g/片。
[0060]實施例3
[0061]1、猴頭燕固體發(fā)酵:
[0062]①藥性培養(yǎng)基質(zhì)的制作
[0063]配方:全粒大麥75%、山藥15%、鐵皮楓斗2%、黨參2%、茯苓2%、陳皮2%、佛手1%、石膏粉1% ;
[0064]配制方法:按配方比例將各組分混合、粉碎，加水至水分重量含量為63% ;121°C滅菌lh，得到藥性培養(yǎng)基質(zhì)；
[0065]②接種發(fā)酵
[0066]將猴頭菇ACCC51804的液體菌種(常規(guī)工藝制備)按5%體積質(zhì)量比接種到①中藥性培養(yǎng)基質(zhì)，即猴頭菇ACCC51804液體菌種的加入的體積量(mL)為藥性培養(yǎng)基質(zhì)的質(zhì)量(g)的5% (mL/g)，28°C培養(yǎng)20天制備具有調(diào)節(jié)腸胃功能的藥性菌質(zhì)；
[0067]2、乳酸菌液體深層發(fā)酵:
[0068]①發(fā)酵培養(yǎng)基制作
[0069]配方:藥性菌質(zhì)50g、酵母粉7.5g,谷氨酸鈉20g,自來水IL ；
[0070]配制方法:按配方比例將藥性菌質(zhì)、酵母粉、谷氨酸鈉溶于水，添加醋酸和醋酸鈉配制成PH為5.5的緩沖液，121°C滅菌30min，得到發(fā)酵培養(yǎng)基；
[0071]②接種發(fā)酵
[0072]將從四川泡菜中篩選的植物乳桿菌LW106 (保藏編號為:CGMCCN0.5655)液體菌種(MRS培養(yǎng)基28°C靜置培養(yǎng)48h)按1%比例接種到①中發(fā)酵培養(yǎng)基，即植物乳桿菌的加入的體積量為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的1%，32°C靜置培養(yǎng)48h制備具有緩解壓力和調(diào)節(jié)腸胃功效的發(fā)酵液；
[0073]3、第2步制備的發(fā)酵液首先經(jīng)過過濾、濃縮、噴霧干燥成粉末，粉末經(jīng)沸騰造粒機造粒、篩分、包裝制成固體飲料,每包lg。
[0074]實施例4
[0075]1、猴頭菇固體發(fā)酵:
[0076]①藥性培養(yǎng)基質(zhì)的制作
[0077]配方:全粒大麥75%、山藥15%、鐵皮楓斗2%、黨參2%、茯苓2%、陳皮2%、佛手1%、石膏粉1% ;
[0078]配制方法:按配方比例將各組分混合、粉碎，加水至水分重量含量為62% ;121°C滅菌lh，得到藥性培養(yǎng)基質(zhì)；
[0079]②接種發(fā)酵
[0080]將猴頭菇ACCC51804的液體菌種(常規(guī)工藝制備)按5%體積質(zhì)量比接種到①中藥性培養(yǎng)基質(zhì)，即猴頭菇ACCC51804液體菌種的加入的體積量(mL)為藥性培養(yǎng)基質(zhì)的質(zhì)量(g)的5% (mL/g)，28°C培養(yǎng)20天制備具有調(diào)節(jié)腸胃功能的藥性菌質(zhì)；
[0081]2、乳酸菌液體深層發(fā)酵:
[0082]①發(fā)酵培養(yǎng)基制作
[0083]配方:藥性菌質(zhì)50g、酵母粉7.5g,谷氨酸鈉20g,自來水IL ；
[0084]配制方法:按配方比例將藥性菌質(zhì)、酵母粉、谷氨酸鈉溶于水，添加醋酸和醋酸鈉配制成PH為5.5的緩沖液，121°C滅菌30min，得到發(fā)酵培養(yǎng)基；
[0085]②接種發(fā)酵
[0086]將從四川泡菜中篩選的植物乳桿菌LW106 (保藏編號為=CGMCC N0.5655)液體菌種(MRS培養(yǎng)基28°C靜置培養(yǎng)48h)按1%比例接種到①中發(fā)酵培養(yǎng)基，即植物乳桿菌的加入的體積量為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的1%，32°C靜置培養(yǎng)48h制備具有緩解壓力和調(diào)節(jié)腸胃功能的發(fā)酵液；
[0087]3、第2步制備的發(fā)酵液首先經(jīng)過過濾、濃縮、噴霧干燥成粉末，粉末經(jīng)沸騰造粒機造粒后用顆粒整粒機以20目篩進(jìn)行整粒，整粒所得顆粒加入相對于整粒所得顆粒重量的
0.5%崩解劑羧甲淀粉鈉和相對于整粒所得顆粒重量的0.1%潤滑劑硬脂酸鎂在多維運動混合機中充分混勻5分鐘壓成片劑，片劑0.5g/片。
[0088]以下通過毒理及功能試驗來進(jìn)一步說明本發(fā)明。由于本發(fā)明的片劑和固體飲料除劑型、輔料不同外，兩者的主要原料、每日服用量、功效成分都相同，不影響產(chǎn)品的安全和功能。故以下針對固體飲料進(jìn)行毒理和功能試驗。
[0089]試驗例I
[0090]毒理試驗:
[0091]試驗?zāi)康?檢驗產(chǎn)品是否具有毒性
[0092]試驗材料:實施例3制得的固體飲料。
[0093]樣品:人體口服推薦攝入量為每日兩次，每次兩包，Ig每包，(體重按60kg計)，折合劑量 0.067g/kg.bw。
[0094]實驗動物:清潔級ICR小鼠、SD大鼠及飼料。
[0095]飼養(yǎng)條件:溫度20-25°C、相對濕度40%_70%的屏障系統(tǒng)。
[0096]試驗方法:
[0097]小鼠急性經(jīng)口毒性試驗:取實施例3制得的固體飲料，用無菌水配制成0.500g/mL,按最大灌胃量20mL/kg.bw —日內(nèi)二次性灌胃給養(yǎng),受試物給予劑量為20.0g/kg.bw。
[0098]Ames試驗:取實施例3制得的固體飲料,用無菌水配制成0.500g/mL,為5000ug/皿的劑量，試驗設(shè)5個劑量，1000、200、40、8ug/皿4個劑量用無菌水按一定倍比逐級稀釋配制成10、2、0.4,0.08mg/mL，加樣量均為0.1mL/皿，加入0.1mL/皿，同時設(shè)陽性、陰性及溶劑對照，計數(shù)每皿回變菌落數(shù)。
[0099]小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗:以40mg/kg *bw劑量的環(huán)磷酰胺為陽性對照,無菌水為陰性對照，試驗組3個劑量分別為10.0g/kg *bw、5.0g/kg *bw、2.5g/kg *bw,取實施例3制得的固體飲料用無菌水配制成0.5,0.25,0.125g/mL,以20mL/kg.bw灌胃2次，采用30h給受試物法，兩次給樣間隔24h，第二次給樣6h后處死動物，取胸骨常規(guī)制片、鏡檢、每鼠計數(shù)1000個骨髓嗜多染紅細(xì)胞，觀察含微核的嗜多染紅細(xì)胞并觀察微核發(fā)生率。
[0100]小鼠精子畸形試驗:以40mg/kg *bw劑量的環(huán)磷酰胺為陽性對照，無菌水為陰性對照，試驗組3個劑量分別為10.0g/kg *bw、5.0g/kg *bw、2.5g/kg *bw,取實施例3制得的固體飲料用無菌水配制成0.5、0.25、0.125g/mL,以20mL/kg *bw灌胃，每天I次,連續(xù)5d。于首次給樣后的第35天處死動物，取兩側(cè)附睪精子濾液按常規(guī)制片、鏡檢，每鼠計數(shù)1000個完整的精子，計算精子畸形發(fā)生率。
[0101]30天喂養(yǎng)試驗:實施例3制得的固體飲料人體推薦量4g/人/天，按人體推薦量的 30、65、100 倍設(shè) 2.00g/kg.bw/d、4.33g/kg.bw/d、6.67g/kg.bw/d 設(shè)三個劑量組,另設(shè)一個空白對照組Og/kg.bw,受試樣品摻入基礎(chǔ)飼料中飼喂大鼠,連續(xù)喂養(yǎng)30天,每周稱I次體重和2次食物攝入量，計算每周及總的食物利用率，每天觀察有無中毒變現(xiàn)和死亡，試驗結(jié)束觀察血液學(xué)、血液生化、臟器系數(shù)指標(biāo)，并進(jìn)行病理學(xué)檢查。
[0102]試驗結(jié)果:
[0103]1、急性經(jīng)口毒性試驗結(jié)果:受試樣品對雌雄性小鼠急性經(jīng)口的最大耐受量(MTD)均大于20.0g/kg.bw,屬無毒級。
[0104]2、三項遺傳毒性試驗結(jié)果:Ames試驗、小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗、小鼠精子畸形試驗結(jié)果均為陰性。
[0105]3、30天喂養(yǎng)試驗結(jié)果:實驗期間，動物生長發(fā)育良好，各劑量組體重、食物利用率、臟器重量、臟器系數(shù)均無異常改變，血液學(xué)指標(biāo)與生化各項指標(biāo)均在正常范圍，各臟器病理學(xué)檢查均未見與受試品相關(guān)的病理改變、給予人體推薦量100倍的受試物未觀察到有害作用。
[0106]試驗例2
[0107]緩解壓力功能試驗:
[0108]試驗?zāi)康?檢驗產(chǎn)品對人體是否具有緩解壓力的功能
[0109]試驗材料:實施例3制得的固體飲料。
[0110]樣品:人體口服推薦量為每日2次，每次2包，樣品I號、2號二者的包裝、外觀基本相同，但其中一個為實施例3制得的固體飲料，另一個為安慰劑。
[0111]受試者選擇:受試者為工作壓力大的白領(lǐng)，年齡在25-45歲，性別不限，凡符合上述條件而自愿參加并保證配合者均可納入試驗。排除以下人員:對該功能食品過敏者；短期內(nèi)服用與受試功能相關(guān)的物品，影響到對結(jié)果的判斷。
[0112]試驗方法:當(dāng)人體處在壓力的狀態(tài)下，唾液中就會分泌皮質(zhì)醇，因此可以通過以唾液皮質(zhì)醇為壓力指標(biāo)評價受試物緩解壓力的作用。受試者隨機分為試食組和安慰劑對照組，每天按推薦劑量服用，連續(xù)服用4周。試驗期間不改變原來的飲食習(xí)慣，正常飲食。結(jié)果如圖2所示，圖2為受試者唾液皮質(zhì)醇的變化率(起始點100%)，由圖2可知，與對照組相t匕，試食組受試者唾液皮質(zhì)醇增加顯著減少(P〈0.01)，說明實施例3制得的固體飲料具有緩解壓力的功效。
[0113]試驗例3
[0114]調(diào)節(jié)腸胃功能試驗:
[0115]試驗?zāi)康?檢驗產(chǎn)品是否具有調(diào)節(jié)腸胃的功能
[0116]試驗材料:實施例3制得的固體飲料。
[0117]樣品:人體口服推薦量為每日2包，每次2粒，樣品I號、2號二者的包裝、外觀基本相同，但其中一個為實施例3制得的固體飲料，另一個為安慰劑。
[0118]實驗動物:清潔級ICR小鼠、SD大鼠及飼料。
[0119]飼養(yǎng)條件:溫度20-25°C、相對濕度40%_70%的屏障系統(tǒng)。
[0120]試驗方法:根據(jù)《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》(2003版)評價標(biāo)準(zhǔn)，選擇對胃黏膜的輔助保護(hù)作用和 改善腸道菌群功能為指標(biāo)評價受試物的調(diào)節(jié)腸胃功能。評價受試物對胃黏膜的輔助保護(hù)作用時建立胃壁注射冰醋酸致大鼠慢性胃潰瘍模型，設(shè)低、中、高3個劑量和陰性對照組(無菌水)，低、中、高3個劑量組分別相當(dāng)于人用最大推薦劑量的5倍、10倍、30 倍，即 0.33g/kg.bw/d, 0.67g/kg.bw/d, 2.0Og/kg.bw/d,將受試物拌入飼料連續(xù)飼養(yǎng)實驗大鼠30d，實驗結(jié)束時測量各實驗組胃黏膜損傷面積或體積，檢查實施例3制得的固體飲料對胃黏膜損傷的保護(hù)作用，結(jié)果見表1。評價受試物改善腸道菌群功能時設(shè)低、中、高3個劑量和陰性對照組(無菌水)，低、中、高3個劑量組分別相當(dāng)于人用最大推薦劑量的5倍、10 倍、30 倍，即 0.33g/kg.bw/d, 0.67g/kg.bw/d, 2.0Og/kg.bw/d,將受試物拌入飼料連續(xù)飼養(yǎng)實驗小鼠30d，搜集糞便，用細(xì)菌16S rDNA熒光定量PCR法測定腸桿菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌3大類腸道菌的數(shù)量，檢查實施例3制得的固體飲料對腸道菌群的調(diào)節(jié)作用，結(jié)果見表2。
[0121]表1實施例3制得固體飲料對大鼠胃壁冰醋酸注射法所致慢性胃潰瘍模型保護(hù)作用 G土η=10, *Ρ〈0.05，**Ρ〈0.01)
[0122]
【權(quán)利要求】
1.一種緩解壓力及調(diào)節(jié)腸胃的功能食品的二步發(fā)酵制備方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)猴頭菇固體發(fā)酵:以含有調(diào)節(jié)腸胃的天然組分為藥性培養(yǎng)基質(zhì)，接種猴頭菇液體菌種進(jìn)行雙向固體發(fā)酵制備具有調(diào)節(jié)腸胃功能的藥性菌質(zhì)； (2)乳酸菌液體深層發(fā)酵:以步驟(I)的藥性菌質(zhì)為原料，粉碎后添加酵母粉、谷氨酸鈉、水制成發(fā)酵培養(yǎng)基，接種乳酸菌進(jìn)行液體深層發(fā)酵生產(chǎn)緩解壓力的Y-氨基丁酸，制備同時具有緩解壓力和調(diào)節(jié)腸胃功能的發(fā)酵液； (3)采用步驟(2)的發(fā)酵液，制備成不同劑型的緩解壓力及調(diào)節(jié)腸胃的功能食品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩解壓力及調(diào)節(jié)腸胃的功能食品的二步發(fā)酵制備方法，其特征在于，步驟(I)中，所述的猴頭菇液體菌種的接種量為2%-10%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩解壓力及調(diào)節(jié)腸胃的功能食品的二步發(fā)酵制備方法，其特征在于，步驟(I)中，所述的藥性培養(yǎng)基質(zhì)的制備:先稱取以下重量百分含量的原料:全粒大麥70%-80%、山藥10%-20%、鐵皮楓斗1%-2%、黨參1%_2%、茯苓1%_2%、陳皮1%_2%、佛手1%-2%、石膏粉0.5%-1.5%，將各組分混合、粉碎，然后加水至水分重量含量為60%-65%，116。。_126°C滅菌 0.5h-l.5h。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的緩解壓力及調(diào)節(jié)腸胃的功能食品的二步發(fā)酵制備方法，其特征在于，步驟(I)中，所述的藥性培養(yǎng)基質(zhì)的制備:先稱取以下重量百分含量的原料:全粒大麥75%、山藥15%、鐵皮楓斗2%、黨參2%、茯苓2%、陳皮2%、佛手1%、石膏粉1%，將各組分混合、粉碎，然后加水至水分重量含量為60%-65%，121°C滅菌lh。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩解壓力及調(diào)節(jié)腸胃的功能食品的二步發(fā)酵制備方法，其特征在于，步驟(I)中，所述的雙向固體發(fā)酵的條件為:發(fā)酵溫度在25V _28°C，發(fā)酵時間在20-25 天。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩解壓力及調(diào)節(jié)腸胃的功能食品的二步發(fā)酵制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基采用以下重量份的原料:水1000重量份、藥性菌質(zhì)40-50重量份、酵母粉5-10重量份、谷氨酸鈉15-20重量份，將藥性菌質(zhì)、酵母粉和谷氨酸鈉溶于水，添加醋酸和醋酸鈉配制成pH為5-6的緩沖液，1160C _126°C滅菌20min-40min。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩解壓力及調(diào)節(jié)腸胃的功能食品的二步發(fā)酵制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述的乳酸菌的接種量為1%_5%。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩解壓力及調(diào)節(jié)腸胃的功能食品的二步發(fā)酵制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述的液體深層發(fā)酵的條件為:發(fā)酵溫度在28-32°C，發(fā)酵時間在48-72h。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩解壓力及調(diào)節(jié)腸胃的功能食品的二步發(fā)酵制備方法，其特征在于，步驟(3)中，所述的緩解壓力及調(diào)節(jié)腸胃的功能食品的劑型為口服液、片劑或固體飲料。
10.根據(jù)權(quán)利要求1?9任一項所述的制備方法制備的緩解壓力及調(diào)節(jié)腸胃的功能食品O
【文檔編號】A23L1/28GK104000192SQ201410136282
【公開日】2014年8月27日 申請日期:2014年4月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月4日
【發(fā)明者】吳學(xué)謙, 徐娟 申請人:浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院